2015医学版第四期

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1 第 41 卷 第 4 期 2015 年 8 月 兰 州 大 学 学 报 ( 医 学 版 ) Journal of Lanzhou University(Medical Sciences) Vol.41 No.4 Aug 文 章 编 号 : (2015) 子 痫 前 期 患 者 髓 过 氧 化 物 酶 和 水 通 道 蛋 白 的 表 达 及 其 与 胎 儿 发 育 的 相 关 性 宋 倪 媛, 陈 徐, 李 霞, 何 晓 阳, 张 妍 四 川 省 崇 州 市 人 民 医 院 妇 产 科, 四 川 崇 州 摘 要 : 目 的 探 讨 子 痫 前 期 患 者 髓 过 氧 化 物 酶 (MO) 和 水 通 道 蛋 白 (AQ) 的 表 达 及 其 与 胎 儿 发 育 的 相 关 性 方 法 选 取 82 例 子 痫 前 期 患 者 为 研 究 对 象, 分 为 轻 度 子 痫 前 期 组 (38 例 ) 和 重 度 子 痫 前 期 组 (44 例 ), 选 取 同 期 正 常 足 月 妊 娠 孕 妇 40 例 为 对 照 组 利 用 酶 联 免 疫 吸 附 试 验 和 实 时 荧 光 定 量 聚 合 酶 链 反 应 分 别 测 定 3 组 研 究 对 象 MO AQ1 AQ3 AQ8 和 AQ9 的 表 达 记 录 胎 儿 的 胎 龄 出 生 体 重 卧 位 身 长 及 胎 盘 质 量, 计 算 胎 儿 的 体 质 指 数 (BMI) 结 果 与 正 常 对 照 组 比 较, 轻 度 和 重 度 子 痫 前 期 组 的 MO AQ3 AQ8 和 AQ9 表 达 水 平 均 明 显 升 高 ( < 0.05); 重 度 子 痫 前 期 组 AQ1 的 表 达 显 著 高 于 ( < 0.05); 轻 度 和 重 度 子 痫 前 期 组 胎 儿 出 生 体 重 BMI 和 胎 盘 质 量 均 显 著 低 于 ( < 0.05),3 组 胎 儿 的 身 长 比 较 差 异 无 统 计 学 意 义 ( > 0.05) Spearman 相 关 分 析 结 果 显 示, MO AQ8 和 AQ9 表 达 水 平 与 胎 儿 出 生 体 重 BMI 和 胎 盘 质 量 呈 负 相 关 ( < 0.05), 与 身 长 和 胎 龄 则 无 相 关 性 ( > 0.05);AQ1 和 AQ3 表 达 水 平 与 胎 儿 胎 龄 出 生 体 重 身 长 BMI 和 胎 盘 质 量 均 无 相 关 性 ( > 0.05) 结 论 子 痫 前 期 患 者 MO AQ8 和 AQ9 表 达 水 平 高 低 与 胎 儿 发 育 密 切 相 关 关 键 词 : 子 痫 前 期 ; 髓 过 氧 化 物 酶 ; 水 通 道 蛋 白 ; 胎 儿 发 育 中 图 分 类 号 :R 文 献 标 识 码 :A doi: /j.issn Expressions of myeloperoxidase and aquaproin in patients with preeclampsia and their correlations with fetal development Song Ni-yuan, Chen Xu, Li Xia, He Xiao-yang, Zhang Yan Department of Obstetrics, eople's Hospital of Chongzhou City, Chongzhou , Sichuan, China Abstract:Objective To explore the expressions of myeloperoxidase (MO) and the aquaproin (AQ) in patients with preeclampsia and their correlations with fetal development. Methods The 82 patients with preeclampsia were divided into mild preeclampsia group (38 cases) and severe preeclampsia group (44 cases) according to the severity of the disease, and the synchronized 40 healthy full-term pregnant women were served as