大同大學數位論文
|
|
- 婵 毛
- 7 years ago
- Views:
Transcription
1 以 靜 電 紡 絲 技 術 製 備 組 織 工 程 用 之 聚 羥 基 丁 酯 戊 酯 (PHBV) / 聚 己 內 酯 (PCL) 纖 維 薄 膜 及 電 漿 表 面 改 質 研 究 Preparation of Poly-hydroxy-butyrate-co-hydroxyalerate (PHBV) / Poly-ε-caprolactone (PCL) Membrane by Electrospinning for Tissue Engineering 研 究 生 : 張 佳 惠 (Chia-Hui Chang) 指 導 教 授 : 王 鐘 毅 (Prof.Chung-Yih Wang) 大 同 大 學 生 物 工 程 研 究 所 碩 士 論 文 Thesis for Master of Science Department of Bioengineering Tatung University 中 華 民 國 一 O 二 年 七 月 July 2013
2
3 致 謝 本 論 文 首 要 感 謝 指 導 教 授 王 鐘 毅 博 士 於 這 二 年 來 於 學 業 實 驗 研 究 之 教 導 及 論 文 撰 寫 上 的 指 導, 在 這 樣 的 歷 練 下 學 習 了 很 多 東 西, 研 究 上 也 很 有 領 悟, 促 使 我 論 文 能 順 利 完 成, 在 此 謹 致 上 最 誠 摯 的 謝 意 感 謝 口 試 委 員 台 北 醫 學 大 學 陳 建 中 教 授 大 同 大 學 陳 克 紹 教 授 對 本 論 文 提 出 的 建 議 與 指 正, 於 百 忙 中 撥 冗 審 查 我 的 論 文, 並 給 予 學 生 許 多 意 見 並 細 心 指 正, 使 得 論 文 能 更 加 完 善 感 謝 生 醫 工 程 研 究 室 的 所 有 好 夥 伴, 學 長 姐 念 齊 若 語 昱 陞, 同 學 鵬 仰 俊 賢, 學 弟 妹 郁 捷 嵐 雅 書 儂 思 浩 暐 婷 俐 瑾 韋 萱 君 璋 琳 樺... 等 在 這 段 研 究 期 間 的 相 互 扶 持 打 氣 與 陪 伴, 成 為 我 能 夠 持 續 實 驗 的 最 大 動 力, 沒 有 你 們 就 沒 有 了 歡 笑, 使 我 的 碩 士 生 涯 更 加 多 采 多 姿 感 謝 台 北 醫 學 大 學 建 華 學 姊, 及 同 學 俊 宏 在 我 做 實 驗 的 期 間 給 予 我 非 常 大 的 鼓 勵 與 指 導, 幫 助 我 解 決 在 實 驗 上 的 問 題 最 後, 感 謝 大 同 大 學 提 供 一 個 優 良 的 讀 書 環 境 與 教 學 資 源, 及 爸 爸 媽 媽 和 弟 弟 給 予 的 支 持, 讓 我 在 求 學 期 間 倍 感 安 心
4 中 文 摘 要 近 年 來 組 織 工 程 的 發 展 開 始 受 到 關 注 其 中, 關 節 軟 骨 缺 乏 再 生 能 力, 外 傷 或 疾 病 引 起 的 軟 骨 缺 損 需 利 用 軟 骨 或 其 它 材 料 修 復, 自 體 軟 骨 來 源 有 限, 且 容 易 造 成 缺 損, 應 用 受 到 限 制 雖 然 異 體 軟 骨 曾 廣 泛 應 用, 但 可 能 會 引 起 免 疫 排 斥 反 應, 而 導 致 細 胞 死 亡 及 功 能 喪 失 因 此, 軟 骨 組 織 工 程 材 料 逐 漸 受 到 重 視, 使 用 人 工 合 成 的 支 架 材 料 它 本 身 的 結 構 表 面 特 性 降 解 行 為 及 生 物 相 容 性 等 將 會 是 重 要 的 研 究 方 向 本 研 究 是 利 用 靜 電 紡 絲 的 方 式 製 備 生 物 可 分 解 性 聚 羥 基 丁 酯 戊 酯 (poly-hydroxybutyrate-co-hydroxyvalerate) (PHBV) 及 具 有 良 好 熱 塑 性 高 分 子 材 料 聚 己 內 酯 (Poly-ε-caprolactone) (PCL) 電 紡 絲 纖 維 薄 膜, 再 給 予 表 面 電 漿 修 飾, 期 望 以 PHBV 來 改 善 PCL 的 機 械 性 質 與 熱 性 質 及 降 解 速 率 將 高 分 子 先 以 不 同 混 和 比 例 摻 合 (PHBV/PCL: 100/0,75/25, 50/50,25/75,0:100) 形 成 參 合 膜, 接 著 使 用 電 紡 絲 方 式 製 備 成 不 同 參 合 比 例 的 纖 維 膜 以 DSC 進 行 熱 分 析, 並 以 拉 伸 試 驗 進 行 機 械 性 質 研 究, 最 後 選 出 適 合 做 為 細 胞 支 架 的 混 參 比 例 (PHBV/PCL:50/50), 進 行 降 解 速 率 與 軟 骨 細 胞 貼 附 率 及 增 生 研 究 接 著 為 了 進 一 步 增 加 細 胞 的 生 長 速 度, 因 此 藉 由 不 同 電 漿 表 面 改 質 (O 2 Hexamethyldisilazane O 2 + Hexamethyldisilazane) 來 改 變 電 紡 絲 維 膜 的 親 疏 水 性 從 實 驗 結 果 顯 示 電 漿 表 面 改 質 對 細 胞 的 生 長 效 果 均 有 改 I
5 善, 但 改 質 疏 水 纖 維 膜 比 改 質 親 水 纖 維 膜 對 細 胞 的 成 長 效 果 較 為 顯 著, 所 以 我 們 同 時 也 探 討 不 同 電 漿 與 基 材 分 離 的 時 間 是 否 會 影 響 細 胞 生 長 效 果 ; 期 望 未 來 能 夠 進 行 動 物 相 容 性 的 實 驗 進 一 步 增 加 材 料 對 軟 骨 組 織 修 復 的 發 展 潛 力 關 鍵 字 : 靜 電 紡 絲 電 漿 改 質 細 胞 相 容 性 組 織 工 程 II
6 Abstract In recent years, development of tissue engineering becomes an important issue.cartilage defects caused by trauma or disease are difficult to recover because articular cartilage can t regenerate by itself. Although allogeneic cartilage has been used, it may lead to rejection, cell death or the loss of function. Therefore, cartilage tissue with synthetic scaffold and autologous cells becomes important research directions. This study used electrospinning method to prepare scaffold for cartilage engineering. Biodegradable poly-hydroxybutyrate-co-hydroxyvalerate (PHBV) and polymer material poly-ε-caprolactone (PCL) was chosen as the raw materials. We adjust PHBV content to improve the mechanical properties and degradation rates of the PCL. Polymers blended with different proportion of PHBV/PCL (100/0, 75/25, 50/50, 25/75, 0/100) to form the films. The films were characterized with contact angle measurement, calorimetry (DSC), Lloyd test machine,and scanning electro microscopy (SEM). PHBV/PCL(50/50) Fiber have the best physical properties, then can be used in plasma modification.to enhance the cell growth rate, we further treated the electropsun fiber with different plasma surface (Oxygen, Hexamethyldisilazane, Oxygen + Hexamethyldisilazane) to modify hydrophilicity of the surface.the results of this study showed that plasma surface modification had improved the cell growth.the hydrophobic fiber had higher growth rate then the hydrophilic fiber. Keywords: electrospinning, plasma modification, cell compatibility, tissue engineering III
7 目 錄 中 文 摘 要 Ⅰ 英 文 摘 要 Ⅲ 目 錄 Ⅳ 圖 目 錄 Ⅷ 表 目 錄 ⅩⅠ 第 一 章 導 論 前 言 研 究 動 機 與 目 的 聚 羥 基 丁 酯 戊 酯 共 聚 物 (PHBV) PHA 材 料 特 性 PHA 的 生 物 可 分 解 性 PHA 的 生 相 容 性 (Biocompatibility) PHA 的 生 物 吸 收 性 (Bioabsorption) 聚 己 內 酯 (PCL) 脂 肪 族 聚 酯 聚 合 物 擁 有 的 優 點 PCL 的 應 用 軟 骨 細 胞 血 清 的 主 要 成 分 及 主 要 作 用 組 織 工 程 支 架 高 分 子 生 醫 材 料 生 技 產 業 市 場 分 析 生 醫 材 料 成 長 的 因 素 20 第 二 章 實 驗 理 論 及 文 獻 回 顧 電 紡 絲 介 紹 22 IV
8 2.2 電 紡 絲 原 理 電 紡 絲 基 本 參 數 控 制 電 紡 絲 的 應 用 電 漿 簡 介 電 漿 基 本 理 論 電 漿 蝕 刻 低 溫 電 漿 的 特 色 低 溫 電 漿 表 面 處 理 技 術 表 面 活 化 電 漿 表 面 處 理 在 生 醫 材 料 上 的 應 用 38 第 三 章 實 驗 方 法 與 儀 器 實 驗 架 構 實 驗 藥 品 與 儀 器 高 分 子 支 架 的 製 備 與 選 取 實 驗 步 驟 混 摻 薄 膜 之 製 備 靜 電 紡 絲 高 分 子 溶 液 配 製 靜 電 紡 絲 薄 膜 的 製 備 分 析 方 法 示 差 掃 描 量 熱 法 (DSC) 拉 升 試 驗 黏 度 測 定 水 接 觸 角 掃 描 式 電 子 顯 微 鏡 (SEM) 電 紡 絲 薄 膜 降 解 性 實 驗 56 V
9 PBS 水 解 實 驗 電 紡 絲 薄 膜 UV 光 照 射 實 驗 電 漿 表 面 處 理 HMDSZ 電 漿 表 面 沉 積 O2 電 漿 表 面 活 化 細 胞 培 養 永 生 大 鼠 軟 骨 細 胞 實 驗 方 法 材 料 前 處 理 冷 凍 細 胞 活 化 細 胞 繼 代 培 養 細 胞 存 活 率 測 定 - MTT assay 實 驗 原 理 標 準 曲 線 樣 品 測 定 細 胞 形 態 固 定 及 觀 察 64 第 四 章 結 果 與 討 論 PHBV/ PCL 摻 合 膜 PHBV/ PCL 摻 合 膜 之 熱 性 質 分 析 PHBV/ PCL 摻 合 膜 之 拉 升 試 驗 PHBV/ PCL 摻 合 膜 之 水 接 觸 角 高 分 子 黏 度 分 析 PHBV/ PCL 靜 電 紡 絲 纖 維 PHBV/ PCL 電 紡 絲 纖 維 SEM 影 像 PHBV/ PCL 電 紡 絲 纖 維 之 熱 分 析 VI
10 4.3.3 PHBV/ PCL 電 紡 絲 纖 維 之 拉 伸 變 化 PHBV/ PCL 電 紡 絲 纖 維 之 水 接 觸 角 降 解 性 測 試 PHBV/ PCL 電 紡 絲 纖 維 的 重 量 損 失 變 化 PHBV/ PCL 電 紡 絲 纖 維 在 不 同 降 解 時 間 對 熱 分 析 之 影 響 P H B V / P C L 電 紡 絲 纖 維 在 不 同 降 解 時 間 之 拉 伸 變 化 UV 光 照 射 後 電 紡 絲 纖 維 的 形 態 電 漿 表 面 處 理 PHBV/ PCL 電 紡 絲 纖 維 表 面 親 疏 水 性 變 化 不 同 電 漿 與 電 紡 絲 纖 維 對 浸 泡 培 養 基 時 間 的 影 響 細 胞 培 養 PHBV/ PCL 摻 合 膜 對 細 胞 生 長 的 影 響 PHBV/ PCL 電 紡 絲 纖 維 對 細 胞 生 長 的 影 響 電 漿 處 理 後 之 PHBV/ PCL 電 紡 絲 纖 維 對 細 胞 的 影 響 氧 氣 電 漿 處 理 之 P H B V / P C L 電 紡 絲 纖 維 對 細 胞 的 影 響 HMDSZ 電 漿 處 理 之 PHBV/ PCL 電 紡 絲 纖 維 對 細 胞 的 影 響 HMDSZ+ 氧 氣 電 漿 處 理 PHBV/ PCL 電 紡 絲 纖 維 對 細 胞 的 影 響 電 漿 處 理 P H B V / P C L ( 5 0 / 5 0 ) 電 紡 絲 纖 維 對 細 胞 的 影 響 第 五 章 結 論 參 考 文 獻 附 錄 附 錄 1 高 分 子 萃 取 步 驟 附 錄 2 PHBV/PCL 摻 合 膜 的 熱 分 析 數 據 圖 附 錄 3 不 同 PHBV/PCL 比 例 電 紡 絲 在 降 解 試 驗 的 熱 分 析 數 據 圖 VII
11 圖 目 錄 圖 1-1 聚 羥 基 酯 類 (PHA) 結 構 名 稱 5 圖 1-2 PHBV 的 結 構 圖 圖 5 圖 1-3 依 據 碳 數 之 不 同 的 PHA 分 類 6 圖 1-4 PCL 聚 合 10 圖 1-5 組 織 工 程 三 要 素 16 圗 2.1 靜 電 紡 絲 原 理 23 圖 2.2 壓 力 對 電 子 溫 度 (T e) 氣 體 溫 度 (T g) 離 子 溫 度 (T i) 之 關 係 28 圖 2.3 Remote Plasma 示 意 圖 29 圖 2.4 圖 2.5 Pure Chemical Etching 29 Pure Physical Etching 30 圖 2.6 活 性 離 子 蝕 刻 示 意 圖 32 圖 2.7 惰 性 氣 體 電 漿 處 理 於 材 料 表 面 所 產 生 的 反 應 36 圖 2.8 非 聚 合 反 應 性 氣 體 電 漿 處 理 於 材 料 表 面 所 產 生 的 反 應 37 圖 2.9 表 面 電 交 處 理 技 術 在 各 種 生 醫 材 料 領 域 上 的 應 用 40 圗 3.1 電 紡 絲 設 備 照 片 45 圖 3.2 PHBV/PCL 摻 合 膜 46 圖 3.3 PHBV/PCL 電 紡 絲 纖 維 膜 48 圖 3.4 電 紡 在 20mm 玻 璃 片 上 的 PHBV/PCL 纖 維 膜 48 圖 3.5 拉 伸 試 驗 簡 圖 50 圖 3.6 應 力 - 應 變 曲 線 圖 51 圗 3.7 音 叉 震 動 式 黏 度 計 53 圖 3.8 IRC 永 生 大 鼠 軟 骨 細 胞 58 圖 3.9 使 用 UV 光 殺 菌 後 PHBV/PCL 纖 維 60 圖 3.10 MTT 結 構 中 的 tetrazolium ring 被 切 斷 形 成 formazan 62 VIII
12 圖 4.1 不 同 PHBV/ PCL 比 例 摻 合 膜 的 熱 分 析 圖 67 圖 4.2 不 同 PHBV/PCL 摻 合 膜 之 楊 氏 系 數 曲 線 圖 69 圖 4.3 不 同 PHBV/PCL 摻 合 膜 之 應 力 應 變 曲 線 圖 69 圖 4.4 不 同 PHBV/PCL 摻 合 膜 之 應 力 應 變 過 程 變 化 圖 70 圖 4.5 不 同 PHBV/PCL 摻 合 膜 之 水 接 觸 角 72 圖 4.6 不 同 比 例 PHBV/PCL 摻 合 膜 之 水 接 觸 角 圖 片 73 圖 4.7 PCL 黏 度 與 濃 度 關 係 圖 75 圖 4.8 PHBV 黏 度 與 濃 度 關 係 圖 75 圖 4.9 PHBV/ PCL 電 紡 絲 纖 維 形 態 78 圖 4.10 不 同 PHBV/PCL 比 例 之 電 紡 絲 薄 膜 熱 分 析 圖 80 圖 4.11 不 同 PHBV/PCL 比 例 之 電 紡 絲 纖 維 應 力 應 變 曲 線 圖 82 圖 4.12 不 同 PHBV/PCL 比 例 電 紡 絲 纖 維 時 間 對 力 的 作 圖 82 圖 4.13 不 同 PHBV/PCL 比 例 電 紡 絲 纖 維 之 楊 氏 係 數 圖 82 圖 4.14 不 同 PHBV/PCL 比 例 的 電 紡 絲 纖 維 水 接 觸 角 84 圖 4.15 不 同 PHBV/ PCL 電 紡 絲 纖 維 的 重 量 損 失 變 化 圖 87 圖 4.16 不 同 PHBV/PCL 比 例 在 降 解 過 程 中 的 最 大 應 力 曲 線 圖 91 圖 4.17 不 同 PHBV/PCL 比 例 在 降 解 過 程 中 的 楊 氏 係 數 曲 線 圖 91 圖 4.18 不 同 PHBV/PCL 比 例 在 降 解 過 程 中 的 最 大 應 變 曲 線 圖 92 圖 4.19 PHBV/PCL 電 紡 絲 薄 膜 於 UV 照 射 後 之 SEM 圖 94 圖 4.20 PHBV/ PCL 電 紡 絲 纖 維 電 漿 前 後 水 接 觸 角 之 測 量 圖 96 圖 4.21 PHBV/ PCL 電 紡 絲 纖 維 電 漿 前 後 水 接 觸 角 之 變 化 97 圖 4.22 PHBV/ PCL 電 紡 絲 纖 維 於 電 漿 改 質 後 浸 泡 培 養 基 時 間 對 水 接 觸 角 的 影 響...99 圖 4.23 PHBV/ PCL 摻 合 膜 於 細 胞 培 養 之 生 長 曲 線 101 圖 4.24 PHBV/PCL 電 紡 絲 纖 維 之 細 胞 生 長 曲 線 103 圖 4.25 氧 氣 電 漿 之 PHBV/ PCL 電 紡 絲 纖 維 細 胞 生 長 曲 線 105 IX
13 圖 4.26 細 胞 在 氧 氣 電 漿 之 PHBV 電 紡 絲 纖 維 膜 SEM 生 長 之 情 形 105 圖 4.27 細 胞 在 氧 氣 電 漿 之 PHBV/PCL (50/50) 電 紡 絲 纖 維 膜 SEM 圖 生 長 之 情 形.106 圖 4.28 細 胞 在 氧 氣 電 漿 之 PCL 電 紡 絲 纖 維 膜 SEM 圖 生 長 之 情 形 106 圖 4.29 HMDSZ 電 漿 之 PHBV/ PCL 電 紡 絲 纖 維 細 胞 生 長 曲 線 108 圖 4.30 細 胞 在 HMDSZ 電 漿 之 PHBV 電 紡 絲 纖 維 膜 SEM 圖 生 長 之 情 形 108 圖 4.31 細 胞 在 HMDSZ 電 漿 之 PHBV/PCL(50/50) 電 紡 絲 纖 維 膜 SEM 圖 生 長 之 情 形 109 圖 4.32 細 胞 在 HMDSZ 電 漿 之 PCL 電 紡 絲 纖 維 膜 SEM 圖 生 長 之 情 形 109 圖 4.33 細 胞 在 氧 氣 + HMDSZ 電 漿 之 PHBV/ PCL 電 紡 絲 纖 維 細 胞 生 長 曲 線 111 圖 4.34 細 胞 在 HMDSZ +O2 電 漿 之 PHBV 電 紡 絲 纖 維 膜 SEM 圖 生 長 之 情 形 111 圖 4.35 HMDSZ +O2 電 漿 之 PHBV/PCL(50/50) 電 紡 絲 纖 維 膜 SEM 圖 生 長 之 情 形.112 圖 4.36 HMDSZ +O2 電 漿 之 PCL 電 紡 絲 纖 維 膜 SEM 圖 生 長 之 情 形 112 圖 4.37 三 種 電 漿 於 PHBV/ PCL(50/50) 電 紡 絲 纖 維 細 胞 生 長 曲 線 114 X
14 表 目 錄 表 4.1 不 同 PHBV/ PCL 摻 合 膜 之 熔 點 與 結 晶 度 67 表 4.2 不 同 PHBV/PCL 摻 合 膜 之 拉 伸 測 試 數 據 表 70 表 4.3 不 同 PHBV/PCL 摻 合 膜 之 水 接 觸 角 數 據 表 72 表 4.4 PHBV/PCL 的 電 紡 絲 薄 膜 熱 分 析 數 據 表 80 表 4.5 不 同 PHBV/PCL 比 例 的 電 紡 絲 薄 膜 水 接 觸 角 數 據 表 84 表 4.6 不 同 PHBV/PCL 比 例 電 紡 絲 在 降 解 性 試 驗 的 熱 分 析 89 表 4.7 不 同 PHBV/PCL 電 紡 絲 纖 維 在 不 同 降 解 時 間 之 拉 伸 數 據 表 92 表 4.8 PHBV/ PCL 電 紡 絲 纖 維 電 漿 前 後 水 接 觸 角 之 數 據 圖 97 表 4.9 PHBV/ PCL 電 紡 絲 纖 維 電 漿 改 質 與 浸 泡 培 養 基 的 水 接 觸 角 數 據 99 XI
15 第 一 章 緒 論 1.1 前 言 隨 著 我 國 老 年 人 口 逐 年 攀 升, 關 節 的 損 傷 和 退 化 性 關 節 炎 便 成 為 近 年 來 重 要 的 研 究 課 題 關 節 軟 骨 為 無 血 管 神 經 之 組 織, 本 身 並 無 再 生 能 力 (O'Driscoll, 1998), 因 此 進 行 器 官 移 植 或 植 入 適 當 替 代 材 料 為 常 見 的 治 療 方 式 在 臨 床 上, 自 體 移 植 雖 然 容 易 被 患 者 接 受, 但 仍 有 來 源 有 限 及 會 造 成 患 者 二 次 傷 害 等 問 題 ; 而 異 體 移 植 雖 然 取 得 較 方 便, 但 是 有 免 疫 排 斥 及 傳 染 疾 病 等 疑 慮 目 前, 靜 電 紡 絲 已 廣 泛 應 用 於 組 織 工 程 支 架 的 研 究, 且 生 物 可 分 解 材 料 漸 漸 受 到 生 醫 材 料 產 業 的 重 視 聚 羥 基 丁 酯 戊 酯 (PHBV) 和 聚 ε- 己 內 酯 (PCL) 都 是 具 有 良 好 生 物 相 容 性 生 物 降 解 性 和 無 毒 性 的 生 物 醫 用 材 料 PHBV 結 晶 度 較 高 球 晶 大, 導 致 有 易 脆 性 質 且 加 工 溫 度 範 圍 窄, 還 有 疏 水 性 強 等 缺 點 PCL 在 生 物 醫 學 等 領 域 有 潛 在 的 應 用 價 值, 但 卻 因 熱 變 形 溫 度 比 較 低, 作 為 骨 科 修 復 材 料 和 組 織 工 程 支 架 材 料 使 用 時, 其 硬 度 和 強 度 方 面 都 沒 辦 法 達 到 要 求, 因 此 材 料 本 體 組 成 表 面 結 構 等 對 於 支 架 材 料 上 有 重 要 影 響 ( 唐 勇 红, 2010) 傳 統 紡 絲 製 成 包 括 : 熔 體 紡 絲 (melting spinning) 溼 式 紡 絲 (wet spinning) 乾 式 紡 絲 (dry spinning) 和 膠 體 紡 絲 法 (gel spinning) 等 僅 可 製 備 出 直 徑 介 於 微 米 級 至 次 微 米 級 的 紡 絲 纖 維 因 為 以 上 纖 1
16 維 製 程 之 加 工 方 式 受 到 纖 維 加 工 或 draw resonance 之 限 制, 無 法 製 備 出 直 徑 小 於 1 m 的 奈 米 纖 維 最 近 電 紡 絲 技 術 的 發 展 主 要 利 用 高 電 壓 產 生 的 電 斥 力 使 高 分 子 溶 液 於 電 紡 過 程 進 行 甩 動 拉 伸 的 運 動, 促 使 纖 維 有 效 且 快 速 的 拉 伸 以 獲 得 直 徑 達 奈 米 級 的 奈 米 纖 維 在 紡 絲 技 術 中 將 纖 維 直 徑 縮 小 至 奈 米 纖 維 有 許 多 好 處 ; 如 增 加 纖 維 的 強 力 及 其 比 表 面 積 以 利 於 纖 維 之 應 用 以 纖 維 的 機 械 強 度 而 言, 直 徑 越 大 的 纖 維 由 於 內 部 存 在 的 缺 陷 (defects) 越 多 且 無 法 達 到 高 度 的 配 向 性, 相 對 的 纖 維 表 面 的 缺 陷 也 越 多, 因 此 在 纖 維 拉 伸 中 導 致 纖 維 受 力 應 力 集 中 (stress concentration) 使 纖 維 的 強 度 大 幅 下 降 ( 王 盈 淇, 2006) 此 外, 細 胞 培 養 也 是 組 織 再 生 的 重 要 入 門 課 程 之 一, 支 架 表 面 的 親 疏 水 性, 對 於 細 胞 的 貼 附 增 生 及 移 動 均 有 影 響 利 用 電 漿, 把 反 應 氣 體 分 子 加 以 解 離 成 原 子 離 子 或 活 性 (Radical), 使 沈 積 反 應 可 以 在 較 低 的 溫 度 下 進 行 薄 膜 沈 積 最 重 要 的 是 沈 積 溫 度 低, 具 有 能 改 變 材 料 表 面 親 疏 水 性 與 增 加 潤 滑 性 生 物 相 容 性 等 優 點 電 漿 反 應 器 中 通 入 有 幾 化 合 物 如 碳 氫 氧 化 合 物 會 先 分 解 然 後 結 合 形 成 含 氧 的 高 分 子 化 合 物 ( 陳 克 紹,2006), 使 細 胞 的 貼 附 性 會 因 為 纖 維 的 親 疏 水 性 而 產 生 改 變 2
17 1.2 研 究 動 機 與 目 的 軟 骨 組 織 工 程 支 架 必 須 具 有 良 好 的 生 物 相 容 性 生 物 可 降 解 性 無 免 疫 排 斥 性 良 好 的 三 維 結 構 及 高 孔 隙 率, 並 且 能 夠 誘 導 細 胞 貼 附 增 生 及 維 持 正 常 細 胞 型 態 (Johnna et al,1999) 電 氣 紡 絲 能 形 成 奈 米 尺 寸 的 纖 維, 這 些 纖 維 互 相 堆 疊 後 形 成 的 開 放 型 多 孔 洞 狀 並 具 有 高 表 面 積 比, 使 其 能 夠 製 作 出 模 仿 胞 外 間 質 的 支 架 (Cui et al,2010) 本 研 究 是 利 用 靜 電 紡 絲 的 方 式 製 備 PHBV/PCL 電 紡 絲 纖 維 膜, 期 望 以 PHBV 來 改 善 PCL 的 機 械 性 質 熱 性 質 和 降 解 速 率 等 隨 之 為 增 加 其 細 胞 相 容 性, 將 纖 維 表 面 以 低 溫 電 漿 處 理, 探 討 支 架 親 水 性 及 促 進 軟 骨 細 胞 貼 附 與 增 生 的 要 素, 並 選 出 最 適 合 作 為 軟 骨 組 織 工 程 的 支 架 混 紡 比 例, 以 作 為 軟 骨 組 織 修 復 之 應 用 3
