结 核 病 与 肺 部 健 康 杂 志 年 月 第 卷 第 期!" #$%&'' ' 7 年 以 来 由 于 结 核 控 制 网 络 松 懈 移 民 的 增 加 %) 的 传 播 和 耐 多 药 及 广 泛 耐 药 ; ;+ 和 :+ 的 出 现 全 球 结 核 病 发 病 率 呈 快 速 回 升

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1 * 结 核 病 与 肺 部 健 康 杂 志 年 月 第 卷 第 期!" #$%&'' ' 专 家 论 坛 结 核 病 免 疫 机 制 及 疫 苗 研 制 开 发 研 究 进 展 刘 海 鹏 戈 宝 学 摘 要 主 要 是 由 结 核 病 病 原 体 ; 感 染 引 起 的 具 有 重 大 公 共 卫 生 威 胁 的 传 染 病 天 然 免 疫 细 胞 如 巨 噬 细 胞 或 树 突 状 细 胞 通 过 其 表 达 的 模 式 识 别 受 体 识 别 ; 特 有 的 病 原 相 关 分 子 模 式 <; 后 引 起 大 量 特 异 性 的 细 胞 因 子 表 达 及 细 胞 活 性 的 提 高 被 激 活 的 巨 噬 细 胞 或 树 突 状 细 胞 不 仅 可 以 直 接 吞 噬 ; 或 ; 感 染 的 细 胞 还 可 以 通 过 释 放 各 种 活 性 分 子 与 抗 原 提 呈 来 激 活 适 应 性 免 疫 应 答 然 而 ; 在 与 宿 主 免 疫 系 统 的 长 期 共 同 进 化 过 程 中 发 展 出 各 种 干 扰 或 抑 制 免 疫 细 胞 功 能 的 机 制 如 抑 制 细 胞 因 子 的 产 生 抑 制 吞 噬 体 与 溶 酶 体 的 融 合 抑 制 巨 噬 细 胞 的 自 噬 抑 制 免 疫 细 胞 的 凋 亡 抑 制 树 突 状 细 胞 的 成 熟 和 抗 原 提 呈 等 从 而 能 够 在 巨 噬 细 胞 内 存 活 目 前 惟 一 使 用 的 减 毒 ; 活 疫 苗 5 却 缺 乏 有 效 性 人 们 对 发 生 机 制 的 认 识 不 足 严 重 限 制 了 对 新 型 高 效 的 抗 ; 疫 苗 的 研 发 尽 管 近 年 来 在 新 型 疫 苗 研 制 开 发 方 面 已 经 取 得 一 些 进 展 目 前 进 入 临 床 状 态 的 候 选 疫 苗 已 达 十 几 种 但 是 距 离 实 际 应 用 还 任 重 而 道 远 按 照 免 疫 策 略 和 改 进 方 法 新 型 疫 苗 可 以 分 为 重 组 5 疫 苗 亚 单 位 疫 苗 活 载 体 疫 苗 和 减 毒 ; 疫 苗 研 发 新 型 疫 苗 关 键 需 要 解 决 以 下 问 题 一 是 如 何 筛 选 到 优 质 的 抗 原 其 次 如 何 筛 选 到 优 质 的 佐 剂 以 增 加 抗 原 的 免 疫 保 护 效 果 再 次 如 何 保 证 抗 原 的 正 确 加 工 和 有 效 提 呈 第 四 如 何 增 加 5 的 免 疫 记 忆 第 五 如 何 进 一 步 降 低 5 的 毒 力 最 后 如 何 对 疫 苗 的 免 疫 保 护 效 果 进 行 评 估 关 键 词 结 核 免 疫 学 卡 介 苗 疫 苗 亚 单 位 疫 苗 减 毒 结 核 菌 苗 佐 剂 免 疫 #!#!!! 2 0# + )!# +"1! $! 0"%%"#!& 2#$ !$$# 0! +!$)!#1"'! #$ + #! +*#!! '/ / &#/#3! // &!& 5!' #$1 '#$ "! ; 0 /! / &/$ '/! &'&& $#+'&. '! '& & #<; 3; /! $#/2 & #! $#/ / #!1 #/##& /.. #!' /#!'/#$.&! &$ &## / /!!'&# /#!! / # 3!/3/!! 6/# &# &! /4& / # 3!' &! /4&.&! &$ &#&# #' &' /! ' &$!; ; /#3!!' &'&! /4& & &/4/.. # # '& /#$&! /4. + '! ' &# &# /$## & / #% 04. ' / '/.. #4& / #& $/&4# 4' /#$! + 4 '/ # 3; &# /.. #. /#!'/#$/# // /#$! / # 3! 6/# 3/ # 3&$. 0/'.& &$3.&! &$ &/3/.. #!' & 0'&.&& / #&# &# /$## & / # 3 # / /!!' 0 /! #/# 4/4&' 3; /#.&! &$ # '5/ '' &4&/'&+ '4&!!