目 录 离 子 色 谱 法 及 液 相 色 谱 法 同 时 检 测 奶 制 品 中 三 聚 氰 胺 和 三 聚 氰 酸 离 子 色 谱 法 ( 等 度 法 梯 度 法 )... 2 液 相 色 谱 法 (C18 分 析 柱 法 CS10 分 析 柱 法 ).

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1 赛 默 飞 世 尔 科 技 离 子 色 谱 及 液 相 色 谱 在 奶 制 品 检 测 中 的 应 用 三 硝 亚 胆 微 硫 高 羟 三 聚 氰 胺 和 三 聚 氰 酸 酸 盐 硝 酸 盐 碱 量 碘 氰 酸 根 氯 酸 盐 脯 氨 酸 价 铬 和 六 价 铬 简 单 准 确 快 速 经 济 的 检 测 方 法

2 目 录 离 子 色 谱 法 及 液 相 色 谱 法 同 时 检 测 奶 制 品 中 三 聚 氰 胺 和 三 聚 氰 酸 离 子 色 谱 法 ( 等 度 法 梯 度 法 )... 2 液 相 色 谱 法 (C18 分 析 柱 法 CS10 分 析 柱 法 )... 4 液 相 色 谱 / 质 谱 法... 5 离 子 色 谱 法 检 测 奶 粉 和 奶 制 品 中 的 硝 酸 盐 及 亚 硝 酸 盐 奶 制 品 中 的 有 机 阳 离 子 胆 碱 乙 酰 胆 碱 以 及 乌 拉 胆 碱 的 分 析 离 子 色 谱 检 测 奶 制 品 中 的 微 量 碘 牛 奶 中 硫 氰 酸 根 的 测 定 牛 奶 中 高 氯 酸 盐 的 测 定 牛 奶 中 羟 脯 氨 酸 的 测 定 牛 奶 中 三 价 铬 和 六 价 铬 的 测 定

3 离 子 色 谱 法 及 液 相 色 谱 法 同 时 检 测 奶 制 品 中 三 聚 氰 胺 和 三 聚 氰 酸 离 子 色 谱 法 和 液 相 色 谱 法 检 测 奶 制 品 中 三 聚 氰 胺 和 三 聚 氰 酸 三 聚 氰 胺, 简 称 三 胺, 学 名 三 氨 三 嗪, 别 名 蜜 胺 氰 尿 酰 胺 三 聚 酰 胺, 是 一 种 重 要 的 氮 杂 环 有 机 化 工 原 料, 具 有 一 定 的 肾 毒 性 因 为 其 分 子 中 含 有 大 量 氮 元 素 ( 大 约 66%), 而 用 全 氮 法 检 测 蛋 白 质 含 量 时 不 能 够 区 分 这 种 伪 蛋 白 氮, 所 以 一 些 不 法 乳 制 品 厂 家 或 无 良 的 奶 农, 为 了 追 求 最 大 利 益 而 不 顾 消 费 者 的 生 命 健 康 和 安 危, 向 产 品 中 大 量 添 加 三 聚 氰 胺 粉 以 提 高 蛋 白 质 含 量 三 聚 氰 酸 与 三 聚 氰 胺 结 构 类 似, 在 化 工 生 产 过 程 中 经 常 同 时 存 在 因 此, 如 果 在 奶 粉 生 产 过 程 中 直 接 加 入 化 工 原 料 三 聚 氰 胺, 事 实 上 也 同 时 掺 入 了 混 在 三 聚 氰 胺 当 中 的 三 聚 氰 酸, 当 三 聚 氰 胺 和 三 聚 氰 酸 同 时 存 在 时, 分 子 结 构 上 的 氢 氧 基 与 氨 基 之 间 会 形 成 水 合 键, 将 二 者 连 接 起 来, 形 成 网 格 结 构, 当 混 在 奶 粉 中 的 这 种 网 格 结 构 被 摄 入 人 体 后, 由 于 胃 酸 的 作 用, 三 聚 氰 胺 和 三 聚 氰 酸 相 互 解 离, 分 别 被 吸 收 入 血 液, 并 被 运 送 到 肾 脏, 准 备 随 尿 液 排 出 体 外, 但 在 肾 脏 细 胞 中, 两 种 物 质 又 一 次 相 遇, 再 次 结 合 成 网 格 结 构 - 不 溶 于 水 的 大 分 子 复 合 物 - 并 沉 积 下 来, 形 成 结 石, 结 果 造 成 肾 小 管 的 物 理 阻 塞, 导 致 尿 液 无 法 顺 利 排 除, 使 肾 脏 积 水, 最 终 导 致 肾 脏 衰 竭 婴 幼 儿 由 于 主 要 营 养 来 源 来 自 于 奶 粉, 而 一 旦 大 量 食 用 含 有 三 聚 氰 胺 和 三 聚 氰 酸 的 奶 粉, 会 形 成 肾 结 石, 长 期 摄 入 会 造 成 肾 衰 竭 和 死 亡 成 年 人 长 期 摄 入 三 聚 氰 胺 和 三 聚 氰 酸, 也 会 造 成 不 同 程 度 的 肾 损 伤, 因 此, 无 论 从 任 何 层 面 上 讲, 三 聚 氰 胺 和 三 聚 氰 酸 都 应 该 被 严 令 禁 止 加 入 到 任 何 食 品 中 据 2007 年 6 月 的 美 国 兽 医 学 会 杂 志 报 道,2007 年 3 月 中 旬 以 来, 美 国 发 生 4000 多 起 猫 狗 等 宠 物 中 毒 死 亡 事 件 美 国 食 品 药 品 管 理 局 (FDA) 从 进 口 的 部 分 小 麦 蛋 白 粉 和 大 米 蛋 白 粉 中 检 出 三 聚 氰 胺 等 成 分 调 查 结 果 认 为 : 掺 杂 了 6.6% 三 聚 氰 胺 的 小 麦 蛋 白 粉 是 导 致 宠 物 食 品 中 毒 的 祸 端 2008 年 9 月 由 于 多 例 婴 幼 儿 因 饮 用 奶 粉 发 生 肾 结 石 而 爆 发 的 奶 粉 掺 有 三 聚 氰 胺 事 件, 引 起 中 国 政 府 的 极 度 重 视, 开 始 对 牛 奶 及 奶 制 品 进 行 大 规 模 监 查 目 前 三 聚 氰 胺 的 检 测 方 法 主 要 集 中 在 色 谱 或 色 谱 与 质 谱 联 用 技 术 上 目 前 文 献 报 道 过 的 方 法 包 括 GC-MS 方 法, 离 子 对 试 剂 液 相 色 谱 - 紫 外 检 测 法,LC-MS 法 和 LC-MS/MS 法 等, 但 是 上 述 各 种 方 法 都 或 多 或 少 存 在 一 些 缺 陷 本 资 料 为 您 介 绍 快 速 准 确 检 测 三 聚 氰 胺 的 方 法 离 子 色 谱 法 和 液 相 色 谱 / 质 谱 法 离 子 色 谱 法 本 法 是 采 用 阳 离 子 交 换 离 子 色 谱 - 紫 外 检 测 的 技 术, 对 奶 粉 中 三 聚 氰 胺 进 行 了 准 确 定 量, 赛 默 飞 世 尔 科 技 为 您 提 供 等 度 以 及 梯 度 两 种 测 定 方 法, 为 三 聚 氰 胺 的 测 定 提 供 可 靠 的 保 障 奶 粉 及 液 态 奶 样 品 前 处 理 方 法 : 奶 粉 一 奶 粉 :( 使 用 RP 柱 前 处 理, 进 样 体 积 100 微 升 ) 称 取 1.00 g 奶 粉 样 品, 充 分 溶 解 于 4mL 去 离 子 水 中 使 用 色 谱 纯 乙 腈 定 容 至 10mL, 充 分 混 匀 室 温 沉 降 蛋 白 十 分 钟 取 上 清 液, 使 用 去 离 子 水 稀 释 十 倍, 依 次 过 0.22 微 米 尼 龙 滤 头 和 活 化 过 的 RP 柱 准 备 进 样 分 析 二 奶 粉 :( 使 用 NG1 在 线 前 处 理, 进 样 体 积 10 微 升 ) 称 取 1.00 g 奶 粉 样 品, 充 分 溶 解 于 4mL 去 离 子 水 中 使 用 色 谱 纯 乙 腈 定 容 至 10mL, 充 分 混 匀 室 温 沉 降 蛋 白 十 分 钟 取 上 清 液, 过 0.22 微 米 尼 龙 滤 头 2