18 1.3 聚 羥 基 丁 酯 戊 酯 共 聚 物 (PHBV) PHA 材 料 特 性 Poly (hydroxyalkanoates) (PHAs), 是 由 C H O 所 組 成 的 脂 肪 族 聚 合 物, 其 聚 合 的 單 元 體 為 hydroxyalkanoates (HAs), 單 元 體 的 carboxyl group 與 下 一 個 單 元 體 的 hydroxyl group 以 ester bond 連 結, 並 以 R configuration 形 式 存 在, 而 在 C-3 或 β 位 置 的 alkyl group 可 以 是 飽 和 不 飽 和 分 枝 烷 基 或 芳 香 族, 隨 著 R group 的 不 同, 其 簡 稱 也 不 相 同 如 接 上 甲 基 (CH 3 -) 則 為 PHB, 而 接 上 乙 基 (C 2 H 5 -) 則 為 PHV, 其 結 構 名 稱 見 圖 1.1 所 示, 而 當 兩 者 共 聚 時 稱 聚 羥 基 丁 酯 羥 基 (poly(3-hyroxybutyrate-co-3-hydroxy valerate),phbv), 其 結 構 如 圖 1.2 所 示,PHBV 共 聚 物 會 隨 著 羥 基 戊 酯 單 元 的 比 例 增 加 而 有 不 同 的 性 質 ( 陳,2004) 根 據 PHA 單 體 組 成 的 碳 數 不 同, 可 分 為 三 類 (Kim et al., 2003), 如 圖 1.3: 4
19 圖 1.1 聚 羥 基 酯 類 (PHA) 結 構 名 稱 ( 陳 丕 哲,2004) 圖 1.2 PHBV 結 構 圖 5
20 圖 1.3 依 據 碳 數 之 不 同 的 PHA 分 類 6
21 1.3.2 PHA 的 生 物 可 分 解 性 PHA 之 所 以 成 為 塑 膠 取 代 品 主 要 在 於 PHA 具 有 自 然 生 物 分 解 性, 在 無 氧 和 有 氧 環 境 下, 微 生 物 所 產 生 的 PHA 可 被 環 境 中 分 解 PHA 的 細 菌 和 真 菌 所 釋 放 的 extracellular PHA depolymerase 所 分 解 目 前 已 知 具 有 295 種 菌 可 以 於 細 胞 外 分 解 PHB 和 P(HB-HV) (Mergaert et al., 1993) PHA 在 在 無 氧 狀 況 下 PHA 被 分 解 成 二 氧 化 碳 和 甲 烷, 而 在 有 氧 的 情 況 下 可 被 分 解 成 二 氧 化 碳 和 水 烷 (Reddy et al., 2003) 實 驗 結 果 顯 示, 將 PHB 製 成 薄 膜 在 37 下,pH = 7.4 的 buffer 環 境 中 分 解 半 衰 期 為 1 年 (Freier et al., 2002) PHA 的 生 相 容 性 (Biocompatibility) 生 物 相 容 性 廣 泛 的 定 義 是 指 生 物 體 對 外 來 物 的 包 容 性 和 接 受 程 度, 也 就 是 植 體 和 受 體 互 動 的 現 象 (William 1986), 而 狹 義 上 的 定 義 是 指 植 入 的 物 質 本 身 與 宿 主 免 疫 系 統 的 一 連 串 反 應 過 程 由 於 PHA 是 屬 於 聚 羥 基 烷 酯 類, 所 以 一 般 會 造 成 非 專 一 性 的 免 疫 反 應 為 先, 而 專 一 性 免 疫 反 應 為 後 生 物 相 容 性 低 的 高 分 子 材 料 往 往 會 引 發 受 體 的 排 斥 反 應 造 成 局 部 或 全 身 性 的 組 織 受 損 PHB 在 活 體 外 可 水 解 成 D-(-)3-hydrobutyric acid 的 單 元 體, 而 D-(-)-3-hy 7
22 droxybutyric acid 是 ketogenesis 代 謝 中 所 得 到 的 酮 體 產 物 之 一 (Reusch et al., 1988) 另 外,PHB 的 含 量 可 在 人 類 的 血 液 中 偵 測 到, 其 為 人 類 代 謝 的 分 解 產 物 之 一 (Reusch et al., 1992) 根 據 以 上 的 結 果, 可 以 認 為 PHB 是 具 有 生 物 相 容 性, 並 且 也 可 應 用 在 各 種 植 體 植 片 膠 片 等 生 醫 材 料 的 製 作, 並 且 應 該 不 具 毒 性 而 PHA 在 生 物 相 容 性 的 研 究 結 果 並 不 一 致, 根 據 活 體 外 的 方 式 評 估 PHB 的 研 究 指 出, 以 小 鼠 纖 維 母 細 胞 或 倉 鼠 卵 巢 細 胞 (CHO-k1) 與 PHB 植 片 混 合 培 養, 並 不 會 改 變 二 種 細 胞 生 長 和 小 鼠 纖 維 母 細 胞 中 葡 萄 糖 消 耗 與 乳 酸 的 產 生 (Lafferty et al., 1988) 並 且, 根 據 植 入 老 鼠 體 內 的 實 驗 顯 示, 以 PHB 製 成 的 植 片 植 入 會 引 起 急 性 發 炎 反 應, 可 在 植 片 鄰 近 發 現 大 量 嗜 中 性 白 血 球 聚 集 ( 植 入 後 5 週 ), 而 植 入 後 20 週 左 右 主 要 是 淋 巴 球 為 主 的 發 炎 反 應, 但 植 片 四 周 組 織 並 沒 有 壞 死 的 現 象, 他 們 推 論 這 只 是 生 物 體 外 來 的 一 種 正 常 反 應 (Korsatko et al., 1984), 另 外 以 PHB 製 成 的 微 小 球 (100μm) 注 入 老 鼠 的 大 腿 肌 肉 實 驗 結 果 (Juni et al.,1987) 與 Korsatko 報 告 一 致, 及 兔 子 軟 骨 細 胞 與 PHBHHx/PHB 所 製 成 之 載 體 作 共 同 培 養, 不 會 干 擾 軟 骨 細 胞 的 生 長 (Deng et al., 2002) 及 以 PHB/atactic PHB 所 作 成 植 片 縫 入 大 鼠 腸 中, 手 術 後 PHB 不 會 與 腸 道 發 生 沾 黏 且 腸 道 蠕 動 正 常 (Freier et al., 2002) 8
23 1.3.4 PHA 的 生 物 吸 收 性 (Bioabsorption) Poly(3-hydroxybutyrate) (PHB) 同 時 也 具 有 生 物 吸 收 性 (Freier et al., 2002), 可 以 在 大 鼠 體 內 起 分 解 反 應, 然 後 被 大 鼠 吸 收 而 消 失 不 見 因 此 PHA 這 些 材 料 表 面 經 過 適 當 處 理 之 後, 可 以 改 變 材 料 的 血 液 相 容 性 蛋 白 質 貼 覆 性 及 細 胞 貼 覆 與 生 長 的 特 性 等, 使 生 醫 材 料 的 應 用 更 廣, 產 品 性 能 更 佳 9
24 1.4 聚 己 內 酯 (PCL) 聚 己 內 酯, 全 名 Polycaprolactone (PCL), 是 利 用 ε- 己 內 酯 經 開 環 聚 合, 即 可 生 成 聚 己 內 酯, 如 圖 1.4, 它 是 一 種 熱 可 塑 性 結 晶 型 聚 酯 屬 於 聚 酯 中 應 用 較 廣 泛 的 一 種, 來 源 廣 泛 可 靠, 而 且 常 可 用 其 他 材 料 進 行 一 些 改 性 或 共 混, 以 滿 足 不 同 用 途 的 要 求, 但 須 克 服 熔 點 較 低 (60 ) 的 缺 陷 PCL 以 ε- 己 內 酯 為 原 料 聚 合 得 到, 是 一 類 完 全 微 生 物 降 解 的 聚 合 物 ( 戈 進 杰,2002) 圖 1-4 PCL 聚 合 PCL 材 料 特 性 ( 戈 進 杰,2002): (1) 具 可 燃 性 高 結 晶 性 生 物 分 解 性 熱 崩 解 性 (230 以 上 ) (2) 低 熔 點 (60 ) (3) 與 多 種 高 分 子 材 料 具 有 較 好 的 混 溶 性 10
25 1.4.1 脂 肪 族 聚 酯 聚 合 物 擁 有 的 優 點 PCL 為 生 物 可 分 解 塑 膠, 為 真 正 減 少 垃 圾 保 護 環 境 之 重 要 材 料, 但 仍 有 缺 點 : 因 成 本 過 高, 隨 著 生 物 分 解 塑 膠 的 規 模 生 產, 成 本 可 能 會 降 低 一 些, 在 短 時 期 內, 成 本 仍 高 於 通 用 塑 膠 雖 常 與 澱 粉 進 行 混 煉, 但 由 於 此 兩 種 材 料 的 相 容 性 並 不 佳, 因 此 必 須 尋 找 適 當 相 容 劑 才 可 將 PCL 和 澱 粉 均 勻 摻 混 PCL 的 應 用 PCL 是 目 前 較 為 重 要 的 生 物 降 解 高 分 子 材 料, 近 來 的 發 展 主 要 是 由 於 高 分 子 技 術 的 進 步 以 及 具 有 良 好 的 熱 塑 性 等 易 加 工 性 主 要 應 用 於 醫 療 食 品 以 及 包 裝 材 料, 商 用 製 品 的 形 態 多 以 薄 膜 為 主, 厚 度 約 為 50~100μm 的 薄 膜 拉 伸 強 度 可 達 19.6MPa(200kg/cm2), 伸 長 率 可 達 300% ( 戈 進 杰,2002) 11
26 1.5 軟 骨 細 胞 (1) 關 節 軟 骨 的 作 用 : 關 節 軟 骨 就 是 人 體 內 關 節 兩 端, 包 裹 在 長 骨 兩 端 的 一 層 白 色 的 光 滑 結 構, 人 類 的 膝 蓋 關 節 軟 骨 大 約 有 幾 釐 米 厚 軟 骨 組 織 和 下 方 的 骨 骼, 在 結 構 上 有 明 顯 的 不 同, 骨 骼 組 織 有 豐 富 的 血 管 和 神 經 網 絡, 也 因 此 硬 骨 組 織 的 新 陳 代 謝 非 常 旺 盛 相 對 地, 軟 骨 組 織 則 沒 有 任 何 血 管 和 神 經 結 構, 軟 骨 組 織 的 養 分 主 要 從 周 圍 關 節 液 中 擴 散 過 來, 供 給 非 常 緩 慢, 因 此, 軟 骨 組 織 中 的 新 陳 代 謝 也 非 常 緩 慢 由 於 骨 骼 內 有 神 經 組 織, 如 果 兩 塊 骨 骼 相 撞, 可 以 想 像 對 於 神 經 的 衝 擊 會 有 多 大, 所 造 成 的 疼 痛 是 非 常 嚴 重 的 可 是, 因 為 有 了 軟 骨 的 遮 蔽, 骨 骼 間 就 不 會 直 接 接 觸, 當 我 們 行 走 或 是 進 行 激 烈 的 活 動 時, 就 不 會 感 到 痛 苦 (2) 關 節 軟 骨 的 損 傷 與 補 救 : 當 軟 骨 組 織 成 熟 後, 軟 骨 細 胞 就 停 止 增 長, 因 此 無 法 對 受 損 的 部 位 進 行 修 復 不 過, 科 學 家 很 早 就 發 現, 將 軟 骨 組 織 取 出 來, 把 細 胞 從 細 胞 外 間 質 中 釋 放 出 來, 在 實 驗 室 培 養 皿 裡 培 養, 軟 骨 細 胞 還 是 可 以 生 長 的 因 此, 有 一 位 瑞 典 籍 的 醫 生 就 想, 既 然 軟 骨 細 胞 在 體 外 不 能 生 長, 那 麼 就 讓 它 們 在 實 驗 室 中 生 長, 再 植 入 關 節 軟 骨 的 缺 陷 處, 看 看 能 不 能 使 軟 骨 組 織 重 生 經 過 一 連 串 的 動 物 實 驗 和 臨 床 實 驗, 證 實 了 將 增 殖 後 的 軟 骨 細 胞 植 入 缺 陷 的 關 節 軟 骨 後, 可 以 再 長 出 新 的 組 織, 病 人 因 而 能 12
27 減 輕 行 動 時 的 痛 苦 這 樣 的 治 療 方 式 後 來 由 美 國 的 健 生 美 (Genzyme) 公 司 商 業 化, 產 品 的 名 稱 為 Carticel R 其 治 療 方 式 是, 外 科 醫 生 從 病 人 關 節 軟 骨 中 未 受 力 的 部 分, 取 出 一 片 約 為 葡 萄 乾 大 小 的 健 康 軟 骨 組 織, 送 到 健 生 美 公 司 的 實 驗 室 中 研 究 人 員 將 軟 骨 細 胞 分 離 出 來, 在 實 驗 室 中 經 過 三 星 期 的 培 養, 細 胞 的 數 目 增 加 約 10 ~ 20 倍 健 生 美 公 司 再 把 細 胞 送 到 醫 院, 醫 生 此 時 把 病 人 召 回, 先 將 軟 骨 受 損 的 部 分 清 理 乾 淨, 去 除 壞 死 的 組 織, 然 後 從 病 人 的 下 方 骨 頭 部 位 取 出 一 片 約 與 傷 口 大 小 相 同 的 骨 膜, 縫 在 傷 口 上 方, 再 將 細 胞 用 針 筒 注 射 到 骨 膜 下 方, 以 防 止 細 胞 外 洩 手 術 後 病 人 經 過 一 連 串 的 復 健, 一 年 後 就 可 以 恢 復 正 常 的 生 活 了 由 於 細 胞 是 來 自 病 患 本 人, 因 此 沒 有 排 斥 的 問 題, 也 可 以 避 免 傳 染 病 血 清 的 主 要 成 分 及 主 要 作 用 ( 章 靜 波.,2005) 血 清 是 由 血 漿 去 除 纖 維 蛋 白 而 形 成, 血 清 中 含 有 各 種 血 漿 蛋 白, 多 肽 脂 肪 碳 水 化 合 物 生 長 因 子 激 素 無 機 物 等, 這 些 物 質 對 促 進 細 胞 生 長 或 抑 制 生 長 活 性 是 達 到 生 理 平 衡 的 血 清 的 主 要 作 用 可 歸 納 如 下 : 13
28 1. 提 供 基 本 營 養 物 質 血 清 中 含 有 各 種 胺 基 酸 維 生 素 無 機 物 脂 類 物 質 核 酸 衍 生 物 等, 都 是 細 胞 生 長 所 需 的 基 本 營 養 物 質 2. 提 供 貼 壁 和 擴 展 因 子 許 多 體 外 培 養 的 細 胞 必 須 貼 附 於 培 養 器 皿 才 能 生 長, 幫 助 細 胞 貼 壁 的 物 質 都 屬 於 細 胞 外 基 質, 細 胞 在 體 內 生 長 時 具 有 分 泌 細 胞 外 基 質 的 功 能, 而 在 體 外 生 長 時, 隨 著 傳 代 次 數 的 增 加 這 種 能 力 逐 漸 下 降 甚 至 丟 失 血 清 中 含 有 這 類 物 質, 如 纖 維 連 接 蛋 白 素 (Fibronectin) 層 粘 連 蛋 白 (laminin) 等, 它 們 可 以 促 進 細 胞 貼 壁 3. 提 供 激 素 及 各 種 生 長 因 子 血 清 中 含 有 各 種 激 素 如 胰 島 素 腎 上 腺 皮 質 激 素 ( 氫 化 可 體 松 地 塞 米 松 ) 類 固 醇 激 素 ( 雌 二 醇 睪 固 酮 助 孕 酮 ) 等 同 時 含 有 各 種 生 長 因 子, 如 成 纖 維 細 胞 成 長 因 子 (FGF) 表 皮 細 胞 細 胞 生 長 因 子 (EGF) 血 小 板 生 長 因 子 (PDGF) 等 4. 提 供 結 合 蛋 白 結 合 蛋 白 的 作 用 是 攜 帶 重 要 的 低 分 子 量 物 質, 如 白 蛋 白 攜 帶 維 生 素 脂 肪 ( 脂 肪 酸 膽 固 醇 ) 以 及 激 素 等, 轉 鐵 蛋 白 攜 帶 鐵 結 合 蛋 白 在 細 胞 代 謝 過 程 中 起 重 要 作 用 14
29 5. 對 培 養 中 的 細 胞 提 供 些 保 護 作 用 有 一 些 細 胞, 如 內 皮 細 胞 骨 髓 樣 細 胞 可 以 釋 放 蛋 白 酶, 血 清 中 含 有 抗 蛋 白 酶 的 成 分, 起 中 和 作 用 這 種 作 用 是 偶 然 發 現 的, 現 在 則 有 目 的 地 使 用 血 清 來 終 止 胰 蛋 白 酶 的 消 化 作 用, 因 為 胰 蛋 白 酶 已 廣 泛 地 應 用 於 貼 壁 細 胞 的 消 化 傳 代 血 清 蛋 白 形 成 血 清 的 黏 度, 可 保 護 細 胞 免 受 機 械 損 傷, 特 別 是 在 懸 浮 培 養 攪 拌 時, 黏 度 起 重 要 作 用 血 清 中 還 含 有 一 些 微 量 元 素 和 離 子, 它 們 在 代 謝 解 毒 中 起 重 要 作 用, 如 SeO3 硒 等 15
30 1.5.2 組 織 工 程 支 架 組 織 工 程 (tissue engineering) 是 應 用 工 程 學 與 生 命 科 學 的 方 法, 發 展 具 活 性 的 替 代 物, 以 便 恢 復 或 改 善 人 體 組 織 的 功 能, 組 織 工 程 包 含 了 三 大 要 素, 分 別 是 細 胞 (cell) 促 進 細 胞 生 長 分 化 的 訊 息 因 子 (signals) 及 提 供 細 胞 生 長 所 需 之 支 架 (scaffold) ( Becker et al.,2007), 如 圖 1.5 其 中, 支 架 不 僅 要 具 備 胞 外 間 質 (extracellular matrix, ECM) 的 結 構 特 性 及 機 械 性 質, 還 要 能 夠 提 供 細 胞 繁 殖 並 維 持 正 常 細 胞 型 態 (Smith et al., 2009), 並 且 要 具 備 良 好 的 生 物 相 容 性 生 物 可 降 解 性 無 免 疫 排 斥 性 無 毒 性 適 當 的 孔 隙 度 誘 導 細 胞 貼 附 增 生 遷 移 並 且 維 持 正 常 細 胞 型 態 (Temeno and Mikos,1999 ; Ma et al.,2003 ; Ma et al.,2004 ; Chen et al.,2001 ; Zhao et al.,2003) 圖 1.5 組 織 工 程 三 要 素 16 ( Becker,2007)
31 1.6 高 分 子 生 醫 材 料 生 醫 高 分 子 材 料 是 生 技 領 域 中, 類 似 關 鍵 零 組 件 概 念 的 產 品, 它 以 製 造 導 向 為 模 式, 且 開 發 的 成 果 和 技 術 可 應 用 至 不 同 的 領 域, 尤 其 在 醫 療 器 材 上 的 應 用 愈 來 愈 多, 也 愈 來 愈 重 要 依 據 藥 事 法 第 13 條, 醫 療 器 材 是 指 包 括 診 斷 治 療 減 輕 或 直 接 預 防 人 類 疾 病, 或 足 以 影 響 人 類 身 體 結 構 及 機 能 的 儀 器 器 械 用 具 及 其 附 件 配 件 零 件 等 一 般 常 把 它 分 成 三 類 : 醫 療 電 子 ( 如 耳 溫 槍 數 位 血 壓 計 超 音 波 機 X 光 機 等 ) 輔 助 器 具 ( 如 輪 椅 電 動 代 步 車 拐 杖 義 肢 等 ), 和 生 醫 材 料 ( 如 繃 帶 隱 形 眼 鏡 注 射 針 筒 醫 用 導 管 人 工 器 官 等 )( 科 學 發 展,2010 年 11 月 ) 生 醫 材 料 是 指 具 有 生 物 相 容 性 而 可 植 入 或 結 合 入 活 體 系 統 中, 以 取 代 或 修 補 活 體 系 統 的 一 部 分, 或 者 直 接 和 活 體 接 觸 而 執 行 生 命 功 能 的 天 然 來 源 或 人 工 合 成 材 料 目 前 生 醫 材 料 的 概 念 可 延 伸 至 包 括 藥 物 傳 輸 系 統 生 物 感 應 器, 甚 至 支 持 身 體 功 能 的 體 外 醫 療 器 材 所 用 的 材 料 ( 科 學 發 展,2010 年 11 月 ) 在 製 造 醫 療 器 材 時, 除 了 一 般 材 料 的 物 理 化 學 性 質 外, 還 需 考 量 它 與 人 體 組 織 體 液 血 液 等 接 觸 時 的 生 物 相 容 性 所 謂 的 生 物 相 容 性, 涵 蓋 了 當 材 料 和 人 體 組 織 體 液 血 液 等 接 觸 時, 其 界 面 或 各 自 所 發 生 的 一 切 現 象, 例 如 蛋 白 質 的 吸 附 血 栓 的 產 生 免 疫 反 應 材 料 的 分 解 等 ( 科 學 發 展,2010 年 11 月 ) 17
32 傳 統 的 工 業 材 料 如 金 屬 與 合 金 陶 瓷 材 料 高 分 子 材 料 等, 都 曾 嘗 試 用 來 做 為 生 醫 材 料 在 1976 年 以 前, 只 要 醫 生 敢 用, 任 何 材 料 都 可 用 在 人 體 上 但 臨 床 的 經 驗 告 訴 我 們, 適 合 用 在 人 體 的 生 醫 材 料, 不 像 一 般 工 業 上 的 應 用, 還 得 考 慮 人 體 複 雜 的 免 疫 系 統 反 應 因 此 在 1976 年 美 國 國 會 通 過 食 品 藥 物 法 規 之 後, 生 醫 材 料 就 如 同 藥 物 一 般, 必 須 通 過 相 當 嚴 謹 的 體 外 和 動 物 實 驗, 進 而 臨 床 測 試 後 才 可 上 市 現 今 生 醫 材 料 的 研 究 已 不 再 是 一 個 單 獨 領 域 的 知 識 就 可 勝 任, 化 學 化 工 生 物 生 理 免 疫 醫 學 等 不 同 領 域 的 知 識, 已 是 研 究 生 醫 材 料 所 必 須 具 備 的 基 礎 依 材 料 種 類 來 分 類, 生 醫 材 料 大 致 可 分 為 高 分 子 有 機 聚 合 體 陶 瓷 金 屬 和 複 合 性 材 料 4 大 類 金 屬 材 料 所 衍 生 的 醫 療 產 品, 在 臨 床 應 用 上 大 致 以 手 術 器 械 和 骨 科 內 外 固 定 裝 置 等 醫 療 器 材 為 主 ; 陶 瓷 材 料 則 以 植 入 式 骨 科 填 補 材 料 為 主 要 應 用 ; 而 高 分 子 材 料, 由 於 易 加 工 生 產 具 強 韌 機 械 強 度 和 良 好 的 生 物 相 容 性 等 特 色, 過 去 數 十 年 被 廣 泛 應 用, 所 開 發 的 數 千 種 拋 棄 式 醫 療 器 材 和 植 入 式 生 醫 材 料, 對 增 進 人 類 健 康 有 重 大 的 貢 獻 高 分 子 材 料 依 來 源 又 可 分 類 為 合 成 高 分 子 材 料 和 天 然 高 分 子 材 料 ( 科 學 發 展,2010 年 11 月 ) 18
33 1.6.1 生 技 產 業 市 場 分 析 台 灣 發 展 生 物 科 技 產 業, 有 幾 個 方 向 值 得 參 考 : (1) 開 發 基 因 治 療 中 草 藥 針 對 亞 洲 人 特 別 容 易 罹 患 的 病 症, 例 如 肝 炎 鼻 咽 癌 口 腔 癌 等 疾 病, 進 行 研 究 及 中 藥 材 開 發 (2) 建 立 生 技 事 業 金 融 平 臺 利 用 國 內 的 資 本 市 場 為 平 臺, 為 國 內 外 生 物 科 技 公 司 募 集 資 金 或 為 國 際 資 金 媒 合 投 資 標 的 建 立 台 灣 生 技 事 業 的 金 融 轉 運 站 (3) 發 展 生 醫 材 料 開 發 高 經 濟 價 值 的 功 能 性 生 醫 材 料, 例 如 生 物 高 分 子 生 物 螢 光 體 等 等 (4) 檢 驗 試 劑 及 分 析 工 具 例 如 : 開 發 生 物 晶 片 及 其 周 邊 設 備 儀 器 及 試 劑 (5) 開 發 保 健 食 品 隨 著 追 求 健 康 保 健 的 觀 念 流 行, 具 有 保 健 功 能 的 食 品 及 機 能 性 飲 料, 市 場 需 求 越 來 越 大 (6) 生 技 醫 療 器 材 配 合 基 因 治 療 發 展, 以 台 灣 具 有 的 微 製 程 技 術 為 基 礎, 開 發 微 小 化 輕 便 及 個 人 化 的 醫 療 器 材 19
34 1.6.2 生 醫 材 料 成 長 的 因 素 目 前, 生 醫 材 料 的 技 術 無 法 完 全 取 代 原 組 織, 但 確 有 相 輔 相 乘 的 作 用 與 正 面 的 助 益 事 實 上, 生 醫 材 料 的 快 速 成 長, 來 自 於 下 列 幾 項 驅 動 因 素 : ( 一 ) 人 口 高 齡 化 造 成 的 需 求 戰 後 嬰 兒 潮 是 指 1946~1964 年 出 生 的 族 群, 亦 是 生 醫 材 料 最 主 要 使 用 的 人 口, 預 估 至 2050 年, 全 球 將 有 20% 屬 於 高 齡 人 口, 由 於, 高 齡 化 人 口 在 歐 美 先 進 國 家 的 比 重 逐 漸 增 加, 其 造 成 的 慢 性 病 增 加 及 追 求 永 保 青 春 的 需 求, 促 使 生 醫 材 料 的 成 長 速 度 驚 人 包 含 : 骨 科 心 血 管 眼 科 牙 科 各 式 微 創 植 入 物 等 市 場 需 求 增 加, 使 得 生 醫 材 料 市 場 逐 漸 擴 大, 使 用 人 口 亦 不 斷 擴 增, 產 業 規 模 逐 漸 大 輻 提 升 ( 二 ) 醫 療 保 險 制 度 需 求 增 加 帶 動 產 業 成 長 過 去 醫 療 器 材 的 需 求, 仰 賴 著 病 患 的 需 求, 這 樣 的 需 求 是 以 使 用 者 需 求 為 依 歸 的 角 度, 但 是, 由 於 許 多 生 醫 材 料 科 技 的 發 展 逐 漸 成 熟, 許 多 的 領 導 廠 商 著 重 於 醫 師 操 作 為 主 的 設 計 與 開 發, 以 突 顯 產 品 的 功 能 性 設 計 這 些 產 業 的 發 展 趨 勢 受 到 全 球 醫 療 保 險 制 度 的 影 響, 造 成 下 一 階 段 的 改 變, 就 是 滿 足 成 本 有 效 性 的 生 醫 材 料 發 展 第 三 支 付 者, 一 般 認 為 就 是 保 險 機 構, 由 於 保 險 公 司 以 第 三 者 身 分 向 醫 療 服 務 提 供 者 支 付 病 20
35 人 ( 投 保 人 ) 的 費 用, 服 務 提 供 者 與 病 人 均 沒 有 強 烈 動 機, 以 防 止 濫 用 醫 療 服 務 和 濫 收 醫 療 費 用 然 而, 就 第 三 支 付 者 的 立 場 來 看, 若 是 產 品 可 以 符 合 第 三 支 付 者 的 長 期 效 益, 將 是 給 予 給 付 的 關 鍵 因 素 若 產 品 一 旦 提 供 保 險 給 付, 醫 療 服 務 的 提 供 者 與 病 患 的 使 用 意 願 將 會 大 增, 新 產 品 的 市 場 將 有 機 會 大 幅 成 長 簡 單 來 說, 生 醫 材 料 需 要 滿 足 減 少 住 院 天 數 減 少 感 染 及 減 少 再 復 發 的 功 能 21
36 2.1 電 紡 絲 介 紹 第 二 章 實 驗 理 論 及 文 獻 回 顧 電 氣 紡 絲 (electrospinning) 是 利 用 高 壓 電 場 為 驅 動 力, 將 溶 解 狀 態 的 高 分 子 溶 液 由 毛 細 管 中 推 出 形 成 泰 勒 錐, 當 電 場 電 壓 大 於 溶 液 內 聚 力 時, 溶 液 會 脫 離 泰 勒 錐 射 出, 經 過 一 定 的 飛 行 軌 跡 後 在 收 集 板 上 展 開 (Reneker and Chun,1996), 形 成 奈 米 尺 寸 的 纖 維, 這 些 纖 維 互 相 堆 疊 形 成 的 開 放 型 多 孔 洞 狀 及 高 表 面 積 比, 使 電 氣 紡 絲 技 術 能 夠 製 作 出 模 仿 胞 外 間 質 的 支 架 (Cui et.al,2010) 2.2 電 紡 絲 原 理 Reneker 學 者 利 用 PEO 進 行 電 紡 絲 實 驗, 將 電 紡 絲 製 程 分 為 Base Jet Splaying Collection 四 大 部 分, 如 圗 2.1 所 示, 高 分 子 溶 於 適 當 之 溶 劑 中, 再 將 此 溶 液 以 擠 壓 的 方 式 導 入 針 頭, 並 且 在 針 頭 連 接 一 正 極 之 高 電 壓, 纖 維 收 集 板 連 接 負 極 或 是 接 地, 當 啟 動 高 壓 電 時, 針 頭 與 負 極 或 接 地 端 隨 即 產 生 電 位 差 ; 隨 著 電 壓 的 上 升, 溶 液 表 面 之 電 荷 密 度 提 高, 液 滴 表 面 產 生 的 靜 電 排 斥 力 隨 之 提 高, 使 得 液 滴 形 狀 由 半 圓 形 (Base) 逐 漸 改 變 形 成 Taylor cone; 當 高 壓 電 場 作 用 力 大 於 溶 液 的 表 面 張 力 時, 液 滴 克 服 表 面 張 力 在 Taylor cone 之 底 端 形 成 一 射 流 (Jet), 射 流 又 受 到 電 場 作 用 力 的 拉 伸 及 鞭 動 進 而 分 裂 展 開 (Splay) 出 更 細 的 射 流 (Jet), 紡 絲 過 程 中 經 溶 劑 揮 發 或 熔 體 冷 卻 後 固 化 成 細 絲, 最 後 以 纖 22