/#04/ #4 3! /44'&#/$ 3! /44&!!/# 4'.# / /.'&!6 3 # &# /#$ # & $# /3<'$.&# $ /# 4'.#3# 4'4&!!/# &4#.& &#. &# #!&# / & 4&!!/#&4 /#!'/#/!&'&$/ /'&' #$0& $ 3 '+ 3/'!'/#/!&'&'/!& / #4'4&!!/# & /4//#!./#&#54&!!/# #/ 4&!!/#'/44! 4&!+!/#&# & # &; 4&!!/#&!!/#$/.. #& $/ &# /.4.#. & 4&'6 '.4'# 4'4&!!/#/' $ &# /$#&4&/# (! # ' 1!'# & 4&#& &!A / & # &#!! /43!3&# /$#/ '!/#$&# # & / # 3&# /$# ' #!! ' &# 3! /4'' /.. # &!!/#& / #' # &#! /3' 1/!/ 3 54&!!/#& / #'! "&' & /. '&# '/&'4&!!/#4&' & / # '& 3. ' $%&! '/ /.. # ' $54&!!/# &!!/##/&!!/# & # &+! '/ 4&!!/# < 4&#/.. # ' $/! 主 要 是 由 结 核 病 病 原 体 ; 感 染 引 起 作 者 单 位 * 同 济 大 学 附 属 上 海 市 肺 科 医 院 通 信 作 者 戈 宝 学 -.&/'& 1 $$#$ /!# 的 肺 科 疾 病 也 是 是 世 界 上 单 一 致 病 菌 引 起 死 亡 最 多 的 疾 病 年 由! 分 离 ; 后 减 毒 活 疫 苗 5 的 问 世 以 及 抗 结 核 药 物 的 广 泛 使 用 极 大 地 控 制 了 结 核 病 的 全 球 发 病 和 流 行 然 而 自

2 结 核 病 与 肺 部 健 康 杂 志 年 月 第 卷 第 期!" #$%&'' ' 7 年 以 来 由 于 结 核 控 制 网 络 松 懈 移 民 的 增 加 %) 的 传 播 和 耐 多 药 及 广 泛 耐 药 ; ;+ 和 :+ 的 出 现 全 球 结 核 病 发 病 率 呈 快 速 回 升 趋 势 据 % 估 计 全 球 约 有 亿 人 感 染 ; 年 死 亡 人 数 约 万 例 我 国 是 结 核 病 高 负 担 国 家 之 一 患 者 占 全 球 的 8 全 国 已 有 以 上 的 人 口 感 染 了 ; 其 中 活 动 性 结 核 病 患 者 * 万 例 每 年 死 亡 人 数 约 万 例 高 居 各 类 传 染 病 之 首 一 结 核 病 免 疫 机 制 ; 特 异 的 分 子 特 征 通 常 能 被 宿 主 免 疫 细 胞 的 受 体 识 别 并 通 过 激 活 一 系 列 信 号 通 路 来 抵 御 和 清 除 胞 内 病 原 菌 感 染 其 中 ' 样 受 体 ''/6! " 在 对 不 同 病 原 相 关 分 子 模 式 & $#+&!/&. '! '& & #<; 的 识 别 和 信 号 放 大 中 起 着 关 键 作 用 " ", 单 独 或 共 同 与 " 结 合 识 别 革 兰 阳 性 菌 的 肽 聚 糖 /$'!&# 和 脂 蛋 白 &! /&''/ /# "" * 识 别 革 兰 阴 性 菌 的 脂 多 糖 " ( 类 脂 胞 壁 酸 '/ /!/!&!/" 识 别 鞭 毛 蛋 白 " 7 识 别 细 菌 < 的 未 甲 基 化 5 结 构 域 + 等 ; 可 以 产 生 特 殊 结 构 的 " ( 这 些 " ( 可 以 和 巨 噬 细 胞 表 面 的 " * 结 合 但 缺 乏 诱 导 宿 *+ 主 炎 症 反 应 的 活 性 另 外 ; 可 以 通 过 脂 蛋 白 或 糖 脂 来 与 " 结 合 从 而 抑 制 适 应 性 免 疫 细 胞 反 应 ; 感 染 与 传 播 的 关 键 问 题 之 一 是 其 逃 避 宿 主 的 免 疫 系 统 在 胞 内 存 活 的 机 制 ; 在 巨 噬 细 胞 内 的 存 活 至 少 依 赖 于 抑 制 吞 噬 小 体 + 溶 酶 体 的 形 7 成 对 溶 酶 体 酸 性 环 境 的 抵 抗 破 坏 诱 导 性 一 氧 化 氮 合 酶 /#!/'#/ /! 