4 准 备 进 样 分 析 ( 由 于 在 定 量 环 后, 保 护 柱 前, 加 一 个 可 以 去 除 疏 水 性 组 分 的 NG1 柱, 乙 腈 已 将 绝 大 部 分 蛋 白 沉 淀, 而 残 余 的 蛋 白 及 脂 肪 则 可 被 NG1 小 柱 去 除 ) 液 态 奶 一 液 态 奶 :( 使 用 RP 柱 前 处 理, 进 样 体 积 100 微 升 ) 取 4mL 牛 奶 样 品 加 入 5mL 色 谱 纯 乙 腈, 充 分 混 匀 室 温 沉 降 蛋 白 十 分 钟 取 上 清 液, 使 用 去 离 子 水 稀 释 十 倍, 依 次 过 0.22 微 米 尼 龙 滤 头 和 活 化 过 的 RP 柱 准 备 进 样 分 析 二 液 态 奶 :( 使 用 NG1 在 线 前 处 理, 进 样 体 积 10 微 升 ) 取 4mL 牛 奶 样 品 加 入 5mL 色 谱 纯 乙 腈, 充 分 混 匀 室 温 沉 降 蛋 白 十 分 钟 取 上 清 液, 过 0.22 微 米 尼 龙 滤 头 准 备 进 样 分 析 ( 由 于 在 定 量 环 后, 保 护 柱 前, 加 一 个 可 以 去 除 疏 水 性 组 分 的 NG1 保 护 柱, 乙 腈 已 将 绝 大 部 分 蛋 白 沉 淀, 而 残 余 的 蛋 白 及 脂 肪 则 可 被 NG1 小 柱 去 除 ) 注 : 使 用 NG1 时, 在 NG1 柱 前 串 接 200 微 升 体 积 的 一 段 绿 管, 用 于 样 品 与 流 动 相 预 混 合 每 折 合 进 样 100 针, 应 使 用 80% 乙 腈 对 NG1 进 行 清 洗, 前 后 用 水 过 度 方 法 一 : 等 度 法 测 定 奶 粉 及 奶 制 品 中 的 三 聚 氰 胺 测 试 对 象 : 奶 粉 生 鲜 牛 奶, 本 方 法 最 低 检 出 限 为 6 mg/kg( 液 态 奶 ) 或 者 0.1 mg/kg( 奶 粉 样 品 ), 样 品 加 标 回 收 率 为 85%-105%, 实 际 样 品 重 现 性 RSD 小 于 4% 仪 器 准 备 : 赛 默 飞 世 尔 科 技 离 子 色 谱 紫 外 检 测 器 色 谱 条 件 : 淋 洗 液 :MSA(6 mmol/l) 或 硫 酸 (3 mmol/l) 等 度 色 谱 柱 :CS17 色 谱 柱 + CG17 保 护 柱 柱 温 :30 进 样 体 积 :10 µl 检 测 器 : 紫 外 检 测 器 UV,240 nm 分 析 时 间 : mau 1 - 三 聚 氰 胺 mau 1 - 三 聚 氰 胺 mg/l 三 聚 氰 胺, 出 峰 时 间 8.5 左 右 阳 性 牛 奶 样 品, 三 聚 氰 胺 浓 度 67.2 mg/kg 3

5 离 子 色 谱 法 及 液 相 色 谱 法 同 时 检 测 奶 制 品 中 三 聚 氰 胺 和 三 聚 氰 酸 方 法 二 : 梯 度 法 测 定 奶 粉 及 奶 制 品 中 的 三 聚 氰 胺 测 试 对 象 : 奶 粉 生 鲜 牛 奶 液 态 奶 巧 克 力 豆 奶 糖 饼 干 等, 本 方 法 最 低 检 出 限 为 3 mg/kg( 液 态 奶 ) 或 者 5 mg/kg( 奶 粉 样 品 ), 样 品 加 标 回 收 率 为 %, 实 际 样 品 重 现 性 RSD 小 于 4%, 结 果 令 人 满 意 仪 器 准 备 : 仪 器 : 赛 默 飞 世 尔 科 技 离 子 色 谱 紫 外 检 测 器 色 谱 条 件 : 淋 洗 液 :MSA 梯 度 或 硫 酸 梯 度 色 谱 柱 :CS17 色 谱 柱 + CG17 保 护 柱 柱 温 :30 进 样 体 积 :25 µl 检 测 器 : 紫 外 检 测 器,240 nm 120 mau 200 mau 色 谱 峰 : 三 聚 氰 胺 131 mg/kg 三 聚 氰 胺 三 聚 氰 胺 ppm 三 聚 氰 胺 标 准 溶 液 色 谱 图,13.5 分 钟 左 右 出 峰 三 聚 氰 胺 阳 性 样 品 色 谱 图 液 相 色 谱 法 赛 默 飞 世 尔 科 技 也 为 您 提 供 液 相 色 谱 检 测 三 聚 氰 胺 的 方 法, 方 法 都 与 国 家 标 准 相 符 方 法 一 : 样 品 前 处 理 : 与 原 料 乳 与 乳 制 品 中 三 聚 氰 胺 检 测 方 法 (GB/T ) 方 法 一 致 色 谱 条 件 : 流 动 相 : 10mM 的 庚 烷 磺 酸 钠 与 柠 檬 酸 (10 mm) 缓 冲 溶 液 : 乙 睛 =92:8 检 测 波 长 :240 nm 色 谱 柱 :Dionex Acclaim 120,C18,5 µm,120a, mm 仪 器 :Dionex U3000 高 效 液 相 色 谱 仪 Pump:LPG-3400 低 压 四 元 梯 度 泵, 内 置 真 空 脱 气 机 AutoSampler: WPS-3000 ColumnOven: TCC-3000 Detector: DAD-3000 二 极 管 阵 列 检 测 器 该 方 法 三 聚 氰 胺 约 11 出 峰, 方 法 检 测 限 是 0.29 ppm 4

