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1 ) 文 章 编 号 '.')) 论 著!"#$%&' ' ' ' ' '!"# ' $%& ' ' '8 目 的 对 ' 例 输 入 性 非 洲 锥 虫 病 患 者 进 行 实 验 室 诊 断 与 病 原 体 鉴 定 方 法 收 集 患 者 的 临 床 发 病 与 流 行 病 学 调 查 资 料 采 集 血 样 脑 脊 液 瑞 氏 吉 氏 染 色 涂 片 后 镜 检 用 布 氏 锥 虫 表 达 位 点 相 关 基 因 # 布 氏 锥 虫 冈 比 亚 亚 种!"## 特 异 性 糖 蛋 白 和 ' # (' 基 因 布 氏 锥 虫 罗 得 西 亚 种 $%### 特 异 性 血 清 抗 性 相 关 # 基 因 的 特 异 性 引 物 扩 增 患 者 血 样 基 因 组 "# 另 进 行 血 常 规 脑 脊 液 常 规 血 生 化 血 免 疫 等 实 验 室 检 查 结 果 患 者 双 下 肢 无 力 伴 浅 表 淋 巴 结 肿 大 月 余 入 院 时 嗜 睡 偶 有 情 绪 异 常 伴 贫 血 血 红 蛋 白 ) %*+ 电 解 质 紊 乱 钠 ',,!-+ 氯.,,!-+ 非 特 异 性 免 疫 球 蛋 白 显 著 增 高 球 蛋 白 %-+ 等 表 现 流 行 病 学 调 查 示 患 者 有 非 洲 加 蓬 共 和 国 务 工 史 期 间 有 数 次 昆 虫 叮 咬 史 患 者 外 周 血 镜 检 查 见 锥 虫 鞭 毛 体 扩 增 结 果 示 # 和 (' 基 因 的 特 异 性 引 物 分 别 扩 增 出 ') /0 的 条 带 结 论 综 合 患 者 的 临 床 资 料 流 行 病 学 史 病 原 学 和 检 测 结 果 确 诊 为 布 氏 冈 比 亚 锥 虫 病 中 图 分 类 号 )'&1 文 献 标 识 码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基 金 项 目 国 家 自 然 科 学 基 金 ').1 '. 上 海 申 康 医 院 发 展 中 心 项 目 基 金 "'' 作 者 单 位 上 海 长 海 医 院 ' 实 验 诊 断 科 血 液 科 上 海 江 苏 省 人 民 医 院 传 染 科 南 京 '1 8 通 讯 作 者,!,;%.>',

2 .' 6! "! 6 "'' 6 7% $! 7%/'& 人 类 非 洲 锥 虫 病 又 称 昏 睡 病 是 布 氏 锥 虫 冈 比 亚 亚 种!! 或 布 氏 锥 虫 罗 得 西 亚 种 "#$$ %! &'!!! 感 染 引 起 的 一 种 寄 生 虫 病 以 采 采 蝇! 为 传 播 ' 媒 介 非 洲 锥 虫 病 在 非 洲 有 数 千 年 的 历 史 ' 年 英 国 海 军 外 科 医 生 #( 发 表 关 于 非 洲 昏 睡 病 的 第 一 次 医 疗 报 告 冈 比 亚 锥 虫 病 占 昏 睡 病 报 告 病 例 的 )* 以 上 主 要 见 于 非 洲 西 部 和 中 部 的 国 家 患 者 潜 伏 期 较 长 可 感 染 数 月 甚 至 数 年 而 无 明 显 症 状 发 现 时 常 常 已 到 疾 病 晚 期 中 枢 神 经 系 统 受 累 预 后 不 佳 随 着 国 际 交 流 的 日 益 频 繁 输 入 性 罕 见 寄 生 虫 病 的 风 险 增 加 需 引 起 重 视 ' 年 月 ' 日 上 海 长 海 医 院 收 住 ' 例 至 非 洲 务 工 感 染 布 氏 锥 虫 冈 比 亚 亚 种 的 病 例 由 于 我 国 为 非 人 