1/ #& / ( 到 吞 噬 小 体 周 边 的 招 募 及 其 富 含 脂 类 的 外 膜 对 氧 化 物 的 保 护 等 研 究 发 现 宿 主 和 病 原 菌 的 一 些 蛋 白 对 病 原 菌 的 胞 内 存 活 均 起 重 要 作 用 但 这 方 面 的 研 究 还 有 待 深 入 以 ; 为 例 其 参 与 胞 内 存 活 的 因 子 有 很 多 包 括 促 进 脂 肪 酸 代 谢 的 异 柠 檬 酸 裂 解 酶 抗 凋 亡 因 子 < % 脱 氢 酶 干 扰 吞 噬 溶 酶 体 &$ '. 形 成 的 蛋 白 激 酶 5 6#5 影 响 吞 噬 小 体 与 初 级 内 体 融 合 磷 脂 酰 肌 醇 甘 露 糖 苷 & /'/#/'.&##/); 抑 制 吞 噬 小 体 + 溶 酶 体 形 成 的 核 苷 二 磷 酸 激 酶 #!'/ /& 6/#& 6 和 带 甘 露 聚 糖 帽 的 脂 阿 拉 伯 甘 露 聚 糖.&##+!& '/&&/#.&#+ #&#;&#"<; 从 宿 主 方 面 分 析 病 原 菌 在 进 入 巨 噬 细 胞 过 程 中 与 宿 主 表 面 受 体 如 结 合 但 与 存 活 是 否 相 关 并 不 清 楚 < + &#+&& &! # &/#/#$! & 蛋 白 抑 制 吞 噬 小 体 + 溶 酶 体 的 融 合 缺 失 < 的 巨 噬 细 胞 对 溶 酶 体 更 加 敏 感 还 有 一 些 宿 主 蛋 白 如 & 和 细 胞 因 子 如 )"+ 增 加 ; 毒 力 延 缓 吞 噬 小 体 的 成 熟 宿 主 胞 内 的 活 性 氧 铁 离 子 等 的 水 平 对 病 原 菌 存 活 也 起 重 要 作 用 在 受 到 病 原 菌 感 染 时 作 为 宿 主 的 一 个 抵 抗 策 略 之 一 宿 主 细 胞 通 常 会 通 过 细 胞 凋 亡 来 抑 制 病 原 菌 的 存 活 比 如 感 染 的 巨 噬 细 胞 会 产 生 前 列 腺 素 可 以 阻 止 线 粒 体 的 损 坏 同 时 促 进 原 生 质 膜 的 破 坏 这 二 个 过 程 对 阻 止 细 胞 坏 死 并 引 起 细 胞 凋 亡 非 常 重 要 但 有 些 病 原 菌 已 经 可 以 阻 止 细 胞 凋 亡 从 而 躲 避 天 然 免 疫 系 统 的 反 应 并 推 迟 *+ 适 应 性 免 疫 反 应 的 发 生 如 ; 感 染 会 通 过 ;&#"<; 激 活 <6 蛋 白 激 酶 "+ 通 路 从 而 抑 制 细 胞 凋 亡 另 外 还 会 促 进 脂 氧 素 <*'/1/# <*":<* 的 产 生 抑 制 环 氧 化 酶 +!!'1 + $#& :+.< 和 前 列 腺 素 - 的 产 生 来 阻 止 巨 噬 细 胞 的 凋 亡 并 促 进 细 胞 坏 死 从 而 有 利 于 ; 的 繁 殖 和 扩 散 细 胞 自 噬 & &$ 是 寄 主 用 来 清 除 病 原 菌, 感 染 的 另 一 种 策 略 最 近 的 全 基 因 组 </ 筛 选 发 现 抑 制 寄 主 * 种 调 节 细 胞 自 噬 的 基 因 可 以 促 进 ; 在 胞 内 的 存 活 提 示 ; 可 能 通 过 抑 制 巨 噬 细 胞 的 自 噬 从 而 能 够 在 巨 噬 细 胞 内 存 活 但 具 体 的 分 子 调 控 机 制 尚 不 清 楚 病 原 菌 通 常 能 促 进 树 突 状 细 胞 的 成 熟 从 而 将 抗 原 提 呈 给 细 胞 并 促 进 细 胞 分 化 成 细 胞 去 直 接 杀 伤 或 分 化 成 细 胞 等 释 放 )+ 激 活 单 核 + 吞 噬 细 胞 等 来 发 挥 免 疫 效 应 但 ; 会 通 过 " 信 号 通 路 或 ;&#"<; 树 突 状 细 胞 特 异 性 细 胞 间 黏 附 分 子 + 结 合 非 整 合 素 因 子 ++!/3/!)<;+ $&/#$# #/# $/# +()5 通 路 来 抑 制 树 突 状 细 胞 的 成 熟 型 主 要 组 织 相 容 性 复 合 体.& /!. & //'/!. '1'& ;%'& 分 子 的 表 达 和 抗 原 提 呈 从 而 抑 制 适 应 性 免 疫 反 应 导 致 肉 芽 肿 的 形 成 另 外 ; 会 通 过 " )"+ 来 诱 导 调 节 性 细 胞 的 分 化 二 5 5 是 目 前 世 界 上 许 多 国 家 包 括 我 国 批 准 应 用 于 预 防 人 体 感 染 ; 发 病 的 惟 一 疫 苗 该 疫 苗 是 由 法 国 位 细 菌 学 家 卡 尔 美 <' " # &'.,7 和 卡 林 &./'5 /# 7, 历 经 年 将 一 株 毒 性 强 烈 的 牛 结 核 分 枝 杆 菌 移 植 培 养 共 达 代 之 多 获 得 一 种 减 毒