37 維 的 形 態 沉 積 於 收 集 板 上 (Collection) 與 一 般 紡 絲 技 術 比 較 之 下, 相 異 之 處 是 將 其 驅 動 力 由 機 械 力 改 為 靜 電 力, 故 稱 之 為 電 紡 絲 圗 2.1 靜 電 紡 絲 原 理 (Reneker and Chun, 1996) 電 紡 絲 藉 由 工 作 電 壓 溶 液 黏 度 工 作 距 離 等 條 件 控 制, 可 紡 織 出 纖 維 交 疊 型 態 的 結 構, 由 控 制 薄 膜 之 孔 洞 率 孔 徑, 達 到 理 想 中 之 纖 維 支 架 結 構 電 紡 纖 維 支 架 因 纖 維 直 徑 的 奈 米 化, 造 成 量 子 尺 寸 效 應 及 表 面 效 應, 進 而 展 現 出 不 同 的 物 理 與 化 學 的 性 質 ; 電 紡 絲 技 術 優 點 如 下 : (1) 纖 維 尺 寸 可 達 奈 米 級 (2) 纖 維 結 構 及 直 徑 大 小 可 由 溶 液 黏 度 (Solution Viscosity) 電 場 強 度 (Electric Field Intensity) 等 變 因, 準 確 調 控 電 紡 絲 可 使 纖 維 呈 現 高 度 順 向 性 排 列, 有 助 於 纖 維 支 架 機 械 強 度 的 提 升, 可 應 用 在 心 血 管 支 架 上 電 紡 絲 藉 由 工 作 電 壓 溶 液 黏 度 工 作 23
38 距 離 等 條 件 控 制, 可 紡 織 出 纖 維 交 疊 型 態 的 結 構, 由 控 制 薄 膜 之 孔 洞 率 孔 徑, 達 到 理 想 中 之 纖 維 支 架 結 構 電 紡 纖 維 支 架 因 纖 維 直 徑 的 奈 米 化, 造 成 量 子 尺 寸 效 應 及 表 面 效 應, 進 而 展 現 出 不 同 的 物 理 與 化 學 的 性 質 ; 電 紡 絲 技 術 優 點 如 下 : (3) 纖 維 尺 寸 可 達 奈 米 級 (4) 纖 維 結 構 及 直 徑 大 小 可 由 溶 液 黏 度 (Solution Viscosity) 電 場 強 度 (Electric Field Intensity) 等 變 因, 準 確 調 控 電 紡 絲 可 使 纖 維 呈 現 高 度 順 向 性 排 列, 有 助 於 纖 維 支 架 機 械 強 度 的 提 升, 可 應 用 在 心 血 管 支 架 上 電 紡 絲 基 本 參 數 控 制 靜 電 紡 絲 的 過 程 中, 紡 絲 參 數 (parameters) 會 影 響 紡 絲 後 的 纖 維 形 態, 可 將 影 響 電 紡 絲 纖 維 形 態 的 參 數 分 為 三 大 類 : 第 一 類 為 設 備 參 數 : 包 括 電 壓 (Voltage) 工 作 距 離 (Work distance) 進 料 流 率 (input flow rate) 纺 絲 頭 直 徑 (Needle diameter)( Holzmeister and Rudisile, 2007 Huang and Zhang, 2004) 第 二 類 : 電 纺 溶 液 的 特 性, 包 括 黏 度 (Viscosity) 聚 合 物 濃 度 (Polymer concentration) 聚 合 物 的 分 子 量 (Molecular weight of polymer)(shah and Manthe, 2009 Munir and Suryamas, 2009 ) 導 電 性 (Electrical conductivity) 表 面 張 力 (Surface tension)(kwon and Kidoaki,
39 Lin and Chua al, 2007) 第 三 類 為 周 遭 環 境 狀 態, 包 括 : 溫 度 (Temperature) 濕 度 (Humidity) 以 及 流 動 氣 體 等 (Vaquette and Babak, 2008) 根 據 這 三 大 類 的 條 件 做 一 個 靜 電 紡 絲 的 製 備, 例 如 在 相 同 的 條 件 下 調 整 進 料 流 率 可 以 增 加 紡 絲 的 產 量, 但 是 當 電 壓 調 高 時 紡 絲 頭 的 泰 勒 錐 將 不 再 明 顯, 而 是 由 紡 絲 嘴 中 的 毛 細 孔 (capillary Pore) 直 接 拉 出, 此 時 靜 電 紡 絲 流 速 等 於 紡 絲 頭 之 初 始 流 速 ; 也 可 以 藉 由 紡 絲 頭 直 徑 的 調 整 來 控 制 毛 細 孔 大 小, 當 口 徑 越 大, 毛 細 現 象 越 薄 弱, 此 時 在 固 定 電 廠 的 拉 扯 下 容 易 形 成 泰 勒 錐, 間 接 影 響 纖 維 形 成 ; 在 電 纺 過 程 中 的 物 理 現 象 由 電 場 強 度 ( electric field strength ) 所 控 制, 在 實 驗 過 程 中 將 電 壓 除 距 離 後 會 得 到 一 比 值, 在 一 些 文 獻 中 將 比 值 稱 為 稱 為 電 壓 距 離 比 (Voltage distance rate), 換 句 話 說 電 壓 與 工 作 距 離 是 同 一 種 類 別 的 條 件, 在 相 同 的 電 壓 下 縮 短 工 作 距 離 時, 纖 維 所 承 受 的 電 場 強 度 就 會 增 加, 若 增 加 工 作 距 離 時 則 反 之, 相 對 的 在 固 定 工 作 距 離 下 進 行 電 壓 調 整 後, 一 樣 也 可 以 獲 得 相 同 的 結 果, 所 以 本 實 驗 中 也 將 以 電 壓 / 距 離 比 之 條 件 作 為 調 整 因 子 在 溶 液 特 性 的 部 分, 高 分 子 溶 液 黏 度 濃 度 分 子 量 和 表 面 張 力 都 成 正 比, 當 高 分 子 濃 度 提 高 時, 黏 度 和 表 面 張 力 也 會 相 對 的 提 升, 此 時 就 需 要 更 大 的 電 場 強 度, 才 能 夠 將 粘 稠 的 高 分 子 溶 液 從 紡 絲 嘴 中 拉 出 纖 25
40 維, 所 以 在 纺 絲 過 程 中 的 各 項 條 件 都 應 適 中, 才 有 利 於 紡 絲 操 作 另 外 環 境 因 素 也 會 影 響 整 個 纖 維 形 態 或 泰 勒 錐 的 黏 度, 因 為 當 環 境 溫 度 過 高 時, 會 使 高 分 子 溶 液 的 黏 度 下 降, 文 獻 指 出 溼 度 過 高 會 使 纖 維 有 機 會 形 成 孔 洞 形 態, 以 及 紡 絲 過 程 中 的 流 動 氣 體 會 使 纖 維 形 態 散 亂 不 規 則 提 高 溶 液 揮 發 速 度, 間 接 影 響 纖 維 的 形 態 直 徑 和 規 則 性 之 排 列 纖 維 等 電 紡 絲 的 應 用 電 氣 紡 絲 技 術 應 用 於 組 織 工 程 支 架 製 備, 在 近 年 來 的 研 究 中 備 受 青 睞, 因 為 其 能 夠 提 供 奈 米 尺 寸 的 孔 洞, 並 且 表 面 積 比 相 當 大, 非 常 適 合 細 胞 增 生 與 貼 附 而 纖 維 直 徑 小 及 電 氣 紡 絲 的 拉 扯 力 等 因 素, 使 纖 維 內 的 分 子 順 向 大 幅 提 高, 讓 電 氣 紡 絲 纖 維 更 能 夠 成 為 模 仿 自 然 生 理 環 境 的 組 織 工 程 材 料 (Liang et.al,2007 ; Smith et.al, 2008; Baker et.al,2009; Smith et.al,2009) 26
41 2.3 電 漿 簡 介 電 漿 基 本 理 論 若 對 中 性 物 質 施 加 高 磁 場 或 能 量 時, 會 使 此 物 質 吸 收 這 些 能 量 而 游 離 出 電 子, 電 子 再 受 電 場 加 速 獲 得 動 能 ( 速 度 能 ), 此 快 速 電 子 衝 撞 原 子 或 分 子 會 有 電 子 (electron) 正 離 子 (positive ion) 負 離 子 (negative ion) 自 由 基 (free radical) 原 子 (atom) 分 子 (molecules) 激 發 物 質 (excited species) UV 光 可 見 光 等 多 種 複 雜 物 質 同 時 產 生 此 狀 態 稱 之 為 電 漿 (plasma)(liao et.al,1994 ; Hsieh and wu 1991) 一 般 來 說 電 漿 具 有 下 列 之 特 性 (Dai et.al,2000) : 1. 電 漿 是 將 能 量 ( 或 熱 能 ) 施 於 氣 體 而 發 生, 故 通 常 視 為 繼 固 態 液 態 氣 態 之 後 物 質 的 第 四 態 (Yasuda,1990) ( 第 四 相 ) 由 氣 態 轉 換 成 電 漿 態 時 其 間 沒 有 一 個 可 供 明 確 區 別 的 相 變 化 (phase change), 這 意 謂 變 化 過 程 為 一 連 續 或 接 近 連 續 2. 電 漿 是 一 種 局 部 或 全 部 離 子 化 之 氣 體, 其 正 電 荷 粒 子 數 目 和 負 電 粒 子 荷 數 目 相 等, 而 呈 現 一 準 中 性 (quasi neutral) 氣 體, 這 些 帶 電 粒 子 藉 長 庫 倫 力 ( long range coulomb force ) 之 交 互 作 用 (Interaction), 而 呈 現 集 體 化 行 為 (collective behavior), 通 常 氣 體 離 子 化 數 目 通 常 達 到 進 料 氣 體 總 數 之 萬 分 之 一 以 上 即 可 以 電 漿 組 成 溫 度 而 言, 可 將 電 漿 分 為 熱 電 漿 (thermal plasma) 與 低 27
42 溫 電 漿 (cold plasma) 操 作 壓 力 在 100torr 以 上 者 一 般 稱 為 熱 電 漿, 亦 稱 為 平 衡 電 漿 (equilibrium plasma) 或 局 部 熱 力 學 平 衡 電 漿 (local thermodynamic equlilbrium); 如 圖 2.2 當 氣 體 溫 度 (T g ) 與 電 子 溫 度 (T e ) 和 離 子 溫 度 (T i ) 三 者 溫 度 相 近, 可 高 達 數 萬 K, 最 常 見 的 例 子 就 是 環 繞 在 太 陽 四 周 的 氣 體, 因 受 太 陽 高 溫 及 輻 射 影 響 而 形 成 熱 電 漿 而 操 作 壓 力 在 1torr 以 下 者 一 般 稱 為 低 溫 電 漿, 亦 稱 為 非 平 衡 電 漿 (non-equilibrium plasma ) 或 非 局 部 熱 力 學 平 衡 電 漿 ( non-local thermodynamic equlilbrium); 由 於 整 個 空 間 屬 於 一 個 低 壓 系 統, 故 系 統 中 電 子 與 中 性 氣 體 分 子 或 離 子 碰 撞 機 率 大 幅 減 少, 導 致 電 子 的 能 量 無 法 有 效 的 傳 遞, 因 此 電 子 溫 度 可 高 達 10 5 K, 而 離 子 中 性 分 子 溫 度 則 與 室 溫 差 不 多 (Jung et al, 2008) 圖 2.2 壓 力 對 電 子 溫 度 (T e) 氣 體 溫 度 (T g) 離 子 溫 度 (T i) 之 關 係 (Jung et al, 2008) 28
43 2.4 電 漿 蝕 刻 電 漿 蝕 刻 (plasma etching) 主 要 的 用 途 可 以 用 來 去 除 材 料 表 面 的 某 些 部 分, 常 被 使 用 於 半 導 體 產 業 中 另 外 它 也 可 以 利 用 在 表 面 的 清 潔 方 面 基 本 的 蝕 刻 機 制 有 以 下 幾 種 (Wang and Yasuda,1995 ; 潘 扶 民,1998 ) : 1. 純 化 學 蝕 刻 (Pure Chemical Etching) 一 般 都 以 遙 距 (remote) 電 漿 或 稱 下 游 (downstream) 電 漿 ( 圖 2.3) 的 方 式, 產 生 具 有 蝕 刻 能 力 的 高 能 氣 體 分 子 或 離 子, 藉 以 碰 撞 材 料 表 面 產 生 化 學 反 應, 形 成 具 揮 發 性 (volatile) 氣 體 產 物 而 脫 離 表 面 ( 圖 2.4) 圖 2.3 Remote Plasma 示 意 圖 (Dai,2000) 圖 2.4 Pure Chemical Etching ( Dai,2000 ) 29
44 2. 純 物 理 性 蝕 刻 (Pure Physical Etching) 電 漿 產 生 之 離 子 對 表 面 只 有 純 物 理 性 的 碰 撞, 不 會 產 生 揮 發 性 氣 體 ( 圖 2.5) 圖 2.5 Pure Physical Etching ( Dai,2000 ) 3. 離 子 輔 助 蝕 刻 (Ion Assisted Etching) 半 導 體 產 業 中 電 漿 產 生 的 陽 離 子 可 清 除 在 材 料 表 面 上 生 成 的 抑 制 層 (inhibitor), 利 用 自 由 基 對 材 料 表 面 蝕 刻, 屬 化 學 性 蝕 刻 如 CF 類 電 漿 氣 體 易 生 成 -(CF 2 )n- 高 分 子 抑 制 層, 使 用 氧 氣 電 漿 可 以 生 成 CO CO2 等 揮 發 性 物 小 分 子 來 清 除 此 抑 制 層 4. 化 學 性 加 物 理 性 蝕 刻 (Chemical and Physical Etching) 化 學 性 強 一 點 的 方 式 蝕 刻 稱 之 為 電 漿 化 學 蝕 刻 (Plasma Chemical Etching PCE); 化 學 性 與 物 理 性 各 半 者 稱 為 活 性 離 子 蝕 刻 (Reactive Ion Etching RIE); 物 理 性 較 強 者 則 稱 為 活 性 離 子 束 蝕 刻 (Reactive Ion Beam Etching RIBE) 以 下 就 以 活 性 離 子 蝕 刻 做 一 些 說 明 ( 圖 2.6): 30
45 A : 自 由 基 吸 附 於 材 料 表 面 B : 小 分 子 的 脫 附 C : 自 由 基 與 材 料 表 面 進 行 化 學 反 應, 生 成 揮 發 性 小 分 子 D : 陽 離 子 易 與 電 子 作 用 而 生 成 自 由 基 E : 脫 附 後 的 小 分 子 擴 散 進 入 本 體 (bulk) 氣 體 由 pump 抽 走 F : 陽 離 子 一 般 並 不 會 參 與 反 應, 但 會 受 負 偏 壓 加 速 撞 擊 材 料 表 面, 而 造 成 缺 陷 (defect), 成 為 活 性 位 置 (active site) 導 致 自 由 基 亦 吸 附 在 此 位 置 上 31
46 圖 2.6 活 性 離 子 蝕 刻 示 意 圖 (In Kwon Jung,2008) 32
47 2.5 低 溫 電 漿 的 特 色 影 響 電 漿 製 程 的 參 數 有 很 多, 如 : 功 率 激 發 頻 率 進 氣 種 類 氣 體 的 混 合 壓 力 流 量 等 等, 各 種 參 數 皆 會 影 響 處 理 的 結 果, 因 此 各 種 參 數 間 的 相 互 影 響 性 非 常 重 要 低 溫 電 漿 化 學 處 理 就 是 把 材 料 放 置 於 電 漿 環 境 中, 讓 電 漿 將 其 材 料 表 面 以 物 理 或 化 學 方 法 加 以 改 質 使 用 電 漿 表 面 處 理 的 特 色 如 下 : 1. 只 有 表 面 被 改 質, 而 不 會 改 變 材 料 的 主 結 構 性 質 ; 2. 是 一 種 乾 式 的 過 程, 低 公 害 ; 3. 聚 合 膜 的 性 能 優 越, 且 與 基 材 上 其 他 層 膜 接 著 力 強 ; 4. 複 雜 的 形 狀, 也 能 均 勻 的 處 理 ; 5. 電 漿 溫 度 低 對 材 料 影 響 很 小 ; 等 多 項 優 點 2.6 低 溫 電 漿 表 面 改 質 技 術 曝 露 於 電 漿 中 的 材 料, 其 所 有 重 要 的 反 應 皆 建 立 於 自 由 基 化 學 (free radical chemical) 上 由 低 壓 電 漿 產 生 的 自 由 基 在 材 料 上 主 要 有 四 種 作 用 (Nimni,1988): 1. 交 錯 連 結 (crosslinking) 2. 切 除 (ablation) 33
48 3. 表 面 清 潔 (etching) 4. 表 面 活 性 化 (activation) 這 四 種 作 用 同 時 發 生 時, 何 種 作 用 較 佔 優 勢, 則 取 決 於 程 序 條 件 (processing conditions) 及 反 應 室 設 計 然 而, 這 些 影 響 皆 只 在 上 面 極 少 數 的 分 子 層 ( 約 10~1000Å ), 所 以 不 會 改 變 材 料 外 觀 或 整 體 性 質 利 用 低 溫 電 漿 處 理 高 分 子 基 材 表 面 的 方 法 已 被 廣 泛 研 究 採 用 的 方 法 可 概 分 為 三 種 : 表 面 活 化 (surface activation ) 電 漿 誘 導 接 枝 共 聚 反 應 ( plasma-induced graft copolymerization ) 電 漿 聚 合 ( plasma polymerization) 等 三 種 而 電 漿 表 面 處 理 的 技 術 優 點 有 : (1) 與 傳 統 燃 燒 化 學 比 較, 電 漿 化 學 能 量 利 用 率 高 (2) 電 漿 反 應 能 量 只 用 於 加 速 電 子, 氣 流 的 溫 度 變 化 不 會 太 大 ; 加 上 電 漿 化 學 產 生 許 多 高 活 性 自 由 基, 由 於 自 由 基 反 應 速 率 非 常 快 而 且 受 溫 度 的 影 響 不 大, 因 此 不 須 在 很 高 溫 度 下 就 可 進 行 反 應, 一 般 情 況 下 室 溫 即 可 ; 簡 單 來 說, 不 需 耗 費 能 源 在 加 熱 氣 體 上 (3) 在 電 漿 的 操 作 下, 可 以 有 許 多 種 反 應 模 式 供 選 擇, 應 用 範 圍 極 廣 大 (4) 電 漿 的 處 理 僅 表 面 而 已, 能 夠 在 不 會 改 變 基 材 本 身 物 理 性 質 下 做 表 面 改 質, 並 且 處 理 彈 性 大, 能 夠 處 理 金 屬 無 機 材 料 與 有 機 材 料 表 面 34
49 2.6.1 表 面 活 化 表 面 活 化 反 應 係 利 用 電 漿 激 發 惰 性 氣 體 或 非 聚 合 反 應 性 氣 體, 以 產 生 具 高 能 量 的 粒 子 與 材 料 表 面 相 互 作 用, 讓 表 面 產 生 活 化 點 (active point) 之 後, 暴 露 於 空 氣 中 生 成 過 氧 化 基 (peroxide) 加 以 應 用 之 反 應 ( 陳 克 紹,1986) 1. 惰 性 氣 體 (Intert Plasma): 如 氬 (Ar) 氦 (He) 形 成 之 電 漿, 對 於 高 分 子 近 表 面 區 域 的 改 質, 離 子 扮 演 一 重 要 角 色 因 為 離 子 可 在 基 材 表 面 產 生 自 由 基 (Chemical radicals) 與 交 聯 (Crosslinking) 的 活 性 表 面 如 Fig. 2.7 所 示 這 些 自 由 基 具 有 非 常 接 近 表 面 半 衰 期 短 易 自 然 氧 化 之 特 質, 故 在 電 漿 反 應 室 內 通 入 單 體, 可 立 即 (in-situ) 運 用 短 暫 的 自 由 基 行 接 枝 聚 合 反 應 ( 曾 勝 群,2006 ; Sperati et al,1975) 35
50 圖 2.7 惰 性 氣 體 電 漿 處 理 於 材 料 表 面 所 產 生 的 反 應 ( 陳 克 紹,1986) 2. 非 聚 合 反 應 性 氣 體 : 如 氮 (N 2 ) 氧 (O 2 ) 形 成 之 電 漿, 離 子 分 解 與 受 激 化 學 反 應 物 種 間 的 平 衡 決 定 電 漿 處 理 材 料 表 面 活 化 點 含 量, 可 以 在 材 料 表 面 形 成 個 別 的 官 能 基 ( 如 圖 2.8) ( 廖 淑 娟,2007): 36
51 圖 2.8 非 聚 合 反 應 性 氣 體 電 漿 處 理 於 材 料 表 面 所 產 生 的 反 應 ( 廖 淑 娟,2007) 37
52 2.7 電 漿 表 面 處 理 在 生 醫 材 料 上 的 應 用 從 一 般 外 用 創 傷 敷 材 到 內 服 控 制 藥 物 釋 放 的 膠 囊, 眼 鏡 族 配 戴 的 隱 形 眼 鏡, 乃 至 於 植 入 病 患 體 內 之 人 造 血 管 及 人 工 關 節 等, 生 醫 材 料 的 應 用 不 勝 枚 舉, 不 同 的 應 用, 功 能 需 求 各 異, 如 圖 2.9 但 最 基 本, 也 是 每 種 生 醫 材 料 在 實 用 上 必 需 要 克 服 的 問 題, 即 是 材 料 本 身 表 面 與 其 接 觸 之 人 體 生 理 界 面 的 相 容 性, 電 漿 表 面 處 理 可 以 在 不 影 響 生 醫 材 料 主 體 機 能 下, 進 行 材 料 表 面 特 性 的 改 質, 改 善 材 料 生 物 的 相 容 性 ( 吳 et.al, 工 業 材 料 雜 誌 212 期 93 年 8 月 ) 電 漿 處 理 技 術 在 生 醫 材 料 的 表 面 改 質 已 有 廣 泛 的 應 用, 除 了 可 提 升 材 料 表 面 的 生 物 相 容 性 外, 也 常 藉 由 改 善 材 料 表 面 的 其 他 性 質, 如 (1) 貼 附 性 (2) 親 水 性 (3) 分 子 固 定 (4) 沉 積 阻 隔 薄 膜 與 (5) 材 料 表 面 清 潔 消 毒 等 (1) 貼 附 性 : 電 漿 表 面 處 理 可 在 材 料 表 面 形 成 一 些 特 定 官 能 基, 或 是 沉 積 薄 膜 來 改 變 材 料 表 面 化 學 組 成, 以 達 到 良 好 的 貼 附 性, 例 如 HN 3 電 漿 處 理 使 用 在 生 醫 材 料 的 表 面 改 質 能 夠 增 加 細 胞 的 貼 附 與 成 長 38
53 (2) 親 水 性 : 在 材 料 表 面 創 造 出 親 水 或 疏 水 的 特 性, 常 見 的 像 是 O 2 電 漿 處 理, 在 表 面 產 生 一 些 OH 基, 以 提 升 表 面 的 親 水 性, 改 善 隱 形 眼 鏡 配 戴 的 舒 適 性 (3) 分 子 固 定 : 高 分 子 材 料 經 電 漿 處 理 後, 可 在 分 子 結 構 中 產 生 自 由 基, 能 與 單 體 進 行 接 枝 聚 合 反 應, 將 生 物 分 子 固 定 以 改 善 生 物 相 容 性, 例 如 表 面 固 定 膠 原 蛋 白 可 提 升 角 膜 上 皮 細 胞 的 生 物 相 容 性 (4) 沉 積 阻 隔 薄 膜 : 在 藥 物 釋 放 系 統 中, 適 當 的 阻 隔 膜 可 限 制 藥 物 分 子 的 擴 散 速 率, 有 助 於 藥 物 低 劑 量 且 長 時 間 穩 定 的 釋 出, 利 用 電 漿 處 理 在 材 料 表 面 沉 積 薄 膜, 能 達 到 控 制 小 分 子 擴 散 透 過 高 分 子 薄 膜 的 速 率 (5) 材 料 表 面 清 潔 消 毒 : 與 普 通 的 加 熱 輻 射 消 毒 法 比 較, 電 漿 消 毒 常 被 應 用 在 一 些 對 高 溫 和 輻 射 表 面 敏 感 的 生 醫 材 料, 例 如 使 用 電 漿 處 理 對 高 分 子 材 料 消 毒 與 清 潔, 能 夠 避 免 結 構 產 生 變 化 或 是 熱 裂 解 的 現 象, 仍 然 能 夠 有 效 的 殺 菌, 避 免 植 入 體 內 產 生 感 染 排 斥 等 問 題 39
54 圖 2.9 表 面 電 交 處 理 技 術 在 各 種 生 醫 材 料 領 域 上 的 應 用 ( 工 業 材 料 雜 誌 212 期 93 年 8 月 ) 40
55 第 三 章 實 驗 方 法 與 儀 器 3.1 實 驗 架 構 41
56 3.2 實 驗 藥 品 與 儀 器 (1) 實 驗 材 料 : 1. 聚 羥 基 丁 酯 戊 酯 ( Poly-hydroxy butyrate-co-hydroxyvalerate, PHBV ),Haloferax mediterranei 發 酵 萃 取 所 生 產 2. 聚 己 內 酯 (poly-ε-caprolactone) Mw = 70000~90000kD, Sigma-Aldrich,USA 3. 二 氯 甲 烷 (Dichloromethane, DCM ):ECHO, 試 藥 級,Taiwan 4. 二 甲 基 甲 醯 胺 ( N,N-Dimethyl formamide, DMF ):ECHO, 試 藥 級, Taiwan 5. 乙 醇 ( Ethanol, ETOH ):95%, 工 業 級,Taiwan 6. 氧 氣 (O 2) 7. Dulbecco s Modified Eagle Medium : Nutrient Mixture F-12 (1:1) (DMEM/F12,Gibco) 8. Dimethyl sulfoxide(dmso,scharlau) 9. Bovine Serum Albumin(BSA,sigma) 10. fetal bovine serum (FBS, Gibco) 11. Hepes buffer (sigma) 12. Phoshphate-Buffered Saline(PBS,Sigma) 13. penicillin (Biological Industries) 14. streptomycin (Biological Industries) 15. Trypan Blue 42