6 8 mau 1 - 三 聚 氰 胺 mau 3 - 三 聚 氰 胺 浓 度 为 10 ppm 的 三 聚 氰 胺 标 准 品 色 谱 图, 进 样 量 20 µl 加 标 样 品 色 谱 图, 三 聚 氰 胺 与 样 品 中 的 杂 质 均 能 被 基 线 分 离, 最 大 限 度 的 将 杂 质 引 起 的 误 差 降 到 最 低 方 法 二 : 样 品 前 处 理 : 与 原 料 乳 中 三 聚 氰 胺 快 速 检 测 液 相 色 谱 法 (GB/T ) 方 法 完 全 一 致 方 法 条 件 : 实 验 仪 器 : 赛 默 飞 世 尔 科 技 U3000 液 相 色 谱 或 赛 默 飞 世 尔 科 技 离 子 色 谱 检 测 器 : 紫 外 检 测 器 色 谱 柱 :IONPAC CS10 分 析 柱 流 动 相 : 磷 酸 盐 缓 冲 溶 液 - 乙 腈 (70+30, 体 积 比 ), 混 匀 ( 磷 酸 盐 缓 冲 液 :5 mol/l 称 取 6.8 g 磷 酸 二 氢 钾 ( 准 确 至 1 g), 加 水 800 ml 完 全 溶 解 后, 用 磷 酸 调 节 ph 至 3.0, 用 水 稀 释 至 1 L, 用 滤 膜 ( 水 相,0.45 µm) 过 滤 ) 流 速 :1.5 ml/ 检 测 波 长 :240 nm 进 样 量 :25 µl 最 低 检 出 限 :6 mg/kg( 样 品 稀 释 一 百 倍 后 进 样, 计 算 检 出 限 为 0.6 ppb) mau 12.5 mau 三 聚 氰 胺 三 聚 氰 胺 ppm 标 准 品 谱 图 稀 释 100 倍 样 品 谱 图 检 测 含 量 :6.825 ppb 5

7 6 液 相 色 谱 / 质 谱 法 特 点 : 使 用 赛 默 飞 世 尔 科 技 最 新 开 发 的 混 合 基 质 柱 WAX-1 分 离 被 分 析 物 该 色 谱 柱 利 用 疏 水 和 离 子 交 换 混 合 作 用 机 理 来 达 到 特 殊 的 选 择 性 和 保 留 液 相 色 谱 运 行 时 间 仅 用 8 分 钟, 赛 默 飞 世 尔 科 技 的 MSQ 质 谱 检 测 器 确 保 选 择 性 和 灵 敏 度 对 于 两 种 物 质 (2-200 ng/ml) 的 线 性 都 能 达 到 R 2 > 方 法 检 出 限 (MDL), 三 聚 氰 胺 为 3.97 ng/ml, 三 聚 氰 酸 为 3.32 ng/ml 本 检 测 条 件 下 MSQ 质 谱 检 测 器 的 检 出 限 <5 ng/ml 样 品 前 处 理 : 提 取 1 液 态 奶 奶 粉 酸 奶 等 样 品 : 净 化 4000 r/ 离 心 10 上 清 液 经 三 氯 乙 酸 润 湿 的 滤 纸 过 滤 用 三 氯 乙 酸 溶 液 定 容 到 25 ml 取 5 ml 滤 液, 加 入 5 ml 水 混 匀 后 待 净 化 固 相 萃 取 柱 : 混 合 型 阳 离 子 固 相 萃 取 柱, 使 用 前 依 次 用 3 ml 甲 醇 5 ml 水 活 化 将 待 净 化 液 转 移 至 固 相 萃 取 柱 中, 依 次 用 3 ml 水 3 ml 甲 醇 洗 涤 后 抽 干 用 6 ml 氨 化 甲 醇 洗 脱, 流 速 不 超 过 1 ml/ 洗 脱 液 用 50 氮 气 吹 干 残 留 物 加 1 ml 液 相 的 流 动 相 定 容, 涡 旋 1 混 匀 过 0.2 µm 滤 膜 仪 器 : 赛 默 飞 世 尔 科 技 Summit HPLC 或 U3000 液 相 色 谱 系 统 自 动 进 样 器 柱 温 箱 赛 默 飞 世 尔 科 技 MSQ Plus 单 四 极 质 谱 检 测 器,ESI 源 Chromeleon 变 色 龙 软 件 色 谱 条 件 : 称 取 2.0 g 样 品 ( 精 确 到 1 g) 于 50 ml 具 塞 塑 料 离 心 管 中 加 入 15 ml 三 氯 乙 酸 溶 液 和 5 ml 乙 腈 混 匀 后 超 声 10, 再 振 荡 r/ 离 心 10 上 清 液 经 三 氯 乙 酸 润 湿 的 滤 纸 过 滤 用 三 氯 乙 酸 溶 液 定 容 到 25 ml 取 5 ml 滤 液, 加 入 5 ml 水 混 匀 后 待 净 化 2 奶 酪 奶 油 等 样 品 : 称 取 2.0 g 样 品 ( 精 确 到 1 g) 于 研 钵 中 加 入 海 沙 研 磨 成 干 粉 状 转 入 50 ml 具 塞 塑 料 离 心 管 中 用 15 ml 三 氯 乙 酸 溶 液 清 洗 研 钵 并 加 入 离 心 管 加 入 5 ml 乙 腈 混 匀 后 超 声 10, 再 振 荡 10 分 析 柱 : 赛 默 飞 世 尔 科 技 Acclaim 混 合 基 质 柱 WAX-1 淋 洗 液 : 等 度 90% 乙 腈 /10% 20mM ph4 醋 酸 铵 缓 冲 液 (v/v) 离 子 色 谱 法 及 液 相 色 谱 法 同 时 检 测 奶 制 品 中 三 聚 氰 胺 和 三 聚 氰 酸 Relative Abundance 108 % HO 全 波 段 扫 描 三 聚 氰 胺 和 三 聚 氰 酸 的 质 谱 图 N OH N N H 2 N OH N Melae NH 2 H N O Cyanuric Acid N NH % m/z m/z ( mm,5 µm) N O N H N O H

8 7 流 速 :0.25 ml/ 柱 温 :20 进 样 量 :5 µl MSQ 质 谱 条 件 分 析 模 式 :SIM 带 极 性 切 换 锥 孔 电 压 :50 V 间 隔 时 间 :0.5 S, 对 于 所 有 SIM 通 道 探 针 温 度 :500 扫 描 :4 SIM 全 程 扫 描 ( 每 次 500 ms), 两 个 不 同 极 性 的 全 扫 描 ( m/z,250 ms) 分 析 物 及 内 标 结 果 见 表 和 色 谱 图 MSQ 质 谱 条 件 名 称 开 始 质 量 数 (m/z) 结 束 质 量 数 (m/z) 时 间 范 围 ( 分 钟 ) 扫 描 时 间 ( 毫 秒 ) 极 性 锥 电 压 (V) 正 极 全 扫 描 pos. 50 负 极 全 扫 描 pos. 50 名 称 Mass (m/z) Span (m/z) 时 间 范 围 ( 分 钟 ) 扫 描 时 间 ( 毫 秒 ) 极 性 锥 电 压 (V) SIM GROUP 1 三 聚 氰 胺 pos. 50 三 聚 氰 胺 N 3 ( 内 pos. 50 SIM GROUP 2 三 聚 氰 酸 neg. 50 三 聚 氰 酸 -13C3( 内 标 ) neg. 50