3 , 结 核 病 与 肺 部 健 康 杂 志 年 月 第 卷 第 期!" #$%&'' ' 图 ; 感 染 发 病 机 制 的 牛 结 核 分 枝 杆 菌 的 变 种 并 在 此 基 础 上 研 制 成 功 了 减 毒 活 疫 苗 7 年 首 次 应 用 于 人 类 结 核 病 的 预 防 和 控 制 该 疫 苗 接 种 于 动 物 后 不 发 生 结 核 病 却 保 留 着 对 结 核 病 产 生 免 疫 作 用 的 抗 原 性 自 从 7 年 卡 介 苗 首 次 应 用 于 人 类 至 今 已 有 7 年 的 历 史 能 有 效 预 防 新 生 儿 结 核 性 脑 膜 炎 和 粟 粒 性 肺 结 核 的 发 病 效 果 可 达 8 但 对 成 人 肺 结 核 的 免 疫 效 果 极 不 稳 定 保 护 力 为 88 其 次 由 于 5 仍 存 在 一 定 毒 力 免 疫 力 低 下 的 儿 童 多 为 先 天 性 免 疫 缺 陷 接 种 5 后 可 引 起 结 核 病 样 的 疾 病 经 血 行 及 淋 巴 播 散 全 身 艾 滋 病 和 糖 尿 病 等 免 疫 缺 陷 患 者 在 接 种 5 后 病 情 会 恶 化 另 外 作 为 一 种 预 防 性 疫 苗 5 不 能 有 效 治 疗 ; 的 潜 伏 感 染 因 此 研 制 新 型 高 效 的 抗 结 核 疫 苗 迫 在 眉 睫 5 缺 乏 有 效 性 的 确 切 原 因 还 不 十 分 清 楚 可 能 与 以 下 因 素 有 关 5 菌 株 多 样 不 同 菌 株 的 免 疫 原 性 可 导 致 不 同 的 保 护 效 应 5 菌 株 可 能 在 反 复 的 体 外 培 养 中 丢 失 了 一 些 重 要 的 抗 原 也 可 能 与 宿 主 的 遗 传 因 素 有 关 环 境 分 枝 杆 菌 的 感 染 可 能 掩 盖 5 的 保 护 力 最 近 研 究 显 示 5 的 保 护 性 效 果 与 临 床 致 病 ; 的 菌 株 表 型 与 基 因 型 有 很 大 关 联 如 5 对 流 行 的 临 床 菌 株 北 京 株 缺 乏 有 效 的 免 疫 保 护 作 用 还 可 能 与 寄 生 虫 感 染 增 强 反 应 和 调 节 性 细 胞 $ 减 弱 了 5 的 保 护 效 应 有 关 三 新 型 疫 苗 近 几 年 来 随 着 在 结 核 免 疫 机 制 及 保 护 性 抗 原 发 现 方 面 的 深 入 研 究 新 型 结 核 病 疫 苗 研 制 方 面 已 经 取 得 一 些 进 展 目 前 已 进 入 临 床 状 态 的 候 选 疫 苗 已 达 十 几 种 图 按 照 免 疫 策 略 和 改 进 方 法 新 型 疫 苗 可 以 分 为 重 组 5 疫 苗 亚 单 位 疫 苗 活 载 体 疫 苗 和 减 毒 ; 疫 苗 图 - 进 入 临 床 试 验 的 候 选 结 核 病 疫 苗

4 结 核 病 与 肺 部 健 康 杂 志 年 月 第 卷 第 期!" #$%&'' ' 重 组 5 疫 苗 是 将 一 些 重 要 的 抗 原 或 者 其 他 因 子 重 新 导 入 到 现 有 的 5 株 得 到 一 个 以 5 为 载 体 的 重 组 疫 苗 或 者 使 ; 的 基 因 缺 失 得 到 基 因 缺 失 突 变 株 从 而 制 造 出 新 的 结 核 疫 苗 以 取 代 传 统 的 5 德 国 马 普 感 染 生 物 学 研 究 所 & 3.&## 教 授 研 制 的 ; 是 将 5 的 尿 素 酶 基 因 敲 除 同 时 重 组 表 达 来 源 于 李 斯 特 菌 #$1!!!+# # 的 细 胞 溶 解 素 该 疫 苗 可 能 通 过 缩 短 5 在 体 内 的 存 活 时 间 提 高 疫 苗 诱 导 的 7 长 期 免 疫 记 忆 已 进 入 临 床 期 另 外 <& 全 球 结 核 病 疫 苗 基 金 会 赞 助 的 <& +* 已 进 入 临 床 期 加 州 大 学 洛 杉 矶 分 校 主 研 的 5 已 完 成 临 床 期 工 作 这 种 方 法 制 备 的 ; 减 毒 活 疫 苗 可 显 著 地 表 达 多 种 抗 原 并 激 活 各 细 胞 群 作 为 临 床 试 验 的 候 选 这 些 疫 苗 肯 定 会 比 5 更 有 效 更 安 全 亚 单 位 疫 苗 可 以 对 已 接 种 卡 介 苗 的 儿 童 进 行 强 化 免 疫 进 而 加 强 免 疫 应 答 并 将 免 疫 保 护 力 延 续 至 成 人 阶 段 亚 单 位 疫 苗 组 成 明 确 结 构 简 单 可 应 用 于 有 免 疫 缺 陷 的 人 群 倍 受 人 