7期xin
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- 丰 韩
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1 中 国 农 学 通 报 0,0():- Chinese Agricultural Science Bulletin 花 椰 菜 种 质 资 源 遗 传 多 样 性 SRAP 标 记 分 析 荆 赞 革, 唐 征, 裴 徐 梨, 刘 庆, 张 小 玲, 罗 天 宽, 朱 世 杨 ( 浙 南 作 物 育 种 重 点 实 验 室, 温 州 科 技 职 业 学 院, 浙 江 温 州 00; 作 物 遗 传 与 种 质 创 新 国 家 重 点 实 验 室 / 南 京 农 业 大 学 园 艺 学 院, 南 京 00) 摘 要 : 为 了 从 分 子 水 平 上 揭 示 花 椰 菜 种 质 资 源 间 的 亲 缘 关 系, 为 其 种 质 搜 集 鉴 定 利 用 和 遗 传 改 良 提 供 一 定 的 理 论 基 础 本 研 究 采 用 SRAP 分 子 标 记 技 术 对 份 花 椰 菜 种 质 资 源 进 行 遗 传 多 样 性 研 究 从 0 个 引 物 组 合 中 筛 选 得 到 对 多 态 性 引 物 组 合, 共 检 测 到 条 扩 增 条 带, 平 均 每 对 引 物 扩 增 等 位 基 因 数 从 到 0 不 等 其 中 多 态 性 片 段 为 条, 多 态 性 比 例 为.%, 表 明 花 椰 菜 种 质 间 具 有 相 对 丰 富 的 遗 传 多 样 性 相 似 系 数 分 析 表 明 种 质 间 遗 传 相 似 系 数 为 0.~0., 平 均 为 0.0 SRAP 分 子 标 记 聚 类 分 析 结 果 显 示 来 源 和 地 域 可 作 为 花 椰 菜 种 质 聚 类 的 农 性 状 之 一 关 键 词 : 花 椰 菜 ; 遗 传 多 样 性 ;SRAP 中 图 分 类 号 :S 文 献 标 志 码 :A 论 文 编 号 :0-00 Genetic Diversity Analysis of Cauliflower Germplasm by SRAP Markers Jing Zange, Tang Zheng, Pei Xuli, Liu Qing, Zhang Xiaoling, Luo Tiankuan, Zhu Shiyang ( Zhenan Key Laboratory of Crop Breeding, Wenzhou Vocational College of Science and Technology, Wenzhou Zhejiang 00; State Key Laboratory of Crop Genetics and Germplasm Enhancement/College of Horticulture, Nanjing Agricultural University, Nanjing 00) Abstract: In order to reveal the genetic relationship of cauliflower germplasm at molecular level, providing some theoretical basis for germplasm collection, identification, utilization, genetic improvement. The genetic diversity of genotypes of cauliflower (Brassica oleracea L. var. botrytis L.) germplasm was evaluated by sequence- related amplified polymorphism (SRAP) technology in this study. A total of alleles were detected by SRAP markers,which screened from 0 primer combinations. The average bands of each primers combination ranged from to 0, of which ones were polymorphic and the polymorphism frequency was.