9 离 子 色 谱 法 检 测 奶 粉 和 奶 制 品 中 的 硝 酸 盐 及 亚 硝 酸 盐 离 子 色 谱 法 检 测 奶 粉 和 奶 制 品 中 的 硝 酸 盐 及 亚 硝 酸 盐 自 然 界 中 的 硝 酸 盐 及 亚 硝 酸 盐 的 形 成 机 理 : 含 氮 有 机 物 在 微 生 物 的 作 用 下, 可 逐 渐 分 解 成 氨, 在 氧 的 作 用 下, 氨 可 进 一 步 被 微 生 物 转 化 为 亚 硝 酸 盐 和 硝 酸 盐, 硝 酸 盐 在 一 定 条 件 下 亦 可 还 原 为 亚 硝 酸 盐 大 量 的 亚 硝 酸 盐 被 人 体 血 液 吸 收 后, 可 使 正 常 的 血 红 蛋 白 ( 二 价 铁 ) 变 成 变 性 血 红 蛋 白 ( 三 价 铁 ), 从 而 失 去 携 带 氧 气 的 功 能, 出 现 组 织 缺 氧 现 象 ; 另 外 亚 硝 酸 盐 与 蛋 白 质 代 谢 的 中 间 产 物 仲 胺 反 应, 还 能 生 成 亚 硝 胺, 亚 硝 胺 具 有 一 定 的 致 癌 性 在 奶 牛 的 喂 养 过 程 中, 如 果 环 境 水 源 喂 养 饲 料 的 添 加 剂 以 及 奶 牛 生 长 环 境 等 硝 酸 盐 亚 硝 酸 盐 含 量 过 高, 都 会 发 生 牛 奶 中 的 硝 酸 盐 及 亚 硝 酸 盐 的 超 标, 随 着 人 们 生 活 质 量 的 提 高, 牛 奶 及 奶 制 品 在 人 们 日 常 生 活 中 所 占 比 重 越 来 越 大, 因 此, 加 强 预 防 和 检 测 牛 奶 及 奶 制 品 的 硝 酸 盐 污 染 是 非 常 必 要 的 本 部 分 介 绍 了 离 子 色 谱 检 测 牛 奶 及 奶 制 品 中 硝 酸 盐 亚 硝 酸 盐 的 方 法, 该 方 法 对 亚 硝 酸 盐 和 硝 酸 盐 检 出 限 分 别 为 5 mg/l 和 75 mg/l 注 : 本 方 法 为 国 标 GB5009 食 品 中 亚 硝 酸 盐 与 硝 酸 盐 的 测 定 中 的 推 荐 方 法 样 品 前 处 理 提 取 : 牛 奶 : 准 确 量 取 5 ml 试 样 于 25 ml 比 色 皿 中, 加 5-10 ml 纯 水, 加 入 3% 乙 酸 2 ml, 摇 匀 超 声 10,75 放 置 5 采 用 定 量 滤 纸 初 步 过 滤 取 部 分 溶 液 于 rpm 速 度 离 心 15, 取 上 清 液 备 用 奶 粉, 奶 制 品 : 准 确 称 取 试 样 2.50 g, 置 于 50 ml 容 量 瓶 中, 加 水 40 ml, 加 入 3% 乙 酸 2 ml, 摇 匀, 超 声 30, 置 75 水 浴 中 放 置 5, 用 水 稀 释 至 刻 度 溶 液 经 滤 纸 过 滤 后, 取 部 分 溶 液 于 rpm 离 心 15, 取 上 清 液 备 用 净 化 : 取 滤 液 15 ml 依 次 通 过 OnGuard II RP 柱 ( 如 果 氯 离 子 大 于 100 mg/l, 则 需 要 依 次 通 过 OnGuard II Ag 柱 和 Na 柱 ), 弃 去 前 面 3 ml(1.0 cc), 收 集 后 面 洗 脱 液 待 测 OnGuard II RP 柱 (1.0 cc) 使 用 前 依 次 用 10ml 甲 醇 10 ml 水 通 过, 活 化 30 OnGuard II Ag 柱 (1.0 cc) 和 OnGuard II Na 柱 (1.0 cc) 用 10 ml 水 通 过, 活 化 30 OnGuard II RP 柱 Ag 柱 和 Na 柱 可 以 用 C18 柱 Ag 型 树 脂 柱 和 Na 型 树 脂 柱 代 替 色 谱 条 件 : 色 谱 柱 : 氢 氧 化 物 选 择 性, 可 兼 容 梯 度 洗 脱 的 高 容 量 阴 离 子 交 换 柱, 如 IonPac AS11-HC 4 mm 250 mm( 带 IonPac AG11-HC 型 保 护 柱 4 mm 50 mm) 淋 洗 液 : 淋 洗 液 自 动 发 生 器, 浓 度 为 6~70 mmol 或 选 配 二 元 或 四 元 梯 度 泵 混 合 产 生 梯 度 程 序 ( 使 用 高 纯 的 质 量 浓 度 为 50% 浓 氢 氧 化 钠 溶 液, 配 制 成 含 OH - 为 100 mmol/l 的 淋 洗 液, 然 后 再 进 行 调 整 稀 释 ) 抑 制 器 : 连 续 自 动 再 生 膜 阴 离 子 抑 制 器 检 测 器 : 电 导 检 测 器, 检 测 池 温 度 :35 淋 洗 液 流 速 :1.0 ml/ 进 样 体 积 :50 µl 测 定 : 标 准 曲 线 移 取 硝 酸 盐 和 亚 硝 酸 盐 混 合 标 准 使 用 液, 加 水 稀 释, 制 成 系 列 标 准 溶 液, 其 中 由 于 不 同 样 品 中 硝 酸 盐 含 量 差 8