control group. The expressions of MO, AQ-1, AQ-3, AQ-8 and AQ-9 in the placental tissue were measured by enzyme linked immunosorbent assay and real time quantitative polymerase chain reaction assay, and the fetal gestational age, birth weight, body length in recumbent position and placental weight were detected, fetal body mass index (BMI) were calculated. Results Compared with the control group, the expressions of MO, AQ-3, AQ-8 and AQ-9 in the mild and severe preeclampsia group were significantly increased 收 稿 日 期 : 基 金 项 目 : 成 都 市 卫 生 局 基 金 项 目 ( ) 作 者 简 介 : 宋 倪 媛 (1980-), 女, 四 川 崇 州 人, 主 治 医 师, 研 究 方 向 为 子 痫 前 期 与 胎 儿 发 育 的 相 关 性 研 究, 陈 徐 (1972-), 女, 四 川 崇 州 人, 副 主 任 医 师, 研 究 方 向 为 子 痫 前 期 与 胎 儿 发 育 的 相 关 性 研 究, 通 信 联 系 人

2 第 4 期 宋 倪 媛, 等 : 子 痫 前 期 患 者 髓 过 氧 化 物 酶 和 水 通 道 蛋 白 的 表 达 及 其 与 胎 儿 发 育 的 相 关 性 49 ( < 0.05), only the expression of AQ-1 in the severe preeclampsia group was significantly higher than that in the control group ( < 0.05). The fetal birth weight, BMI and placental weight of mild and severe preeclampsia group were significantly lower than those in control group ( < 0.05), but there was no significant difference in the length of fetal body among the three groups ( > 0.05). Spearman correlation analysis showed that, the expressions of MO, AQ-8 and AQ-9 were negatively correlated with the birth weight, BMI and placenta weight ( < 0.05); but no significant correlation was found between the expressions of MO, AQ-8 andaq-9 and body length and gestational age ( > 0.05); AQ-1 and AQ-3 expressions also showed no correlation with the fetal gestational age, birth weight, body length, BMI and placental weight ( > 0.05). Conclusion The expressions of MO, AQ-8 and AQ-9 are highly correlated with fetal development in patients with preeclampsia. Key words: preeclampsia; myeloperoxidase; aquaproin; fetal development 子 痫 前 期 是 妊 娠 期 特 有 的 疾 病, 多 以 孕 期 高 血 压 蛋 白 尿 等 为 主 要 特 征, 可 引 发 心 脏 肝 脏 肾 脏 胎 盘 等 多 脏 器 受 损, 严 重 损 害 孕 妇 及 新 生 儿 