57 16. trypsin 胰 蛋 白 酶 17. MTT(5mg/ml PBS) 18. NaHCO 3 (Sigma) 19. 六 甲 基 二 矽 氨 烷 Hexamethyldisilazane [(CH 3 ) 3 Si-NH-Si(CH 3 ) 3,HMDSZ],( 分 子 量 = g/mole, 密 度 = g/cm 3 (Fluka Chemical Co. Japan.) 20. 細 胞 株 : 永 生 大 鼠 軟 骨 細 胞 immortalized rat chondrocytes (IRC) ( 由 國 立 臺 灣 大 學 徐 善 慧 教 授 提 供 ) (2) 實 驗 儀 器 : 1. 乾 燥 烘 箱 :DENG YNG,DO 60,Taiwan 2. 排 煙 櫃 3. 電 紡 設 備 ( 由 台 北 醫 學 大 學 陳 建 中 老 師 提 供 )( 圖 3.1) 4. 電 漿 設 備 ( 由 大 同 大 學 陳 克 紹 老 師 提 供 ) 5. 電 磁 加 熱 攪 拌 器 (NUOVA II,STIR PLATE Thermolyne,USA) 6. 電 子 天 平 (XS105DU,Taiwan) 7. T-flask(T-25 T-75,Nunc) well 96 well(nunc) 9. 恆 溫 水 浴 槽 (G-20,DENG YNG) 43
58 10. 培 養 箱 (MCO-20AIC,Sanyo) 11. 血 球 計 數 盤 (MARIENFELD) 12. 離 心 機 (5310,Kubota) 13. 倒 立 式 螢 光 顯 微 鏡 ( 含 : 顯 微 鏡 與 照 相 系 統,TEU2000-U,Nikon) 14. 無 菌 操 作 台 (VCM-420,TKS) C 冰 箱 (SANYO,MDF-U33V, Taiwan) 16. 圓 形 蓋 玻 片 (20mm, Taiwan) 17. 玻 璃 針 筒 (5ml 10ml, korea) 18. 鐵 氟 龍 管 19. 掃 描 式 電 子 顯 微 鏡 (JEOL JSM-5600, Japan) 20. 差 示 掃 描 量 熱 法 (DSC) (TA Instrument DSC-Q10, USA) 21. 傅 利 葉 紅 外 線 光 譜 儀 (FTIR) (horiba FT-720, Japan) 22. 音 叉 型 振 動 式 黏 度 計 (A&D Vibro viscometer SV-10, Japan) 23. 高 壓 靜 電 產 生 器 (CM50 Simco, USA) 24. 光 學 顯 微 鏡 (Nikon,Eclipse E600,Japan) 25. 拉 伸 機 (Lloyd Instruments,USA) 44
59 圗 3.1 電 紡 絲 設 備 照 片 (1) 推 進 式 幫 浦 ;(2) 高 壓 靜 電 產 生 器 ;(3) 玻 璃 針 筒 ;(4) 鐵 氟 龍 管 ; (5) 同 軸 式 紡 絲 嘴 ;(6) 滾 筒 式 收 集 器 ;(7) 旋 轉 馬 達 ( 100 ~ 1000 rpm ) 45
60 3.3 高 分 子 支 架 的 製 備 與 選 取 實 驗 步 驟 混 摻 薄 膜 之 製 備 1. 以 8.5wt% 的 濃 度 將 不 同 重 量 比 例 (PHBV:PCL=100/0,75/25,50/50, 25/75,0/100) 的 藥 品 放 入 sample 瓶 中, 並 加 入 二 氯 甲 浣 和 二 甲 基 甲 醯 胺, 以 9:1 的 比 例 於 室 溫 下 震 盪 混 合 24 小 時 2. 將 攪 拌 完 成 之 PHBV/PCL 溶 液 在 通 風 櫥 中 吸 取 10ml 置 入 dish 中 3. 為 避 免 蒸 散 速 率 過 快, 操 作 期 間 關 閉 通 風 系 統 4. 將 dish 蓋 上 鋁 蓋, 打 開 通 風 系 統 5. 靜 置 至 溶 劑 完 全 揮 發, 即 得 本 實 驗 所 需 高 子 薄 膜 ( 圖 3.2) 製 作 多 孔 鋁 蓋 : 1. 將 市 售 製 作 糕 點 的 鋁 盤 蓋 在 玻 璃 dish 上 方, 以 注 射 針 頭 ( mm) 均 勻 戳 40 個 孔 洞 2. 使 鋁 盤 邊 緣 能 與 玻 璃 dish 盡 量 密 合 Pure PHBV PHBV75/PCL25 PHBV50/PCL50 PHBV25/PCL75 Pure PCL 圖 3.2 PHBV/PCL 摻 合 膜 46
61 靜 電 紡 絲 高 分 子 溶 液 配 製 將 不 同 重 量 比 例 PHBV / PCL (100/0,75/25,50/50,25/75,0/100) 加 入 DCM/DMF ( 9 : 1 ) 配 製 成 黏 度 800 cp ( 此 黏 度 較 適 合 電 紡 ) 約 8.5wt% ~12wt%, 於 室 溫 下 利 用 磁 石 攪 拌 器 攪 拌 至 完 全 溶 解, 並 靜 置 一 小 時 以 去 除 攪 拌 時 所 產 生 之 氣 泡 靜 電 紡 絲 薄 膜 的 製 備 電 氣 紡 絲 儀 器 由 注 射 器 泵 補 (syringe pump) 通 有 高 壓 電 場 的 編 織 針 (needle) 和 收 集 板 (collector) 所 組 成 首 先, 將 PHBV/PCL 溶 液 置 於 注 射 器 泵 補 中, 並 分 別 以 3 ml/h 及 4 ml/h 的 速 度 將 溶 液 注 入 編 織 針, 並 在 編 織 針 處 通 以 19KV ~26.9KV 的 電 流, 使 溶 液 由 電 氣 紡 絲 儀 器 的 針 頭 部 位 射 出, 在 針 頭 與 包 有 鋁 箔 的 銅 製 收 集 版 之 間 的 距 離 為 15cm 及 13cm, 蒐 集 板 上 黏 有 20mm 的 圓 形 蓋 玻 片, 使 纖 維 紡 在 上 面 以 利 後 續 細 胞 培 養 ( 玻 璃 片 雖 屬 非 導 電 材 質, 但 不 影 響 紡 絲 過 程 所 收 集 之 纖 維 ), 如 圖 3.3,3.4 所 示 當 所 有 溶 液 都 製 成 奈 米 纖 維 後, 測 量 其 面 積 及 厚 度, 放 入 真 空 脫 泡 (vacuum chamber) 中 48 小 時, 將 剩 餘 的 DCM / DMF 溶 液 抽 出, 並 置 於 乾 燥 箱 47
62 圖 3.3 PHBV/PCL 電 紡 絲 纖 維 膜 圖 3.4 電 紡 在 20mm 玻 璃 片 上 的 PHBV/PCL 纖 維 膜 48
63 3.3.2 分 析 方 法 示 差 掃 描 量 熱 法 (DSC) 示 差 掃 瞄 量 熱 計, 簡 稱 DSC, 其 利 用 的 原 理, 簡 單 來 說, 就 是 將 樣 品 和 參 考 物 置 於 可 以 等 速 升 降 溫 或 維 持 恆 溫 的 加 熱 爐 中, 並 通 以 穩 定 流 速 的 氣 體 ( 例 如 氮 氣 ) 使 爐 體 內 的 氣 體 環 境 維 持 恆 定, 測 定 樣 品 在 定 速 率 下 加 熱 或 冷 卻, 或 以 恆 溫 的 方 式 進 行 下, 其 熱 焓 量 的 變 化 當 樣 品 發 生 熔 融 蒸 發 結 晶 相 轉 變 等 物 理 或 化 學 變 化 時, 常 會 伴 隨 著 吸 熱 或 放 熱 反 應, 使 樣 品 與 參 考 物 間 產 生 溫 度 差 或 熱 阻 抗 值 的 差 異, 熱 分 析 圖 譜 中 將 會 出 現 吸 熱 或 放 熱 帶, 推 測 樣 品 之 性 質 簡 言 之, DSC 所 應 用 的 原 理, 就 是 量 測 樣 品 能 量 的 變 化 情 形, 進 而 推 測 樣 品 之 性 值 透 過 DSC 來 了 解 PHBV/PCL 摻 合 膜 與 電 紡 纖 維 膜 的 材 料 性 質, 例 如 熱 焓 值 熔 點 等 等, 材 料 間 的 物 理 變 化, 其 測 量 方 式 是 將 各 比 例 的 摻 合 膜 與 電 紡 纖 維 膜 秤 取 2~5 mg 至 壓 盤 內, 再 放 入 儀 器 中 進 行 分 析, 設 定 條 件 以 10 /min 的 升 溫 速 度 從 20 降 溫 至 -30 之 後, 再 以 10 /min 升 溫 速 度 升 溫 至 180 維 持 5 分 鐘, 透 過 升 溫 與 降 溫 的 過 程 可 以 獲 得 數 據 圖 譜 49
64 拉 伸 試 驗 先 將 不 同 比 例 (PHBV:PCL 100/0,75/25,50/50,25/75,0/100) 的 掺 合 膜 及 電 紡 纖 維 膜 試 片, 裁 成 寬 約 5mm, 長 約 25 mm 長 條 試 片, 夾 住 試 片, 拉 伸 速 度 為 10 mm / min, 並 將 參 數 輸 入 程 式 中, 並 開 始 測 試, 當 試 片 斷 裂 後, 即 完 成 測 試 ( 實 驗 數 值 為 數 據 的 平 均 值 n=6) 拉 伸 試 驗 是 用 來 測 試 材 料 在 靜 止 狀 態 承 受 荷 重 或 受 到 緩 慢 增 加 負 荷 時 的 抵 抗 能 力 拉 伸 過 程 中, 試 片 兩 端 被 夾 緊 同 時 受 到 軸 向 的 拉 力, 給 果 會 使 得 試 片 在 平 行 於 作 用 力 的 方 向 產 生 伸 長 的 現 象 試 驗 裝 置 簡 圖 如 圖 3.5: 圖 3.5 拉 伸 試 驗 簡 圖 50
65 (1) 彈 性 變 形 與 塑 性 變 形 圖 3.6 應 力 - 應 變 曲 線 中 的 OP 線 段, 是 材 料 受 拉 力 的 初 期, 應 力 與 應 變 呈 直 線 關 係 工 程 上 稱 這 種 宜 線 關 係 為 虎 克 定 律 在 此 直 線 範 圍, 當 我 們 對 試 桿 拖 予 一 拉 力 時, 構 成 材 料 的 原 子 與 原 子 之 間 的 鍵 便 被 拉 開 來, 則 使 得 試 桿 伸 長, 當 我 們 將 拉 力 釋 放 棹 時, 原 子 間 的 鍵 回 復 到 原 來 長 度, 試 桿 便 縮 回 到 原 來 尺 寸 若 應 力 繼 續 增 加 到 某 一 程 度, 將 迫 使 材 料 內 部 的 差 排 開 始 運 動 而 形 成 滑 移 (slip) 的 現 象, 則 材 料 的 塑 性 變 形 便 產 生, 若 此 時 將 拉 力 移 去, 由 聯 結 鍵 伸 長 所 造 成 的 禪 性 變 形 仍 將 回 復, 但 由 滑 移 所 形 成 的 變 形 則 將 永 久 的 存 在 圖 3.6 應 力 - 應 變 曲 線 圖 51
66 (2) 彈 性 係 數 (Modulus of Elasticity) 彈 性 係 數 或 稱 為 楊 氏 係 數, 就 是 應 力 - 應 變 曲 線 上 彈 性 區 域 的 斜 率, 其 關 係 滿 足 虎 克 定 律 : 彈 性 係 數 E = 彈 性 係 數 也 代 表 著 材 料 的 剛 性 (stiffiness), 剛 性 材 料 具 有 較 高 的 彈 性 係 數, 意 味 著 其 原 子 間 有 較 大 的 鍵 給 力, 在 彈 性 負 荷 範 圍 內 較 易 保 持 形 狀 和 尺 寸 52
67 黏 度 測 定 透 過 此 分 析 來 定 量 不 同 高 分 子 或 溶 劑 溶 液 的 黏 度, 乃 利 用 音 叉 振 動 式 黏 度 計 進 行 黏 度 測 試 測 量 原 理 是 利 用 音 叉 在 待 測 溶 液 中, 音 叉 會 以 固 定 頻 率 的 正 弦 波 反 向 驅 動 兩 個 碟 片, 如 圖 3.7 所 示, 當 碟 片 以 固 定 頻 率 振 動 時, 碟 片 與 待 測 溶 液 的 磨 擦 力 不 同, 因 此 擺 動 幅 度 也 會 跟 著 改 變, 為 了 使 碟 片 可 以 得 到 相 同 振 動 幅 度, 黏 度 計 的 彈 簧 盤 會 驅 動 電 流, 確 保 碟 片 獲 得 相 同 振 動 幅 度, 驅 動 的 電 流 將 與 黏 度 成 正 比, 並 以 驅 動 電 流 和 黏 度 之 間 的 比 例 關 係 來 獲 得 黏 度 圗 3.7 音 叉 震 動 式 黏 度 計 53
68 水 接 觸 角 材 料 的 表 面 自 由 能 (surface free energy) 或 表 面 張 力 (surface tension), 可 以 使 用 接 觸 角 測 量 方 法 來 測 量 它 當 標 準 液 體 滴 在 平 滑 且 均 質 的 物 體 表 面 時, 因 為 固 相 / 液 相 固 相 / 氣 相 和 氣 相 / 液 相 三 種 介 面 張 力 存 在 下, 使 得 液 滴 在 受 測 物 的 表 面 上 會 有 此 形 狀 接 觸 角 一 般 會 隨 著 表 面 能 量 的 變 化 而 變 化, 同 時 也 受 液 體 (liquid) 和 固 體 (solid) 種 類 的 影 響 ; 此 外, 接 觸 角 也 會 受 週 遭 環 境 的 影 響, 例 如 溫 度 溼 度 等 實 驗 中 所 使 接 觸 角 測 量 時 需 注 意 幾 點 事 項 以 避 免 實 驗 誤 差 : (1) 為 避 免 水 中 的 雜 質 影 響 到 測 量 結 果, 所 以 使 用 的 水 為 乾 淨 之 去 離 子 水 (2) 為 使 每 次 測 量 之 液 滴 所 受 到 重 力 的 影 響 不 致 太 大, 應 固 定 液 滴 體 積, 本 實 驗 固 定 為 0.9μL (3) 本 實 驗 的 量 測 數 值 採 用 3 點 測 量 的 平 均 值 首 先 以 蒸 餾 水 滴 於 奈 米 纖 維 支 架 表 面, 在 室 溫 下 利 用 電 荷 耦 合 元 件 (Charge Coupled Device, CCD) 觀 察 並 利 用 電 腦 分 析 軟 體 算 出 水 接 觸 角 值 θ H2O 當 水 接 觸 角 越 小 表 示 材 料 表 面 親 水 性 越 好 54
69 掃 描 式 電 子 顯 微 鏡 (SEM) SEM 主 要 是 用 來 看 物 質 表 面 的 影 像, 觀 察 高 分 子 薄 膜 表 面 形 態 ; 掃 描 式 電 子 顯 微 鏡 是 以 電 場 發 射 原 理 產 生 電 子, 當 施 加 一 負 偏 壓 於 電 子 槍 時, 強 大 的 電 場 會 集 中 在 針 尖, 藉 此 游 離 電 子, 再 將 游 離 的 電 子 聚 焦, 用 電 子 束 撞 擊 材 料 表 面, 以 偵 測 二 次 或 背 向 散 射 電 子 解 析 度 可 達 3.5 nm, 通 常 以 電 壓 10 kv 來 觀 察 管 狀 纖 維 的 表 面 顯 微 結 構 將 奈 米 纖 維 支 架 收 集 在 載 玻 片 上, 以 雙 面 碳 膠 帶 固 定 於 SEM 載 台 上,, 接 著 以 大 氣 電 漿 (SPI-MODULE sputter coater) 噴 射 塗 層 金 粒 子, 再 以 掃 描 式 電 子 顯 微 鏡 (Scanning electron microscopy, SEM, JEOL JSM-5600 SEM) 觀 測 支 架 的 表 面 型 態, 並 且 以 OriginPro8 分 析 計 算 支 架 的 孔 係 度 55
70 3.3.3 電 紡 絲 薄 膜 降 解 性 實 驗 為 了 定 量 支 架 的 降 解 程 度, 本 實 驗 的 降 解 性 試 驗 是 以 磷 酸 緩 衝 溶 液 ( Phosphate buffered saline, PBS ) 與 UV 照 射 兩 種 方 法 來 進 行 實 驗 PBS 水 解 實 驗 首 先 將 乾 燥 之 奈 米 纖 維 支 架 ( 1 x 3 cm ) 裁 切 並 秤 乾 重, 接 著 將 支 架 放 入 裝 含 有 15mL PBS( PH = 7.4 ) + 1mL trypsin 的 20mm 樣 品 瓶 中, 置 於 37 恆 溫 培 養 箱 中, 第 天 分 別 取 出 將 其 烘 乾 2 天, 再 秤 其 乾 重 針 對 各 時 間 點 的 降 解 樣 品 進 行 結 晶 度 熔 點 重 量 來 探 討 整 個 降 解 過 程 對 材 料 性 質 的 改 變 ( 實 驗 期 間 每 週 更 換 ㄧ 次 PBS 及 trypsin) 並 以 下 式 算 出 支 架 的 降 解 : 剩 餘 支 架 重 量 (%)=100 實 驗 後 乾 重 / 實 驗 前 乾 重 電 紡 絲 薄 膜 UV 光 照 射 實 驗 為 模 擬 高 分 子 於 自 然 環 境 中 分 解 之 情 形, 本 研 究 使 用 紫 外 燈 (30W) 照 射 12 hr, 並 觀 察 表 面 形 態 之 變 化 56
71 3.4 電 漿 表 面 處 理 HMDSZ 電 漿 表 面 沉 積 利 用 旋 轉 或 機 械 式 幫 浦 抽 至 真 空 度 30 mtorr 以 下, 接 著 通 入 HMDSZ 單 體, 待 腔 體 內 部 氣 體 壓 力 處 於 平 衡 時 開 始 電 漿 表 面 沉 積 處 理 參 數 為 : 功 率 20W; 處 理 時 間 為 10 分 鐘 ;HMDSZ 單 體 通 入 量 為 60 mtorr 此 時 無 機 之 基 材 表 面 帶 有 官 能 機, 並 放 置 在 空 氣 中 形 成 過 氧 化 物, 以 利 於 後 面 表 面 活 化 O 2 電 漿 表 面 活 化 利 用 油 壓 式 幫 浦 抽 至 真 空 度 為 30 mtorr 以 下, 接 著 通 入 O 2 單 體, 待 腔 體 內 部 氣 體 壓 力 處 於 平 衡 時 開 始 電 漿 表 面 活 化 處 理 參 數 為 : 功 率 20W; 處 理 時 間 為 10 分 鐘 ;O 2 單 體 通 入 量 為 100 mtorr 目 的 在 利 用 高 功 率 低 處 理 時 間, 利 用 氧 氣 活 化 表 面, 增 加 支 架 的 親 水 性 57
72 3.5 細 胞 培 養 永 生 大 鼠 軟 骨 細 胞 永 生 大 鼠 軟 骨 細 胞 ( immortalized rat chondrocytes, IRC) 是 由 W. E. Horton et al. (1988, Exp. Cell Res. 178, ) 建 置 之 軟 骨 細 胞 株, 是 利 用 轉 錄 病 毒 將 v-myc 和 v-raf 兩 個 癌 化 基 因 插 入 大 鼠 軟 骨 細 胞, 使 其 成 為 永 生 細 胞 株 (Horton et.al,1988), 如 圖 3.8 圖 3.8 IRC 永 生 大 鼠 軟 骨 細 胞 58
73 3.5.2 實 驗 方 法 1. 培 養 基 配 製 : 配 製 Dulbecco's Modified Eagle Media-low glu-cose(dmem-lg )/ Ham s F12 以 1:1 混 合, 再 加 入 1.176g NaHCO 3 10 ml hepes buffer (sigma) 13.5ml Bovine Serum Albumin(BSA, sigma) 10% fetal bovine serum (FBS, Gibco) 及 100 U/ml penicillin 或 100 mg/ml streptomycin (Biological Industries) 2. 放 置 於 室 溫 攪 拌 2 小 時, 使 用 HCL 調 整 ph 質 至 7.4, 最 後 用 0.22μm 過 濾 膜 過 濾 3. 前 一 天 須 將 材 料 先 做 好 前 處 理 4. 先 將 紡 於 20mm 圓 形 蓋 播 片 上 的 電 紡 纖 維 支 架 裁 切 取 下, 放 入 12well 盤 中, 並 置 於 無 菌 層 流 操 作 台 (laminar flow hood) 下 以 紫 外 光 (Ultraviolet) 照 2 個 小 時, 以 達 到 滅 菌 效 果 5. 將 IRC 軟 骨 細 胞 培 養 於 T-75 flask 中, 每 2 至 3 天 更 換 一 次 培 養 基, 當 達 到 足 夠 細 胞 數 量 時, 以 胰 蛋 白 酶 (trypsin) 將 細 胞 由 T-75 flask 中 沖 洗 下 來, 並 取 cells/ml 注 入 裝 有 支 架 的 12 孔 盤 中, 每 天 做 MTT, 及 SEM 記 錄 一 次 6. 培 養 條 件 :37 C 5%CO 2 59
74 材 料 前 處 理 1. 電 紡 纖 維 在 培 養 細 胞 前 皆 須 進 行 殺 菌 處 理, 在 這 邊 我 們 用 uv 光 殺 菌 2 小 時, 酒 精 浸 泡 10 分 鐘 ( 因 酒 精 浸 泡 超 過 1 小 時 會 發 現 纖 維 有 膨 脹 化 開 的 現 象, 所 以 在 這 邊 以 uv 光 殺 菌 為 主, 如 圖 3.9) 2. 殺 菌 完 成 時, 將 材 料 分 別 放 入 12 孔 盤 中 並 加 入 培 養 基, 放 置 於 培 養 箱 24hr, 待 隔 天 將 細 胞 種 入 圖 3.9 使 用 UV 光 殺 菌 後 PHBV/PCL 纖 維 冷 凍 細 胞 活 化 1. 將 細 胞 培 養 液 於 恆 溫 水 浴 槽 回 溫 至 由 液 態 氮 中 取 出 冷 凍 小 管, 置 於 恆 溫 水 浴 槽 37 中 輕 輕 搖 晃, 直 至 冷 凍 小 管 中 的 細 胞 液 完 全 融 化 3. 將 融 化 後 的 細 胞 液 以 pipet 稍 加 混 合, 避 免 細 胞 分 散 不 均, 再 將 細 胞 懸 浮 液 加 入 至 T 為 避 免 滲 透 壓 變 化 過 大 對 細 胞 造 成 傷 害, 取 4ml 的 細 胞 培 養 液 緩 慢 加 入 T-25 內 60
75 5. 將 T-25 置 於 二 氧 化 碳 培 養 箱 培 養 24 小 時 後 更 換 新 鮮 培 養 液, 其 後 每 三 日 移 除 舊 有 培 養 液, 更 換 成 新 鮮 培 養 液 6. 由 於 冷 凍 細 胞 時 必 須 在 細 胞 培 養 液 中 加 入 抗 凍 劑 (DMSO), 因 此 待 細 胞 貼 附 後, 需 移 除 含 抗 凍 劑 之 培 養 液, 更 換 成 新 鮮 的 培 養 液 細 胞 繼 代 培 養 1. 將 細 胞 培 養 液 trypsin-edta PBS 於 恆 溫 水 浴 槽 回 溫 至 移 除 T-flask 內 的 舊 培 養 液 3. 以 PBS 潤 洗 T-flask 底 部 的 細 胞 層, 避 免 血 清 影 響 trypsin-edta 的 作 用 4. 加 入 trypsin-edta(t-25 加 1ml T-75 加 3ml) 快 速 潤 洗 T-flask 底 部, 抽 掉 trypsin-edta 後 加 入 新 鮮 培 養 基 中 止 trypsin-edta 對 細 胞 的 作 用 5. 利 用 pipet 吸 取 培 養 液 輕 輕 沖 刷 T-flask 底 部, 使 細 胞 完 全 懸 浮 於 培 養 液 中, 接 著 將 含 有 細 胞 之 培 養 液 取 出 至 離 心 管, 以 1000rpm 5 分 鐘 使 細 胞 沉 降 6. 移 除 離 心 管 內 上 層 液 體, 保 留 細 胞 團 塊 7. 加 入 1ml 的 新 鮮 培 養 液 並 使 細 胞 完 全 懸 浮 8. 取 20μl 細 胞 懸 浮 液 經 適 量 稀 釋 後 以 trypan blue 染 色, 再 利 用 血 球 計 數 盤 計 算 細 胞 數 量 61
76 9. 依 據 細 胞 數 量 將 細 胞 移 至 數 個 新 的 T-flask, 細 胞 每 分 盤 一 次 即 增 加 一 代 細 胞 存 活 率 測 定 - MTT assay 實 驗 原 理 MTT assay 是 一 種 生 物 學 上 常 用 以 測 定 細 胞 存 活 率 或 增 殖 作 用 的 方 法 MTT(1,3-[4,5-Dimethylthiazol-2yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide) 是 一 種 水 溶 性 呈 現 黃 色 的 tetrazolium 鹽 類 MTT 主 要 依 賴 活 細 胞 內 粒 線 體 中 的 琥 珀 酸 去 氫 酶 之 作 用 將 MTT 之 tetrazolium 鹽 類 轉 為 藍 紫 色 產 物 -MTT formazan, 如 圖 3.10, 並 於 細 胞 中 堆 積, 當 加 入 DMSO 將 其 溶 解, 則 可 利 用 測 OD 540nm 值 得 知 formazan 的 形 成 量, 即 細 胞 還 原 MTT 的 能 力 而 此 OD 540nm 值 代 表 粒 線 體 的 活 性, 即 表 示 活 細 胞 的 數 目, 故 MTT assay 能 作 為 細 胞 存 活 率 的 指 標 (Kaczmarek et al,2002) 圖 3.10 MTT 結 構 中 的 tetrazolium ring 被 切 斷, 形 成 formazan MTT 結 構 中 的 tetrazolium ring 被 切 斷, 形 成 formazan 只 有 活 細 胞 粒 線 體 中 的 琥 珀 酸 去 氫 酶 酵 素 才 具 有 活 性, 故 所 測 得 的 吸 光 值 與 細 胞 存 活 率 呈 正 比, 因 此 可 利 用 formazan 產 量 多 寡 評 估 細 胞 存 活 率 62
77 標 準 曲 線 1. 於 24 well 中 seeding 六 個 不 同 細 胞 密 度 2. 待 24 小 時 後 細 胞 貼 附 於 well 上, 移 除 well 中 的 medium 各 well 中 加 入 400μl medium 和 100μl MTT 溶 液 下 培 養 4 小 時 4. 移 除 含 MTT 之 medium, 每 well 加 入 500μl 之 DMSO 5. 每 一 well 中 取 100μl 至 96 well 6. 波 長 570nm 測 吸 光 值 7. 利 用 Excel 繪 製 細 胞 數 量 與 吸 光 值 之 關 係 曲 線, 對 此 線 作 線 性 迴 歸 可 得 標 準 曲 線 之 方 程 式 63
78 樣 品 測 定 1. 於 12 well 盤 中 seeding 個 細 胞 ( 需 經 前 處 裡 完 ) 2. 待 24 小 時 後 細 胞 貼 附 於 well 上, 移 除 well 中 的 medium 各 well 中 加 入 400μl medium 和 100μl MTT 溶 液 下 培 養 4 小 時 4. 移 除 含 MTT 之 medium, 每 well 加 入 500μl 之 DMSO 5. 每 一 well 中 取 100μl 至 96 well, 測 波 長 570nm 測 吸 光 值 6. 測 得 之 吸 光 值 數 據 代 回 標 準 曲 線 之 回 歸 曲 線 方 程 式, 可 得 相 對 應 的 細 胞 數 細 胞 形 態 固 定 及 觀 察 IRC 軟 骨 細 胞 分 別 經 過 天 培 養 後, 需 先 將 細 胞 固 定 於 薄 膜 試 片 上 再 使 用 SEM 進 行 拍 攝, 觀 察 細 胞 的 形 態 固 定 步 驟 : 2.5% 戊 二 醛, 30 min, 4 C PBS Wash 2 次 50% 酒 精,10min, 室 溫 70% 酒 精,10min 80% 酒 精,10min 90% 酒 精,10min 95% 酒 精,10min,2 次 抽 風 櫃 抽 乾 放 置 乾 燥 箱 儲 存 64