10 别 较 大, 故 针 对 不 同 类 型 的 样 品, 需 制 作 不 同 标 准 曲 线, 含 硝 酸 盐 浓 度 为 mg/l 或 和 10 mg/l 和 亚 硝 酸 盐 浓 度 为 mg/l 的 混 合 标 准 溶 液, 用 1.0mL 注 射 器 从 低 到 高 浓 度 依 次 进 样, 得 到 上 述 各 浓 度 标 准 溶 液 的 色 谱 图 以 硝 酸 盐 和 亚 硝 酸 盐 的 浓 度 (µg/l) 为 横 坐 标, 以 峰 高 (µs) 或 峰 面 积 为 纵 坐 标, 绘 制 标 准 曲 线, 并 计 算 线 性 回 归 方 程 样 品 测 定 : 用 1.0 ml 注 射 器 分 别 吸 取 空 白 和 试 样 溶 液, 在 相 同 工 作 条 件 下, 依 次 注 入 离 子 色 谱 仪 中, 记 录 色 谱 图 根 据 保 留 时 间 定 性, 分 别 测 量 空 白 和 样 品 的 峰 高 (µs) 或 峰 面 积 (µs*) 结 果 计 算 : 试 样 中 硝 酸 盐 或 亚 硝 酸 盐 含 量 按 式 (1) 计 算 X 式 中 : = ( ) C C 0 V f 1000 m 1000 (1) - - X 试 样 中 硝 酸 盐 ( 以 NO 3 计 ) 或 亚 硝 酸 盐 ( 以 NO 2 计 ) 的 含 量, 单 位 为 毫 克 每 千 克 (mg/kg) c 测 定 用 试 样 溶 液 中 的 硝 酸 盐 或 亚 硝 酸 盐 浓 度, 单 位 为 毫 克 每 升 (mg/l) co 试 剂 空 白 液 中 硝 酸 盐 或 亚 硝 酸 盐 的 浓 度, 单 位 为 毫 克 每 升 (mg/l) V 试 样 溶 液 体 积, 单 位 为 毫 升 (ml) f 试 样 溶 液 稀 释 倍 数 m 试 样 取 样 量, 单 位 为 克 (g) 计 算 结 果 表 示 到 小 数 点 后 两 位 µs 色 谱 峰 : 1 NO ppm 2 NO ppm 硝 酸 盐 和 亚 硝 酸 盐 混 合 标 准 溶 液 的 色 谱 图 9

11 奶 制 品 中 的 有 机 阳 离 子 胆 碱 乙 酰 胆 碱 以 及 乌 拉 胆 碱 的 分 析 奶 制 品 中 的 有 机 阳 离 子 胆 碱 乙 酰 胆 碱 以 及 乌 拉 胆 碱 的 分 析 胆 碱 又 被 称 为 记 忆 因 子, 是 合 成 乙 酰 胆 碱 的 重 要 原 料, 能 帮 助 中 枢 神 经 传 递 资 讯, 是 大 脑 思 维 记 忆 等 智 力 活 动 的 必 需 物 质, 胆 碱 在 心 血 管 和 肝 健 康 以 及 人 体 正 常 的 新 陈 代 谢 中 发 挥 着 重 要 作 用 婴 幼 儿 以 及 幼 小 动 物 由 于 自 身 尚 无 合 成 胆 碱 的 功 能, 体 内 所 需 要 胆 碱 全 部 依 赖 外 界 供 给, 氯 化 胆 碱 是 维 生 素 之 一, 卵 磷 脂 的 主 要 成 份, 氯 化 胆 碱 经 常 作 为 胆 碱 添 加 剂 添 加 到 婴 幼 儿 食 品 维 生 素 配 方 运 动 饮 料 和 小 动 物 饲 料 中 胆 碱 是 一 种 季 胺 碱, 具 有 强 碱 性, 氯 化 胆 碱 是 胆 碱 的 盐 酸 盐, 化 学 名 称 为 三 甲 基 (2- 烃 乙 基 ) 氯 化 铵, 传 统 的 氯 化 胆 碱 的 检 测 为 间 接 检 测, 根 据 检 测 的 Cl - 含 量 进 行 计 算 得 出 胆 碱 含 量, 故 一 些 不 法 商 人 趁 机 掺 假, 许 多 廉 价 无 机 氯 化 物 和 有 盐 酸 盐, 如 NaCl NH 4 Cl 三 甲 胺 盐 酸 盐 等 均 可 能 作 为 掺 假 物 掺 加 到 奶 制 品 及 小 动 物 饲 料 中 赛 默 飞 世 尔 科 技 的 离 子 色 谱 法 检 测 胆 碱 采 用 阳 离 子 交 换 柱, 电 导 检 测 器, 可 以 直 接 得 到 胆 碱 的 色 谱 峰, 方 法 准 确 快 速 色 谱 条 件 分 析 柱 :IonPac CS12A,CG12A 淋 洗 液 :18 mn 硫 酸 流 速 :1 ml/ 进 样 体 积 :10 µl 检 测 方 式 : 抑 制 型 电 导,CSRS Ⅱ, 自 循 环 模 式 3.5 µs A. 100 ppm 胆 碱 B. 婴 儿 配 方 奶 粉 µs 色 谱 峰 : 6 1. 系 统 峰 2. Na 3. NH 4 4. K 5. 胆 碱,9.1 ppm 6. Mg 7. Ca 婴 儿 配 方 奶 粉 中 胆 碱 与 常 规 阳 离 子 的 分 离 谱 图 10

12 离 子 色 谱 检 测 奶 制 品 中 的 微 量 碘 碘 是 人 体 必 需 的 微 量 元 素, 碘 的 缺 乏 或 过 量 摄 入 都 会 使 人 的 甲 状 腺 功 能 紊 乱, 影 响 身 体 和 智 力 的 发 展, 婴 幼 儿 所 需 碘 主 要 来 源 于 母 乳 和 婴 幼 儿 配 方 奶 粉, 所 以 对 产 妇 和 婴 幼 儿 配 方 奶 粉 以 及 牛 奶 中 碘 的 检 测 是 十 分 必 要 的 本 方 法 用 带 有 脉 冲 安 培 检 测 器 的 离 子 色 谱 检 测 了 婴 儿 配 方 奶 粉 孕 产 妇 专 用 奶 粉 以 及 鲜 牛 奶 中 的 微 量 碘, 以 NaOH 作 淋 洗 液, 直 接 进 样, 方 法 的 检 测 限 达 1 µg/l 样 品 前 处 理 : 牛 奶 量 取 7.0 ml 牛 奶 加 入 2 ml 体 积 分 数 为 3% 的 醋 酸 稀 释 至 10 ml, 摇 匀 于 3500 转 / 分 速 度 下 离 心 3 上 清 液 用 0.45 µm 滤 膜 过 滤, 取 5.0 ml 滤 液 加 入 0.2 ml 3 mol/l NaOH 混 匀 于 3500 转 / 分 下 离 心 3 分 钟 用 0.45 µm 滤 膜 再 过 滤 样 品 经 过 上 述 两 步 处 理 分 别 脱 去 蛋 白 质 和 脂 肪 等 有 机 物 后 可 用 于 离 子 色 谱 直 接 进 样 分 析 脱 脂 奶 粉 在 100 ml 烧 杯 中 称 取 脱 脂 奶 粉 样 品 0.95 g 加 入 10 ml 水 溶 解 加 入 2 ml 3% 乙 酸 混 合 再 加 入 8 ml 去 离 子 水 混 合 通 过 滤 膜 进 行 过 滤 将 5 ml 滤 液 通 过 OnGuard RP 柱, 收 集 此 滤 液 并 进 样 仪 器 : 赛 默 飞 世 尔 科 技 离 子 色 谱 仪 安 培 检 测 器 AS11 分 离 柱 G11 保 护 柱 标 准 溶 液 : 标 准 溶 液 :1.0 g/l I - 储 备 液 : 称 取 g KI( 分 析 纯 ), 溶 于 二 次 石 英 蒸 馏 水 中 稀 释 至 1 L, 其 他 浓 度 的 I - 标 准 溶 液 用 储 备 液 稀 释 成 低 于 10 mg/l 的 I - 标 准 溶 液, 当 天 使 用, 当 天 稀 释 配 制 色 谱 条 件 : 淋 洗 液 :4 mol/l NaOH 流 速 :1.0 ml/ 脉 冲 安 培 检 测 器 Ag 工 作 电 极 ;Ag/AgCl 参 比 电 极 工 作 电 压 :7 V 进 样 量 :50 µl I A 婴 儿 配 方 奶 粉 I B 孕 产 妇 专 用 奶 粉 I C 新 鲜 牛 奶 实 际 样 品 色 谱 图 11