们 关 注 由 于 亚 单 位 疫 苗 主 要 是 由 有 限 数 量 的 抗 原 构 成 所 引 起 的 保 护 性 免 疫 应 答 也 高 度 集 中 但 是 这 类 疫 苗 在 体 内 的 滞 留 时 间 短 免 疫 应 答 的 持 续 时 间 也 较 短 因 此 需 要 有 效 的 佐 剂 辅 助 才 能 诱 导 出 理 想 的 免 疫 效 果 丹 麦 国 立 血 清 研 究 所 (() 在 这 一 领 域 取 得 了 较 好 的 进 展 目 前 已 有 ; <( % / +) )+ 两 种 疫 苗 进 入 临 床 期 %/ +) <% /, )+ 以 及 %<*<& +** )+ 三 种 疫 苗 进 入 临 床 期 涉 及 的 抗 原 包 括 <$ -<( +,47, 及 4 等 此 外 英 国 葛 兰 素 史 克 公 司 5( 研 制 的 ; 3<(< 嵌 合 疫 苗 也 取 得 了 较 强 的 保 护 性 效 果 目 前 正 在 期 临 床 试 验 评 估 中 当 前 几 种 主 要 的 候 选 疫 苗 均 采 用 了 各 种 新 型 佐 剂 以 辅 助 亚 单 位 疫 苗 激 发 出 持 久 有 效 的 保 护 效 果 因 此 新 型 佐 剂 的 研 究 和 开 发 已 成 为 结 核 病 亚 单 位 疫 苗 研 制 的 重 要 组 成 部 分 近 年 来 许 多 有 前 景 的 新 型 细 胞 佐 剂 已 在 结 核 疫 苗 的 临 床 研 究 中 获 得 广 泛 使 用 如 <<( <( )+ 阳 离 子 脂 质 体 及 黏 膜 分 泌 的 ", 表 等 活 载 体 疫 苗 是 以 病 毒 为 载 体 将 一 些 重 要 的 抗 原 重 新 导 入 现 有 5 株 产 生 高 水 平 的 持 续 胞 内 免 疫 牛 津 大 学 研 发 的 ; <+< 表 达 <$< 的 复 制 缺 陷 的 痘 苗 病 毒 可 诱 导 强 * 细 胞 应 答 在 多 年 前 接 种 5 的 个 体 重 新 诱 导 记 忆 性 免 疫 应 答 仅 观 察 到 轻 微 的 不 良 反 应 并 且 对 潜 伏 期 的 患 者 有 类 似 的 免 疫 效 果 又 如 荷 兰 生 物 制 药 公 司!' 和 <& 全 球 结 核 病 疫 苗 基 金 会 合 作 研 制 的 <& +* 是 以 腺 病 毒 为 载 体 过 表 达 ; <$< <$ 和 9* 融 合 抗 原 刺 激 宿 主 产 生 高 水 平 的 细 胞 免 疫 反 应 以 上 种 疫 苗 都 已 进 入 临 床 期 四 新 型 结 核 病 疫 苗 研 发 中 的 一 些 关 键 问 题 鉴 于 大 多 数 人 都 曾 经 接 种 过 5 目 前 新 型 结 核 病 疫 苗 的 研 发 策 略 基 本 上 都 是 在 5 的 基 础 上 通 过 不 同 的 手 段 来 表 达 重 要 抗 原 或 其 他 因 子 来 增 强 5 的 免 疫 保 护 效 果 因 此 关 键 之 一 是 如 何 筛 选 到 优 质 的 抗 原 其 次 如 何 筛 选 到 优 质 的 佐 剂 以 增 加 抗 原 的 免 疫 保 护 效 果 再 次 如 何 保 证 抗 原 的 正 确 加 工 和 有 效 提 呈 第 四 如 何 增 加 5 的 免 疫 记 忆 第 五 如 何 进 一 步 降 低 5 的 毒 力 最 后 如 何 对 疫 苗 的 免 疫 保 护 效 果 进 行 评 估 如 何 筛 选 到 优 质 抗 原 是 设 计 有 效 新 型 结 核 疫 苗 的 关 键 之 一 ; 标 准 株 %4 的 全 基 因 序 列 已 于 77 年 被 破 译 共 编 码 7 多 个 基 因 其 中 分 泌 蛋 白 是 ; 最 常 被 识 别 的 抗 原 其 中 -(< +, <$ 等 分 泌 蛋 白 能 引 起 强 烈 的 免 疫 应 答 并 已 经 应 用 于 疫 苗 研 究 过 去 几 年 间 研 究 人 员 利 用 比 较 基 因 组 学 和 蛋 白 质 组 学 研 究 筛 选 到 了 一 些 ; 特 有 的 5 及 其 他 非 结 核 分 枝 杆 菌 缺 失 的 抗 原 例 如 到, 区 的 分 泌 抗 原 -(< +, + 等 同 时 基 于 蛋 白 质 组 学 的 研 究 一 般 采 用 重 组 蛋 白 制 备 技 术 蛋 白 组 芯 片 技 术 筛 选 候 选 抗 原 但 是 常 规 的 大 肠 埃 希 菌 表 达 系 统 产 生 的 重 组 蛋 白 易 形 成 包 涵 体 若 用 常 规 蛋 白 纯 化 变 性 复 性 方 法 则 耗 时 耗 力 表 目 前 在 研 的 佐 剂 佐 剂 特 征 剂 型 来 源 )+ 阳 离 子 抗 菌 肽 " 7 配 体 " " " 阳 离 子 多 肽 及 寡 核 苷 酸 奥 地 利 )#!' 