%, indicating that the cauliflower germplasm relatively had extensive genetic diversity. Similarity coefficient analysis showed that genetic similarity among genotypes was from 0. to 0., averaged out at 0.0. Cluster analysis showed that origin and district could be used as agronomic traits in cauliflower germplasm cluster analysis. Key words: cauliflower; genetic diversity; SRAP 0 引 言 花 椰 菜 (Brassica oleracea L. var. botrytis L.), 又 称 花 菜 菜 花 椰 菜 花, 和 西 兰 花 ( 青 花 菜 ) 结 球 甘 蓝 等 同 为 甘 蓝 的 变 种, 是 中 国 重 要 的 蔬 菜 作 物 之 一 花 椰 菜 原 产 于 地 中 海 沿 岸, 自 世 纪 引 入 中 国, 由 于 其 味 道 鲜 美, 适 应 性 广, 在 全 国 各 地 得 到 广 泛 栽 培 据 种 质 资 源 统 计 表 明, 中 国 的 花 椰 菜 品 种 资 源 主 要 分 布 在 福 建 江 浙 一 带, 其 他 地 方 资 源 相 对 较 少 花 椰 菜 在 中 国 的 栽 培 时 间 较 长, 大 多 为 常 规 品 种, 产 量 偏 低, 品 种 退 化 严 重 因 此 深 入 研 究 花 椰 菜 种 质 资 源 的 基 金 项 目 : 温 州 科 技 职 业 学 院 院 立 项 目 花 椰 菜 种 质 资 源 引 进 筛 选 与 创 新 第 一 作 者 简 介 : 荆 赞 革, 男, 年 出 生, 河 南 人, 助 理 研 究 员, 博 士 研 究 生, 研 究 方 向 : 蔬 菜 遗 传 育 种 与 生 物 技 术 通 信 地 址 :00 浙 江 省 温 州 市 六 虹 桥 路 000 号 温 州 科 技 职 业 学 院,Tel:0-, jingzange@aliyun.com 通 讯 作 者 : 唐 征, 男, 年 出 生, 江 西 人, 副 教 授, 硕 士 研 究 生, 研 究 方 向 : 蔬 菜 遗 传 育 种 与 生 物 技 术 通 信 地 址 :00 浙 江 省 温 州 市 六 虹 桥 路 000 号 温 州 科 技 职 业 学 院,Tel:0-, tzeng0@.com 收 稿 日 期 :0-0-0, 修 回 日 期 :0-0-
2 荆 赞 革 等 : 花 椰 菜 种 质 资 源 遗 传 多 样 性 SRAP 标 记 分 析 遗 传 多 样 性 和 亲 缘 关 系 对 于 培 育 优 良 花 椰 菜 优 势 杂 交 组 合, 提 高 品 质 和 产 量 具 有 重 要 意 义, 有 力 地 促 进 花 椰 菜 良 种 产 业 化 相 关 序 列 扩 增 多 态 性 (sequence-related amplified polymorphism,srap) 又 称 基 于 序 列 扩 增 多 态 性,00 年 在 美 国 加 州 大 学 被 首 次 提 出 该 标 记 具 有 扩 增 多 态 性 高, 扩 增 位 点 在 基 因 组 中 分 布 均 匀, 较 易 对 扩 增 得 到 的 目 标 片 段 进 行 测 序 等 优 点, 同 时 SRAP 引 物 具 有 较 好 的 通 用 性, 能 够 用 少 量 