类 锥 虫 病 流 行 区 临 床 医 生 缺 乏 对 罕 见 输 入 性 锥 虫 病 的 诊 断 经 验 导 致 该 患 者 虽 多 地 求 医 但 直 至 晚 期 才 明 确 诊 断 现 将 本 病 例 的 病 原 学 鉴 定 介 绍 如 下 以 期 为 临 床 诊 断 该 疾 病 提 供 经 验 和 参 考 资 料 与 方 法 '&' 主 要 试 剂 和 仪 器 "# 抽 提 试 剂 盒 购 自 德 国 +% 公 司 "# 聚 合 酶 购 自 宝 生 物 工 程 大 连 有 限 公 司 #,-./ 荧 光 定 量 0 仪 为 美 国 #, 公 司 产 品 1' 全 自 动 血 细 胞 分 析 仪 及 配 套 试 剂 为 日 本 公 司 产 品 日 立 ' 全 自 动 生 化 分 析 仪 为 日 本 公 司 产 品 -22#3// 免 疫 化 学 系 统 及 配 套 试 剂 为 美 国 贝 克 曼 公 司 产 品 '& 病 例 资 料 收 集 该 患 者 自 /' 年 ) 月 以 来 发 病 过 程 中 主 要 的 实 验 室 检 查 及 治 疗 资 料 对 患 者 进 行 流 行 病 学 调 查 包 括 离 开 居 住 地 的 外 出 情 况 有 无 输 血 史 和 蝇 虫 叮 咬 史 等 '& 病 原 学 检 测 采 集 患 者 肘 部 曲 侧 静 脉 血 液 涂 制 薄 血 片 干 燥 固 定 后 行 瑞 氏 吉 氏 染 色 显 微 镜 下 镜 检 '& 实 验 室 常 规 检 查 完 善 患 者 相 关 实 验 室 检 查 包 括 血 常 规 血 生 化 血 免 疫 以 及 脑 脊 液 常 规 检 查 '&. 0 检 测 '&.&' "# 提 取 按 血 液 "# 提 取 试 剂 盒 操 作 方 法 分 别 提 取 健 康 对 照 者 及 患 者 外 周 血 全 血 "# 4 保 存 '&.& 合 成 引 物 根 据 文 献 报 道 以 2$5 作 为 布 氏 锥 虫 的 表 达 位 点 相 关 基 因 6 7 % #3 的 特 异 性 引 物 以 布 氏 锥 虫 冈 比 亚 亚 种 特 异 性 糖 蛋 白 " $!!6 %! 6 3 和 ' 0# 2' 基 因 为 布 氏 锥 虫 冈 比 亚 亚 种 的 分 子 标 志 以 血 清 抗 性 相 关 $ 7 0# 基 因 为 布 氏 锥 虫 罗 得 西 亚 种 的 分 子 标 志 设 计 特 异 性 引 物 表 ' 引 物 由 生 工 生 物 工 程 上 海 有 限 公 司 合 成 '&.& 0 扩 增 用 上 述 引 物 对 患 者 血 样 "# 进 行 0 扩 增 以 健 康 人 血 样 "# 为 对 照 0 反 应 体 系 '0 缓 冲 液 含 2%!.! 78 混 合 物! '/!9: 上 下 游 引 物 各 '! $ "# 聚 合 酶 &. ; 模 板 "# '! 双 蒸 水 补 至.! 2$5 和 0# 基 因 0 扩 增 条 件 为 ). ' ). 个 循 环 表 引 物 名 称 及 序 列!" 物 种 引 物 名 引 物 序 列. 片 段 长 度 96 :%96 参 考 文 献 6 5$. 0 布 氏 锥 虫 #$$ %! 2$5 2$ #3#3#383# #8#88883# 布 氏 锥 虫 罗 得 西 亚 种 &'!!! 0# 0#0.#8#383###3#8338#8##3.## #38#88338#38. 布 氏 锥 虫 冈 比 亚 亚 种 $!! #3#3.3# 布 氏 锥 虫 冈 比 亚 亚 种 $!! 2' 2'0.38#3883##838333#38.#83#83##83383###383#3 '.