13 12 牛 奶 中 硫 氰 酸 根 的 测 定 牛 奶 中 硫 氰 酸 根 的 测 定 硫 氰 酸 钠 (NaSCN) 是 白 色 斜 方 晶 系 结 晶 或 粉 末, 毒 害 品 它 的 毒 性 主 要 由 其 在 体 内 释 放 的 氰 根 离 子 而 引 起 氰 根 离 子 在 体 内 能 很 快 与 细 胞 色 素 氧 化 酶 中 的 三 价 铁 离 子 结 合, 抑 制 该 酶 活 性, 使 组 织 不 能 利 用 氧 而 产 生 中 毒 原 料 乳 或 奶 粉 中 掺 入 硫 氰 酸 钠 后 可 有 效 的 抑 菌 保 鲜, 延 长 产 品 的 保 质 期, 故 很 多 不 法 奶 户 利 用 这 点 将 硫 氰 酸 钠 掺 入 原 料 乳 或 者 奶 粉 中, 损 害 了 消 费 者 的 健 康 随 着 卫 生 部 在 食 品 安 全 方 面 的 工 作 力 度 逐 渐 加 大,2008 年 12 月 12 卫 生 部 发 布 的 食 品 中 可 能 违 法 添 加 的 非 食 用 物 质 和 易 滥 用 的 食 品 添 加 剂 品 种 名 单 ( 第 一 批 ) 中 明 确 规 定 乳 及 乳 制 品 中 硫 氰 酸 钠 属 于 违 法 添 加 物 质 近 日 卫 生 部 食 品 整 治 办 [2009]29 号 文 件 全 国 打 击 违 法 添 加 非 食 用 物 质 和 滥 用 食 品 添 加 剂 专 项 整 治 中, 规 定 的 牛 奶 中 的 硫 氰 酸 钠 检 验 方 法, 使 用 了 赛 默 飞 世 尔 科 技 的 离 子 色 谱 法 测 定 牛 奶 中 硫 氰 酸 根 方 法, 该 方 法 使 用 赛 默 飞 世 尔 科 技 离 子 色 谱 仪 和 AS16 离 子 色 谱 柱 进 行 检 测 该 检 测 方 法 结 果 准 确, 重 复 性 良 好, 检 测 限 低 值 得 一 提 的 是, 方 法 中 梯 度 洗 脱 的 方 式, 采 用 了 赛 默 飞 世 尔 科 技 只 加 水 淋 洗 液 发 生 专 利 技 术, 能 够 自 动 产 生 需 要 的 淋 洗 液 浓 度, 替 代 了 传 统 人 工 配 制 的 方 式, 克 服 了 因 手 动 配 置 带 来 的 浓 度 不 准 确, 操 作 繁 复 缺 点 样 品 前 处 理 方 法 : 取 牛 乳 样 品 4 ml, 加 乙 腈 5 ml, 摇 匀, 静 置, 取 清 液 1 ml, 加 水 稀 释 至 10 ml,0.22 µm 尼 龙 滤 膜 过 滤 后, 过 OnGuard RP 柱, 即 可 进 样 标 准 溶 液 分 离 谱 图 : 22.0 µs 色 谱 峰 : 1 硫 氰 根 180 μs #76 1 CD_1 2 - #77 2 CD_1 3 - #78 3 CD_1 4 - #79 4 CD_1 5 - #80 5 CD_1 μs 种 常 见 阴 离 子 (F -,Cl -,Br -,NO 2 -,SO4 -,PO4 - ) 及 硫 氰 酸 根 (10 ppm) 混 合 标 准 溶 液 的 色 谱 图 5 个 样 品 的 平 行 色 谱 图

14 牛 奶 中 高 氯 酸 盐 的 测 定 有 消 息 报 导 部 分 美 国 品 牌 婴 幼 儿 奶 粉 中 检 测 出 高 氯 酸 盐, 这 是 继 我 国 牛 奶 及 奶 制 品 的 三 聚 氰 胺 事 件 后 又 一 波 引 起 关 注 的 奶 制 品 污 染 事 件 高 氯 酸 盐 是 一 种 持 久 性 环 境 污 染 物 质, 广 泛 用 于 火 箭 推 进 剂 导 弹 和 烟 火 制 造 工 业, 使 高 氯 酸 盐 很 容 易 释 放 到 环 境 中 研 究 表 明, 由 于 高 氯 酸 盐 和 碘 离 子 具 有 相 似 的 电 荷 和 离 子 半 径, 会 与 碘 竞 争 进 入 人 体 甲 状 腺, 抑 制 甲 状 腺 对 碘 的 吸 收, 从 而 减 少 甲 状 腺 荷 尔 蒙 的 生 成, 影 响 甲 状 腺 功 能, 导 致 成 人 新 陈 代 谢 功 能 紊 乱 影 响 胎 儿 和 婴 儿 神 经 中 枢 的 正 常 生 长 和 发 展, 高 氯 酸 盐 的 高 暴 露 还 会 导 致 甲 状 腺 癌 2002 年 美 国 国 家 环 保 署 (US EPA) 规 定 饮 用 水 中 高 氯 酸 盐 的 最 大 容 许 浓 度 为 1µg/L 美 国 的 一 些 州 将 高 氯 酸 盐 的 限 定 浓 度 规 定 为 1-18 µg/l 高 氯 酸 盐 的 分 析 已 进 入 美 国 EPA 系 列 标 准 方 法 中 (EPA ) 需 要 关 注 的 是, 除 了 奶 粉 本 身 的 污 染 外, 冲 调 奶 粉 的 水 中 如 果 被 高 氯 酸 污 染, 也 会 引 起 冲 调 牛 奶 的 高 氯 酸 超 标 目 前 随 着 人 们 对 环 境 与 食 品 安 全 意 识 的 加 强, 国 内 高 氯 酸 盐 的 检 测 受 到 了 各 行 业 广 泛 的 关 注, 对 于 水 中 高 氯 酸 盐 的 离 子 色 谱 检 测, 赛 默 飞 世 尔 科 技 提 供 符 合 EPA 和 的 成 熟 分 析 方 法, 专 门 推 出 了 IonPacAS20 和 AS21 色 谱 分 析 柱 目 前 赛 默 飞 世 尔 科 技 的 IC/MS 技 术 用 于 牛 奶 中 的 高 氯 酸 盐 检 测, 满 足 了 大 量 科 研 分 析 人 员 对 该 项 技 术 的 需 求, 更 大 程 度 和 范 围 推 广 该 项 检 测 技 术 样 品 前 处 理 及 标 准 溶 液 的 配 制 : 精 密 称 取 奶 粉 样 品 0.50g, 加 去 离 子 水 3.5mL 使 充 分 溶 解 混 匀, 再 加 入 5mL 乙 腈 振 荡 混 匀, 静 置 10 分 钟 以 沉 淀 蛋 白 取 上 清 液 1mL, 用 去 离 子 水 定 容 至 10mL, 将 稀 释 后 的 溶 液 经 过 0.22 µm 尼 龙 滤 膜 和 RP 柱 过 滤, 滤 液 直 接 上 机 分 析 标 准 溶 液 的 配 置 :NaClO 4 H2O( 化 学 纯 >=98.0%), 精 密 称 取 g, 去 离 子 水 定 容 至 1000ppm, 分 别 稀 释 至 10ppm 100ppb, 再 依 次 稀 释 分 别 配 制 得 到 标 准 工 作 溶 液 ppb ClO 4 - 分 析 条 件 色 谱 柱 :IonPac AS mm 分 析 柱, IonPac AG mm 保 护 柱 淋 洗 液 组 成 :EG-KOH,0-17,40mM;17-22,70mM,22-27,40mM( 带 CR-ATC) 流 速 :0.25mL/ 抑 制 器 : 连 续 自 动 再 生 膜 阴 离 子 抑 制 器 检 测 器 : 电 导 检 测 器 质 谱 参 数 : Mode: -ESI; Probe Voltage: -3KV; Cone Voltage: 70V; Probe Temp: 450 ; SIM channels, 99,101,m/z; SIM parameters; Span 0.3amu; Dwell time: 1s 13