79 第 四 章 結 果 與 討 論 4.1 PHBV/ PCL 摻 合 膜 由 於 想 找 出 最 適 合 做 為 軟 骨 細 胞 支 架 的 電 紡 絲 混 紡 比 例, 於 是 先 以 摻 合 模 來 決 定, 期 望 藉 由 PHBV 來 改 善 PCL 的 機 械 性 質 及 熱 性 質 探 討 ; 另 一 方 面 結 合 PCL 的 優 點, 使 混 摻 出 來 的 纖 維 不 太 過 硬 或 脆, 反 而 會 有 韌 性 及 延 展 性 PHBV/ PCL 摻 合 膜 之 熱 性 質 分 析 圖 4.1 及 表 4.1 是 PHBV/ PCL 摻 合 膜 經 由 DSC 測 試 觀 察 所 得 到 的 結 果, 可 以 發 現 這 三 種 比 例 (75/25; 50/50; 25/75) 的 摻 合 膜 熔 點 (Tm) 產 生 雙 峰 值 現 象, 主 要 是 PHBV 由 兩 種 單 體 所 組 合, 兩 種 單 體 也 分 別 具 有 不 同 的 結 晶 相, 因 此 出 現 此 現 象, 如 圖 4.1 (Srubar III and Billington, 2013) 熔 點 以 第 二 峰 值 作 為 數 據 ( 取 物 質 熔 融 完 全 時 的 所 出 現 的 峰 值 ) 且 各 比 例 差 異 不 大, 而 三 種 摻 合 膜 結 晶 度 (Xc) 及 結 晶 溫 度 熱 焓 ( Tc) 均 有 因 為 添 加 PCL 而 降 低, 如 表 4.1 所 示 根 據 文 獻 指 出, 結 晶 度 越 高, 材 料 越 脆, 且 結 晶 度 下 降 有 助 於 增 加 材 料 的 降 解 速 度 ( 陳 風 雷 等 人, 2006) 做 為 適 合 組 織 工 程 用 的 支 架 需 要 保 持 一 些 韌 性 及 延 展 性, 使 支 架 在 體 內 不 會 因 任 意 的 外 力 而 脆 化 在 這 65
80 裡 顯 示 出 添 加 PCL 有 助 於 降 低 PHBV 的 結 晶 度, 也 可 能 助 於 增 加 降 解 速 率 雖 然 表 4.1 三 種 摻 合 膜 的 數 據 結 果 都 顯 示 出 雙 峰 值, 從 數 據 推 測 是 由 於 分 子 與 分 子 之 間 沒 有 均 勻 混 合 所 導 致, 但 不 因 此 結 果 而 有 影 響, 最 後 還 是 如 期 獲 得 較 低 結 晶 度 的 摻 合 膜 66
81 圖 4.1 不 同 PHBV/ PCL 比 例 摻 合 膜 的 DSC 表 4.1 不 同 PHBV/ PCL 摻 合 膜 之 熔 點 與 結 晶 度 Tm( C) Hm(J/g) Xc(%) Tc( C) Tc(J/g) pure PHBV PHBV75/PCL / / / / /4.82 PHBV50/PCL / / / / /17.17 PHBV25/PCL / / /33.74 NON/18.8 NON/31.72 pure PCL Tm:melting temperature; Hm:enthalpy of melting;tc:crystallization temperature; Tc:enthalpy of crystallization;crystallinity (Xc) =ΔHm /ΔHm 0 x 100 % Hm 0 = 136 J/g of PCL Hm 0 = 146 J/g of PHBV(Gonçalves and Martins-Franchetti, 2010) 67
82 4.1.2 PHBV/ PCL 摻 合 膜 之 拉 伸 試 驗 經 由 拉 伸 試 驗 可 以 看 出 材 料 的 機 械 性 質, 並 推 斷 其 可 能 的 機 械 強 度 圖 4.2 ~ 4.4 表 4.2 分 別 為 不 同 比 例 PHBV/ PCL(100/0,75/25, 50/50,25/75,0/100) 摻 合 膜 的 機 械 性 質 結 果 由 圖 4.2 發 現 添 加 PCL 後 的 三 種 摻 合 膜 其 楊 氏 系 數 均 較 PHBV 來 的 低, 其 中 又 以 PHBV/PCL:50/50 最 低, 降 低 了 *10-1 MPa, 楊 氏 系 數 越 低 代 表 材 料 延 展 性 越 好 在 圖 可 以 看 到 三 種 摻 合 膜 最 大 應 力 及 應 變 以 PHBV/PCL:25/75 最 佳, 符 合 具 有 支 撐 及 緩 衝 性, 但 依 表 4.1 的 結 晶 度 來 看,PHBV/PCL: 25/75 的 結 晶 度 兩 者 不 平 均, 落 差 最 大, 且 PHBV/PCL:50/50 結 晶 度 為 最 低, 較 利 於 往 後 降 解 性 試 驗, 所 以 在 這 邊 我 們 將 初 步 考 慮 使 用 此 兩 種 混 紡 比 例 (PHBV/PCL: 25/75 50/50) 作 為 細 胞 支 架 68
83 圖 4.2 不 同 PHBV/PCL 摻 合 膜 之 楊 氏 系 數 曲 線 圖 (n=6) 圖 4.3 不 同 PHBV/PCL 摻 合 膜 之 應 力 應 變 曲 線 圖 (n=6) 69
84 圖 4.4 不 同 PHBV/PCL 摻 合 膜 之 應 力 應 變 過 程 變 化 圖 表 4.2 不 同 PHBV/PCL 摻 合 膜 之 拉 伸 測 試 數 據 表 Maximum stress(mpa) Maximum strain(%) Young's Modulus(Mpa) PHBV(0%) 0.331± ± x10-1 ±1.09*10-1 BV75/CL25(25%) ± ± x10-1 ±9.28*10-3 BV50/CL50(50%) ± ± x10-1 ±4.15*10-3 BV25/CL75(75%) 0.218± ± x10-1 ±1.92*10-2 PCL(100%) ± ± x10-1 ±6.81*
85 4.1.3 PHBV/ PCL 摻 合 膜 之 水 接 觸 角 由 圖 表 4.3 我 們 可 以 發 現 由 於 兩 種 材 料 本 身 屬 於 較 疏 水 的 物 質, 所 以 三 種 摻 合 膜 的 水 接 觸 角 並 沒 有 改 善 很 多, 只 有 PHBV/PCL: 75/25 稍 微 親 水 些, 但 整 體 而 言 並 沒 有 太 大 的 差 異 由 於 差 異 不 大, 所 以 接 下 來 的 實 驗 我 們 將 會 做 電 漿 表 面 改 質 來 改 善 材 料 的 親 疏 水 性, 期 望 可 以 讓 材 料 表 面 由 疏 水 轉 親 水, 以 利 於 後 續 細 胞 培 養 的 實 驗 71
86 表 4.3 不 同 PHBV/PCL 摻 合 膜 之 水 接 觸 角 數 據 表 Composition(%) Contact angle( ) Average( ) PHBV ± 1.12 PHBV75/PCL ± 0.86 PHBV50/PCL ± 1.09 PHBV25/PCL ± 0.59 PCL ± 0.93 圖 4.5 不 同 PHBV/PCL 摻 合 膜 之 水 接 觸 角 (n = 3) 72
87 (a) ± 0.42 (b) (c) ± ± 1.09 (d) (e) ± ± 0.92 圖 4.6 不 同 比 例 PHBV/PCL 摻 合 膜 之 水 接 觸 角 圖 片 (a)phbv ; (b) PHBV75/PCL25 ; (c) PHBV50/PCL50 ; (d) PHBV25/PCL75 ; (e) PCL 73
88 4.2 高 分 子 黏 度 分 析 在 電 紡 絲 技 術 中, 高 分 子 的 量 與 濃 度 皆 會 影 響 其 黏 度, 若 黏 度 過 低 或 過 高 都 不 利 於 紡 絲, 所 以 為 了 能 掌 握 電 紡 溶 液 的 條 件, 我 們 對 兩 種 材 料 分 別 做 黏 度 測 試 本 研 究 以 音 叉 式 黏 度 計 進 行 黏 度 測 量, 由 圖 4.7 和 4.8 黏 度 檢 量 線 可 以 估 算 出 所 需 的 黏 度 其 預 調 配 的 高 分 子 濃 度 範 圍 以 現 階 段 高 分 子 的 性 質 而 言, 透 過 黏 度 測 試 法 可 以 改 善 紡 絲 材 料 的 不 穩 定 性, 以 固 定 黏 度 之 方 式 來 進 行 紡 絲 實 驗, 並 可 藉 此 測 試 來 調 整 靜 電 纺 絲 高 分 子 溶 液 所 需 要 的 黏 度 範 圍, 使 紡 絲 時 可 排 除 一 項 變 數 本 次 實 驗 控 制 黏 度 約 800cp,PHBV 為 8.5wt%,PCL 為 12wt% 74
89 Viscosity (cp) 圖 4.7 PCL 黏 度 與 濃 度 關 係 圖 y = x R 2 = Concentration (wt%) 圖 4.8 PHBV 黏 度 與 濃 度 關 係 圖 75
90 4.3 PHBV/ PCL 靜 電 紡 絲 纖 維 此 實 驗 使 用 本 研 究 所 發 酵 工 程 實 驗 室 所 生 產 的 PHBV 與 市 售 PCL 混 紡, 製 備 出 適 合 軟 骨 組 織 工 程 的 支 架 實 驗 參 數 以 電 壓 19~26.9KV, 工 作 距 離 13~15cm, 流 速 3ml/h 和 4ml/h, 濃 度 8.5wt%~12wt% 來 進 行 實 驗, 實 驗 結 果 將 以 數 據 統 計 分 析 來 和 摻 合 模 做 比 對, 找 出 最 適 合 做 為 支 架 的 混 摻 比 例 PHBV/ PCL 電 紡 絲 纖 維 SEM 影 像 圖 4.9 為 PHBV/ PCL 電 紡 絲 纖 維 500 倍 及 1000 倍 的 SEM 影 像 由 圖 4.9(b) 和 (d) 我 們 可 以 看 到 由 於 PCL 比 PHBV 較 具 延 展 性 的 關 係, 纖 維 形 態 也 較 細 長, 大 約 2.45±1.3μm 左 右 ; 而 PHBV 的 纖 維 細 度 大 約 是 3.51±1.6μm 圖 4.9(e) 和 (f) 則 是 因 混 摻 的 關 係 所 以 纖 維 細 度 介 於 兩 者 中 間 一 般 來 說, 這 是 以 電 紡 絲 技 術 製 備 出 的 電 紡 絲 纖 維 薄 膜, 此 種 纖 維 製 品 不 具 方 向 性 纖 維 形 成 機 制 是 由 於 在 纺 絲 過 程 中, 當 高 分 子 溶 液 在 通 過 紡 絲 噴 嘴 時 會 進 入 所 謂 的 穩 定 區 域, 這 時 纖 維 以 直 線 的 方 式 飛 向 收 集 板, 緊 接 著 進 入 不 穩 定 區 域 (Splay), 使 纖 維 透 過 電 場 力 量 呈 現 甩 動 的 狀 態 (Reneker et al., 2000) 最 後 形 成 本 實 驗 的 靜 電 紡 絲 纖 維 薄 膜 ; 以 纖 維 形 態 來 說, 這 樣 的 線 性 纖 維 薄 膜 可 以 應 用 於 組 織 工 程 支 架, 因 為 絕 大 部 分 的 細 胞 以 線 性 方 式 來 生 長, 也 可 以 透 過 纖 維 之 間 孔 隙 度 的 調 整 來 調 76
91 控 細 胞 之 生 長, 如 Lyu 等 人 利 用 電 紡 絲 纖 維 進 行 骨 組 織 修 復 研 究 (Lyu et al., 2013) 我 們 可 以 看 到 纖 維 與 纖 維 之 間 產 生 類 似 交 聯 的 現 象, 可 能 是 在 纺 絲 過 程 中 溶 劑 揮 發 未 完 全 所 導 致, 且 纖 維 在 定 型 之 前 都 有 可 能 呈 現 交 聯 形 態, 當 高 分 子 溶 劑 揮 發 完 全 時, 纖 維 形 態 才 會 完 全 固 化, 呈 現 完 整 的 纖 維 形 態 ; 具 文 獻 指 出, 交 聯 現 象 所 產 生 的 結 構 強 度 大 於 無 交 聯 之 纖 維 形 態 (Jiang et al., 2008), 因 此 本 研 究 所 製 備 的 電 紡 絲 纖 維 薄 膜 將 有 利 於 組 織 工 程 之 應 用 77
92 (a) (b) (c) (d) (e) (f) 圖 4.9 PHBV/ PCL 電 紡 絲 纖 維 形 態 (a)(b):pcl ; (c)(d):phbv ; (e)(f): PHBV/PCL(50/50) (a)(c)(e):500 倍 (b)(e)(f):1000 倍 78
93 4.3.2 PHBV/ PCL 電 紡 絲 纖 維 之 熱 分 析 將 不 同 比 例 的 PHBV/PCL 電 紡 絲 纖 維 薄 膜 進 行 熱 性 質 之 分 析, 主 要 探 討 高 分 子 在 溶 劑 溶 解 過 程 中 混 合 之 情 形 圖 4.10 結 果 顯 示 不 同 比 例 的 PHBV/PCL 電 紡 絲 纖 維 於 熔 點 發 生 前 有 一 吸 收 峰 值, 其 中 75/25 和 25/75 都 出 現 雙 吸 收 峰 現 象, 可 能 由 於 兩 種 材 料 在 溶 解 過 程 中 的 高 分 子 無 法 完 全 混 合 均 勻 所 導 致 ( 張 朝 順, 2005), 在 不 同 比 例 組 合 當 中 50/50 是 唯 一 與 PHBV PCL 具 相 同 的 單 一 吸 收 峰 值, 可 能 是 由 於 PHBV 與 PCL 結 晶 度 相 近 所 導 致, 如 表 4.4 所 示 結 果 中 出 現 雙 熔 點 峰 值, 是 因 為 高 分 子 在 溶 劑 內 混 合 時 並 非 分 子 交 聯 混 合 而 是 物 理 混 合, 所 以 數 據 上 會 顯 示 出 兩 種 高 分 子 的 結 晶 度 此 外, 從 表 4.4 與 表 4.1 可 以 發 現 PHBV/PCL 電 紡 絲 纖 維 與 摻 合 膜 比 較 之 下, 熔 點 (Tm) 與 結 晶 度 (Xc) 有 些 許 的 下 降, 目 前 已 知 高 分 子 於 溶 劑 中 可 能 會 使 高 分 子 結 構 受 到 些 許 改 變, 產 生 降 解 的 情 形, 分 子 量 熔 點 也 因 此 下 降 (Li et al,2012) 在 PHBV/PCL 50/50 比 例 的 電 紡 絲 纖 維 其 結 晶 度 較 其 他 組 合 電 紡 絲 纖 維 最 為 平 均 且 為 最 低, 推 測 有 助 於 增 加 纖 維 降 解 時 的 速 率 79
94 圖 4.10 不 同 PHBV/PCL 比 例 之 電 紡 絲 薄 膜 熱 分 析 圖 表 4.4 PHBV/PCL 的 電 紡 絲 薄 膜 熱 分 析 數 據 表 Tm( C) Hm(J/g) Xc(%) pure PHBV PHBV75/PCL / / /3.94 PHBV50/PCL / / /12.21 PHBV25/PCL / / /29.7 pure PCL Tm:melting temperature; Hm:enthalpy of melting ;Crystallinity (Xc)= ΔHm / ΔHm0 x 100 % Hm 0 = 136 J/g of PCL Hm 0 = 146 J/g of PHBV(Gonçalves and Martins-Franchetti, 2010) 80
95 4.3.3 PHBV/ PCL 電 紡 絲 纖 維 之 拉 伸 變 化 以 不 同 比 例 PHBV/ PCL 電 紡 絲 薄 膜 進 行 拉 伸 試 驗, 探 討 不 同 PHBV/ PCL 組 成 之 最 大 應 力 最 大 應 變 與 楊 氏 係 數 的 變 化, 圖 結 果 顯 示, 最 大 應 變 隨 著 PCL 的 添 加 成 正 比, 而 整 體 最 大 應 力 與 添 加 比 例 成 反 比, 添 加 PCL 其 目 的 為 改 善 PHBV 易 脆 性 質, 就 彈 性 而 言,50/50 與 25/75 比 例 可 以 大 幅 增 加 材 料 彈 性 在 最 大 應 力 的 部 分 則 是 以 50/50 比 例 較 佳, 主 要 是 因 為 材 料 在 溶 劑 溶 解 過 程 中 分 子 單 體 混 合 較 均 勻, 由 熱 分 析 與 拉 伸 試 驗 都 獲 得 類 似 的 結 果 在 圖 4.13 楊 氏 係 數 部 分, 隨 著 PCL 添 加 比 例 上 升 楊 氏 係 數 有 明 顯 的 下 降 趨 勢, 但 是 當 PHBV/PCL 比 例 從 75/50 增 加 至 25/50 時 卻 無 顯 著 差 異, 意 味 著 此 範 圍 比 例 之 電 紡 絲 薄 膜 就 楊 氏 係 數 而 言 差 異 甚 小, 楊 氏 係 數 主 要 由 應 力 與 應 變 之 比 值 所 獲 得, 當 楊 氏 係 數 越 高 時, 材 料 本 身 具 有 較 大 的 應 力, 楊 氏 係 數 較 低 則 材 料 彈 性 較 佳, 綜 合 整 個 拉 伸 數 據 之 結 果 顯 示 PHBV/PCL(50/50) 比 例 有 利 於 增 加 材 料 彈 性, 又 能 夠 保 有 一 定 的 應 力 強 度, 不 因 添 加 PCL 而 產 生 下 降 情 形, 因 此 將 以 PHBV/PCL(50/50) 做 後 續 的 實 驗 81
96 圖 4.11 不 同 PHBV/PCL 比 例 之 電 紡 絲 纖 維 應 力 應 變 曲 線 圖 (n=6) 圖 4.12 不 同 PHBV/PCL 比 例 電 紡 絲 纖 維 的 作 圖 (n=6) 圖 4.13 不 同 PHBV/PCL 比 例 電 紡 絲 纖 維 之 楊 氏 係 數 圖 (n=6) 82
97 4.3.4 PHBV/ PCL 電 紡 絲 纖 維 之 水 接 觸 角 將 不 同 比 例 的 PHBV/ PCL 電 紡 絲 纖 維 做 水 接 觸 角 測 試, 從 圖 4.14 可 以 發 現 電 紡 絲 薄 膜 的 接 觸 角 並 沒 有 因 為 使 用 電 紡 絲 技 術 而 纖 維 更 親 水, 而 電 紡 絲 纖 維 與 摻 合 膜 水 接 觸 角 在 相 同 組 成 比 較 之 下, 沒 有 太 大 顯 著 差 異 ( 小 於 6 ), 後 續 的 實 驗 將 以 PHBV/PCL: 50/50 比 例 做 為 電 紡 絲 纖 維 的 混 紡 比 例, 進 一 步 再 給 予 電 漿 表 面 改 質 及 細 胞 相 容 性 的 研 究 83
98 表 4.5 不 同 PHBV/PCL 比 例 的 電 紡 絲 薄 膜 水 接 觸 角 數 據 表 Composition(%) Contact angle( ) Average( ) PHBV ±1.75 BV75/CL ±1.34 BV50/CL ±2.38 BV75/CL ±1.76 PCL ±2.59 圖 4.14 不 同 PHBV/PCL 比 例 的 電 紡 絲 纖 維 水 接 觸 角 (n =6) 84
99 4.3.5 降 解 性 測 試 透 過 降 解 性 試 驗 來 了 解 PHBV/ PCL 電 紡 絲 纖 維 在 降 解 的 過 程 中 發 生 的 變 化, 除 了 纖 維 形 態 和 重 量 改 變 之 外, 我 們 同 時 也 探 討 他 的 熱 性 質 與 拉 升 強 度 的 變 化 PHBV/ PCL 電 紡 絲 纖 維 的 重 量 損 失 變 化 本 實 驗 的 降 解 性 試 驗 是 以 磷 酸 緩 衝 溶 液 (PBS ) + 胰 蛋 白 酶 trypsin 模 擬 細 胞 支 架 在 人 體 內 降 解 的 情 況 在 圖 4.15 中 結 果 顯 示 隨 著 降 解 的 時 間 增 加 ( 第 天 ), 重 量 開 始 有 下 降 的 趨 勢 支 架 的 降 解 速 度 往 往 會 影 響 組 織 工 程 修 復 的 程 度,Yamamoto 等 學 者 提 到, 在 骨 折 需 要 約 10 週 的 修 復 時 間, 若 支 架 分 解 過 快, 則 無 法 使 組 織 完 全 修 復, 當 支 架 分 解 過 慢, 則 可 能 間 接 阻 礙 組 織 修 復 之 情 形 (Yamamoto et.al,2005) 在 結 果 中 隨 著 PCL 比 例 增 加 降 解 速 度 有 減 慢 的 趨 勢, 但 第 四 週 重 量 損 失 率 與 單 一 高 分 子 PHBV 電 紡 絲 纖 維 相 比 較 卻 沒 有 太 大 差 異, 說 明 混 摻 比 例 不 大 於 50/50 時, 除 了 可 以 有 效 增 加 材 料 彈 性, 降 解 速 率 上 也 沒 有 顯 著 之 影 響 從 第 四 週 數 據 上 可 以 推 測 微 生 物 所 生 產 的 酯 類 高 分 子 (PHBV, 66.75% ) 分 解 速 率 與 化 學 合 成 (PCL, 96.55%) 相 比 之 下 快 了 近 30%, 而 本 研 究 所 添 加 PHBV /PCL:50/50 比 例 下, 物 質 剩 餘 重 量 85
100 也 達 70.25%, 初 步 證 實 以 微 生 物 發 酵 所 生 產 之 生 物 可 分 解 高 分 子 可 能 較 化 學 合 成 之 降 解 速 率 快 一 些, 根 據 摻 合 膜 數 據 推 測 可 能 由 於 PCL 結 晶 度 高 於 PHBV 所 導 致 86
101 圖 4.15 不 同 PHBV/ PCL 電 紡 絲 纖 維 的 重 量 損 失 變 化 圖 87
102 PHBV/ PCL 電 紡 絲 纖 維 在 不 同 降 解 時 間 對 熱 分 析 影 響 將 PHBV/PCL 在 不 同 降 解 時 間 之 樣 品 分 別 進 行 熱 分 析, 探 討 在 降 解 過 程 中 熔 點 與 結 晶 度 的 變 化, 並 進 一 步 證 實 因 PCL 結 晶 度 高 於 PHBV 所 導 致 降 解 速 率 變 慢 的 機 制 表 4.6 顯 示 PHBV 相 較 於 PCL 整 體 結 晶 度 低 了 約 2~8%, 初 步 證 實 先 前 降 解 速 率 與 材 料 結 晶 度 有 密 切 關 聯 當 材 料 結 晶 程 度 越 高 則 降 解 速 度 越 慢, 結 晶 度 越 低 則 反 之 從 表 4.4 結 果 中 發 現 結 晶 度 有 先 下 降 後 上 升 的 趨 勢, 其 主 要 原 因 為 高 分 子 糾 纏 結 構 的 非 結 晶 區 受 到 破 壞 使 得 結 晶 度 下 降, 接 著 分 子 單 體 產 生 的 新 結 晶 造 成 結 晶 度 上 升, 最 後 結 晶 區 開 始 受 到 破 壞, 使 結 晶 度 有 下 降 趨 勢 (Hu et al,2011) 三 組 混 紡 PHBV/PCL 電 紡 絲 纖 維 其 結 晶 度 都 低 於 未 混 紡 的 纖 維, 且 以 50/50 結 晶 度 最 為 平 均 熔 點 的 部 分 對 這 三 組 混 紡 纖 維 沒 有 太 大 的 顯 著 差 異, 所 以 在 這 裡 我 們 挑 選 50/50 比 例 做 為 後 續 實 驗 之 比 例 參 數 88
103 表 4.6 不 同 PHBV/PCL 比 例 電 紡 絲 在 降 解 性 試 驗 的 熱 分 析 degradation time (Day) Tm( ) pure PHBV PHBV75/PCL / / / / /61.32 PHBV50/PCL / / / / /63.56 PHBV25/PCL / / / / /64.3 pure PCL Hm(J/g) pure PHBV PHBV75/PCL / / / / /4.98 PHBV50/PCL / / / / /30.39 PHBV25/PCL / / / / /35.69 pure PCL Xca(%) pure PHBV PHBV75/PCL / / / / /3.66 PHBV50/PCL / / / / /22.35 PHBV25/PCL / / / / /16.43 pure PCL Tm:melting temperature; Hm:enthalpy of melting ;Crystallinity (Xc)= ΔHm / ΔHm0 x 100 % Hm 0 = 136 J/g of PCL Hm 0 = 146 J/g of PHBV(Gonçalves and Martins-Franchetti, 2010) 89
104 PHBV/ PCL 電 紡 絲 纖 維 在 不 同 降 解 時 間 之 拉 伸 變 化 將 降 解 個 時 間 點 之 樣 品 進 行 拉 伸 試 驗, 並 探 討 降 解 過 程 對 機 械 性 質 的 改 變, 由 圖 4.16 ~ 4.18 結 果 與 上 述 熱 分 析 進 行 對 照, 並 獲 得 相 對 應 之 結 果, 當 材 料 結 晶 度 越 高 時, 材 料 應 力 也 因 此 提 高, 間 接 使 得 降 解 速 率 變 慢, 由 結 果 中 得 到 證 實 從 圖 4.16 結 果 中 發 現, 當 降 解 28 天 時 50/50 比 例 具 有 較 佳 的 機 械 性 質, 可 能 是 由 於 高 分 子 在 溶 解 過 程 中 單 體 與 單 體 之 間 能 夠 均 勻 混 合 且 50/50 比 例 顯 示 出 比 其 它 比 例 結 晶 度 低 降 解 速 率 也 適 中, 於 降 解 28 天 時 又 能 夠 保 有 一 定 機 械 應 力 與 彈 性, 作 為 生 醫 材 料 來 說 是 非 常 好 的 現 象, 這 也 間 接 提 高 材 料 的 應 用 領 域, 例 如 手 術 縫 線 彈 性 敷 料 透 析 膜 等 由 表 4.7 結 果 顯 示, 降 解 28 天 後 的 最 大 應 力 與 最 大 應 變 之 PHBV/PCL(pure PHBV, 75/25, 50/50, 25/75, pure PCL) 依 序 分 別 為 (Mpa) 10.04%;0.0961(Mpa) 81.76%;0.1002(Mpa) %;0.0463(Mpa) %;0.0322(Mpa) 71.87%, 結 果 顯 示 出 50/50 比 例 有 利 於 生 醫 材 料 之 應 用 90
105 圖 4.16 不 同 PHBV/PCL 比 例 在 降 解 過 程 中 的 最 大 應 力 曲 線 圖 (n=6) 圖 4.17 不 同 PHBV/PCL 比 例 在 降 解 過 程 中 的 楊 氏 係 數 曲 線 圖 (n=6) 91
106 圖 4.18 不 同 PHBV/PCL 比 例 在 降 解 過 程 中 的 最 大 應 變 曲 線 圖 (n=6) 表 4.7 不 同 PHBV/PCL 電 紡 絲 纖 維 在 不 同 降 解 時 間 之 拉 伸 數 據 表 Maximum stress(mpa) 0(day) 7(day) 14(day) 21(day) 28(day) PHBV ± ± ± ± ± BV75/CL ± ± ± ± ± BV50/CL ± ± ± ± ± BV25/CL ± ± ± ± ± PCL ± ± ± ± ± Maximum strain(%) 0(day) 7(day) 14(day) 21(day) 28(day) PHBV ± ± ± ± ± 3.18 BV75/CL ± ± ± ± ± BV50/CL ± ± ± ± ± BV25/CL ± ± ± ± ± PCL ± ± ± ± ± Young's modulus(mpa) 0(day) 7(day) 14(day) 21(day) 28(day) PHBV ± ± ± ± ± BV75/CL ± ± ± ± ± BV50/CL ± ± ± ± ± BV25/CL ± ± ± ± ± PCL ± ± ± ± ±
107 4.3.6 UV 光 照 射 後 電 紡 絲 纖 維 的 形 態 將 PHBV PHBV/PCL(50/50) PCL 透 過 UV 照 射 方 式, 探 討 材 料 於 殺 菌 過 程 中 對 纖 維 形 態 之 變 化, 由 圖 4.19 結 果 發 現 PHBV 與 PHBV/PCL(50/50) 經 過 12 小 時 UV(30 W/ cm²) 照 射 後 出 現 些 許 裂 解, 其 可 能 原 因 為 PHBV 結 晶 度 較 低, 分 子 結 構 容 易 受 到 破 壞 所 導 致 此 現 象 說 明 材 料 放 置 於 自 然 環 境 中 (13.76 W/cm²) 透 過 日 照 也 可 能 產 生 分 解 的 情 形, 透 過 估 算 後 於 自 然 環 境 中 日 照 小 時, 也 可 能 獲 得 相 同 的 裂 解 效 果, 因 此, 此 材 料 除 了 生 醫 材 料 上 的 應 用 還 有 利 於 無 須 耐 久 度 之 產 品 應 用, 如 購 物 袋 食 品 容 器 飲 料 品 連 接 環 吸 管 等 如 果 將 材 料 經 過 UV 殺 菌 處 理 須 注 意 分 解 之 情 形, 在 後 續 研 究 中, 將 控 制 照 射 殺 菌 之 時 間, 避 免 材 料 產 生 裂 解 之 情 形 93