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4 2 ' "# 标 志 物 ' 布 氏 锥 虫 $ 基 因 冈 比 亚 亚 种 ( 基 因 ) 罗 得 西 亚 种 *+# 基 因 冈 比 亚 亚 种 '* 基 因 ' 患 者 血 液 "# 健 康 者 血 液 "#, "# -./ 0, $ % 1 / 0, ( % 1 / 0 ), *+# % 1 / 0, '*! % 1 / ',! "# 1 - /,! "# 1 -!!& ' ) 图 患 者 血 样 扩 增 结 果!" #$ 依 氟 鸟 氨 酸 1! 赛 诺 菲 安 万 特 药 厂 生 产 商 品 名 3! 治 疗 ' -%4.% 静 脉 滴 注 每 隔 输 注 次 输 注 时 间 须 大 于 - 共 疗 程 结 束 后 复 查 患 者 体 温 正 常 脑 脊 液 细 胞 数 及 蛋 白 明 显 改 善 神 志 清 醒 皮 肤 瘙 痒 等 症 状 改 善 随 访 至 5' 年 月 患 者 日 常 生 活 能 够 自 理 双 下 肢 无 力 及 全 身 浅 表 淋 巴 结 肿 胀 等 症 状 均 有 所 改 善 % 讨 论 非 洲 锥 虫 病 是 由 布 氏 锥 虫 感 染 所 引 起 的 一 种 人 兽 共 患 的 寄 生 原 虫 病 人 是 布 氏 锥 虫 冈 比 亚 亚 种 的 主 要 储 存 宿 主 布 氏 锥 虫 罗 得 西 亚 种 主 要 感 染 牲 畜 偶 尔 感 染 人 类 曾 引 起 过 大 规 模 的 暴 发 流 行 555' 年 世 界 卫 生 组 织 统 计 的 冈 比 亚 锥 虫 病 6 新 发 病 例 为 6 例 4 年 无 罗 得 西 锥 虫 病 例 本 例 为 我 国 首 例 报 道 的 输 入 性 非 洲 锥 虫 病 病 例 因 我 国 目 前 没 有 其 传 播 媒 介 采 采 蝇 的 分 布 暂 无 本 地 传 播 6 的 危 害 冈 比 亚 锥 虫 病 和 罗 得 西 锥 虫 病 的 病 程 病 情 特 点 及 治 疗 用 药 均 有 所 不 同 因 此 在 明 确 患 者 感 染 布 氏 锥 虫 后 鉴 别 其 感 染 锥 虫 的 亚 种 确 定 疾 病 阶 '5 段 对 临 床 治 疗 有 重 要 的 指 导 价 值 布 氏 锥 虫 冈 比 亚 亚 种 和 罗 得 西 亚 亚 种 的 形 态 极 为 相 似 单 凭 显 微 镜 观 察 虫 体 形 态 无 法 区 分 除 了 临 床 特 点 及 地 理 差 异 目 前 主 要 依 靠 检 测 特 定 的 分 子 标 志 来 区 分 布 氏 锥 虫 卡 片 凝 集 实 验 7 %%!$ #88 可 用 于 群 体 筛 查 针 对 *+# 等 特 异 性 基 因 的 + 实 验 可 以 提 高 诊 断 准 确 度 本 例 患 者 务 工 的 非 洲 加 蓬 共 和 国 位 于 非 洲 中 部 西 海 岸 是 布 氏 冈 比 亚 锥 虫 病 多 发 地 区 其 务 工 时 虽 然 曾 有 昆 虫 叮 咬 史 因 未 予 重 视 不 能 明 确 叮 咬 虫 种 和 具 体 时 间 患 者 以 双 下 肢 无 力 伴 浅 表 淋 巴 结 肿 大 等 不 典 型 症 状 就 诊 通 过 淋 巴 结 活 检 排 除 肿 瘤 淋 巴 结 转 移 及 淋 巴 瘤 等 血 液 系 统 疾 病 后 结 合 患 者 皮 疹 淋 巴 结 肿 大 嗜 睡 以 及 非 洲 中 部 工 作 史 上 海 长 海 医 院 医 生 怀 疑 其 为 非 洲 锥 虫 感 染 在 外 周 血 中 查 见 锥 虫 鞭 毛 体 证 实 为 非 洲 锥 虫 病 为 鉴 定 所 感 染 锥 虫 的 亚 种 通 过 抽 提 患 者 全 血 "# 用 冈 比 亚 和 罗 得 西 亚 种 特 异 性 基 因 引 物 进 行 + 扩 增 最 终 确 定 该 患 者 感 染 的 病 原 体 为 冈 比 亚 锥 虫 根 据 以 往 的 报 道 罗 德 西 锥 虫 感 染 时 典 型 的 高 原 虫 血 症 可 达 55 个 4-! 