公 司 <( 基 于 脂 质 体 表 面 活 性 皂 苷 及 " 配 体 皂 苷 =( 及 单 磷 酸 类 脂 < ; " 英 国 葛 兰 素 史 克 <( 水 包 油 型 乳 剂 表 面 活 性 皂 苷 及 " * 配 体 皂 苷 =( 及 单 磷 酸 类 脂 < ; " 英 国 葛 兰 素 史 克 < 基 于 脂 质 体 ;) "- 配 体 双 十 八 烷 基 二 甲 基 溴 化 铵 < 及 海 藻 糖,,K+ 山 嵛 酸 酯 丹 麦 国 立 血 清 研 究 所

5 结 核 病 与 肺 部 健 康 杂 志 年 月 第 卷 第 期!" #$%&'' ' 蛋 白 组 芯 片 技 术 将 大 肠 埃 希 菌 表 达 蛋 白 不 经 纯 化 直 接 吸 附 在 硝 酸 纤 维 素 膜 上 一 方 面 大 量 大 肠 埃 希 菌 自 身 蛋 白 易 干 扰 实 验 结 果 另 一 方 面 易 使 重 组 蛋 白 失 去 空 间 表 位 更 为 关 键 的 问 题 是 针 对 结 核 病 这 种 以 细 胞 免 疫 为 主 的 疾 病 蛋 白 组 芯 片 仅 能 筛 选 血 清 抗 体 而 无 法 进 行 外 周 血 淋 巴 细 胞 捕 获 及 相 关 免 疫 功 能 的 检 测 因 此 难 以 筛 选 细 胞 免 疫 相 关 的 重 要 抗 原 分 子 另 外 目 前 用 于 结 核 疫 苗 研 发 的 参 考 菌 株 为 实 验 室 标 准 菌 株 %4 该 菌 株 在 种 系 系 统 发 生 上 属 于 欧 美 分 支 和 我 国 流 行 的 北 京 菌 株 具 有 较 大 的 遗 传 差 异 最 好 在 我 国 流 行 的 临 床 菌 株 中 找 到 抗 原 或 其 他 疫 苗 靶 标 并 在 我 国 流 行 的 菌 株 群 体 中 进 行 遗 传 多 样 性 的 评 估 因 此 需 要 针 对 上 述 问 题 建 立 快 速 简 便 的 高 通 量 筛 选 ; 候 选 疫 苗 分 子 的 技 术 平 台 新 一 代 重 组 亚 单 位 合 成 肽 及 < 疫 苗 虽 然 作 用 特 异 度 及 安 全 性 提 高 但 普 遍 免 疫 原 性 较 差 因 此 对 佐 剂 的 研 制 提 出 了 新 的 要 求 可 以 说 佐 剂 的 研 究 成 败 几 乎 决 定 了 新 型 疫 苗 的 能 否 诞 生 虽 然 经 典 的 铝 胶 佐 剂 成 为 美 国 食 品 与 药 品 管 理 局 < 批 准 的 惟 一 的 人 医 用 佐 剂 但 是 由 于 铝 胶 佐 剂 主 要 激 活 型 免 疫 细 胞 只 诱 导 体 液 免 疫 应 答 适 用 于 以 抗 体 保 护 为 主 的 疾 病 疫 苗 显 然 不 适 合 以 细 胞 免 疫 为 主 的 抗 新 型 疫 苗 的 需 要 因 此 寻 找 有 效 的 佐 剂 是 结 核 亚 单 位 疫 苗 发 展 要 解 决 的 关 键 问 题 近 年 来 的 研 究 发 现 双 十 八 烷 基 二 甲 基 溴 化 铵 /.+ ' /! &! '+&.. #/../ < 单 磷 酸 类 脂 <; " 海 藻 糖,,K+ 山 嵛 酸 酯 &',,K+ / #& 及 衍 生 物 海 藻 糖 二 霉 菌 酸 酯 &'+,,+ /.! '& ; 和 < 的 混 合 物 可 以 有 效 激 发 反 应 诱 导 强 的 免 疫 保 护 反 应 ; 和 通 常 被 天 然 免 疫 细 胞 的 型 凝 集 素 受 体 家 族 成 员 ;/#!' 所 识 别 后 进 而 激 活 ;/#!' 受 体 下 游 的 信 号 通 路 诱 导 多 种 致 炎 细 胞 因 子 如 )"+, )"+ 和 )"+ 等 的 表 达 引 发 宿 主 的 适 应 性 免 疫 应 答 从 而 增 强 亚 单 位 疫 苗 保 护 宿 主 抗 结 核 的 能 力 宿 主 天 然 免 疫 细 胞 还 表 达 其 他 的 模 式 识 别 受 体 进 一 步 筛 选 确 定 的 ; 中 能 被 ;/#!' 