的 生 命 健 康 [1] 目 前 子 痫 前 期 的 发 病 机 理 尚 未 明 确, 给 该 病 的 早 期 诊 断 和 治 疗 带 来 困 难 现 有 研 究 发 现, 胎 盘 形 成 早 期 子 宫 内 小 动 脉 的 痉 挛 性 病 理 改 变 氧 化 应 激 反 应 和 子 宫 滋 养 细 胞 侵 入 能 力 的 降 低 均 是 诱 发 子 痫 前 期 发 病 的 主 要 因 [2] 素 髓 过 氧 化 物 酶 (myeloperoxidase, MO) 是 体 内 反 映 氧 化 应 激 水 平 及 内 皮 细 胞 功 能 的 重 要 指 标 ; 水 通 道 蛋 白 (aquaproin,aq) 则 是 维 持 滋 养 细 胞 迁 移 分 化 和 融 合 的 关 键 促 进 因 子 [3-4] 本 研 究 测 定 子 痫 前 期 患 者 MO 和 AQ 的 表 达 水 平, 探 讨 MO 和 AQ 表 达 与 胎 儿 发 育 的 相 关 性 1 资 料 与 方 法 1.1 临 床 资 料 选 取 2012 年 2 月 年 12 月 崇 州 市 人 民 医 院 妇 产 科 收 治 的 82 例 子 痫 前 期 患 者, 年 龄 20~34 岁, 平 均 (26.63 ± 4.91) 岁, 孕 周 37~42 周, 平 均 (38.92±1.45) 周 子 痫 前 期 的 诊 断 按 照 文 献 [5] 执 行, 将 患 者 分 为 轻 度 子 痫 前 期 组 (38 例 ) 和 重 度 子 痫 前 期 组 (44 例 ) 另 选 取 同 期 正 常 足 月 妊 娠 孕 妇 40 例 为 对 照 组 3 组 研 究 对 象 年 龄 孕 周 血 压 等 一 般 临 床 资 料 差 异 均 无 统 计 学 意 义 ( > 0.05), 见 表 1 所 有 研 究 对 象 均 排 除 急 慢 性 肝 炎 糖 尿 病 甲 状 腺 功 能 亢 进 或 低 下 心 血 管 疾 病 肾 脏 疾 病 等 合 并 症, 且 均 未 出 现 羊 水 量 异 常 胎 位 不 正 瘢 痕 子 宫 胎 膜 早 破 妊 娠 糖 尿 病 感 染 等 其 他 产 科 并 发 症 研 究 方 案 经 崇 州 市 人 民 医 院 伦 理 委 员 会 批 准, 所 有 研 究 对 象 均 知 情 同 意 本 项 目 研 究, 并 签 署 知 情 同 意 书 1.2 血 液 标 本 和 胎 盘 组 织 采 集 所 有 研 究 对 象 均 在 禁 食 8~12 h 后 空 腹 抽 取 静 脉 血 5 ml,3 000 r/min 离 心 10 min 后 分 离 血 清, 置 于 -80 C 冰 箱 保 存 备 用 血 液 采 集 时 间 为 孕 周 20 周 以 后 取 胎 盘 中 央 无 钙 化 区 8 cm 3 大 小 的 胎 盘 组 织 ( 不 包 含 胎 膜 ), 常 温 生 理 盐 水 冲 洗 去 除 残 留 血 液, 并 迅 速 将 胎 盘 组 织 放 入 事 先 标 记 编 号 的 冻 存 管 中, 液 氮 短 暂 冷 却 后 置 于 -80 C 冰 箱 保 存 备 用 1.3 MO AQ 1 AQ 3 AQ 8 和 AQ 9 表 达 水 平 检 测 采 用 酶 联 免 疫 吸 附 试 验 检 测 血 清 中 MO 表 达 水 平, 试 剂 盒 购 自 美 国 RD 公 司,Multiskan C 酶 标 仪 购 自 美 国 Thermo Labsystem 公 司 操 作 过 程 表 1 3 组 研 究 对 象 的 一 般 临 床 资 料 比 较 n/ 例 年 龄 / 岁 孕 周 / 周 收 缩 压 /mmhg 舒 张 压 /mmhg ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ±

3 50 兰 州 大 学 学 报 ( 医 学 版 ) 第 41 卷 按 照 说 明 书 要 求 由 专 业 检 测 技 术 人 员 完 成 应 用 实 时 荧 光 定 量 聚 合 酶 链 反 应 (real time quantitative polymerase chain reactio,qrt-cr) 检 测 AQ1 AQ3 AQ8 AQ9 的 表 达 水 平, 总 RNA 提 取 试 剂 盒 逆 转 录 试 剂 盒 和 qrt-cr 荧 光 定 量 试 剂 盒 均 购 于 北 京 天 根 生 化 科 技 有 限 公 司 应 用 TRIzol 法 提 取 所 有 胎 盘 组 织 的 总 RNA, 将 总 RNA 按 cdna 合 成 