108 (a) (b) (c) 圖 4.19 PHBV/PCL 電 紡 絲 薄 膜 於 UV 照 射 後 之 SEM 圖 (a):phbv; (b):phbv/pcl;(c):pcl 94
109 4.4 電 漿 表 面 處 理 於 先 前 的 實 驗 結 果 顯 示 PHBV/PCL(50/50) 為 最 好 的 混 紡 比 例 所 以 以 下 的 實 驗 將 用 (50/50) 的 混 紡 比 例 來 探 討 纖 維 表 面 親 疏 水 性 PHBV/ PCL 電 紡 絲 纖 維 表 面 親 疏 水 性 變 化 將 PHBV/PCL 進 行 電 漿 改 質 處 理, 並 利 用 水 接 觸 角 方 式 探 討 HMDSZ 與 O 2 改 質 方 法 對 親 疏 水 性 之 影 響 從 圖 表 4.8 結 果 顯 示, PHBV PHBV/PCL(50/50) PCL 於 未 電 漿 處 理 前 之 水 接 觸 角 分 別 為 , 以 HMDSZ 電 漿 改 質 後 變 為 更 加 疏 水, 而 O 2 則 是 非 常 親 水, 顯 示 兩 種 電 漿 確 實 有 成 功 改 質 纖 維 表 面 然 而 無 論 透 過 何 種 電 漿 方 式 進 行 改 質, 都 與 材 料 本 身 之 親 疏 水 性 無 大 太 關 聯, 因 為 在 電 漿 改 質 過 程 中, 並 不 會 受 材 料 原 本 之 親 疏 水 性 影 響 但 電 漿 改 質 後 之 材 料 表 面 暴 露 在 空 氣 中 容 易 受 到 氧 化 水 解 之 現 象 (Huang et al,2004), 這 是 改 質 後 尚 須 注 意 的 地 方, 在 後 續 實 驗 中 有 針 對 電 漿 解 離 之 速 率 ( 天 ) 進 行 探 討, 以 了 解 兩 種 電 漿 (HMDCZ 與 O 2) 對 於 浸 泡 培 養 液 時 間 的 長 短 是 否 會 影 響 細 胞 生 長 做 探 討 95
110 69.71± ± ±1.39 (a) (b) (c) 88.15± ± ±0.38 (d) (e) (f) <10 <10 <10 (g) (h) (i) 圖 4.20 PHBV/ PCL 電 紡 絲 纖 維 電 漿 前 後 水 接 觸 角 之 測 量 圖 Untreatment : (a)pcl;(b) PHBV-PCL;(c)PHBV HMDCZ : (d)pcl;(e) PHBV-PCL;(f)PHBV 氧 氣 : (g)pcl;(h) PHBV-PCL;(I)PHBV 96
111 圖 4.21 PHBV/ PCL 電 紡 絲 纖 維 電 漿 前 後 水 接 觸 角 之 變 化 (n=3) 表 4.8 PHBV/ PCL 電 紡 絲 纖 維 電 漿 前 後 水 接 觸 角 之 數 據 圖 untreatment Water Contact angle( ) mean PCL ±1.17 PHBV-PCL ±0.80 PHBV ±1.39 HMDSZ PCL ±0.14 PHBV-PCL ±0.37 PHBV ±0.38 氧 氣 PCL <10 <10 <10 <10 PHBV-PCL <10 <10 <10 <10 PHBV <10 <10 <10 <10 97
112 4.4.2 不 同 電 漿 與 電 紡 絲 纖 維 對 浸 泡 培 養 基 時 間 的 影 響 本 實 驗 將 以 電 漿 改 質 HMDSZ 與 O 2 之 PHBV/PCL 電 紡 絲 薄 膜 透 過 浸 泡 培 養 基 的 方 式 探 討 浸 泡 天 之 後 親 疏 水 性 之 影 響 從 圖 4.22 結 果 顯 示,HMDCZ 浸 泡 天 後 的 水 接 處 觸 角 沒 有 太 大 變 化, 只 有 於 浸 泡 7 天 後 出 現 少 許 的 下 降, 於 表 4.9 計 算 出 HMDCZ 電 漿 處 理 之 PHBV PHBV/PCL PCL 電 紡 絲 纖 維 浸 泡 7 天 後 水 接 觸 角 降 低 幅 度 依 序 為 4.59% 4.28% 5.6%, 均 無 太 大 顯 著 差 異 ; 初 步 證 實 HMDCZ 電 漿 處 理 較 不 容 易 受 液 態 環 境 所 影 響 在 O 2 的 部 份 則 出 現 水 接 觸 角 增 加 的 現 象, 推 測 可 能 是 氧 氣 電 漿, 容 易 受 到 環 境 濕 度 或 浸 泡 液 體 所 影 響 或 是 電 漿 膜 厚 太 薄 易 與 基 材 分 離, 而 導 致 O 2 電 漿 水 接 觸 角 有 増 加 的 趨 勢, O 2 電 漿 在 浸 泡 第 一 天 時, 三 種 材 料 均 <10, 當 PHBV PHBV/PCL PCL 浸 泡 七 天 後 水 接 觸 角 分 別 上 升 至 , 與 表 4.9 電 漿 處 理 前 相 比, 已 近 似 於 電 漿 處 理 前 之 水 接 觸 角, 並 從 數 據 上 初 步 證 實 O 2 電 漿 處 理 於 浸 泡 培 養 基 七 天 後, 電 漿 分 離 程 度 已 >95%, 此 結 果 與 細 胞 培 養 的 狀 況, 下 一 節 將 會 探 討 98
113 圖 4.22 PHBV/ PCL 電 紡 絲 纖 維 於 電 漿 改 質 後 浸 泡 培 養 基 時 間 對 水 接 觸 角 的 影 響 表 4.9 PHBV/ PCL 電 紡 絲 纖 維 電 漿 改 質 與 浸 泡 培 養 基 的 水 接 觸 角 數 據 Contact Angle( ) Plasma Culture time(day) Before After PCL PCL(HMDCZ) PCL(O2) <10 < PHBV-PCL PHBV-PCL(HMDCZ) PHBV-PCL(O2) <10 < PHBV 72.9 PHBV(HMDCZ) PHBV(O2) <10 <
114 4.5 細 胞 培 養 本 實 驗 使 用 大 鼠 軟 骨 細 胞 分 別 於 PHBV PHBV/PCL(50/50) PCL 進 行 培 養, 由 於 先 前 的 實 驗 結 果 顯 示 PHBV/PCL(50/50) 為 最 好 的 混 紡 比 例 所 以 本 實 驗 將 用 (50/50) 比 例 來 探 討 摻 合 膜 電 紡 絲 纖 維 電 漿 改 質 等, 以 了 解 材 料 於 不 同 形 式 或 不 同 改 質 之 方 式 對 細 胞 生 長 的 影 響 PHBV/ PCL 摻 合 膜 對 細 胞 生 長 的 影 響 將 先 前 所 探 討 之 最 適 化 比 例 PHBV/PCL(50/50) 與 PHBV 和 PCL 摻 合 膜 進 行 細 胞 活 性 測 試, 探 討 不 同 類 別 之 摻 合 膜 對 細 胞 相 容 性 之 影 響 圖 4.23 結 果 顯 示 在 培 養 一 天 時,PHBV 與 PHBV-PCL 比 PCL 高 出 一 些, 可 能 是 PHBV 與 PHBV-PCL 的 水 接 觸 角 比 PCL 低 所 導 致 隨 著 培 養 天 數 到 天 時, 三 種 摻 合 膜 於 細 胞 培 養 時 沒 有 太 大 顯 著 差 異, 從 三 種 材 料 的 基 本 特 性 ( 水 接 觸 角 結 晶 度 ) 來 看, 雖 然 有 些 許 差 別, 但 乃 屬 於 類 似 之 性 質, 所 以 在 細 胞 培 養 天 後, 較 無 太 大 顯 著 差 異, 其 詳 細 機 制 有 待 進 一 步 探 討 100
115 圖 4.23 PHBV/ PCL 摻 合 膜 於 細 胞 培 養 之 生 長 曲 線 101
116 4.5.2 PHBV/ PCL 電 紡 絲 纖 維 對 細 胞 生 長 的 影 響 實 驗 中 將 紡 於 圓 形 蓋 玻 片 之 電 紡 絲 纖 維 進 行 細 胞 培 養, 探 討 不 同 組 成 之 細 胞 支 架 對 細 胞 生 長 的 影 響 由 圖 4.24 結 果 顯 示,PCL 在 整 個 培 養 期 間 之 生 長 速 度, 均 高 出 PHBV 與 PHBV/PCL 兩 種 纖 維, 可 能 因 素 是 由 於 PCL 在 先 前 數 據 中 的 纖 維 尺 度 較 其 它 兩 種 纖 維 低 了 約 50% 左 右, 當 纖 維 尺 度 越 小 時, 纖 維 比 表 面 積 也 會 因 此 增 加, 文 獻 指 出, 當 基 材 具 高 度 比 表 面 積 可 以 有 利 於 細 胞 貼 附 與 生 長 ( 蔡, 2011), 因 此 PCL 之 細 胞 生 長 數 量 有 較 高 的 趨 勢 先 前 所 探 討 的 最 適 化 PHBV/PVL(50/50) 比 例 於 結 果 中 沒 有 出 現 較 佳 的 生 長 趨 勢, 但 相 較 於 純 PHBV 纖 維 相 比 高 出 許 多, 於 培 養 時 間 天 分 別 高 於 純 PHBV 纖 維 約 24% 35% 21% 38%, 顯 然 添 加 PCL 於 PHBV 當 中 有 利 於 細 胞 的 生 長, 但 生 長 效 果 有 待 改 進, 因 此 在 後 續 實 驗 中 將 以 電 漿 改 質 的 方 式 提 高 PHBV/PVL(50/50) 之 親 疏 水 性, 間 接 增 加 纖 維 於 細 胞 培 養 時 之 生 長 速 率 102
117 圖 4.24 PHBV/PCL 電 紡 絲 纖 維 之 細 胞 生 長 曲 線 103
118 4.5.3 電 漿 處 理 後 之 PHBV/ PCL 電 紡 絲 纖 維 對 細 胞 的 影 響 本 實 驗 透 過 氧 氣 HMDSZ 與 氧 氣 + HMDSZ 之 電 漿 處 理 方 式 進 行 改 質, 並 分 別 探 討 PCL PHBV/PCL PCL 於 三 種 電 漿 處 理 方 式 後 對 細 胞 生 長 曲 線 與 SEM 纖 維 形 態 之 影 響 氧 氣 電 漿 處 理 之 PHBV/ PCL 電 紡 絲 纖 維 對 細 胞 的 影 響 先 前 數 據 指 出, 透 過 氧 氣 電 漿 處 理 方 式 之 三 種 電 紡 絲 纖 維 水 接 觸 角 均 < 10, 顯 示 出 透 過 氧 氣 電 漿 處 理 之 電 紡 絲 纖 維 水 接 觸 角 出 現 大 幅 下 降, 使 得 細 胞 培 養 能 得 到 較 顯 著 之 差 異 圖 4.25 結 果 顯 示, PHBV/PCL(50/50) 於 細 胞 培 養 3 天 後 出 現 比 純 PHBV 和 PCL 好 的 生 長 趨 勢, 從 SEM 圖 來 看, 圖 4.26~4.28 紅 圈 處 為 實 驗 中 所 培 養 之 細 胞 形 態, 天 之 SEM 圖 發 現 PHBV/PVL(50/50) 於 培 養 第 5 天 後 的 纖 維 上, 貼 附 許 多 的 細 胞, 而 純 PHBV 和 PCL 就 少 了 許 多, 於 生 長 7 天 後 的 纖 維 都 覆 蓋 上 滿 滿 的 細 胞 株, 在 圖 4.25 生 長 曲 線 上 卻 出 現 下 降 的 情 形, 對 照 先 前 的 電 漿 處 理 於 浸 泡 培 養 基 後 的 水 接 觸 角 數 據 中 可 以 推 測, 培 養 第 七 天 的 MTT 生 長 曲 線 可 能 是 電 漿 分 離 所 導 致, 先 前 數 據 指 出 纖 維 浸 泡 於 培 養 基 第 七 天 時, 水 接 觸 角 已 接 近 於 未 電 獎 處 理 之 表 面, 於 SEM 圖 中 無 法 發 現 此 結 果, 從 形 態 上 無 法 區 分 死 細 胞 及 活 細 胞 之 形 態 在 MTT 分 析 當 中, 只 有 活 細 胞 才 能 夠 進 行 反 應 ( 染 色 ), 因 此 常 作 為 細 胞 活 性 的 分 析 方 法 104
119 圖 4.25 氧 氣 電 漿 之 PHBV/ PCL 電 紡 絲 纖 維 細 胞 生 長 曲 線 (a) (b) (c) 圖 4.26 細 胞 在 氧 氣 電 漿 之 PHBV 電 紡 絲 纖 維 膜 SEM (a) 1 天 (b) 3 天 (c) 7 天 生 長 之 情 形 105
120 (a) (b) (c) 圖 4.27 細 胞 在 氧 氣 電 漿 之 PHBV/PCL (50/50) 電 紡 絲 纖 維 膜 SEM (a)1 天 (b) 3 天 (c)7 天 生 長 之 情 形 (a) (b) (c) 圖 4.28 細 胞 在 氧 氣 電 漿 之 PCL 電 紡 絲 纖 維 膜 SEM(a)1 天 (b) 3 天 (c) 7 天 生 長 之 情 形 106
121 HMDSZ 電 漿 處 理 之 PHBV/ PCL 電 紡 絲 纖 維 對 細 胞 的 影 響 先 前 數 據 指 出, 透 過 HMDSZ 電 漿 處 理 方 式 之 三 種 電 紡 絲 纖 維 水 接 觸 角 約 為 85.9 ~ 88.2, 顯 然 透 過 HMDSZ 電 漿 處 理 之 電 紡 絲 纖 維 水 接 觸 角 有 些 許 提 高, 使 纖 維 變 得 更 加 疏 水, 但 從 細 胞 培 養 中 卻 能 得 到 與 氧 氣 電 漿 處 理 有 類 似 的 趨 勢 由 圖 4.29 結 果 顯 示,PHBV/PVL(50/50) 在 細 胞 培 養 結 果 有 較 好 的 趨 勢, 於 細 胞 培 養 第 七 天 時 出 現 些 許 下 降 的 趨 勢, 推 測 可 能 與 氧 氣 電 漿 處 理 有 類 似 的 機 制, 從 圖 4.30~4.32 SEM 顯 示 紅 圈 處 為 細 胞 生 長 於 纖 維 上 之 形 態, 其 細 胞 數 量 較 氧 氣 電 漿 處 理 少 上 許 多, 推 測 可 能 是 表 面 較 疏 水 所 導 致, 在 細 胞 的 生 長 機 制 當 中, 細 胞 必 須 先 於 材 料 上 進 行 貼 附, 接 著 細 胞 才 進 行 分 化, 從 氧 氣 與 HMDSZ 電 漿 處 理 結 果 可 以 推 測, 電 漿 分 離 可 能 使 細 胞 數 有 下 降 的 趨 勢 107
122 圖 4.29 HMDSZ 電 漿 之 PHBV/ PCL 電 紡 絲 纖 維 細 胞 生 長 曲 線 (a) (b) (c) 圖 4.30 細 胞 在 HMDSZ 電 漿 之 PHBV 電 紡 絲 纖 維 膜 SEM (a)1 天 (b) 3 天 (c) 7 天 生 長 之 情 形 108
123 (a) (b) (c) 圖 4.31 細 胞 在 HMDSZ 電 漿 之 PHBV/PCL(50/50) 電 紡 絲 纖 維 膜 SEM(a)1 天 (b) 3 天 (c) 7 天 生 長 之 情 形 (a) (b) (c) 圖 4.32 細 胞 在 HMDSZ 電 漿 之 PCL 電 紡 絲 纖 維 膜 SEM (a)1 天 (b) 3 天 (c) 7 天 生 長 之 情 形 109
124 HMDSZ+ 氧 氣 電 漿 處 理 PHBV/ PCL 電 紡 絲 纖 維 對 細 胞 的 影 響 本 實 驗 期 望 透 過 HMDSZ 電 漿 處 理 後 可 以 有 利 於 穩 定 氧 氣 電 漿 處 理 後 的 不 穩 定 性, 因 此 本 實 驗 依 序 以 HMDSZ 和 氧 氣 進 行 電 漿 處 理, 探 討 此 種 電 漿 處 理 方 式 對 細 胞 生 長 之 影 響 由 圖 4.33~4.36 結 果 顯 示, 培 養 於 第 七 天 之 細 胞 數 量 與 單 獨 氧 氣 電 漿 處 理 之 數 據, 相 較 於 第 五 天 的 細 胞 數 量 都 有 大 幅 下 降 的 趨 勢, 推 斷 此 方 法 並 不 能 穩 定 氧 氣 於 電 漿 處 理 後 所 產 生 的 不 穩 定 性, 其 細 胞 數 下 降 原 因 有 待 進 一 步 研 究 綜 合 最 後 結 果, 由 圖 4.33 與 先 前 氧 氣 和 HMDSZ 電 獎 處 理 之 細 胞 培 養 結 果 都 有 一 共 通 之 處, 就 是 本 研 究 所 製 備 之 PHBV/PCL(50/50) 電 紡 絲 纖 維 薄 膜 於 細 胞 培 養 時 都 具 有 較 好 的 結 果 110
125 圖 4.33 氧 氣 + HMDSZ 電 漿 之 PHBV/ PCL 電 紡 絲 纖 維 細 胞 生 長 曲 線 (a) (b) (c) 圖 4.34 細 胞 在 HMDSZ +O 2 電 漿 之 PHBV 電 紡 絲 纖 維 膜 SEM (a)1 天 (b) 3 天 (c) 7 天 培 養 之 情 形 111
6-1-1極限的概念
選 修 數 學 (I-4 多 項 式 函 數 的 極 限 與 導 數 - 導 數 與 切 線 斜 率 定 義. f ( 在 的 導 數 : f ( h 對 實 函 數 f ( 若 極 限 存 在 h h 則 稱 f ( 在 點 可 微 分 而 此 極 限 值 稱 為 f ( 在 的 導 數 以 f ( 表 示 f ( f ( 函 數 f ( 在 的 導 數 也 可 以 表 成 f ( 註 : 為 了
More information所 3 學 分 課 程, 及 兩 門 跨 領 域 課 程 共 6 學 分 以 上 課 程 學 生 在 修 課 前, 必 須 填 寫 課 程 修 課 認 定 表, 經 班 主 任 或 指 導 教 授 簽 名 後 始 認 定 此 課 程 學 分 ) 10. 本 規 章 未 盡 事 宜, 悉 依 學 位
95 年 訂 定 96 年 11 月 修 正 97 年 10 月 修 正 100 年 2 月 修 正 101 年 4 月 修 正 102 年 1 月 修 正 103 年 4 月 修 正 103 學 年 度 入 學 新 生 適 用, 舊 生 可 比 照 適 用 1. 研 究 生 須 於 入 學 後 第 二 學 期 開 學 前 選 定 指 導 教 授, 經 課 程 委 員 會 認 定 後 方 得 繼 續
More informationMicrosoft Word - 10100000191.doc
臺 灣 集 中 保 管 結 算 所 股 份 有 限 公 司 辦 理 認 購 ( 售 ) 權 證 帳 簿 劃 撥 作 業 配 合 事 項 部 分 條 文 修 正 條 文 對 照 表 附 件 1 修 正 條 文 現 行 條 文 說 明 第 五 章 認 購 ( 售 ) 權 證 之 權 利 行 使 第 一 節 認 購 權 證 採 證 券 給 付 或 以 證 券 給 付 之 認 購 權 證 發 行 人 得 選
More information骨 折 別 日 數 表 1. 鼻 骨 眶 骨 ( 含 顴 骨 ) 14 天 11. 骨 盤 ( 包 括 腸 骨 恥 骨 坐 骨 薦 骨 ) 40 天 2. 掌 骨 指 骨 14 天 12. 臂 骨 40 天 3. 蹠 骨 趾 骨 14 天 13. 橈 骨 與 尺 骨 40 天 4. 下 顎 ( 齒
查 詢 本 公 司 資 訊 公 開 說 明 文 件, 請 上 本 公 司 網 站, 南 山 產 物 團 體 傷 害 保 險 傷 害 醫 療 保 險 給 付 ( 日 額 型 ) 附 加 條 款 ( 主 要 給 付 項 目 : 傷 害 醫 療 保 險 金 日 額 保 險 金 ) 100.05.27(100) 美 亞 保 精 字 第 0097 號 函 備 查 101.08.08(101) 美 亞 保 精
More informationBSP 烤箱 - 封面-2
BSPO615 使 用 及 安 裝 說 明 書 總 代 理 優 氏 集 團 客 林 渥 股 份 有 限 公 司 台 北 市 內 湖 區 行 愛 路 69 號 2 樓 TEL 02-2794 2588 FAX 02-2794 3789 台 中 市 北 屯 區 后 庄 路 1080-12 號 TEL 04-2422 0958 FAX 04-2422 0938 高 雄 市 左 營 區 政 德 路 633
More information章節
試 題 阿 財 每 年 年 初 存 入 銀 行 0000 元, 年 利 率 %, 每 年 計 息 一 次, () 若 依 單 利 計 息, 則 第 0 年 年 底 的 本 利 和 多 少? () 若 依 複 利 計 息, 則 第 0 年 年 底 的 本 利 和 約 為 多 少?( 近 似 值 :0 0 計 ) 編 碼 0044 難 易 中 出 處 高 雄 中 學 段 考 題 解 答 ()000 元
More informationMicrosoft Word - ch07
五 本 要 點 補 助 款 之 請 撥 及 核 結, 依 下 列 規 定 辦 理 : ( 一 ) 補 助 經 費 由 本 署 直 接 撥 付 至 地 方 政 府 經 費 代 管 學 校 及 其 他 學 校 ( 二 ) 聯 絡 處 及 校 外 會 應 檢 附 收 據, 向 經 費 代 管 學 校 或 地 方 政 府 辦 理 核 銷, 原 始 支 出 憑 證 由 經 費 核 銷 單 位 留 存 備 查
More information業 是 國 家 的 根 本, 隨 著 科 技 的 進 步 與 社 會 的 富 裕, 增 加 肥 料 的 施 用 量 與 農 病 蟲 害 防 治 方 法 的 提 升, 使 得 糧 食 產 量 有 大 幅 的 增 長, 但 不 當 的 農 業 操 作, 如 過 量 的 肥 料 農 藥 施 用 等, 對
業 是 國 家 的 根 本, 隨 著 科 技 的 進 步 與 社 會 的 富 裕, 增 加 肥 料 的 施 用 量 與 農 病 蟲 害 防 治 方 法 的 提 升, 使 得 糧 食 產 量 有 大 幅 的 增 長, 但 不 當 的 農 業 操 作, 如 過 量 的 肥 料 農 藥 施 用 等, 對 生 態 環 境 產 生 很 嚴 重 的 傷 害, 為 確 保 農 業 的 永 續 發 展 與 安 全
More information寫 作 背 景 導 讀 [98] L Lyman Frank Baum 1856-1919 1882 1886 1900 1939
綠 野 仙 蹤 繪 本 創 意 教 案 教 案 設 計 / 朱 秀 芳 老 師 28 寫 作 背 景 導 讀 [98] L Lyman Frank Baum 1856-1919 1882 1886 1900 1939 故 事 簡 介 綠 野 仙 蹤 心 得 分 享 [99] 處 處 有 仙 蹤 繪 本 創 意 教 案 設 計 者 : 朱 秀 芳 適 用 年 級 : 授 課 時 間 :200 教 學
More information16
序 1 16 序 2 KK KK KK KK KK KK 溫 溫 KK KK 周 婉 芬 博 士 2016 年 5 月 前 言 平 安 健 康 便 好 了 16 10 ICU ICU 26 300 26 10 ICU ICU 曾 錦 強 2016 年 5 月 目 錄 Chapter 1 家 庭 親 子 關 係 1.1 多 存 款 入 關 係 戶 口 2 1.2 不 傷 關 係 管 學 業 12 1.5
More information目 錄 項 目 內 容 頁 數 1 手 機 要 求 3 2 登 記 程 序 3 3 登 入 程 序 4 4 輸 入 買 賣 指 示 6 5 更 改 指 示 14 6 取 消 指 示 18 7 查 詢 股 票 結 存 21 8 查 詢 買 賣 指 示 23 9 更 改 密 碼 24 10 查 詢 股
流 動 股 票 買 賣 服 務 操 作 指 引 目 錄 項 目 內 容 頁 數 1 手 機 要 求 3 2 登 記 程 序 3 3 登 入 程 序 4 4 輸 入 買 賣 指 示 6 5 更 改 指 示 14 6 取 消 指 示 18 7 查 詢 股 票 結 存 21 8 查 詢 買 賣 指 示 23 9 更 改 密 碼 24 10 查 詢 股 價 及 指 數 26 11 切 換 語 言 及 登 出
More information授 課 老 師 章 節 第 一 章 教 學 教 具 間 3 分 鐘 粉 筆 CNC 銑 床 教 學 內 容 CNC 銑 床 之 基 本 操 作 教 材 來 源 數 值 控 制 機 械 實 習 Ⅰ 1. 了 解 CNC 銑 床 的 發 展 2. 了 解 CNC 銑 床 刀 具 的 選 用 3. 了 解
台 中 市 財 團 法 人 光 華 高 級 工 業 職 業 學 校 專 業 科 目 - 數 值 控 制 機 械 教 案 本 適 用 科 別 : 機 械 科 製 圖 科 編 寫 單 位 : 光 華 高 工 機 械 製 圖 科 授 課 老 師 章 節 第 一 章 教 學 教 具 間 3 分 鐘 粉 筆 CNC 銑 床 教 學 內 容 CNC 銑 床 之 基 本 操 作 教 材 來 源 數 值 控 制 機
More information包 裝 維 生 素 礦 物 質 類 之 錠 狀 膠 囊 狀 食 品 營 養 標 示 應 遵 行 事 項 一 本 規 定 依 食 品 安 全 衛 生 管 理 法 第 二 十 二 條 第 三 項 規 定 訂 定 之 二 本 規 定 所 稱 維 生 素 礦 物 質 類 之 錠 狀 膠 囊 狀 食 品, 指
包 裝 維 生 素 礦 物 質 類 之 錠 狀 膠 囊 狀 食 品 營 養 標 示 應 遵 行 事 項 一 本 規 定 依 食 品 安 全 衛 生 管 理 法 第 二 十 二 條 第 三 項 規 定 訂 定 之 二 本 規 定 所 稱 維 生 素 礦 物 質 類 之 錠 狀 膠 囊 狀 食 品, 指 以 營 養 添 加 劑 作 為 維 生 素 礦 物 質 來 源 之 錠 狀 膠 囊 狀 食 品 三
More informationLayout 1
視 為 優 講 燈 1 講 開 場 簡 報 隨 齡 發 視 變 資 訊 討 論 檢 討 會 與 會 將 夠 幾 點 與 變 關 視 變 兩 種 視 習 慣 個 問 專 業 員 問 題 講 1 燈 2 隨 齡 長 會 視 變 視 變 會 動 變 難 閱 讀 電 腦 視 變 會 裡 絆 體 風 險 藥 護 務 駕 車 動 難 會 響 並 導 慮 鬱 過 適 當 應 對 視 變 繼 續 動 並 減 關 慮
More information四 修 正 幼 兒 園 師 資 類 科 應 修 學 分 數 為 四 十 八 學 分, 並 明 定 學 分 數 抵 免 之 相 關 規 定 及 規 範 修 習 幼 兒 園 教 育 專 業 課 程 之 最 低 年 限 ( 修 正 條 文 第 五 條 ) 五 發 給 修 畢 師 資 職 前 教 育 證 明
公 告 及 送 達 教 育 部 公 告 中 華 民 國 103 年 11 月 21 日 臺 教 師 ( 二 ) 字 第 1030167058A 號 主 旨 : 預 告 修 正 幼 稚 園 及 托 兒 所 在 職 人 員 修 習 幼 稚 園 教 師 師 資 職 前 教 育 課 程 辦 法 草 案 依 據 : 行 政 程 序 法 第 一 百 五 十 一 條 第 二 項 準 用 第 一 百 五 十 四 條
More information長跨距暨挑高建築特殊結構系統之調查分析
