一 概 述 ( 一 ) 兽 药 和 兽 药 残 留 的 概 念 掌 握 典 型 的 兽 药 : 是 指 用 于 预 防 和 治 疗 畜 禽 疾 病 的 药 物 但 是, 随 着 集 约 化 养 殖 生 产 的 开 展, 一 些 化 学 的 生 物 的 药 用 成 分 被 开 发 成 具 有 某 些

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1 食 品 中 兽 药 残 留 检 验 一 概 述 二 兽 药 残 留 的 检 验

2 一 概 述 ( 一 ) 兽 药 和 兽 药 残 留 的 概 念 掌 握 典 型 的 兽 药 : 是 指 用 于 预 防 和 治 疗 畜 禽 疾 病 的 药 物 但 是, 随 着 集 约 化 养 殖 生 产 的 开 展, 一 些 化 学 的 生 物 的 药 用 成 分 被 开 发 成 具 有 某 些 功 效 的 动 物 保 健 品 或 饲 料 添 加 剂, 也 属 于 兽 药 的 范 畴 兽 药 的 主 要 用 途 : 防 病 治 病 促 进 生 长 提 高 生 产 性 能 改 善 动 物 性 食 品 的 品 质 等

3 兽 药 残 留 : 是 指 食 品 动 物 用 药 后, 动 物 性 食 品 中 含 有 的 某 种 兽 药 的 原 形 或 其 代 谢 物 以 及 与 兽 药 相 关 的 杂 质 的 残 留 兽 药 残 留 的 来 源 : 治 病 用 药 饲 料 中 加 入 的 添 加 剂 动 物 性 食 品 保 鲜 另 外, 休 药 期 ( 是 指 自 停 止 给 药 到 动 物 获 准 屠 宰 或 其 动 物 性 产 品 获 准 上 市 的 间 隔 时 间 ) 过 短, 是 造 成 动 物 性 食 品 兽 药 残 留 过 量 的 另 一 个 重 要 原 因

4 ( 二 ) 兽 药 残 留 的 种 类 1. 抗 生 素 类 药 物 这 类 药 物 多 为 天 然 发 酵 产 物, 是 临 床 应 用 最 多 的 一 类 抗 菌 药 物, 如 青 霉 素 类 氨 基 糖 苷 类 大 环 内 酯 类 四 环 素 类 螺 旋 霉 素 链 霉 素 土 霉 素 金 霉 素 等 青 霉 素 类 最 容 易 引 发 过 敏 反 应, 四 环 素 类 链 霉 素 有 时 也 能 引 起 过 敏 反 应 : 轻 度 时, 短 时 间 内 出 现 血 压 下 降 皮 疹 身 体 发 热 血 管 神 经 性 水 肿 血 清 病 样 反 应 等, 严 重 者 可 能 导 致 过 敏 性 休 克 甚 至 死 亡 长 期 摄 入 含 氨 基 糖 苷 类 残 留 超 标 的 动 物 性 食 品, 可 损 害 听 力 及 肾 脏 功 能

5 2. 磺 胺 类 药 物 主 要 用 于 抗 菌 消 炎, 如 磺 胺 嘧 啶 磺 胺 二 甲 嘧 啶 磺 胺 眯 菌 得 清 新 诺 明 等 近 年 来, 磺 胺 类 药 物 在 动 物 性 食 品 中 的 残 留 超 标 现 象, 在 所 有 兽 药 当 中 是 最 严 重 的 后 果 : 长 期 摄 入 含 磺 胺 类 药 物 残 留 的 动 物 性 食 品 后, 药 物 可 不 断 在 体 内 蓄 积, 造 成 泌 尿 系 统 损 伤, 引 起 结 晶 尿 血 尿 管 型 尿

6 3. 硝 基 呋 喃 类 药 物 主 要 用 于 抗 菌 消 炎, 如 呋 喃 唑 酮 呋 喃 西 林 呋 喃 妥 因 等 危 害 : 主 要 是 胃 肠 反 应 和 过 敏 反 应 剂 量 过 大 或 肾 功 能 不 全 者, 可 引 起 严 重 毒 性 反 应, 主 要 表 现 为 周 围 神 经 炎 嗜 酸 性 白 细 胞 增 多 溶 血 性 贫 血 等 长 期 摄 人 可 引 起 不 可 逆 性 末 端 神 经 损 害, 如 感 觉 异 常 疼 痛 及 肌 肉 萎 缩 等