试 剂 盒 说 明 书 逆 转 录 为 cdna, 并 将 逆 转 录 的 产 物 用 于 CR 的 扩 增 检 测, 检 测 引 物 见 表 2, 引 物 的 合 成 由 生 工 生 物 工 程 ( 上 海 ) 股 份 有 限 公 司 完 成 qrt-cr 反 应 条 件 :95 C 预 变 性 10 min 1 个 循 环,94 C 15 s,58 C 30 s,72 C 1 min,40 个 循 环,72 C 延 伸 10 min 利 用 2 -ΔΔCT 法 计 算 各 项 检 测 指 标 的 相 对 mrna 表 达 水 平 表 2 AQ1 AQ3 AQ8 AQ9 和 内 参 引 物 序 列 检 测 指 标 AQ 1 AQ 3 AQ 8 AQ 9 β-actin 上 游 引 物 5'-TGG CTG TGG GAT TAA CCC TG-3' 5'-TGAGCATCCACTGACTGTCC-3' 5'-TTCATTGGAGATGGGAAGACC-3' 5'-AGGGGTCATCACTATCAATGTTGG-3' 5'-CTGGCTGCTGACCGAGG-3' 下 游 引 物 5'-GGTTGCTGAAGTTGTGTGTGATC-3' 5'-TCCCTGCCCTGAATATCTG-3' 5'-TTGAGAAGCAAGGAAGTGGC-3' 5'-GAGACACATTGCTAAAGACACAGC-3' 5'-AAGGTCTCAAA CATGATCTGGGT-3' 1.4 胎 儿 发 育 指 标 评 定 记 录 每 例 研 究 对 象 出 生 胎 儿 的 出 生 体 重 卧 位 身 长 及 胎 盘 质 量, 计 算 胎 儿 的 体 质 指 数 (body mass index,bmi) 1.5 统 计 学 处 理 采 用 SSS 17.0 软 件 进 行 整 理 和 分 析 计 量 资 料 以 均 数 ± 标 准 差 (xˉ ±s) 表 示, 多 组 间 比 较 应 用 单 因 素 方 差 分 析, 组 间 两 两 比 较 应 用 LSD-t 检 验, 相 关 分 析 应 用 Spearman 相 关 分 析, 以 <0.05 为 差 异 有 统 计 学 意 义 2 结 果 2.1 MO 和 AQ 表 达 水 平 比 较 与 相 比, 轻 度 和 的 MO 水 平 显 著 增 加, 差 异 具 有 统 计 学 意 义 ( < 0.05); AQ3 AQ8 和 AQ9 表 达 水 平 也 均 明 显 升 高 ( < 0.05) AQ1 显 著 高 于 正 常 对 照 组 ( < 0.05), 而 与 对 照 组 比 较 无 明 显 差 别 ( > 0.05), 见 表 3 表 3 3 组 MO 和 AQ 表 达 水 平 比 较 MO/(ng/L) AQ1/ 倍 AQ3/ 倍 AQ8/ 倍 AQ9/ 倍 12.18± ±1.74 a 15.31±1.62 a ± ±0.13 a ±0.10 a 1.76±0.14 a ±0.12 a 1.78±0.15 a ±0.11 a 1.69±0.14 a a: 与 比 较, < 胎 儿 发 育 指 标 比 较 轻 度 和 胎 儿 的 出 生 体 重 BMI 和 胎 盘 质 量 均 显 著 低 于, 差 异 具 有 统 计 学 意 义 ( < 0.05); 而 三 组 胎 儿 的 身 长 比 较 则 无 明 显 差 异 ( > 0.05) 见 表 MO 和 AQ 表 达 水 平 与 胎 儿 发 育 指 标 的 相 关 性 分 析 Spearman 相 关 分 析 结 果 显 示,MO AQ8 和 AQ9 表 达 水 平 与 胎 儿 出 生 体 重 BMI 和 胎 盘 质 量 呈 负 相 关 关 系, 差 异 具 有 统 计 学 意 义 (<0.05); 与 身 长 和 胎 龄 则 无 相 关 性 (>0.05); AQ1 和 AQ3 表 达 水 平 与 胎 儿 胎 龄 出 生 体 重 身 长 BMI 和 胎 盘 质 量 均 无 相 关 性 (>0.05) 见 表 5 3 讨 论 临 床 研 究 显 示, 子 痫 前 期 是 导 致 孕 妇 和 新 生 儿 发 病 及 死 亡 的 主 要 原 因, 发 病 率 可 达 2%~