第 一 章 1 2 3 4 第 二 章 5 6 7 8 1. 2. 9 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 10 12. 13. 14. 15. 16. 17. 18. 19. 11 第 三 章 p 12 b / B 0.75 13 p 14 15 D = l 20 +10 16 17 p l D l D l D 3 p 4 3 18 19 20 21 22 23 24 25
More informationMicrosoft Word - 立法會十四題附件.doc
附 件 一 公 務 員 資 歷 組 別 I. 資 歷 組 別 及 名 稱 資 歷 組 別 名 稱 1 無 需 中 學 會 考 五 科 及 格 2 中 學 會 考 證 書 第 一 組 : 需 要 香 港 中 學 會 考 五 科 及 格 的 第 二 組 : 需 要 香 港 中 學 會 考 五 科 及 格 並 具 相 當 經 驗 的 3 高 級 文 憑 及 文 憑 第 一 組 : 高 級 文 憑 第 二
More informationMicrosoft Word - 第四章.doc
第 四 章 - 試 分 別 說 明 組 合 邏 輯 電 路 與 序 向 邏 輯 電 路 之 定 義 解 : 組 合 邏 輯 電 路 由 基 本 邏 輯 閘 所 組 成 的 此 種 邏 輯 電 路 之 輸 出 為 電 路 所 有 輸 入 的 組 合 因 此 輸 出 狀 態 可 完 全 由 目 前 之 輸 入 來 決 定 而 組 合 邏 輯 電 路 之 示 意 圖 如 圖 所 a 示 ; 而 序 向 邏
More information102.6.30.xls
之 二 資 產 負 債 權 益 展 開 表 102 年 6 月 30 日 單 位 : 新 臺 幣 千 元 資 產 會 計 項 目 展 開 項 目 現 金 及 約 當 現 金 75,497 75,497 存 放 央 行 及 拆 借 銀 178 178 同 業 透 過 損 益 按 公 允 價 值 衡 量 之 金 融 資 產 139,578 139,578 對 金 融 相 關 事 業 之 資 本 投 資
More information校 長 遴 選 者 就 相 關 遴 選 事 項, 有 程 序 外 之 接 觸 遴 選 會 委 員 在 任 期 間 因 故 無 法 執 行 任 務 或 有 不 適 當 之 行 為 者, 由 各 該 主 管 機 關 解 聘 之 ; 其 缺 額, 依 第 一 項 至 第 五 項 規 定 聘 ( 派 ) 委
高 級 中 等 學 校 校 長 遴 選 聘 任 及 辦 學 績 效 考 評 辦 法 修 正 對 照 表 中 華 民 國 一 百 零 二 年 十 二 月 二 十 日 教 育 部 臺 教 授 國 部 字 第 1020118431A 號 令 修 正 高 級 中 等 學 校 校 長 遴 選 聘 任 及 任 期 考 評 辦 法, 名 稱 並 修 正 為 高 級 中 等 學 校 校 長 遴 選 聘 任 及 辦
More information第 6. 節 不 定 積 分 的 基 本 公 式 我 們 可 以 把 已 經 知 道 反 導 函 數 之 所 有 函 數 都 視 為 不 定 積 分 的 基 本 公 式 基 本 公 式 涵 蓋 的 範 圍 愈 大, 我 們 求 解 積 分 就 愈 容 易, 但 有 記 憶 不 易 的 情 事 研 讀
第 6. 節 反 導 函 數 與 不 定 積 分 定 義 6.. 反 導 函 數 說 明 : 第 六 章 求 積 分 的 方 法 若 F( ) f ( ), Df, 則 F ( ) 為 f( ) 之 反 導 函 數 (antierivative) () 當 F ( ) 為 f( ) 之 反 導 函 數 時, 則 F( ) C,C 為 常 數, 亦 為 f( ) 之 反 導 函 數 故 若 反 導 函
More information101年性別圖像1.doc
衛 生 局 性 別 統 計 圖 像 性 比 例 男 性 人 口 年 增 率 低 於 女 性, 致 性 比 例 逐 年 降 低 100 年 臺 北 市 男 女 性 比 例 ( 指 男 性 人 口 對 百 位 女 性 人 口 的 比 例, 即 男 / 百 女 ) 為 92.85, 與 91 年 97.09 相 較, 性 比 例 減 少 4.24, 即 十 年 來 每 百 名 女 性 人 口 相 對 之
More information前 項 第 三 款 所 定 有 機 農 產 品 及 有 機 農 產 加 工 品 驗 證 基 準, 如 附 件 一 第 七 條 驗 證 機 構 受 理 有 機 農 產 品 及 有 機 農 產 加 工 品 之 驗 證, 應 辦 理 書 面 審 查 實 地 查 驗 產 品 檢 驗 及 驗 證 決 定 之
有 機 農 產 品 及 有 機 農 產 加 工 品 驗 證 管 理 辦 法 (101.06.07 修 正 ) 第 一 條 本 辦 法 依 農 產 品 生 產 及 驗 證 管 理 法 ( 以 下 簡 稱 本 法 ) 第 五 條 第 二 項 規 定 訂 定 之 第 二 條 本 辦 法 用 詞, 定 義 如 下 : 一 生 產 廠 ( 場 ): 指 在 國 內 生 產 加 工 分 裝 或 流 通 有 機
More information1010327
核 算 加 計 利 息 滯 納 金 滯 納 利 息 規 定 及 計 算 範 例 各 稅 法 對 納 稅 義 務 人 逾 期 繳 納 稅 款, 大 多 有 加 徵 滯 納 金 加 計 利 息 之 規 定, 而 逾 期 與 否, 應 以 繳 款 書 所 填 載 之 繳 納 期 間 繳 納 期 限 或 限 繳 日 期 為 準 認 定 之 各 代 收 稅 款 金 融 機 構 對 於 逾 期 繳 納 稅 款
More information證 券 簡 易 下 單 :2121 證 券 簡 易 下 單 1. 主 工 具 列 的 視 窗 搜 尋 器 直 接 輸 入 2121 2. 點 擊 主 選 單 證 券 專 區 下 單 特 殊 下 單 2121 證 券 簡 易 下 單 畫 面 說 明 1. 下 單 區 2. 個 股 行 情 資 訊 與
下 單 :2111 證 券 快 速 下 單 1. 主 工 具 列 的 視 窗 搜 尋 器 直 接 輸 入 2111 2. 點 擊 主 選 單 證 券 專 區 下 單 一 般 下 單 2111 證 券 快 速 下 單 1. 點 擊 後, 可 選 擇 群 組 帳 號 或 單 一 帳 號, 選 擇 後 快 速 點 擊 滑 鼠 左 鍵 兩 下, 可 將 帳 號 完 成 登 錄 並 帶 入 視 窗 2. 點
More information內 政 統 計 通 報
內 政 統 通 報 一 一 年 第 四 週 100 年 居 家 服 務 使 用 者 度 調 查 結 果 內 政 部 統 處 8 成 5 的 居 家 服 務 使 用 者 對 居 家 服 務 所 提 供 的 各 項 服 務 表 示 有 7 成 5 表 示 會 介 紹 他 人 使 用 有 接 受 居 家 服 務 所 提 供 的 協 助 洗 澡 協 助 換 穿 衣 服 協 助 吃 飯 協 助 起 床 站 立
More informationCP70D0026D61ETW0R01-01-印刷
HQ / HQCN / HQC / HS Series ISO 9001 Certified WALRUS PUMP CO., LTD WALRUS HQ / HQCN / HQC / HS HQ / HQCN HQ / HQCN HQCN 入 口 壓 力 需 小 於 啟 動 壓 力 抽 深 6m 環 境 溫 度 +4º ~ +40º 40º :+4º ~ +40º :+4º ~ +40º +4º
More information2.報考人數暨錄取或及格率按類科分_1試
103 年 公 務 人 員 高 等 考 試 三 級 考 試 暨 普 通 考 試 ( 含 公 職 類 科 第 一 試 ) 報 考 人 數 暨 錄 取 或 及 格 率 按 類 科 分 報 考 人 數 到 考 人 數 類 科 別 需 用 人 數 錄 取 標 準 % % % % 錄 取 或 及 格 人 數 到 考 率 (%) 錄 取 或 及 格 率 (%) % % 總 到 考 率 總 及 格 率 119,959
More information二 兒 歌 選 用 情 形 ( ) 2 ( ) ( ) 1. 158 2.
兒 歌 內 容 分 析 ~ 以 台 灣 省 教 育 廳 發 行 之 大 單 元 活 動 設 計 內 之 兒 歌 為 例 ~ 摘 要 82 76 158 一 兒 歌 類 目 的 分 布 情 形 ( ) 26 23 22 16 61 38.6 16.5 ( ) 二 兒 歌 選 用 情 形 ( ) 2 ( ) ( ) 1. 158 2. 第 一 章 緒 論 第 一 節 研 究 動 機 79 第 二 節 研
More information第一章 緒論
第 五 章 實 證 結 果 第 一 節 敘 述 統 計 表 11 表 12 分 別 為 男 女 癌 症, 實 驗 組 與 控 制 組 樣 本 之 基 本 特 性 此 為 罹 癌 前 一 年 度 樣 本 特 性 由 於 我 們 以 罹 癌 前 一 年 有 在 就 業, 即 投 保 類 別 符 合 全 民 健 康 保 險 法 中 所 規 定 之 第 一 類 被 保 險 人, 且 年 齡 介 於 35 至
More information105年7月14日糖尿病研討會簡章-衛生局版_docx
105 年 屏 東 縣 糖 尿 病 暨 慢 性 病 共 同 照 護 網 繼 續 教 育 The Conference of Diabetes Joint Care In 本 研 討 為 增 進 慢 性 病 患 之 肺 結 核 與 COPD 疾 病 認 識, 另 針 對 糖 尿 病 胰 島 素 之 臨 床 經 驗 分 享, 讓 學 員 充 分 認 識 胰 島 素 特 性, 以 提 供 良 好 的 醫
More information<30332EAAFEA5F3A440A142A447A142A454A142A57CA147BEC7A5CDB14DB77EC3D2B7D3BEC7B2DFA661B9CF2E786C73>
嶺 東 科 技 大 學 財 務 金 融 系 日 四 技 學 生 專 業 學 習 地 圖 02 年 6 月 28 日 0 學 年 度 第 二 學 期 財 務 金 融 系 課 程 委 會 議 通 過 名 稱 微 積 分 ( 一 ) 微 積 分 ( 二 ) 個 體 經 濟 學 商 業 套 裝 軟 體 ( 二 ) 應 用 統 計 學 ( 一 ) 期 貨 與 選 擇 權 國 際 - 管 理 學 保 險 學 商
More information2 工 礦 衛 生 技 師 證 明 文 件 者 火 災 學 消 防 法 規 警 報 系 統 消 防 安 全 設 備 專 技 人 員 專 門 職 業 及 技 術 人 員 高 等 考 試 技 師 考 試 高 考 ( 專 技 ) 專 科 三 高 等 檢 定 相 當 類 科 及 格 者 四 消 防 設 備
公 共 衛 生 學 系 相 關 公 職 報 考 資 格 以 下 資 料 係 作 為 報 名 之 參 考, 最 終 仍 須 經 考 選 部 應 考 資 格 審 查 通 過 為 準 類 科 別 種 類 名 稱 等 級 學 歷 資 格 應 考 資 格 特 殊 限 制 條 件 專 技 人 員 專 門 職 業 及 技 術 人 員 高 等 暨 普 通 消 防 設 備 人 員 高 考 ( 專 技 ) 專 科 一
More information業 是 國 家 的 根 本, 隨 著 科 技 的 進 步 與 社 會 的 富 裕, 增 加 肥 料 的 施 用 量 與 農 病 蟲 害 防 治 方 法 的 提 升, 使 得 糧 食 產 量 有 大 幅 的 增 長, 但 不 當 的 農 業 操 作, 如 過 量 的 肥 料 農 藥 施 用 等, 對
業 是 國 家 的 根 本, 隨 著 科 技 的 進 步 與 社 會 的 富 裕, 增 加 肥 料 的 施 用 量 與 農 病 蟲 害 防 治 方 法 的 提 升, 使 得 糧 食 產 量 有 大 幅 的 增 長, 但 不 當 的 農 業 操 作, 如 過 量 的 肥 料 農 藥 施 用 等, 對 生 態 環 境 產 生 很 嚴 重 的 傷 害, 為 確 保 農 業 的 永 續 發 展 與 安 全
More informationART_RAE16_ticket_cn_p.1
1. 2. 3. 4. 基 础 部 分 - 色 彩 TM TM Premier B2C Sales to China 2014 TM OCR www.divcom.com.hk/ocrc 現 在 開 始 計 劃 訪 問 亞 洲 零 售 博 覽 的 行 程! 交 通 配 套 乘 車 路 線 : 由 機 場 乘 坐 公 共 汽 車 : A11 或 E11 到 灣 仔 (~80 分 鐘 ) 地 鐵 :
More information二零零六至零七年施政報告
1 3 4 13 14 34 17 19 20 24 2 5 26 27 28 29 3 0 31 32 3 3 3 4 35 50 36 42 43 45 46 48 49 50 51 66 52 57 58 60 61 65 6 6 67 76 1. 2. 3. 1 4. 5. 6. CEPA 7. 8. 9. 2 10. 11. 12. 13. 3 14. 15. 16. 17. 4 18.
More information簽 呈
台 新 證 券 投 資 信 託 股 份 有 限 公 司 公 告 中 華 民 國 105 年 5 月 4 日 台 新 投 (105) 總 發 文 字 第 00116 號 主 旨 : 本 公 司 經 理 之 台 新 亞 美 短 期 債 券 證 券 投 資 信 託 基 金 等 3 檔 基 金 ( 以 下 合 稱 本 基 金 ), 修 正 證 券 投 資 信 託 契 約 暨 配 合 修 正 公 開 說 明
More information2 2.1 A H 2.2 601288 1288 12 360001 360009 69 100005 86-10-85109619 86-10-85108557 ir@abchina.com 2
AGRICULTURAL BANK OF CHINA LIMITED 1288 2016 2016 3 31 571 XIVA 13.09(2) 13.10B 1 1.1 1.2 2016 4 28 2016 5 2016 1414 1.3 1.4 1 2 2.1 A H 2.2 601288 1288 12 360001 360009 69 100005 86-10-85109619 86-10-85108557
More informationMicrosoft Word - Draft circular on Sub Leg - 11 Apr (chi)_Traditional
檔 號 : (20) in EDB(SCR) 25/58/11 Pt.4 教 育 局 通 告 第 3/2012 號 2012 年 教 育 ( 修 訂 ) 規 例 2012 年 教 育 ( 豁 免 )( 提 供 非 正 規 課 程 的 私 立 學 校 )( 修 訂 ) 令 2012 年 香 港 考 試 及 評 核 局 條 例 ( 修 訂 附 表 1) 令 [ 注 意 : 本 通 告 應 交 ( a )
More information前 言 民 主 黨 0 9-1 0 施 政 報 告 建 議 書 1 2002 1 2 2 0 0 5 2 0 1 2 1 2 0. 5 3 民 主 黨 立 法 會 議 員 二 零 零 九 年 九 月
前 言 民 主 黨 0 9-1 0 施 政 報 告 建 議 書 1 2002 1 2 2 0 0 5 2 0 1 2 1 2 0. 5 3 民 主 黨 立 法 會 議 員 二 零 零 九 年 九 月 目 錄 前 言... 1 政 治 1....5 2....7 3....8 4....9 5....10 經 濟 6....12 7....13 8....14 9....15 10....16 11....17
More informationMicrosoft Word - 附件_table1020328
表 1-1: 課 程 名 稱 學 分 數 開 課 時 間 修 訂 表 原 課 程 名 稱 修 改 後 課 程 名 稱 學 分 數 護 理 助 產 學 I 進 階 護 理 助 產 學 I 護 理 助 產 學 II 進 階 護 理 助 產 學 II 護 理 助 產 學 實 習 進 階 護 理 助 產 學 實 習 6 表 1-: 課 程 名 稱 開 課 時 間 修 訂 表 課 程 名 稱 原 開 課 學
More informationPROSPECT EXPLORATION 壹 前 言 20 90 066 第 9 卷 第 2 期 中 華 民 國 100 年 2 月
專 題 研 究 法 律 與 法 制 探 析 中 國 大 陸 現 行 土 地 估 價 法 律 制 度 體 系 探 析 中 國 大 陸 現 行 土 地 估 價 法 律 制 度 體 系 A Study on the Legal Framework of Real Estate Appraisal in China 蔣 國 基 * (Chiang, Kuo-chi) 香 港 鴻 裕 公 司 法 務 長 摘
More information研究一:n人以『剪刀、石頭、布』猜拳法猜拳一次,決定一人勝
嘉 義 市 第 三 十 屆 中 小 學 科 學 展 覽 會 作 品 說 明 書 猜 拳 決 勝 負 的 最 佳 策 略 探 討 科 別 : 數 學 科 組 別 : 國 小 組 關 鍵 詞 : 剪 刀 石 頭 布 黑 白 猜 編 號 : 壹 摘 要 在 玩 遊 戲 時 往 往 需 要 運 用 猜 拳 剪 刀 石 頭 布 或 黑 白 猜 來 決 勝 負 或 是 分 組, 但 人 數 一 多, 便 無 法
More information2 飲 料 調 製 丙 級 技 術 士 技 能 檢 定 必 勝 寶 典 Beverage Modulation Preparation 應 考 綜 合 注 意 事 項 A1 A2 A3 A4 A5 A6 B7 B8 B9 B10 B11 B12 C13
1Part BEVERAGE MODULATION PREPARATION 2 飲 料 調 製 丙 級 技 術 士 技 能 檢 定 必 勝 寶 典 Beverage Modulation Preparation 應 考 綜 合 注 意 事 項 1. 980301 980302 980303 A1 A2 A3 A4 A5 A6 B7 B8 B9 B10 B11 B12 C13 C14 C15 C16
More informationBOT_BS_audited_96
資 產 1 0 3,343,286,709,539.29 2,697,567,620,133.77 645,719,089,405.52 23.94 流 動 資 產 11-12 8 1,045,693,236,706.49 943,992,407,407.67 101,700,829,298.82 10.77 現 金 110 8 17,472,077,610.79 23,418,517,459.20-5,946,439,848.41-25.39
More information1DEn
浮 潛 Skin Diving 基 本 浮 潛 裝 備 基 本 裝 備 Mask 面 鏡 Snorkel 呼 吸 管 Fins 蛙 鞋 Belt 配 重 帶 Weight 配 重 Suit 潛 水 衣 Gloves 手 套 Boots/Socks 潛 水 靴 / 襪 基 本 裝 備 面 鏡 呼 吸 管 蛙 鞋 配 重 帶 配 重 潛 水 衣 手 套 潛 水 靴 / 襪 使 用 選 擇 型 式 材 質
More information修 課 特 殊 規 定 : 一 法 律 系 學 生 最 低 畢 業 學 分 128;101 學 年 度 修 讀 法 律 系 雙 主 修 學 生 應 修 畢 法 律 專 業 目 64 學 分 ( 限 修 習 本 校 法 律 系 開 設 課 程, 不 得 以 原 學 系 或 外 校 課 程 抵 免 -
法 律 學 系 學 士 班 基 礎 科 目 一 覽 表 101 學 年 度 入 學 學 生 適 用 科 目 名 稱 必 規 定 第 一 學 年 第 二 學 年 第 三 學 年 第 四 學 年 群 學 分 上 下 上 下 上 下 上 下 備 註 ( 先 修 科 目 ) 刑 法 ( 一 ) 群 3 3 基 礎 科 目 刑 法 ( 二 ) 群 3 3 基 礎 科 目 / 先 修 刑 法 ( 一 ) 刑 事
More information「家加關愛在長青」計劃完成表現及評估報告
- 1 - - 2 - - 3 - - 4 - 註 一 一 般 義 工 : 任 何 人 志 願 貢 獻 個 人 時 間 及 精 神, 在 不 為 任 何 物 質 報 酬 的 情 況 下, 為 改 進 社 會 而 提 供 服 務, 時 數 不 限 ( 參 考 香 港 義 務 工 作 發 展 局 之 定 義 ) 註 二 核 心 義 工 : 由 於 建 立 社 會 資 本 所 重 視 的 是 網 絡 的
More informationPowerPoint 簡報
長 庚 科 大 雲 端 硬 碟 ( 進 階 ) 雲 端 硬 碟 ( 進 階 ) 1 招 我 的 雲 端 硬 碟 (1/3) 我 的 雲 端 硬 碟 Google Apps - 雲 端 硬 碟 查 看 使 用 者 自 己 雲 端 硬 碟 中 的 檔 案 注 意 : 離 線 版 雲 端 硬 碟 只 會 同 步 我 的 雲 端 硬 碟 資 料 夾 中 的 檔 案 1) 查 看 雲 端 硬 碟 已 使 用
More information(DP_MFP_Training
影 印 機 操 作 說 明 1 人 性 化 操 作 面 板 超 大 液 晶 觸 控 面 板 : 容 易 觀 看 及 了 解 (192 x 72mm) 直 覺 性 操 作 面 板 設 計 : 由 上 而 下 由 左 至 右 的 消 費 者 直 覺 操 作 設 計 圖 形 化 界 面 : 所 有 功 能 一 目 了 然, 使 用 方 便 啟 動 統 一 式 設 計 : 全 系 列 相 同 操 作 界 面
More information55202-er-ch03.doc
8 第 章 機 率 - 樣 本 空 間 與 事 件 列 出 擲 一 粒 骰 子 所 出 現 點 數 的 樣 本 空 間, 並 以 集 合 表 示 下 列 各 事 件 : A 是 出 現 點 數 為 偶 數 的 事 件, B 是 出 現 點 數 為 奇 數 的 事 件, C 是 出 現 點 數 大 於 的 事 件 骰 子 出 現 的 點 數 可 能 是,,, 4,5, 6, 因 此 出 現 點 數 的
More informationsle cover 1
給 愛 尋 根 究 底 的 青 少 年 紅 斑 狼 瘡 冷 知 識 鳴 謝 給 愛 尋 根 究 底 的 青 少 年 紅 斑 狼 瘡 冷 知 識 ~ Hospital for Special Surgery 2003 For Inquiring Teens With LUPUS ~ Our Thoughts, Issues & Concerns Nichole Niles 為 什 麼 會 有 這 本
More information五 四 五 說 ( 代 序 ) 李 澤 厚 劉 再 復 I I II IV V VII 第 一 篇 五 四 新 文 化 運 動 批 評 提 綱 001 003 006 009 011 014 019 附 論 一 中 國 貴 族 精 神 的 命 運 ( 提 綱 ) 021 021 022 026 02
劉 再 復 著 與 李 澤 厚 李 歐 梵 等 共 論 五 四 共 鑒 五 四 五 四 五 說 ( 代 序 ) 李 澤 厚 劉 再 復 I I II IV V VII 第 一 篇 五 四 新 文 化 運 動 批 評 提 綱 001 003 006 009 011 014 019 附 論 一 中 國 貴 族 精 神 的 命 運 ( 提 綱 ) 021 021 022 026 028 附 論 二 誰 是
More information桃園市104年國民中學新進教師甄選各校複試方式及需求表
桃 園 市 105 年 國 民 中 學 新 進 教 師 甄 選 各 校 複 試 方 式 及 需 求 表 編 號 校 名 教 評 會 審 查 方 式 及 學 校 需 求 備 註 1 2 桃 園 青 溪 ( 一 ) 口 試 80% 是 否 符 合 學 校 需 求 度 20% 具 數 學 專 長 者 為 佳 ( 一 ) 口 試 70% 是 否 符 合 學 校 需 求 度 30 % 需 擔 任 資 源 班
More information實德證券網上交易系統示範
實 德 證 券 網 上 交 易 系 統 示 範 實 德 證 券 網 上 交 易 系 統 分 別 提 供 增 強 版 及 標 準 版, 使 用 標 準 版 必 須 安 裝 JAVA, 標 準 版 自 動 更 新 戶 口 資 料, 而 使 用 增 強 版 則 不 必 安 裝 JAVA, 但 必 須 按 更 新 鍵 才 能 更 新 戶 口 資 料, 請 用 戶 根 據 實 際 需 要 選 擇 使 用 標
More informationMicrosoft PowerPoint - 資料庫正規化(ccchen).ppt
資 料 庫 正 規 化 正 規 化 的 概 念 何 謂 正 規 化 (Normalization)?? 就 是 結 構 化 分 析 與 設 計 中, 建 構 資 料 模 式 所 運 用 的 一 個 技 術, 其 目 的 是 為 了 降 低 資 料 的 重 覆 性 與 避 免 更 新 異 常 的 情 況 發 生 因 此, 就 必 須 將 整 個 資 料 表 中 重 複 性 的 資 料 剔 除, 否 則
More information目 錄 壹 題 目 1: 新 增 商 品 ( 商 品 名 稱 為 玉 井 芒 果 乾 禮 盒 )... 3 貳 題 目 2: 新 增 商 品 ( 商 品 名 稱 為 紅 磚 布 丁 精 選 禮 盒 )... 5 參 題 目 3: 新 增 商 品 ( 商 品 名 稱 為 晶 鑽 XO 醬 禮 盒 ).
行 動 電 子 商 務 管 理 師 行 動 電 子 商 務 規 劃 師 術 科 考 試 題 解 製 作 單 位 :TMCA 台 灣 行 動 商 務 運 籌 管 理 協 會 證 照 評 測 試 務 中 心 1 目 錄 壹 題 目 1: 新 增 商 品 ( 商 品 名 稱 為 玉 井 芒 果 乾 禮 盒 )... 3 貳 題 目 2: 新 增 商 品 ( 商 品 名 稱 為 紅 磚 布 丁 精 選 禮
More information<4D6963726F736F667420576F7264202D20B3E6A4B830312D2D2DBCC6BD75BB50BEE3BCC6AABAA55BB4EEB942BAE22E646F6378>
國 中 數 學 基 本 學 習 內 容 補 救 教 材 第 一 冊 一 -1 單 元 一 數 線 與 整 數 的 加 減 運 算 主 題 一 正 數 負 數 的 意 義 一 正 數 和 負 數 : 尋 找 寶 藏 北 西 東 小 明 南 小 明 無 意 間 得 到 了 一 張 藏 寶 圖, 圖 上 的 黑 點 代 表 小 明 現 在 站 的 地 方, 每 個 腳 印 都 代 表 1 步 若 要 在
More information???T????????