受 体 或 其 他 受 体 分 子 特 异 识 别 的 配 体 糖 分 子 能 够 为 筛 选 和 设 计 高 效 低 毒 的 亚 单 位 疫 苗 佐 剂 提 供 明 确 的 靶 标 ; 感 染 通 常 能 被 机 体 的 免 疫 系 统 有 效 地 清 除 天 然 免 疫 细 胞 如 巨 噬 细 胞 或 树 突 状 细 胞 可 以 通 过 其 表 达 的 模 式 识 别 受 体 来 识 别 病 原 菌 特 有 的 <; 的 保 守 序 列 从 而 引 起 大 量 特 异 性 的 细 胞 因 子 的 表 达 及 细 胞 活 性 的 提 高 被 激 活 的 巨 噬 细 胞 或 树 突 状 细 胞 不 仅 可 以 直 接 吞 噬 病 原 菌 或 病 原 菌 感 染 的 细 胞 还 可 以 通 过 释 放 各 种 活 性 分 子 与 抗 原 提 呈 来 激 活 辅 助 性 * 细 胞 细 胞 毒 性 " 细 胞 细 胞 细 胞 和 以 产 生 抗 体 的 细 胞 为 主 的 体 液 免 疫 * 细 胞 可 以 释 放 大 量 淋 巴 因 子 如 细 胞 因 子 干 扰 素 来 强 力 激 活 巨 噬 细 胞 等 来 发 挥 免 疫 效 应 清 除 寄 居 在 细 胞 内 的 ; 细 胞 能 直 接 将 穿 孔 素 和 粒 酶 等 生 物 活 性 物 质 介 入 被 ; 感 染 的 细 胞 破 坏 其 完 整 性 体 液 免 疫 可 以 通 过 抗 体 中 和 细 菌 毒 素 或 与 ; 结 合 从 而 促 进 其 被 吞 噬 细 胞 吞 噬 但 是 ; 已 经 在 与 宿 主 免 疫 系 统 的 长 期 共 同 进 化 过 程 中 发 展 出 各 种 干 扰 或 抑 制 免 疫 细 胞 功 能 的 机 制 如 抑 制 细 胞 因 子 的 产 生 抑 制 吞 噬 体 与 溶 酶 体 的 融 合 抑 制 免 疫 细 胞 的 凋 亡 抑 制 树 突 状 细 胞 的 成 熟 和 抗 原 提 呈 等 人 们 对 结 核 病 发 生 机 制 特 别 是 ; 如 何 抑 制 抗 原 的 有 效 加 工 和 提 呈 的 认 识 仍 然 不 足 严 重 限 制 了 对 结 核 病 新 型 疫 苗 的 研 发 5 保 护 成 人 肺 结 核 效 力 不 足 并 在 接 种 年 后 免 疫 记 忆 逐 渐 丧 失 最 近 的 研 究 发 现 包 括 寄 生 虫 疟 疾 在 内 的 众 多 慢 性 感 染 疾 病 的 免 疫 保 护 水 平 和 抗 原 特 异 性 中 央 免 疫 记 忆 水 平 呈 正 相 关 笔 者 前 期 的 初 步 研 究 数 据 也 表 明 结 核 病 的 免 疫 保 护 与 中 央 免 疫 记 忆 细 胞 ; 的 频 率 密 切 相 关 因 此 笔 者 推 测 不 能 有 效 诱 导 机 体 产 生 高 水 平 的 ; 细 胞 群 可 能 是 导 致 5 对 成 人 肺 结 核 保 护 力 低 下 的 主 要 原 因 之 一 5 对 保 护 成 人 肺 结 核 效 力 低 下 的 原 因 可 能 是 由 于 5 诱 导 产 生 的 免 疫 记 忆 下 降 所 致 基 于 这 一 创 新 理 论 基 础 可 以 开 发 一 些 可 能 具 有 提 高 5 中 央 免 疫 记 忆 水 平 的 新 型 结 核 疫 苗 5 的 一 个 缺 点 就 是 仍 然 有 一 定 的 毒 力 艾 滋 病 糖 尿 病 等 免 疫 缺 陷 患 者 在 接 种 5 后 病 情 会 加 重 并 可 能 导 致 死 亡 因 此 如 何 降 低 5 的 毒 力 也 是 新 型 结 核 疫 苗 的 研 发 需 要 克 服 的 问 题 此 外 5 只 可 以 预 防 疾 病 不 具 有 治 疗 作 用 或 清 除 潜 伏 感 染 的 作 用 图 因 此 开 发 新 型 治 疗 性 疫 苗 也 是 一 个 重 要 的 研 究 方 向 五 展 望 尽 管 近 年 来 在 新 型 结 核 病 疫 苗 研 制 开 发 方 面 已 经 取 得 一 些 进 展 但 是 距 离 实 际 应 用 还 任 重 而 道 远 况 且 目 前 在 研 的 疫 苗 都 存 在 不 同 的 缺 陷 如 基 于 病 毒 活 载 体 的 疫 苗 存 在 较 大 的 安 全 隐 患 预 防 的 对 象 面 过 窄 等 缺 陷 限 制 了 其 实 际 应 用 而 重 组 5 表 达 的 相 关 细 胞 因 子 如 )++ )"+ 等 可 以