而 冈 比 亚 锥 虫 感 染 时 血 液 中 的 原 虫 量 一 般 很 低 当 患 者 原 虫 血 症 波 动 时 尤 其 在 低 原 虫 血 症 时 外 周 血 中 较 难 查 到 病 原 体 5 年 6 月 ) 日 采 集 患 者 外 周 静 脉 血 制 作 并 观 察 了 张 血 片 全 片 & 7-& 7- 计 数 虫 体 为 5 个 4 张 需 细 致 耐 心 查 找 否 则 极 易 漏 诊 考 虑 该 患 者 就 诊 时 可 能 处 于 冈 比 亚 锥 虫 的 高 原 虫 血 症 期 故 在 外 周 血 中 查 见 了 较 为 罕 见 的 冈 比 亚 锥 虫 鞭 毛 体 布 氏 锥 虫 病 按 病 程 可 分 为 淋 巴 血 液 期 早 期 锥 虫 血 症 期 和 脑 膜 脑 炎 期 晚 期 神 经 系 统 感 染 期 由 于 晚 期 使 用 的 中 枢 神 经 系 统 治 疗 药 物 不 良 反 应 大 因 此 准 确 诊 断 布 氏 锥 虫 病 的 分 期 对 于 治 疗 5 和 预 后 具 有 重 要 指 导 意 义 66 年 的 9:3 标 准 是 目 前 被 广 泛 使 用 的 脑 膜 脑 炎 期 分 期 方 法 即 脑 脊 液 中 检 出 锥 虫 和 4 或 脑 脊 液 白 细 胞 计 数 个 细 胞 4! +2 等 发 现 锥 虫 病 患 者 特 别 是 冈 比 亚 锥 虫 病 脑 脊 液 白 细 胞 ;5 细 胞 4! 或 脑 脊 液 鞘 内 % 增 加 时 无 论 在 脑 脊 液 中 是 否 检 出 锥 虫 均 可 判 断 为 中 枢 神 经 系 统 感 染 期 因 此 锥 虫 病 患 者 须 进 行 脑 脊 液 常 规 检 查 以 判 断 疾 病 分 期 推 荐 进 行 计 数 虫 体 观 察 以 及 脑 脊 液 鞘 内 % 等 检 测 项 目 本 例 患 者 脑 脊 液 压 力 增 加 白 细 胞 计 数 为 65 个 细 胞 4! 结 合 外 周 血 查 见 冈 比 亚 锥 虫 患 者 存 在 嗜 睡 等 神 经 系 统 症 状 脑 脊 液 白 细 胞 ;5 细 胞 4! 判 断 患 者 为 冈 比 亚 锥 虫 病 脑 膜 脑 炎 期 脑 脊 液 生 化 检 查 示 蛋 白 量 增 高 考 虑 与 虫 体 刺 激 产 生 的 大 量 免 疫 球 蛋 白 有 关 虫 体 在 脑 内 消 耗 糖 及 氯 化 物 导 致 其 含 量 的 减 少 本 例 患 者 在 入 院 初 虽 进 行 了 脑 脊 液 及 淋 巴 结 活 检 但 由 于 未 考 虑 寄 生 虫 感 染 仅 进 行 了 常 规 检 查 而 未 针 对 病 原 体 进 行 仔 细 查 找 错 失 了 观 察 淋 巴 结 和 脑 脊 液 中 是 否 存 在 病 原 体 的 机 会 患 者 于 5 年 6 月 日 至 上 海 长 海 医 院 就 诊 时 已 出 现 嗜 睡 等 晚 期 脑 膜 脑 炎 症 状 此 时 其 实 验 室 检

5 查 结 果 为 中 度 贫 血 电 解 质 紊 乱 非 特 异 性 免 疫 球 蛋 白 显 著 增 高 等 改 变 其 中 以 免 疫 球 蛋 白 增 高 表 现 最 为 显 著 该 患 者 0% 为 正 常 值 的 ) 倍 人 类 疱 疹 病 毒 单 纯 疱 疹 病 毒 巨 细 胞 病 毒 的 0% 和 0%1 抗 体 均 为 阳 性 抗 糖 蛋 白 ' 抗 体 抗 心 磷 脂 抗 体 均 大 于 最 大 检 查 上 限 锥 虫 能 表 达 一 组 可 变 表 面 糖 蛋 白 通 过 '' 不 断 改 变 虫 体 抗 原 来 逃 避 宿 主 的 免 疫 攻 击 导 致 宿 主 体 内 产 生 大 量 针 对 多 种 不 同 抗 原 表 位 的 免 疫 球 蛋 白 非 洲 锥 虫 病 患 者 有 采 采 蝇 叮 咬 史 和 非 洲 生 活 史 该 病 淋 巴 血 液 期 症 状 轻 潜 伏 期 长 常 以 不 明 原 因 的 淋 巴 结 病 变 为 主 要 表 现 晚 期 可 出 现 嗜 睡 等 症 状 外 周 血 淋 巴 液 或 脑 脊 液 中 发 现 虫 体 为 诊 断 的 金 标 准 但 外 周 血 发 现 虫 体 的 概 率 较 低 * 是 鉴 定 锥 虫 亚 种 较 好 的 方 法 其 他 实 验 室 检 查 方 面 以 贫 血 电 解 质 紊 乱 免 疫 球 蛋 白 增 加 等 为 特 征 其 中 0% 和 0%1 显 著 增 高 今 后 如 果 遇 到 明 确 