7 4. 抗 寄 生 虫 类 药 物 主 要 用 于 驱 虫 或 杀 虫, 如 苯 并 咪 唑 左 旋 咪 唑 克 球 酚 吡 喹 酮 等 危 害 : 致 畸 和 致 突 变 对 于 妊 娠 期 的 孕 妇 有 可 能 发 生 胎 儿 畸 形, 如 短 肢 兔 唇 等 ; 对 所 有 消 费 者 来 说, 可 能 由 于 其 致 突 变 作 用 使 消 费 者 发 生 癌 变 和 性 染 色 体 畸 变, 从 而 其 后 代 有 发 生 畸 形 的 危 险

8 5. 激 素 类 药 物 主 要 用 于 提 高 动 物 的 繁 殖 和 加 快 生 长 发 育 速 度, 使 用 于 动 物 的 激 素 有 性 激 素 和 皮 质 激 素, 而 以 性 激 素 最 常 用, 如 孕 酮 睾 酮 雌 二 醇 等 正 常 情 况 下, 动 物 性 食 品 中 天 然 存 在 的 性 激 素 含 量 是 很 低 的, 因 而 不 会 干 扰 消 费 者 的 激 素 代 谢 和 生 理 机 能 但 超 标 的 话, 可 能 会 影 响 消 费 者 的 正 常 生 理 机 能, 并 具 有 一 定 的 致 癌 性, 可 能 导 致 儿 童 早 熟 儿 童 发 育 异 常 儿 童 异 性 趋 向 等

9 ( 三 ) 兽 药 残 留 的 危 害 毒 性 作 用 急 性 中 毒 慢 性 中 毒 三 致 ( 致 癌 致 畸 致 突 变 ) 耐 药 性 动 物 体 内 耐 药 性 菌 株 通 过 食 品 传 递 给 人, 给 治 疗 带 来 困 难 过 敏 反 应 激 素 作 用 潜 在 致 癌 儿 童 性 早 熟 等 污 染 环 境 影 响 生 态 兽 药 排 入 环 境 后, 仍 然 有 活 性, 对 土 壤 微 生 物 水 生 生 物 等 造 成 影 响

10 ( 四 ) 兽 药 残 留 限 量 标 准 和 检 验 兽 药 最 高 残 留 限 量 (MRLVD): 是 指 某 种 兽 药 在 食 物 中 或 食 物 表 面 产 生 的 最 高 允 许 兽 药 残 留 量 ( 单 位 μg/kg, 以 鲜 重 计 ) 兽 药 最 高 残 留 限 量 标 准 2002 年 农 业 部 颁 布 最 新 动 物 性 食 品 中 最 高 残 留 限 量 不 需 要 制 定 最 高 残 留 限 量 的 药 物 :88 种 需 要 制 定 最 高 残 留 限 量 的 药 物 :94 种 可 以 使 用, 但 不 得 在 食 品 中 检 出 的 药 物 :9 种 禁 止 使 用, 且 不 得 在 食 品 中 检 出 的 药 物 有 :31 种

11 检 验 方 法 简 介 气 相 色 谱 法 (GC): 常 规 分 析 法 常 用 方 法 高 效 液 相 色 谱 法 (HPLC): 常 规 分 析 法, 最 多 采 用 酶 联 免 疫 法 (ELISA): 选 择 性 强 灵 敏 度 高 简 单 快 速 仪 器 联 用 法 (GC-MS,LC-MS,TLC-MS 等 )

12 ( 二 ) 常 见 兽 药 残 留 的 检 验 1. 四 环 素 类 兽 药 残 留 的 检 验 2. 磺 胺 类 兽 药 残 留 的 检 验 3. 硝 基 呋 喃 类 兽 药 残 留 的 测 定 4. 盐 酸 克 伦 特 罗 残 留 的 检 验 5. 激 素 类 兽 药 的 测 定

13 可 食 性 组 织 及 产 品 残 留 分 析 的 样 品 肝 肾 肌 肉 脂 肪 皮 肤 血 液 奶 蛋 其 他 加 工 食 品 其 他 毛 发 尿 粪 便 等