6 结 核 病 与 肺 部 健 康 杂 志 年 月 第 卷 第 期!" #$%&'' ' 7 图. 针 对 不 同 临 床 需 求 的 结 核 病 新 型 疫 苗 激 活 有 效 的 免 疫 反 应 但 这 类 细 胞 因 子 的 增 加 也 可 能 会 导 致 免 疫 系 统 失 调 引 起 不 良 反 应 另 外 当 人 吸 入 ; 后 8 个 体 会 被 感 染 感 染 个 体 中 78 处 于 潜 伏 期 不 到 8 发 展 为 活 动 性 结 核 病 但 是 在 研 的 疫 苗 基 本 上 都 是 用 于 结 核 病 预 防 而 针 对 潜 伏 感 染 或 用 于 治 疗 尤 其 是 耐 药 ; 感 染 的 结 核 患 者 的 疫 苗 还 很 缺 乏 因 此 应 该 紧 紧 围 绕 结 核 病 疫 苗 研 发 结 合 基 础 研 究 和 临 床 研 究 的 优 势 联 用 免 疫 学 微 生 物 学 生 物 信 息 学 等 方 法 在 开 展 结 核 病 免 疫 保 护 机 制 的 研 究 基 础 上 筛 选 抗 原 并 进 行 重 要 功 能 抗 原 的 疫 苗 学 研 究 研 发 出 针 对 不 同 临 床 需 求 的 结 核 病 新 型 疫 苗 参 考 文 献 &0&/ <6/&( ' 3 & #+! $#/ / #!/# /##& /.. #/ &#'+'/6! & ).. # ' + * &'. ; 2 /4 & #! $#/ / #!&#! #' 3& &/4/.. #/).. # ' 47 + ' < "&# /##& /.. #/ ' 7 77+* * ;/. " &/ < #&4'/#$ &#'3 &#!/ '& '&# / 4/ '#!& / /#;/! / ' + ;/. " &'; &/ <"&# # 0 6 /#! #+ ' 3 &#!/ '&'&# / 4/ '#! ;/! / ' 7*, +7, &(&'$&. % /##& /.. # # 5!' #$1 '#$ "! '/#).. # '* *+, )# &! / # 0#@ /#/& / &# /.. #.)#3! ).. #,*+ /<!(& 3.&##(% 3 0 /.. # # &$&/# 5!' #$1 '#$ "! &+ '&#!& ' $ &#! / #).. # ' 4* + 7$#)& (/#$ (&''/ ' $35!' # $1 '#$ "!&$.<##4' 4 / '*,+ 7* &# &'% //#/";(! #&/#$ &'<..&# /#4 /# &&! /&' %/#/# &&$.&'5! ' #$1 '#$ "! & ; **7+* &4/ <( $#);& (( &';! &#/. 3/#!/' #/ /! 1/ #& 1!'/ #3..! &! /&'&$ +." ( & &#@" -&5( &') # /3/!& / # 3&$#/#+ 4 '4 /#/ # /3!!'&#&.! '/!&!//# 5!' #$1 '#$ "!! & '<!& (!/ (<77 7*,, +,, *.& &$ '& / # 0#4/4&'/#! &# '/./#& / # 3/# &!' '&.! &! /&&# A /'/+ /. 3 '/!& &'&#! ;/!)#3! + * > &#$@ '/ 6&' 3.&! &$&/ /# & + $# /3@ /#/& ;/! / ').. # '7 + & (; /4&#$& /;. ' %5-4& / # 3/##& /.+. #/ 5!' #$1 '#$ "!/&&#1/ & + $ % &4;/! / '7,,+,*, /! < &$ /#/.. #/&#!'+& #.+ 3# &$&/#/# &!' '&./!).. # ' 4* 7+*.& &" &.&';< &'5#.+0/ &#&'/ 3/# &!' '& # 0 6& $ '&4/4&' 35!' #$1 '#$ "!'* +* %& /#$. % $ '& / # 3&# /$## & / # 5!' #$1 '#$ "!& '3 '+'/6! &4;/! / '*7,+ 7& 3.&##(% &! &# 3/! / #/#! '/ 4&!!/# + &! & '& "&#! )#3! /,+,*.);<! /'' 3 5! '/ - /# 7, 7+ 收 稿 日 期 +,+, 本 文 编 辑 薛 爱 华

本 书 作 者 简 介 杰 罗 德 莫 尔 年 至 年 任 粮 农 组 织 法 律 顾 问 现 为 国 际 生 物 多 样 性 中 心 意 大 利 罗 马 荣 誉 研 究 员 全 球 作 物 多 样 性 信 托 基 金 法 律 顾 问 维 托 尔 德 提 莫 斯 基 麦 吉 尔 大 学 民 法 与 普 通 法 学 士 文 学 学 士 加 拿 大 最 高 法 院 法 律 顾 问 国 际 可 持 续 发

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