4 第 4 期 宋 倪 媛, 等 : 子 痫 前 期 患 者 髓 过 氧 化 物 酶 和 水 通 道 蛋 白 的 表 达 及 其 与 胎 儿 发 育 的 相 关 性 51 表 4 3 组 研 究 对 象 胎 儿 发 育 指 标 比 较 出 生 体 重 /g ± ± a ± a 身 长 /cm 51.09± ± ± BMI 13.75± ±1.02 a 12.11±1.04 a 胎 盘 质 量 /g ± ±61.36 a ±54.92 a a: 与 比 较, < 0.05 表 5 MO 和 AQ 表 达 水 平 与 胎 儿 发 育 指 标 的 相 关 性 分 析 检 测 指 标 MO AQ-1 AQ-3 AQ-8 AQ-9 胎 龄 出 生 体 重 a a a a a a 身 长 BMI a a a a a a a: < 0.05 r s 胎 盘 质 量 a a a a a a 10%; 子 痫 前 期 也 是 医 源 性 早 产 最 常 见 的 原 因 之 一, 可 诱 发 新 生 儿 生 长 受 限 胎 盘 早 剥 甚 至 死 [6] 亡 等 不 良 结 局 既 往 观 点 认 为, 诱 发 子 痫 前 期 的 病 因 包 括 遗 传 易 感 性 血 管 生 成 受 损 内 皮 细 胞 功 能 紊 乱 免 疫 失 衡 炎 症 反 应 和 氧 化 应 激 等 [7-8] 多 种 因 素 MO 是 一 种 存 在 于 髓 系 细 胞 的 含 铁 溶 酶 体, 与 人 类 多 种 疾 病 的 发 生 发 展 密 切 相 关, 有 研 究 提 示 MO 介 导 的 氧 化 应 激 反 应 可 能 参 与 了 [9] 子 痫 前 期 的 发 病 过 程 本 研 究 测 定 了 轻 度 重 度 子 痫 前 期 患 者 和 健 康 孕 妇 的 MO 含 量, 结 果 显 示 MO 在 子 痫 前 期 患 者 显 著 升 高, 而 且 随 着 病 情 的 加 重,MO 的 升 高 幅 度 更 为 显 著 重 要 的 是, 本 研 究 结 果 还 发 现,MO 与 出 生 体 重 BMI 和 胎 盘 质 量 呈 明 显 负 相 关, 提 示 MO 含 量 增 高 可 能 阻 碍 了 胎 儿 的 发 育 过 程, 导 致 胎 儿 出 生 体 重 的 降 低 以 及 BMI 和 胎 盘 质 量 的 下 降 造 成 这 一 结 果 的 可 能 作 用 机 制 是 : 子 痫 前 期 患 者 血 管 痉 挛 导 致 胎 盘 血 供 和 灌 流 量 急 剧 减 少, 并 伴 随 血 管 内 皮 细 胞 功 能 的 紊 乱 和 胎 盘 功 能 下 降, 胎 儿 的 营 养 物 质 运 输 不 足, 促 使 胎 儿 生 长 受 限 本 结 果 也 充 分 提 示, 检 测 MO 的 含 量 对 子 痫 前 期 的 诊 断 治 疗 和 预 后 判 断 具 有 潜 在 的 临 床 指 导 价 值 AQ 是 一 类 存 在 于 细 胞 膜 或 细 胞 内 囊 泡 中 的 可 通 透 水 的 蛋 白 质 分 子, 广 泛 分 布 于 体 内 与 液 体 吸 收 和 分 泌 有 关 的 上 皮 细 胞, 参 与 水 分 子 跨 细 胞 [10] 转 运, 在 细 胞 体 液 平 衡 中 发 挥 重 要 作 用 目 前 已 发 现 哺 乳 动 物 的 AQ 有 13 种, 但 不 同 的 AQ 在 胎 盘 和 胎 膜 的 表 达 水 平 存 在 差 异, 其 中 仅 有 4 种 被 发 现 在 胎 盘 组 织 中 表 达, 包 括 AQ1 AQ3 AQ8 和 AQ9 [11-14] 本 研 究 结 果 显 示, 重 度 子 痫 前 期 患 者 AQ1 AQ3 AQ8 和 AQ9 表 达 水 平 明 显 升 高, 轻 度 子 痫 前 期 患 者 AQ3 AQ8 和 AQ9 表 达 水 平 明 显 升 高 本 研 究 还 发 现,AQ1 和 AQ3 与 胎 儿 的 发 育 指 标 无 相 关 性, 表 明 AQ1 和 AQ3 可 能 仅 参 与 了 子 痫 前 期 的 发 病 过 程, 但 对 胎 儿 的 发 育 并 无 显 著 的 影 响 作 用 上 述 结 果 说 明,AQ 参 与 子 痫 前 期 的 发 病 过 程, 对 胎 儿 发 育 是 否 产 生 影 响 与 不 同 亚 型 AQ 的 表 达 水 平 相 关 因 此,AQ 引 发 子 痫 前 期 的 病 理 机 制 可 能 是 AQ 表 达 水 平 的 改 变 导 致 子 宫 滋 养 细 胞 的 分 化 和 迁 移 过 程 受 抑 制, 促 使 滋 养 细 胞 浸 润 过 浅, 促 进 子 宫 滋 养 细 胞 的 凋 亡 进 程, 诱 发 了 胎 盘 的 缺 血 缺 氧 反 应, 从 而 诱 发 了 子 痫 前 期 的 发 生 在 临 床 实 践 中 检 测 与 胎 儿 发 育 密 切 相 关 的 AQ, 如 AQ8