的 引 物 可 组 配 得 到 多 个 引 物 对 [], 目 前 在 等 番 茄 [] 大 白 菜 [] 西 瓜 [] 茄 子 [] 黄 瓜 [] [] [] 苦 瓜 作 物 的 种 质 资 源 鉴 定 评 价 核 心 种 质 构 建 遗 传 材 料 创 建 [] 遗 传 多 样 性 [0] 品 种 鉴 定 [] 性 状 连 锁 标 [-] 记 等 方 面 都 得 到 了 较 好 的 应 用 目 前 在 国 内 可 供 利 用 的 花 椰 菜 育 种 材 料 相 对 有 限, 为 此 运 用 SRAP 技 术 对 份 花 椰 菜 种 质 资 源 进 行 遗 传 多 样 性 分 析, 研 究 结 果 有 助 于 从 分 子 水 平 上 揭 示 种 质 间 亲 缘 关 系, 为 花 椰 菜 种 质 资 源 的 搜 集 鉴 定 利 用 和 遗 传 改 良 提 供 一 定 的 理 论 基 础 材 料 与 方 法. 材 料 以 本 研 究 所 引 进 保 存 的 份 花 椰 菜 种 质 资 源 为 试 验 材 料, 常 规 田 间 管 理 材 料 编 号 及 熟 性 产 地 等 信 息 见 表. 基 因 组 DNA 提 取 采 收 期 选 取 具 有 典 型 品 种 特 性 的 单 株 幼 嫩 叶 片, [] 采 用 改 良 CTAB 法 提 取 基 因 组 DNA, 经 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 检 测 质 量 后, 稀 释 成 浓 度 为 0 ng/μl 的 工 作 液, 超 低 温 冰 箱 保 存 备 用. SRAP 扩 增 和 电 泳 检 测 试 验 选 用 了 个 正 向 引 物 和 个 反 向 引 物 ( 表 ) 以 基 因 组 DNA 为 模 板 进 行 PCR 扩 增, 反 应 体 系 为 μl:dna ng, 引 物 各 0. μmol/l,taq 酶.0 U,Mg +.0 mmol/l, PCR 缓 冲 液 反 应 程 序 为 为 min; 0 s, 0 s, 0 s, 个 循 环 ; 表 供 试 所 用 花 椰 菜 种 质 资 源 编 号 品 种 名 称 熟 性 /d 产 地 雪 剑 号 ~0 天 津 市 耕 耘 种 业 有 限 公 司 神 良 0 0 浙 江 神 良 种 业 有 限 公 司 神 良 浙 江 神 良 种 业 有 限 公 司 庆 农 庆 荣 庆 农 庆 农 0 0 利 民 0 0 浙 江 省 乐 清 市 远 东 花 椰 菜 种 苗 场 松 花 王 乐 清 市 肇 丰 种 苗 有 限 公 司 0 农 发 0 0 福 州 立 信 种 苗 有 限 公 司 台 友 0-0~ 台 友 宏 展 种 苗 有 限 公 司 青 松 天 津 市 耕 耘 种 业 有 限 公 司 洞 松 0 新 宏 瑞 安 市 丰 农 种 苗 有 限 公 司 白 马 王 子 0 0 温 州 市 神 鹿 种 苗 有 限 公 司 洞 松 0 农 田 台 湾 农 田 种 苗 有 限 公 司 洞 松 洞 松 00 0 洞 松 好 吃 0 0 温 州 首 指 蔬 菜 种 业 有 限 公 司 好 吃 温 州 首 指 蔬 菜 种 业 有 限 公 司 特 早 0 0 浙 江 省 乐 清 市 远 东 花 椰 菜 种 苗 场 早 春 王 0 0 台 湾 第 一 种 苗 股 份 有 限 公 司
3 中 国 农 学 通 报 表 用 于 花 椰 菜 遗 传 多 样 性 分 析 的 SRAP 引 物 序 列 引 物 正 向 序 列 ( - ) 引 物 反 向 序 列 ( - ) Em0 TGAGTCCAAACCGGATA Me0 GACTGCGTACGAATTAAT Em0 TGAGTCCAAACCGGAGC Me0 GACTGCGTACGAATTTGC Em0 TGAGTCCAAACCGGAAT Me0 GACTGCGTACGAATTGAC Em0 TGAGTCCAAACCGGACC Me0 GACTGCGTACGAATTTGA Em0 TGAGTCCAAACCGGAAG Me0 GACTGCGTACGAATTAAC Me0 GACTGCGTACGAATTGCA 0 s,0 0 s, 0 s, 个 循 环 ; 完 全 延 伸 min 0 保 存 扩 增 产 物 进 行 非 变 性 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 电 泳 检 测 预 电 泳 后, 每 点 样 孔 加 样 μl,0 V 稳 压 电 泳.