15 14 牛 奶 中 高 氯 酸 盐 的 测 定 测 定 标 准 溶 液 色 谱 叠 加 图 : 30,000 30,000 20, counts counts m/z 1 - Perchlorate m/z 1 - Perchlorate 20,000 10,000 10, , ppb ClO 4 标 准 溶 液 色 谱 叠 加 图 -5, 某 奶 粉 样 品 测 定 及 加 标 谱 图 10,000 8,750 10,000 7,500 8,750 6,250 7,500 5,000 6,250 3,750 5,000 1 gu+3 2 gu+40ppb counts 1 gu+3 2 gu+40ppb counts m/z m/z 1 - Perchlorate 1 - Perchlorate 2,500 3, ,000 2, ,

16 15 牛 奶 中 羟 脯 氨 酸 的 测 定 动 物 胶 原 水 解 蛋 白 是 一 种 廉 价 蛋 白 原 料, 是 将 牛 皮 及 其 制 品 下 脚 料 等 成 分 粗 加 工 后 制 成 的 水 解 蛋 白 质, 某 些 非 法 厂 家 在 乳 粉 中 掺 入 廉 价 的 水 解 动 物 蛋 白 来 冒 充 或 替 代 乳 蛋 白 质, 提 高 乳 中 蛋 白 的 质 量 分 数, 降 低 成 本 掺 加 动 物 胶 原 水 解 蛋 白 不 但 会 影 响 乳 的 口 感 和 风 味, 改 变 牛 乳 的 溶 解 度, 因 其 氨 基 酸 的 组 成 不 合 理, 且 不 易 消 化, 所 以 营 养 价 值 低 下, 导 致 人 体 吸 收 利 用 率 降 低, 会 严 重 影 响 消 费 者 的 健 康 状 况 而 羟 脯 氨 酸 (Hydroxyproline, Hyp) 又 名 反 式 -4- 羟 基 -L- 脯 氨 酸, 为 胶 原 蛋 白 中 的 特 有 氨 基 酸, 其 含 量 占 10% 以 上 ; 而 乳 蛋 白 中 不 含 有 此 成 分, 如 若 样 品 中 检 测 出 来 含 有 L(-)- 羟 脯 氨 酸, 可 判 定 添 加 了 动 物 水 解 蛋 白 赛 默 飞 世 尔 科 技 提 供 羟 脯 氨 酸 的 测 定 方 法, 为 乳 制 品 中 是 否 掺 入 动 物 胶 原 水 解 蛋 白 的 判 断 提 供 依 据 样 品 前 处 理 方 法 : 前 处 理 方 法 参 考 GB/T 饲 料 中 氨 基 酸 的 测 定 : 将 适 量 样 品 ( 奶 粉 或 者 牛 奶 ) 到 安 培 瓶 中, 加 入 6 mol/l 盐 酸 溶 液 10 ml, 液 氮 冷 冻, 抽 真 空, 在 酒 精 喷 灯 上 烧 结 瓶 口, 于 (110±1) 恒 温 干 燥 箱 中 水 解 22 h 冷 却 后, 混 匀, 开 管, 用 移 液 管 吸 取 200 µl 滤 液, 置 浓 缩 仪 或 旋 转 蒸 发 仪 中 蒸 发 至 干 加 入 3 ml 2 mol/l 盐 酸 和 20 mg/l 叠 氮 化 钠 混 合 溶 液, 摇 匀 后 备 用 测 定 前, 取 适 量 该 样 品 溶 液, 以 20 mg/l 叠 氮 化 钠 溶 液 稀 释 至 10 ml, 摇 匀 后 通 过 0.22 µm 尼 龙 滤 膜 和 OnGuard RP 柱 (1 cc, 经 甲 醇 和 水 活 化 ), 弃 去 初 始 3 ml 后 收 集 1 ml 流 出 液, 直 接 进 样 分 析 色 谱 条 件 仪 器 型 号 :ICS-3000 色 谱 柱 类 型 尺 寸 分 析 柱 :AoPac PA10,250 2 mm 保 护 柱 :AoPac PA10G,50 2 mm 检 测 方 式 : 脉 冲 积 分 安 培 检 测,Au 电 极, 氨 基 酸 检 测 电 位,pH 参 比 电 极 模 式 淋 洗 液 组 成 :NaOH/NaOAc/HOAc 梯 度 淋 洗 : AoPac PA10 使 用 说 明 中 Table 3 Gradient Conditions for Ao Acids and Carbohydrates 添 加 ,0.1 mol/l HOAc 冲 洗 步 骤, 其 余 同 流 速 :0.25 ml/ 进 样 体 积 :25 µl 10 µmol/l 羟 脯 氨 酸 标 准 溶 液 分 离 谱 图 : 200 nc 10 µm HP Hydroxyproline um 19aa

17 牛 奶 中 羟 脯 氨 酸 的 测 定 10 µmol/l 19AA 标 准 溶 液 分 离 谱 图 : 400 nc 10um 19aa Cystine Arginine 2 - Glutae 3 - Lysine 4 - Alanine 5 - Threonine 6 - Glycine 7 - Valine 8 - Hydroxyproline 10-9 Proline - Serine 11 - Isoleucine 12 - Leucine 13 - Methionine 14 - Histidine 15 - Phenylalanine 16 - Glutamate 17 - Aspartate 19 - Tyrosine 由 标 准 谱 图 可 见, 羟 脯 氨 酸 与 另 外 常 见 18 种 氨 基 酸 可 以 实 现 较 好 的 分 离, 与 相 距 较 近 的 丝 氨 酸 也 可 以 实 现 基 线 分 离 奶 粉 样 品 水 解 液 的 分 离 谱 图 200 nc H yd ro xypro lin e