5 兰 州 大 学 学 报 ( 医 学 版 ) 第 41 卷 和 AQ9, 可 为 防 治 子 痫 前 期 的 发 生 发 展 提 供 有 效 指 导 参 考 文 献 [1] 刘 玲 艳, 张 学 勤. 子 痫 前 期 发 病 机 制 的 研 究 进 展 [J]. 医 学 综 述, 2015, 21(3): [2] ulli B, Ali M, orghani R, et al. Measuring myeloperoxidase activity in biological samples [J]. LoS One, 2013, 8(7): e [3] 刘 毅, 史 振 伟. 肺 水 通 道 蛋 白 的 研 究 进 展 [J]. 医 学 综 述, 2014, 20(24): [4] 梁 丽, 张 文 芳, 鲁 建 华, 等. AQ4 和 VEG 在 大 鼠 视 网 膜 缺 血 / 再 灌 注 损 伤 中 表 达 的 规 律 及 相 关 性 分 析 [J]. 兰 州 大 学 学 报 : 医 学 版, 2010, 36(3): 5-8. [5] 乐 杰. 妇 产 科 学 [M]. 第 7 版. 北 京 : 人 民 卫 生 出 版 社, 2008: [6] Arulkumaran N, Lightstone L. Severe pre- eclampsia and hypertensive crises[j]. Best ract Res Clin Obstet Gynaecol, 2013, 27(6): [7] Jerath R, Barnes V A, adel H E. Mechanism of development of pre- eclampsia linking breathing disorders to endothelial dysfunction[j]. Med Hypotheses, 2009, 73(2): [8] Verlohren S, Melchiorre K, Khalil A, et al. Uterine artery Doppler, birth weight and timing of onset of pre-eclampsia: providing insights into the dual etiology of late-onset pre-eclampsia[j]. Ultrasound Obstet Gynecol, 2014, 44(3): [9] 陈 朝 霞. 氧 化 应 激 与 妊 娠 高 血 压 的 相 关 性 [J]. 兰 州 大 学 学 报 : 医 学 版, 2013, 39(3): [10] 朱 文 秀, 蔡 雁. 水 通 道 蛋 白 在 胎 盘 和 胎 膜 中 的 表 达 以 及 羊 水 调 节 的 相 关 性 研 究 [J]. 现 代 妇 产 科 进 展, 2013, 22(8): [11] Zheng Z, Liu H, Beall M, et al. Role of aquaporin 1 in fetal fluid homeostasis[j]. J Matern etal Neonatal Med, 2014, 27(5): [12] Zhu X Q, Jiang S S, Zhu X J, et al. Expression of aquaporin 1 and aquaporin 3 in fetal membranes and placenta in human term pregnancies with oligohydramnios[j]. lacenta, 2009, 30(8): [13] Zhu X, Jiang S, Hu Y, et al. The expression of aquaporin 8 and aquaporin 9 in fetal membranes and placenta in term pregnancies complicated by idiopathic polyhydramnios[j]. Early Hum Dev, 2010, 86(10): [14] Jiang S S, Zhu X J, Ding S D, et al. Expression and localization of aquaporins 8 and 9 in term placenta with oligohydramnios[j]. Reprod Sci, 2012, 19(12):

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