~.0 h 电 泳 结 束 后 采 用 AgNO 染 色 法 进 行 染 色, 经 过 [] 固 定 染 色 显 影 等 程 序, 至 条 带 清 晰 后 拍 照. 数 据 处 理 及 分 析 对 获 得 清 晰 的 DNA 条 带 进 行 统 计, 样 品 间 同 一 位 置 有 电 泳 条 带 则 赋 值 为, 无 则 赋 值 为 0 样 品 种 间 遗 传 相 似 系 数 参 照 Nei 和 Li 的 方 法 运 用 NTSYS pc 软 件 统 计 数 据, 形 成 /0 矩 阵, 按 照 不 加 权 成 对 群 算 术 平 均 法 (UPGMA) 进 行 遗 传 聚 类 分 析, 并 绘 制 亲 缘 关 系 树 状 图 结 果 与 分 析. 花 椰 菜 SRAP 扩 增 结 果 本 试 验 从 0 个 SRAP 引 物 组 合 中, 筛 选 出 个 可 稳 定 扩 增, 多 态 性 较 好 的 引 物 对 份 花 椰 菜 种 质 资 源 进 行 PCR 扩 增 结 果 显 示 对 引 物 组 合 共 检 测 到 条 扩 增 片 段, 平 均 每 对 引 物 扩 增 的 等 位 基 因 数 在 介 于 到 0 之 间, 平 均 为. 个, 其 中 多 态 性 片 段 为 条, 多 态 性 比 例 为.%, 单 个 引 物 检 测 到 的 多 态 性 位 点 比 率 最 低 为 me/em(.% ), 最 高 的 me/em (.0%), 表 明 花 椰 菜 种 质 间 具 有 较 为 丰 富 的 遗 传 多 样 性 图 为 引 物 me/em 在 个 花 椰 菜 基 因 型 的 扩 增 图 谱. 花 椰 菜 种 质 资 源 间 相 似 系 数 和 聚 类 分 析 根 据 SRAP 分 析 结 果, 计 算 出 个 花 椰 菜 种 质 间 的 遗 传 相 似 系 数 ( 表 ) 从 表 中 看 出, 其 中 青 松 () 与 新 宏 () 的 遗 传 相 似 系 数 最 大, 为 0., 雪 剑 号 () 和 农 田 00 () 之 间 的 遗 传 相 似 系 数 最 小, 为 0., 个 种 质 间 的 平 均 相 似 系 数 为 0.0 采 用 非 加 权 平 均 法 (UPGMA) 对 花 椰 菜 种 质 进 行 聚 类 分 析, 构 建 亲 缘 关 系 树 状 图 ( 图 ), 在 遗 传 相 似 系 数 0. 处 可 将 供 试 材 料 分 为 两 个 类 群 第 一 类 群 仅 包 括 雪 剑 号, 该 资 源 搜 集 于 天 津 市, 来 自 于 北 方 地 区, 单 独 聚 类 其 余 个 种 质 几 乎 全 部 来 源 于 近 长 江 流 域 维 度 地 区, 地 缘 关 系 较 近, 聚 为 第 二 类 群 第 二 类 群 中 洞 松 () 洞 松 () 洞 松 () 洞 松 () 洞 松 (0) 搜 集 于, 聚 为 一 个 亚 L 0 0 L:DNA Ladder;~: 样 品 编 号 同 表 图 引 物 me/em 在 个 花 椰 菜 种 质 的 扩 增 图 谱
4 荆 赞 革 等 : 花 椰 菜 种 质 资 源 遗 传 多 样 性 SRAP 标 记 分 析 表 基 于 SRAP 分 析 的 个 花 椰 菜 种 质 间 的 遗 传 相 似 系 数