14 容 器 材 料 样 本 的 贮 存 一 般 为 玻 璃 或 塑 料 硅 烷 化 处 理 防 止 器 皿 壁 对 痕 量 残 留 组 分 的 吸 附 塑 料 吸 附 脂 溶 性 物 质 玻 璃 表 面 吸 附 碱 性 物 质 硅 烷 化 处 理 是 以 有 机 硅 烷 水 溶 液 为 主 要 成 分 对 金 属 或 非 金 属 材 料 进 行 表 面 处 理 的 过 程

15 样 本 的 贮 存 冷 冻 保 存 是 最 常 用 的 方 法, 一 般 冷 冻 温 度 为 20, 此 时 生 物 样 品 如 血 浆 尿 液 和 组 织 样 品 均 被 冻 凝, 可 以 终 止 样 品 中 酶 的 活 性, 又 可 以 贮 存 样 品

16 脱 脂 除 蛋 白 提 取 净 化 浓 缩 生 物 样 品 前 处 理

17 去 蛋 白 处 理 生 物 样 品 如 肝 脏 肾 脏 血 浆 等 含 有 大 量 的 蛋 白 质, 它 们 能 结 合 药 物, 因 此 对 于 某 些 药 物 的 测 定, 必 须 先 将 与 蛋 白 结 合 的 药 物 游 离 之 后 再 作 进 一 步 处 理 为 什 么 要 除 去 蛋 白?? 因 为 生 物 样 品 含 有 大 量 的 蛋 白 质, 蛋 白 质 在 测 定 过 程 中 会 形 成 泡 沫 浑 浊 或 出 现 沉 淀 而 干 扰 测 定 蛋 白 质 还 会 污 染 仪 器 或 恶 化 测 定 条 件, 如 直 接 进 样 用 液 相 色 谱 分 析 含 蛋 白 质 的 体 液 样 品 时, 蛋 白 质 会 沉 积 在 色 谱 柱 上, 这 不 仅 影 响 柱 效, 而 且 大 大 缩 短 色 谱 柱 的 使 用 寿 命

18 去 蛋 白 处 理 通 常 除 蛋 白 的 方 法 是 在 含 蛋 白 样 品 中 加 入 适 当 的 沉 淀 剂 或 变 性 剂, 使 蛋 白 质 脱 水 而 沉 淀 ( 如 有 机 溶 剂 中 性 盐 ), 有 的 是 由 于 蛋 白 质 形 成 不 溶 性 盐 而 析 出 ( 如 一 些 酸 类 : 三 氯 醋 酸 高 氯 酸 磷 酸 苦 味 酸 ), 离 心 后 取 上 清 液 用 于 分 析

19 1 有 机 溶 剂 沉 淀 甲 醇 乙 腈 丙 酮 和 乙 醇 是 沉 淀 蛋 白 常 用 的 有 机 溶 剂, 尤 以 甲 醇 和 乙 腈 为 最 常 用 甲 醇 与 蛋 白 形 成 絮 状 沉 淀 易 于 离 心 分 离, 得 到 澄 清 的 上 清 液 ; 乙 腈 与 蛋 白 形 成 致 密 沉 淀, 易 离 心 除 去, 沉 淀 效 率 较 甲 醇 高 使 用 时 应 加 入 足 量 的 沉 淀 剂, 通 常 加 入 量 为 样 品 体 积 的 1.5~2 倍

20 2 酸 性 沉 淀 常 用 的 酸 性 沉 淀 剂 有 三 氯 醋 酸 和 高 氯 酸, 其 他 还 有 钨 酸 钼 酸 磷 钨 酸 磷 钼 酸 和 苦 味 酸 等 酸 性 沉 淀 剂 能 同 蛋 白 质 的 阳 离 子 形 成 不 溶 盐 而 沉 淀, 必 要 条 件 是 溶 液 的 ph 要 低 于 蛋 白 的 等 电 点 加 入 沉 淀 剂 之 后 立 即 形 成 白 色 沉 淀 ( 必 要 时 可 加 热 使 沉 淀 完 全 ), 离 心 后 可 得 到 澄 明 的 上 清 液