诊 断 或 怀 疑 为 锥 虫 病 者 建 议 及 时 上 报 中 国 疾 病 预 防 控 制 中 心 寄 生 虫 病 预 防 控 制 所 并 向 申 请 药 物 治 疗 志 谢 本 项 工 作 得 到 中 国 疾 病 预 防 控 制 中 心 寄 生 虫 病 预 防 控 制 所 周 晓 农 教 授 和 第 二 军 医 大 学 病 原 生 物 学 教 研 室 朱 淮 民 教 授 等 专 家 的 指 导 和 帮 助 一 并 致 谢 参 考 文 献 ' 2% "& # & ( & : +;& 4 5!7% 6 # & 056 "! #8.. ( &!2! % & $8 # !7% 6( 728! %6! $72&!4 ;728! *6.. (.& +6 * 8 & "6 5!7% 6 $76 4 * 87!56 5 :7 62 % 2 & ! ))).( & * ,9 & 3 $ % 2% 6! !& # ( )& " %% 9,< 9 ;%$ *#9 & "% 6 66$64 5 * %8!7% 6 2% 9 %% !! $7( 4! %$2! $24 &, %! 3 7 "9 ''9 ( )&, % "9 3 9!! 09 &!6 5 7& 6! ! * 2! ! 87!56,#&! *9 ''9 ')( '')& +6 *9 8 9 " #9 & ;728! %4 5 $8 # &! ;728!9 '9 ( & ) 陈 飞 & 我 国 发 现 首 例 输 入 性 非 洲 锥 虫 病 & 健 康 报 9 ' '& ' 24 1&!6! 5$9 2% $8 # !7% 6 &,6 $!9 '9 '( '')& '' =$ *9 =!$8 9 77$ +9 & $ &,69 '9 ))( '')& ' #& 3 728! %4 2 6! 5 $8 # & #2!9 '9 )( ''& '!2! % &! 2 $!!6 5 # ( 7 5 : &!2! % 36 *7 9 '))9 '( 009 '''& ',< 9 * 9,% "9 & 06! 88$ % 5 6! $ 48! & 056 "9 9 ')( ''& 收 稿 日 期 '' 编 辑 陈 勤 上 接 第 ) 页 & 汤 林 华 高 琪 & 中 国 疟 疾 的 控 制 与 消 除 & 上 海 ( 上 海 科 学 技 术 出 版 社 '( ''& 魏 义 胜 杨 跃 杰 & 输 入 性 恶 性 疟 疾 ' 例 治 疗 分 析 & 医 药 论 坛 杂 志 ' ''( ))& 刘 颖 周 瑞 敏 陈 伟 奇 等 & 间 日 疟 原 虫 环 子 孢 子 蛋 白 * *+, 多 态 性 分 析 & 中 国 寄 生 虫 学 与 寄 生 虫 病 杂 志 ' '( & 刘 颖 周 瑞 敏 赵 玉 玲 等 & 河 南 省 间 日 疟 原 虫 环 子 孢 子 蛋 白 基 因 序 列 分 析 & 郑 州 大 学 学 报 医 学 版 ' )( ''& ) 陈 亚 飞 张 鹭 戴 路 等 & 中 国 全 球 基 金 项 目 管 理 特 点 介 绍 与 启 示 & 中 国 药 事 ' ( '''& ' 钱 丹 邓 艳 张 红 卫 等 & 河 南 省 消 除 疟 疾 全 球 基 金 项 目 实 施 效 果 评 价 & 中 国 热 带 医 学 ' '( ''& '' 钞 凤 张 书 芳 周 昇 昇 等 & 河 南 省 疾 控 系 统 食 品 安 全 检 验 机 构 资 源 调 查 & 河 南 预 防 医 学 杂 志 '' ( & ' 曹 俊 周 水 森 周 华 云 等 & 中 国 疟 疾 从 控 制 走 向 消 除 ( 消 除 阶 段 的 目 标 - 策 略 和 措 施 & 中 国 血 吸 虫 病 防 治 杂 志. ( )& 刘 颖 钱 丹 陈 伟 奇 等 & 环 子 孢 子 蛋 白 基 因 检 测 法 对 例 间 日 疟 病 例 的 溯 源 & 中 国 寄 生 虫 学 与 寄 生 虫 病 杂 志. ( & 刘 颖 周 瑞 敏 钱 丹 等 & 河 南 省../.' 年 疟 疾 流 行 特 征 分 析 & 中 国 寄 生 虫 学 与 寄 生 虫 病 杂 志.' ( ') & 收 稿 日 期.''' 编 辑 陈 勤

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