5 中 国 农 学 通 报 图 个 花 椰 菜 种 质 资 源 树 状 聚 类 图 组, 表 明 其 具 有 较 为 相 近 的 遗 传 背 景 庆 农 () 庆 荣 () 庆 农 00 () 庆 农 0 () 聚 为 另 一 个 亚 组, 个 种 质 均 来 源 于, 推 测 该 系 列 种 质 可 能 采 用 同 一 母 本 或 亲 本 来 源 相 同 ; 好 吃 0 () 和 好 吃 00 () 个 种 质 来 源 于 温 州 首 指 蔬 菜 种 业 有 限 公 司, 聚 在 一 个 亚 组 内 本 研 究 表 明 同 一 来 源 或 同 一 地 理 区 域 的 种 质 资 源 间 具 有 相 对 较 近 的 遗 传 基 础 结 论 与 讨 论 研 究 表 明, 花 椰 菜 种 质 资 源 遗 传 多 样 性 的 SRAP 分 析 能 够 为 传 统 种 质 研 究 提 供 准 确 和 深 入 的 理 论 依 据, 其 从 分 子 水 平 上 揭 示 了 遗 传 差 异, 不 受 环 境 因 素 的 影 响 与 其 他 分 子 标 记 方 法 相 比,SRAP 标 记 具 有 多 态 性 好 易 于 使 用 效 率 高 高 共 显 性 等 优 点, 是 分 析 遗 传 多 样 性 的 重 要 工 具 [] 马 二 磊 等 在 00 年 以 松 花 型 花 椰 菜 为 材 料, 将 SRAP 标 记 成 功 的 用 于 花 椰 菜 的 遗 传 多 样 性 分 析, 试 验 结 果 显 示 个 引 物 组 合 共 检 测 到 条 带, 平 均 每 个 引 物 检 测 到. 个, 其 中.% 为 多 态 性 条 带, 与 SAPD ISSR 分 子 标 记 对 比 之 后 发 现 只 有 SRAP 标 记 的 引 物 me/em 可 将 0 个 品 种 全 部 鉴 别 得 出 本 试 验 也 采 用 SRAP 标 记 方 法, 从 0 个 引 物 组 合 中 筛 选 得 到 对 多 态 性 引 物 组 合, 共 检 测 到 条 扩 增 条 带, 每 对 引 物 扩 增 的 等 位 基 因 数 平 均 为. 个, 多 态 性 为.%, 与 该 试 验 结 果 相 比, 平 均 每 个 引 物 检 测 到 条 带 数 和 多 态 性 比 例 均 略 低, 推 测 可 能 是 因 为 试 验 材 料 和 引 物 组 合 的 不 同 所 引 起 来 源 是 物 种 亲 缘 关 系 分 析 的 重 要 指 标, 也 是 聚 类 分 析 的 重 要 影 响 因 素 现 代 生 物 系 统 学 分 析 表 明, 每 个 物 种 都 有 其 初 生 起 源 中 心, 之 后 经 过 地 理 隔 离 基 因 突 变 染 色 体 畸 变 等 基 因 重 组 过 程 可 分 化 为 不 同 的 亚 [] 种 及 类 群 本 试 验 采 用 的 个 SRAP 引 物 可 将 份 花 椰 菜 种 质 资 源 分 为 大 类 群 第 类 群 仅 包 括 雪 剑 号 一 个 种 质 资 源, 其 产 地 为 天 津, 其 他 个 种 质
6 荆 赞 革 等 : 花 椰 菜 种 质 资 源 遗 传 多 样 性 SRAP 标 记 分 析 资 源 聚 为 第 类 群, 产 地 大 多 为 南 方 地 区, 由 此 推 断 由 于 气 候 地 理 等 差 异, 使 得 花 椰 菜 的 不 同 种 质 间 出 现 了 遗 传 差 异 本 试 验 中 来 自 洞 头 县 的 个 松 散 型 花 椰 菜 地 方 品 种 庆 农 种 苗 有 限 公 司 的 个 种 质 和 温 州 首 指 蔬 菜 种 业 有 限 公 司 的 份 资 源, 分 别 聚 类 在 一 起, 且 亚 组 内 亲 缘 关 系 较 近, 表 明 同 一 来 源 或 同 一 地 域 的 种 质 资 源 间 具 有 相 近 的 遗 传 基 础, 来 源 和 地 域 可 作 为 花 椰 [] 菜 种 质 资 源 聚 类 的 重 要 农 艺 性 状, 这 与 孙 德 岭 等 对 个 花 椰 菜 种 质 资 源 聚 类 分 析 的 结 论 相 似 前 人 研 [,] 究 发 现 熟 性 也 可 作 为 种 质 聚 类 的 重 要 指 标 之 一, 与 遗 传 亲 缘 关 系 存 在 着 相 关 性 本 试 验 中 花 椰 菜 种 质 聚 类 与 熟 性 相 关 度 不 大, 推 测 可 能 是 由 于 所 用 引 物 数 量 太 少, 以 及 试 验 材 料 特 殊 性 引 起 由 于 长 期 的 人 工 选 育, 花 椰 菜 的 遗 传 多 样 性 较 为 丰 富,SRAP 标 记 在 鉴 定 其 遗 传 多 样 性 的 同 时, 也 可 很 方 便 地 对 特 异 片 段 进 行 进 一 步 研 究 本 研 究 结 果 有 利 于 制 定 正 确 花 椰 菜 种 质 资 源 保 存 策 略, 为 其 遗 传 改 良 和 资 源 利 用 提 供 一 定 的 理 论 基 础 参 考 文 献 [] 李 小 艳. 