資 訊 王 資 料 可 於 相 關 網 站 查 詢 對 應 表 系 統 選 項 資 料 選 項 對 應 相 關 網 址 上 櫃 公 司 現 金 增 資 資 料 現 金 增 資 與 股 上 市 股 票 公 開 申 購 資 訊 票 申 購 上 櫃 股 票 公 開 申 購 資 訊 http://www.twse.com.tw/ch/announcement/public.php 合 併 / 個 別 財 務
More information頁 1 / 8 法 規 名 稱 : 公 務 人 員 俸 給 法 修 正 時 間 :97.1.16 第 一 條 ( 本 法 內 容 ) 公 務 人 員 之 俸 給, 依 本 法 行 之 第 二 條 ( 名 詞 定 義 ) 本 法 所 用 名 詞 意 義 如 下 : 一 本 俸 : 係 指 各 職 等 人 員 依 法 應 領 取 之 基 本 給 與 二 年 功 俸 : 係 指 各 職 等 高 於 本 俸
More informationprinting.indd
上 帝 信 仰 與 古 代 中 國 13 基 督 教 之 景 教 在 唐 朝 傳 入 中 國 人 類 最 早 期 活 動 都 在 兩 河 流 域 一 帶 人 類 文 化 始 於 巴 比 倫 兩 河 流 域 14 圖 片 中 國 基 督 教 簡 史 挪 亞 三 子 後 裔 分 散 全 地, 中 國 人 是 閃 族 的 後 人 四 大 文 明 古 國 都 離 不 開 大 河 滋 潤 一 般 書 籍 所
More informationuntitled
第 二 章 : 至 今 的 進 展 高 水 平 的 系 統 可 使 用 性.. 建 立 高 水 平 的 系 統 可 使 用 性, 以 確 保 系 統 有 能 力 支 援 醫 療 服 務 需 每 星 期 七 天 每 天 24 小 時 運 作 的 需 要 2.13 我 們 會 為 電 子 健 康 記 錄 互 通 資 料 建 立 中 央 資 料 儲 存 庫, 所 有 由 參 與 計 劃 的 醫 療 服 務
More information( ) 1 5 ( ) 6 37 8 11 12 16 17 20 21 22 23 25 26 27 28 29 30 32 33 37 ( ) 38 66 42 48 49 51 52 56 57 59 60 65 66 ( ) 67 89 75 76 79 80 83 84 86 87 88
二 零 一 六 年 施 政 報 告 創 新 經 濟 促 進 和 諧 改 善 民 生 繁 榮 共 享 ( ) 1 5 ( ) 6 37 8 11 12 16 17 20 21 22 23 25 26 27 28 29 30 32 33 37 ( ) 38 66 42 48 49 51 52 56 57 59 60 65 66 ( ) 67 89 75 76 79 80 83 84 86 87 88 89
More information格 成 績 證 明 第 六 條 第 七 條 本 系 大 四 課 程 中 規 劃 日 本 韓 國 越 南 專 題 研 究, 學 生 需 於 大 四 時 修 習 該 課 程, 並 於 規 定 期 間 內 提 出 專 題 報 告, 取 得 合 格 成 績 證 明 本 系 規 定 學 生 畢 業 時 需 取
國 立 高 雄 大 學 東 亞 語 文 學 系 大 學 部 修 業 規 則 (104 學 年 後 入 學 學 生 適 用 ) 修 正 對 照 表 條 文 修 正 後 條 文 原 條 文 備 註 第 二 條 第 三 條 第 四 條 第 五 條 大 學 部 104 學 年 度 入 學 學 生 大 四 上 下 皆 未 選 擇 校 外 實 習 I 及 校 外 實 習 Ⅱ 者 畢 業 學 分 為 128 學
More information基 金 配 息 資 訊 聯 博 境 外 基 金 2016 AA/AD/AT/BA/BD/BT 月 份 除 息 日 2016 年 01 月 01 月 28 日 01 月 29 日 2016 年 02 月 02 月 26 日 02 月 29 日 2016 年 03 月 03 月 30 日 03 月 31
基 金 配 息 資 訊 聯 博 基 金 歷 史 配 息 及 報 酬 率 資 訊 境 外 基 金 ( 本 基 金 有 相 當 比 重 投 資 於 非 投 資 等 級 之 高 風 險 債 券 且 配 息 來 源 可 能 為 本 金 ) ( 本 基 金 主 要 係 投 資 於 非 投 資 等 級 之 高 風 險 債 券 且 配 息 來 源 可 能 為 本 金 ) ( 基 金 之 配 息 來 源 可 能 為
More information肆 研 究 方 法 進 行 本 研 究 前, 我 們 首 先 對 研 究 中 所 用 到 名 詞 作 定 義 定 義 : 牌 數 : 玩 牌 時 所 使 用 到 撲 克 牌 數 次 數 : 進 行 猜 心 術 遊 戲 時, 重 複 分 牌 次 數 數 : 進 行 猜 心 術 遊 戲 時, 每 次 分
摘 要 魔 術 師 讀 心 術 背 後 到 底 藏 了 多 少 祕 密? 一 般 觀 眾 心 裡 常 有 著 這 句 話 本 研 究 我 們 破 解 了 魔 術 師 透 過 數 學 規 律 加 上 置 中 手 法 完 成 一 連 串 騙 人 撲 克 牌 遊 戲, 也 學 會 了 如 何 透 過 整 理 表 格 方 式, 來 找 出 數 學 規 律, 也 更 懂 得 如 何 把 簡 單 數 學 技 巧
More information0042 國 立 臺 灣 大 學 工 程 科 學 及 海 洋 工 程 學 系 國 文 x1.00 英 文 x1.00 數 學 甲 x1.00 物 理 x1.00 化 學 x1.00 14 390.90 ***** ----- ----- ----- 0043 國 立 臺 灣 大 學 材 料 科 學
104 學 年 度 大 學 考 試 入 學 分 發 各 系 組 最 低 及 錄 取 人 數 一 覽 表 0001 國 立 臺 灣 大 學 中 國 文 學 系 國 文 x1.50 英 文 x1.25 數 學 乙 x1.00 歷 史 x1.25 地 理 x1.00 32 464.48 ***** 497.24 ----- ----- 0002 國 立 臺 灣 大 學 外 國 語 文 學 系 國 文 x1.25
More informationHSBC Holdings plc Interim Report 2015 - Chinese
聯 繫 客 戶 創 先 機 助 握 商 情 百 五 載 HSBC Holdings plc 滙 豐 控 股 有 限 公 司 2015 年 中 期 業 績 報 告 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43
More information第二組掃描器規範書
第 二 組 掃 描 器 規 範 書 1. A4 規 格 2400 DPI( 含 ) 以 上 掃 描 器 第 1 項 ) 1-1. 機 型 : 平 台 式 掃 瞄 器 1-2. 光 學 解 析 度 :2400x2400DPI( 含 ) 以 上 1-3. 最 大 輸 出 解 析 度 :9600DPI( 含 ) 以 上 1-4. 介 面 :SCSI 介 面 ( 附 介 面 卡 及 傳 輸 線 ) 或 USB
More information<4D6963726F736F667420506F776572506F696E74202D20B2C431B860C2B2B3F82DC2BEB77EBEC7AED5B77CAD70BEC7BDD2B57BBAF5AD6EA65DC0B3B0EABBDAB77CAD70B7C7AB6828494652537329AE74B2A7A4C0AA522831303130393230292E707074205BACDBAE65BCD2A6A15D>
職 業 學 校 會 計 學 課 程 綱 要 因 應 國 際 會 計 準 則 (IFRSs) 差 異 分 析 報 告 人 : 陳 文 欽 101.9.20 教 材 依 據 教 育 部 一 般 公 認 會 計 課 綱 會 計 會 計 原 則 相 關 法 規 會 計 相 關 法 規 及 一 般 公 認 會 計 原 則 適 用 順 序 公 開 發 行 公 司 非 公 開 發 行 公 司 獨 資 合 夥 1.
More information教 師 相 關 ( 升 等, 依 業 務 需 002 交 通 管 科 評 鑑, 評 量, 徵,C031, 聘, 各 項 考 試 委 C051,C054, 員, 通 訊 錄 等 ),C057, C058,C063 各 項 會 議 紀 錄 依 業 務 需 C001,, 002,130 交 通 管 科 (
個 資 檔 案 名 稱 保 有 依 據 個 資 類 別 特 定 目 的 保 有 單 位 教 職 員 業 務 聯 絡 資 料 ( 含 教 職 員 工 通 訊 錄 校 安 中 心 通 訊 錄 文 康 活 動 名 冊 ) 電 子 郵 件 管 業 務 需 C001 002 工 業 與 資 訊 管 各 類 申 請 表 相 關 資 料 ( 含 門 禁 磁 卡 申 請 表 汽 機 車 通 行 證 申 請 資 料
More information0040 國 立 臺 灣 大 學 機 械 工 程 學 系 國 文 x1.00 英 文 x1.00 數 學 甲 x1.00 物 理 x1.00 化 學 x1.00 25 406.30 **** ----- ----- ----- 0041 國 立 臺 灣 大 學 化 學 工 程 學 系 國 文 x1.
103 學 年 度 大 學 考 試 入 學 分 發 各 系 組 最 低 及 錄 取 人 數 一 覽 表 0001 國 立 臺 灣 大 學 中 國 文 學 系 國 文 x1.50 英 文 x1.25 數 學 乙 x1.00 歷 史 x1.25 地 理 x1.00 32 493.40 **** ----- ----- ----- 0002 國 立 臺 灣 大 學 外 國 語 文 學 系 國 文 x1.25
More informationMicrosoft Word - BM900HD-2F電腦設定.doc
3.4 控 制 機 能 1/20 1. 顯 示 區 顯 示 當 前 起 重 機 狀 態 2. 蜂 鳴 器 蜂 鳴 器 主 要 用 於 過 載 ( 包 括 載 荷 限 制 警 報 ) 當 負 荷 到 達 90% 時, 蜂 鳴 器 間 歇 性 警 報, 到 達 100% 率 時 連 續 警 報 負 荷 率 增 加 時, 蜂 鳴 器 警 報 間 隔 時 間 越 來 越 短 警 報 類 型 間 斷 連 續
More informationMicrosoft Word - 附表二-1030714
六 條 附 表 公 特 種 應 目 表 壹 本 表 每 年 所 設 類, 仍 需 配 合 當 年 任 用 需 求 予 以 設 置 貳 類 普 通 目 為 : 及 四 國 文 ( 作 文 公 文 與 測 驗 ) 其 占 分 比 重, 分 為 作 文 占 百 分 之 六 十, 公 文 測 驗 占 百 分 之 十, 時 間 小 時 五 國 文 ( 包 括 公 文 格 式 用 語 ) 採 測 驗 式 題,
More information廢液桶之標示
吳 鳳 科 技 大 學 實 驗 室 廢 棄 物 貯 存 容 器 標 示 及 存 放 須 知 一 材 質 : ( 一 ) 廢 棄 物 貯 存 容 器 應 使 用 HDPE, 容 積 為 20 公 升 之 方 型 容 器 ( 二 ) 存 放 時, 下 方 應 有 防 漏 盤 ( 材 質 與 尺 寸 法 令 並 無 規 定, 但 應 為 耐 腐 蝕 材 質 可 供 承 接 之 容 器, 例 如 : 不 鏽
More information101年度社會福利方案 網路線上操作手冊
104 年 度 社 會 福 利 服 務 方 案 網 路 申 請 線 上 操 作 手 冊 中 華 社 會 福 利 聯 合 勸 募 協 會 103 年 8 月 編 製 中 華 社 會 福 利 聯 合 勸 募 協 會 方 案 線 上 申 請 操 作 1 2 4 0-12 104 年 度 社 會 福 利 服 務 方 案 網 路 申 請 線 上 操 作 手 冊 一 方 案 線 上 申 請 流 程 方 案 線
More informationMicrosoft PowerPoint - 國票期貨研究部日簡報1050225New
美 股 走 勢 - 道 瓊 指 數 美 股 週 三 開 低 隨 油 價 盤 中 走 高 而 拉 高 技 術 面 回 測 10 日 均 線 有 撐 最 終 留 下 長 下 引 線 重 回 5 日 均 線 選 擇 權 未 平 倉 量 分 布 圖 每 一 刻 度 代 表 1000 口 OI Call 履 約 價 11600 11400 11200 11000 10800 10600 10400 10200
More information一、 資格條件:
臺 灣 港 務 股 份 有 限 公 司 新 進 人 員 甄 選 規 範 交 通 部 民 國 102 年 7 月 22 日 交 人 字 第 1025010095 號 函 核 定 交 通 部 民 國 103 年 8 月 4 日 交 授 港 總 人 字 第 10300564431 號 函 核 定 修 正 交 通 部 民 國 104 年 2 月 13 日 交 授 港 總 人 字 第 10401620891
More information調 查 背 景 去 年 年 尾 奶 粉 供 應 緊 張 有 零 售 商 大 幅 抬 價 的 報 導 和 投 訴 在 每 兩 個 月 進 行 的 定 期 嬰 幼 兒 奶 粉 價 格 調 查 以 外, 在 農 曆 新 年 前 後, 特 別 加 強 奶 粉 供 應 和 價 格 的 調 查 工 作 2
初 生 嬰 兒 奶 粉 供 應 和 價 格 調 查 1 調 查 背 景 去 年 年 尾 奶 粉 供 應 緊 張 有 零 售 商 大 幅 抬 價 的 報 導 和 投 訴 在 每 兩 個 月 進 行 的 定 期 嬰 幼 兒 奶 粉 價 格 調 查 以 外, 在 農 曆 新 年 前 後, 特 別 加 強 奶 粉 供 應 和 價 格 的 調 查 工 作 2 調 查 概 況 地 區 : 全 港 18 區 中
More information課 程 簡 介 第 一 章 基 本 電 路 理 論 第 二 章 半 導 體 物 理 與 pn 接 面 二 極 體 元 件 分 析 第 三 章 二 極 體 電 路 分 析
電 子 學 ( 一 ) 課 程 簡 介 第 一 章 基 本 電 路 理 論 第 二 章 半 導 體 物 理 與 pn 接 面 二 極 體 元 件 分 析 第 三 章 二 極 體 電 路 分 析 第 四 章 雙 載 子 接 面 電 晶 體 第 五 章 雙 載 子 接 面 電 晶 體 之 直 流 偏 壓 分 析 第 六 章 雙 載 子 接 面 電 晶 體 之 交 流 小 訊 號 分 析 基 本 電 路
More information(Microsoft Word - MOODLE990201\266i\266\245\244\342\245U1000804)
(2011.08.04 修 訂 ) 目 錄 壹 舊 課 程 複 製 到 新 課 程 的 方 法... 1 一 將 舊 課 程 的 課 程 文 件 匯 入 新 課 程... 1 二 編 輯 新 課 程... 5 三 備 份 舊 課 程 資 料 還 原 至 新 課 程... 6 貳 元 課 程 (META COURSE) 說 明 與 應 用... 12 一 元 課 程 說 明... 12 二 利 用 元
More informationMicrosoft Word - 會計學、中級會計學、會計學概要
一 會 計 學 適 用 考 試 名 稱 適 用 考 試 類 科 公 務 人 員 高 等 考 試 三 級 考 試 特 種 考 試 地 方 政 府 公 務 人 員 考 試 三 等 考 試 公 務 人 員 特 種 考 試 原 住 民 族 考 試 三 等 考 試 公 務 人 員 特 種 考 試 身 心 障 礙 人 員 考 試 三 等 考 試 財 稅 行 政 金 融 保 險 財 稅 行 政 財 稅 行 政 財
More information100 學 年 度 科 技 校 院 四 年 制 及 專 科 學 校 二 年 制 日 間 部 聯 合 登 記 分 發 入 學 各 校 系 科 組 學 程 總 成 績 統 計 表 ( 一 般 生 ) 類 別 代 碼 學 校 名 稱 系 科 組 學 程 名 稱 01 機 械 066 正 修 科 技 大 學
100 學 年 度 科 技 校 院 四 年 制 及 專 科 學 校 二 年 制 日 間 部 聯 合 登 記 分 發 入 學 各 校 系 科 組 學 程 總 成 績 統 計 表 ( 一 般 生 ) 類 別 代 碼 學 校 名 稱 系 科 組 學 程 名 稱 01 機 械 001 國 立 臺 灣 科 技 大 學 機 械 工 程 系 66 66 667.00 385.00 636.00 390.00 01
More information題 目 : 箭 在 弦 上 -- 弓 箭 祕 密 再 探 究 摘 要 在 上 的 研 究 之 中, 我 們 列 舉 出 仍 未 探 討 的 題 目 及 問 題, 利 用 這 的 研 究 課 程 加 以 驗 證 在 實 驗 結 果 中 發 現, 加 入 箭 頭 有 助 於 落 點 的 集 中, 而 加
中 華 民 國 第 52 屆 中 小 學 科 學 展 覽 會 作 品 說 明 書 類 別 : 物 理 類 科 別 : 自 然 科 組 別 : 國 小 組 作 品 名 稱 : 箭 在 弦 上 -- 弓 箭 祕 密 再 探 究 關 鍵 詞 : 弓 箭 箭 頭 落 點 飛 行 距 離 編 號 : 題 目 : 箭 在 弦 上 -- 弓 箭 祕 密 再 探 究 摘 要 在 上 的 研 究 之 中, 我 們 列
More information<4D6963726F736F667420576F7264202D20B773A55FA5ABAC46A9B2BDC3A5CDA7BD313034A67EA6DC313035A67E33A4EBBFECB27AA9CAA74FA5ADB5A5ABC5BEC9B1A1A7CE>
新 北 市 政 府 衛 生 局 104 年 至 105 年 3 月 辦 理 性 別 平 等 宣 導 情 形 宣 導 方 式 ( 含 平 面 網 頁 廣 播 影 音 座 談 會 說 明 會 性 別 平 等 宣 導 文 宣 製 作 情 形 CEDAW 宣 導 情 形 宣 導 成 效 記 者 會 及 活 動 等 ) 時 間 :104 年 1 月 10 日 內 容 : 溫 柔 生 產 分 享 及 母 乳 支
More informationPowerPoint 簡報
程 序 一 : 系 科 自 我 適 性 定 位 1. 分 析 系 ( 科 ) 教 師 之 專 長 特 性 為 何? 1-1: 分 析 系 ( 科 ) 教 師 之 學 歷 專 長 特 性 情 形 1-2: 分 析 系 ( 科 ) 教 師 之 業 界 實 務 背 景 特 性 情 形 1-3: 完 成 系 ( 科 ) 教 師 專 長 背 景 經 驗 分 析 表 1-1: 已 完 成 系 ( 科 ) 教 師
More information期交所規則、規例及程序
黃 金 期 貨 合 約 細 則 下 述 合 約 細 則 適 用 於 黃 金 期 貨 合 約 : 相 關 資 產 合 約 單 位 交 易 貨 幣 合 約 月 份 報 價 最 低 價 格 波 幅 立 約 成 價 立 約 價 值 持 倉 限 額 成 色 不 少 於 995 的 黃 金 100 金 衡 安 士 美 元 現 貨 月 及 下 兩 個 曆 月 集 團 行 政 總 裁 與 證 監 會 會 商 後 可
More information目 錄 頁 1. 歡 迎 使 用 網 上 預 約 面 談 訪 問 系 統... 3 2. 新 用 戶... 4 2.1 新 用 戶 登 入 帳 戶 程 序... 4 2.2 啟 動 網 上 預 約 面 談 訪 問 帳 戶... 5 2.2.1 核 對 帳 戶 的 地 址 資 料... 5 2.2.2
網 上 預 約 面 談 訪 問 使 用 指 南 香 港 特 別 行 政 區 政 府 統 計 處 目 錄 頁 1. 歡 迎 使 用 網 上 預 約 面 談 訪 問 系 統... 3 2. 新 用 戶... 4 2.1 新 用 戶 登 入 帳 戶 程 序... 4 2.2 啟 動 網 上 預 約 面 談 訪 問 帳 戶... 5 2.2.1 核 對 帳 戶 的 地 址 資 料... 5 2.2.2 閱
More information(Microsoft Word - 3-3 \245\277\244\361\273P\244\317\244\361.doc)
觀 念 篇 關 係 式 描 述 兩 個 變 數 x 與 y 之 間 關 係 的 數 學 式 子 例 題 練 習 1. 時 速 60 (km/h) 前 進, 求 距 離 y ( 公 里 ) 與 時 間 x ( 小 時 ) 的 關 係 式 關 係 式 就 是 描 述 兩 個 變 數 x 與 y 之 間 關 係 的 數 學 式 子 例 如 :y=60x 2. 媽 媽 的 年 齡 (x 歲 ) 比 女 兒
More information2010年澳门市民体质监测公报
2010 年 澳 門 市 民 體 質 監 測 綜 合 簡 報 為 了 系 統 掌 握 澳 門 市 民 體 質 狀 況 和 變 化 規 律, 推 動 澳 門 市 民 科 學 健 身 活 動 的 開 展, 澳 門 體 育 發 展 局 聯 合 衛 生 局 教 育 暨 青 年 局 社 會 工 作 局 高 等 教 育 輔 助 辦 公 室 和 澳 門 理 工 學 院 等 部 門, 在 國 家 體 育 總 局 體
More information目 錄
總 統 令 中 華 民 國 1 0 2 年 1 月 9 日 華 總 一 義 字 第 1 0 2 0 0 0 00811 號 茲 修 正 安 寧 緩 和 醫 療 條 例 第 一 條 第 三 條 至 第 五 條 及 第 六 條 之 一 至 第 九 條 條 文, 公 布 之 總 統 馬 英 九 行 政 院 院 長 陳 冲 安 寧 緩 和 醫 療 條 例 修 正 第 一 條 第 三 條 至 第 五 條 及
More informationMicrosoft Word - LCEWA01_090110_00066.doc
收 文 編 號 :1050000093 議 案 編 號 :1050115071001100 立 法 院 議 案 關 係 文 書 ( 中 華 民 國 41 年 9 月 起 編 號 ) 中 華 民 國 105 年 4 月 20 日 印 發 院 總 第 703 號 政 府 提 案 第 10511 號 之 2 案 由 : 行 政 院 農 業 委 員 會 函, 為 修 正 犬 貓 及 偶 蹄 類 動 物 進
More information2016年中國語文科試卷三聆聽及綜合能力考核樣本試卷示例及說明
目 錄 2016 年 中 國 語 文 科 試 卷 三 聆 聽 及 綜 合 能 力 考 核 樣 本 試 卷 示 例 及 說 明 前 言 1 第 五 級 示 例 一 2 第 五 級 示 例 二 11 第 四 級 示 例 一 20 第 四 級 示 例 二 28 第 三 級 示 例 一 37 第 三 級 示 例 二 45 第 二 級 示 例 一 53 第 二 級 示 例 二 61 第 一 級 示 例 一 68
More information75 叁 積 木 遊 戲 的 教 學 功 能 一 促 進 體 能 發 展 二 發 展 社 會 技 巧 Ramsey 1991 Beaty 1995 ( ) ( ) ( ) 三 學 習 情 緒 處 理 國 教 之 友 第 59 卷 第 3 期 19
75 叁 積 木 遊 戲 的 教 學 功 能 一 促 進 體 能 發 展 二 發 展 社 會 技 巧 Ramsey 1991 Beaty 1995 ( ) ( ) ( ) 三 學 習 情 緒 處 理 國 教 之 友 第 59 卷 第 3 期 19 四 增 進 認 知 體 驗 五 提 升 語 言 層 次 六 激 發 創 造 力 發 展 88 肆 幼 兒 在 積 木 遊 戲 上 的 發 展 過 程 86
More informatione-Submission System Quick Reference Guide for Publication Related Matters (Chinese version)
有 關 登 載 事 宜 的 電 子 呈 交 系 統 簡 易 參 考 指 南 2016 年 5 月 1.4 版 本 第 1 頁 目 錄 1 登 入 前 要 準 備 的 資 料... 4 2 登 入 電 子 呈 交 系 統... 5 2.1 輸 入 使 用 者 編 號 及 密 碼... 5 2.2 接 受 免 責 聲 明 的 版 頁... 5 2.3 從 主 項 目 單 中 選 擇... 5 3 一 次
More information128 提 示 樞 紐 分 析 表 的 用 途 樞 紐 分 析 表 是 指 可 以 用 來 快 速 合 併 和 比 較 大 量 資 料 的 互 動 式 表 格, 透 過 它 可 以 詳 細 分 析 數 值 資 料, 特 別 適 用 於 下 列 情 況 : 需 要 從 含 有 大 量 資 料 的 清
Chapter 06 使 用 樞 紐 分 析 表 快 速 分 組 資 料 127 學 習 要 點 認 識 樞 紐 分 析 表 建 立 樞 紐 分 析 表 調 整 樞 紐 分 析 表 的 版 面 配 置 顯 示 群 組 小 計 的 合 計 折 疊 與 展 開 明 細 資 料 篩 選 與 排 序 樞 紐 分 析 表 資 料 新 增 計 算 欄 位 本 章 結 構 什 麼 是 樞 紐 分 析 表 適 用
More information牙 科 門 診 診 察 費 1. 每 位 醫 師 每 日 門 診 量 在 二 00122C 230 1999/7/1 十 人 次 以 下 部 分 ( 20) 2) 未 開 處 方 或 處 方 由 本 院 所 自 行 調 劑 牙 科 門 診 診 察 費 2. 每 位 醫 師 每 日 門 診 量 超 過
診 療 項 目 代 碼 健 保 支 付 點 數 價 格 參 考 起 日 價 格 參 考 迄 日 中 文 項 目 名 稱 英 文 項 目 名 稱 備 註 一 般 門 診 診 察 費 醫 院 門 診 診 察 費 ( 不 含 00101B 260 2016/4/1 牙 科 門 診 ) 2. 地 區 醫 院 (1) 處 方 交 付 特 約 藥 局 調 劑 一 般 門 診 診 察 費 醫 院 門 診 診 察
More information8,530 1,056 52% 951 5.1 94% 1.9 33.3% 730 515 27.2% 179 50.3% 1 30,000 25,000 20,000 15,000 10,000 5,000 0 25,072 24,043 21,950 24,684 17,537 2011 201
第 四 章 金 融 財 務 80 246 000 6.5% 16.6% 香 港 的 國 際 金 融 中 心 地 位 總 覽 24 Z/Yen 證 券 及 衍 生 工 具 市 場 蓬 勃 暢 旺 24.7 1 866 2,630 52 8,530 1,056 52% 951 5.1 94% 1.9 33.3% 730 515 27.2% 179 50.3% 1 30,000 25,000 20,000
More information教育實習問與答:
問 與 答 集 一 總 則 Q1: 本 校 開 設 的 教 育 學 程 的 類 別 有 那 幾 種? A1: 本 校 開 設 的 教 育 學 程 有 中 等 學 校 師 資 類 科 教 育 學 程 ( 取 得 國 中 高 中 高 職 等 教 師 資 格 ) 國 民 小 學 師 資 類 科 教 育 學 程 取 得 國 小 教 師 資 格 ) 二 修 習 對 象 與 資 格 Q1: 在 何 種 條 件
More information關 於 教 育 部 學 習 拍 立 得 教 育 部 於 (103) 年 度 整 合 各 縣 市 政 府 部 屬 機 構 大 學 及 民 間 的 數 位 資 源 與 服 務, 依 不 同 類 型, 分 別 匯 集 於 教 育 大 市 集 教 育 百 科 教 育 媒 體 影 音 教 育 部 學 習 拍
教 育 部 學 習 拍 立 得 - 教 師 版 使 用 手 冊 v2.0 2015.10.31 關 於 教 育 部 學 習 拍 立 得 教 育 部 於 (103) 年 度 整 合 各 縣 市 政 府 部 屬 機 構 大 學 及 民 間 的 數 位 資 源 與 服 務, 依 不 同 類 型, 分 別 匯 集 於 教 育 大 市 集 教 育 百 科 教 育 媒 體 影 音 教 育 部 學 習 拍 立 得
More information