18 17 牛 奶 中 三 价 铬 和 六 价 铬 的 测 定 某 些 非 法 厂 家 在 乳 粉 中 掺 入 廉 价 的 水 解 动 物 蛋 白 来 冒 充 或 替 代 乳 蛋 白 质, 提 高 乳 中 蛋 白 的 质 量 分 数, 降 低 成 本, 而 这 些 水 解 动 物 蛋 白 是 将 牛 皮 及 其 制 品 下 脚 料 等 成 分 粗 加 工 后 制 成 的 水 解 蛋 白 质, 由 于 制 革 过 程 中 需 要 大 量 的 三 价 铬 作 为 铬 鞣 剂, 因 此 皮 革 水 解 蛋 白 即 使 经 过 脱 铬 处 理 也 会 存 在 一 定 量 的 重 金 属 铬 这 些 铬 主 要 以 Cr(III) 和 Cr(VI) 的 形 态 存 在, 六 价 铬 具 有 很 强 的 毒 性, 可 干 扰 重 要 的 酶 体 系, 具 有 致 癌 和 诱 发 基 因 突 变 的 作 用 三 价 铬 是 人 体 的 一 种 必 需 微 量 元 素, 在 正 常 食 品 补 给 剂 量 下, 三 价 铬 是 无 毒 的, 但 较 高 剂 量 的 三 价 铬 仍 表 现 出 细 胞 毒 性 反 应, 因 此 对 于 含 皮 革 水 解 蛋 白 粉 的 乳 制 品, 同 时 检 测 其 中 三 价 铬 和 六 价 铬 的 含 量 具 有 重 要 意 义 原 子 吸 收 和 发 射 光 谱 等 方 法 只 能 检 测 铬 的 总 量 ; 直 接 分 光 光 度 法 检 测 时 两 种 铬 精 确 度 难 以 保 证 有 文 献 报 道 用 离 子 色 谱 分 离,UV 或 电 感 耦 合 等 离 子 体 质 谱 同 时 检 测 三 价 铬 和 六 价 铬, 用 UV 检 测 的 方 法 中 六 价 铬 没 有 经 过 络 合, 因 而 灵 敏 度 较 低 赛 默 飞 世 尔 科 技 采 用 离 子 色 谱 法 对 三 价 铬 和 六 价 铬 分 别 进 行 柱 前 和 柱 后 衍 生, 大 大 提 高 了 检 测 灵 敏 度, 六 价 铬 的 检 测 限 与 使 用 ICP-MS 检 测 接 近, 而 仪 器 设 备 成 本 大 大 降 低 本 文 采 用 带 有 ph 缓 冲 体 系 和 三 价 铬 络 合 剂 的 溶 液 完 成 了 两 种 铬 的 同 时 提 取, 并 且 提 取 沉 降 蛋 白 柱 前 衍 生 同 时 完 成, 使 前 处 理 步 骤 大 大 减 少 色 谱 条 件 色 谱 柱 :IonPac CS5A 4mm 250mm 分 析 柱 及 IonPac CG5A 4 mm 50 mm 保 护 柱 ; 淋 洗 液 :2 mm PDCA,2 mm Na 2 HPO 4,10 mm NaI,50 mm CH 3 CO 2 NH 4,2.8 mm LiOH 混 合 水 溶 液 ; 衍 生 试 剂 :2 mm DPC,10 %(V/V) 甲 醇,2.5%(V/V) 硫 酸 淋 洗 液 流 速 :1.0 ml/; 衍 生 液 流 速 :0.5 ml/ 检 测 波 长 :0~ nm,4.3~8 530 nm 仪 器 : ICS-3000 离 子 色 谱 仪 (Dionex, 美 国 );Ultimate 3000 可 变 波 长 紫 外 可 见 检 测 器 ;PC-10 柱 后 衍 生 装 置 ;375 µl 编 结 反 应 管 ;OnGuard II RP 前 处 理 柱 (1.0 cc);0.22 µm 尼 龙 滤 膜 样 品 溶 液 的 制 备 在 一 个 50 ml 容 量 瓶 中, 按 顺 序 加 入 牛 奶 或 牛 奶 加 标 样 品 0.5mL, 超 纯 水 4.5mL, 淋 洗 液 储 备 液 5mL,33% 硝 酸 0.1 ml, 煮 沸 2-3 分 钟, 冷 却 定 容 后 过 0.22 µm 尼 龙 滤 膜 和 OnGuard II RP 前 处 理 柱, 弃 去 前 面 3mL, 后 面 溶 液 用 于 进 样 方 法 利 用 吡 啶 二 羧 酸 铬 (CrIII-PDCA) 的 紫 外 吸 收 和 二 苯 卡 巴 肼 铬 (CrVI-DPC) 在 可 见 光 区 的 吸 收 来 进 行 检 测 由 于 三 价 铬 的 配 位 交 换 的 动 力 较 弱, 所 以 需 要 进 行 柱 前 衍 生 生 成 Cr(III)-PDCA, 进 样 后 在 分 析 柱 中 以 Cr(PDCA) 2- 的 形 式 被 分 离, 而 六 价 铬 则 以 铬 酸 根 离 子 (CrO 4 2- ) 的 形 式 被 分 离 出 来 在 分 离 之 后 再 采 用 柱 后 衍 生 生 成 Cr(VI)-DPC, 两 种 物 质 在 不 同 波 长 下 进 行 检 测 两 种 铬 的 标 准 品 分 离 谱 图 和 牛 奶 加 标 样 品 分 离 谱 图 见 图 1 和 图 2 由 图 2 可 见, 牛 奶 基 体 对 两 种 铬 的 检 测 都 没 有 干 扰, 分 析 快 速 准 确 18.0 mau WVL:365 nm 25.0 mau WVL:365 nm Cr Cr Cr Cr 图 1. 三 价 铬 和 六 价 铬 标 准 品 分 离 谱 图 图 2. 牛 奶 加 标 样 品 分 离 谱 图

19 赛 默 飞 世 尔 科 技 上 海 上 海 浦 东 新 金 桥 路 27 号 6 号 楼 邮 编 : 电 话 : 传 真 : 北 京 北 京 东 城 区 安 定 门 东 大 街 28 号 雍 和 大 厦 西 楼 F 座 7 层 邮 编 : 电 话 : 传 真 : 销 售 热 线 北 京 电 话 : /1 传 真 : 上 海 电 话 : 传 真 : 广 州 电 话 : 传 真 : 成 都 电 话 : / 29 传 真 : 应 用 支 持 热 线 北 京 : 上 海 : 服 务 热 线 欲 知 更 多 信 息, 请 浏 览 我 们 的 网 站 : Thermo Fisher Scientific Inc. 版 权 所 有 PBJ

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