花 椰 菜 种 子 遗 传 纯 度 检 测 与 品 种 鉴 定 的 分 子 标 记 分 析 [D]. 南 京 : 南 京 农 业 大 学,00. [] 王 燕, 龚 义 勤, 赵 统 敏, 等. 番 茄 SRAP-PCR 体 系 优 化 与 品 种 分 子 鉴 定 [J]. 南 京 农 业 大 学 学 报,00,0():-. [] 李 停 停. 大 白 菜 耐 热 性 基 因 的 SRAP 分 子 标 记 [D]. 长 春 : 吉 林 大 学, 0. [] 朱 小 茜, 孙 治 强, 李 晓 慧, 等. 西 瓜 全 雌 基 因 连 锁 的 SRAP 分 子 标 记 [J]. 河 南 农 业 科 学,0,0():0-0. [] 吴 雪 霞, 查 丁 石, 朱 宗 文, 等. 茄 子 耐 盐 种 质 资 源 遗 传 多 样 性 的 SRAP 和 ISSR 分 析 [J]. 植 物 生 理 学 报,0,():-. [] 鲁 明. 黄 瓜 硝 酸 盐 含 量 SRAP 标 记 分 析 [D]. 哈 尔 滨 : 东 北 农 业 大 学, 0. [] 赵 秀 娟, 宋 建 文, 胡 开 林. 苦 瓜 种 质 遗 传 多 样 性 的 SRAP 标 记 分 析 [J]. 植 物 遗 传 资 源 学 报,0,():-. [] 张 君 玉. 利 用 SSR 和 SRAP 分 子 标 记 构 建 葡 萄 核 心 种 质 [D]. 洛 阳 : 河 南 科 技 大 学,0. [] 闻 晓 英, 李 晓 峰, 商 少 川, 等. 大 白 菜 - 结 球 甘 蓝 异 附 加 系 的 SRAP 鉴 定 [J]. 华 北 农 学 报,0,():0-0. [0] 房 超, 李 跃 建, 帅 波, 等. 茄 子 及 其 近 缘 野 生 种 遗 传 多 样 性 的 SRAP 分 析 [J]. 西 南 农 业 学 报,0,():-0. [] 李 亚 利, 扈 新 民, 赵 丹, 等. 运 用 SRAP 分 子 标 记 鉴 定 辣 椒 杂 交 种 纯 度 [J]. 中 国 农 学 通 报,00,():-0. [] 张 慧, 张 淑 江, 李 菲, 等. 大 白 菜 隐 性 细 胞 核 雄 性 不 育 恢 复 基 因 BrMsf 的 标 记 [J]. 中 国 蔬 菜,0():-. [] 伊 六 喜, 斯 钦 巴 特 尔, 孟 显 光, 等. 甜 菜 雄 性 核 不 育 基 因 的 SRAP 标 记 [J]. 华 北 农 学 报,0,():0-0. [] 王 从 彦.SRAP 标 记 在 植 物 性 状 标 记 和 遗 传 图 谱 构 建 中 的 应 用 研 究 进 展 [J]. 河 南 农 业 科 学,0,():-,. [] 荆 赞 革, 唐 征, 张 小 玲, 等. 青 花 菜 SRAP-PCR 体 系 优 化 与 品 种 分 子 鉴 定 [J]. 生 物 技 术 通 报,00,:-. [] 马 二 磊, 王 燕, 刘 莉, 等. 松 花 型 花 椰 菜 主 要 品 种 鉴 定 的 分 子 标 记 分 析 [J]. 植 物 遗 传 资 源 学 报,00,():-. [] 韩 明 友. 生 命 的 信 息 本 质 与 生 物 进 化 机 制 的 哲 学 探 索 [D]. 长 春 : 吉 林 大 学,00. [] 孙 德 岭, 赵 前 程, 宋 文 芹, 等. 花 椰 菜 类 蔬 菜 自 交 系 基 因 组 间 亲 缘 关 系 的 AFLP 分 析 [J]. 园 艺 学 报,00,():-.
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