21 三 氯 醋 酸 ( 常 用 10% 溶 液 ) 沉 淀 蛋 白 的 作 用 很 强, 因 此 最 常 使 用, 但 应 注 意 试 剂 中 含 有 的 杂 质, 将 它 们 引 入 离 心 后 的 上 清 液 中, 可 能 会 干 扰 药 物 的 分 析 其 次 应 注 意, 当 上 清 液 再 用 乙 醚 等 有 机 溶 剂 萃 取 时, 三 氯 醋 酸 则 连 同 溶 入 其 内 的 杂 质 会 进 入 有 机 相, 也 可 能 干 扰 药 物 的 分 析 采 用 高 氯 酸 作 为 蛋 白 沉 淀 剂 时, 其 优 点 是 残 留 在 上 清 液 中 的 ClO 4 可 加 入 钾 盐 除 去

22 3 无 机 盐 沉 淀 一 些 无 机 盐 如 硫 酸 铵 硫 酸 钠 和 氯 化 钠 等, 能 使 蛋 白 质 胶 体 脱 水 并 中 和 其 电 荷, 使 蛋 白 质 失 去 胶 体 性 质 而 沉 淀 下 来 无 机 盐 中 以 硫 酸 铵 最 常 用 常 用 的 重 金 属 盐 类 有 汞 盐 铜 盐 和 锌 盐 等, 它 们 能 与 蛋 白 质 形 成 不 溶 盐 而 沉 淀 析 出 如 可 用 HgCl 2 作 为 蛋 白 沉 淀 剂 处 理 血 浆 样 品, 离 心 后 用 比 色 法 测 定 上 清 液 中 的 水 杨 酸 浓 度 采 用 蛋 白 沉 淀 剂, 只 要 加 入 足 量, 一 般 可 除 去 98% 以 上 的 蛋 白 蛋 白 沉 淀 后 是 否 与 之 相 结 合 的 药 物 能 游 离 释 出, 目 前 尚 缺 乏 系 统 的 研 究 资 料, 仅 观 察 到 少 数 现 象

23 样 品 提 取 和 净 化 液 液 萃 取 是 经 典 的 提 取 方 法 之 一, 它 基 于 被 测 组 分 在 不 相 溶 的 两 种 溶 剂 中 的 分 配 优 点 : 1 通 过 萃 取 可 将 被 测 组 分 自 大 量 内 源 性 物 质 中 分 离 出 来, 减 少 杂 质 对 测 定 的 干 扰 ; 2 操 作 简 单 快 速 经 济 实 用 ; 3 可 将 萃 取 液 蒸 发, 使 组 分 富 集 ; 4 可 一 次 进 行 同 类 组 分 的 萃 取

24 液 液 萃 取 的 溶 剂 选 择 液 液 萃 取 常 用 的 有 机 溶 剂 有 甲 醇 乙 腈 丙 酮 氯 仿 二 氯 甲 烷 四 氯 化 碳 乙 醚 叔 丁 基 甲 醚 乙 酸 乙 酯 苯 甲 苯 正 己 烷 溶 剂 选 择 应 注 意 以 下 几 点 : 1 溶 剂 的 极 性, 根 据 相 似 相 溶 原 理, 极 性 组 分 易 溶 于 极 性 溶 剂, 反 之 亦 然, 应 根 据 被 测 组 分 的 极 性 选 择 相 似 极 性 的 溶 剂 实 际 萃 取 被 测 组 分 时, 还 常 于 萃 取 溶 剂 中 加 人 第 二 种 溶 剂, 以 调 整 极 性, 使 达 到 选 择 性 萃 取

25 2 溶 剂 的 沸 点, 萃 取 分 离 后 的 有 机 相 通 常 需 置 温 水 浴 中 通 压 缩 空 气 ( 或 氮 气 ) 使 挥 发, 将 被 测 组 分 浓 集, 因 此 萃 取 溶 剂 的 沸 点 就 不 应 接 近 或 高 于 水 的 沸 点, 否 则 挥 发 困 难 3 溶 剂 的 毒 性, 使 用 对 人 体 有 害 的 溶 剂 萃 取 时, 应 在 通 风 橱 内 进 行 在 常 用 溶 剂 中, 乙 酸 乙 酯 既 安 全 又 无 毒, 对 不 同 极 性 的 被 测 组 分 均 有 较 高 的 萃 取 回 收 率, 又 易 于 挥 发, 萃 取 物 中 混 入 的 内 源 杂 质 量 少,

26 四 环 素 类 药 物 残 留 的 测 定

27 四 环 素 类 药 物 四 环 素 类 (Tetracyclines) 抗 生 素 是 一 类 碱 性 广 谱 抗 生 素 四 环 素 类 早 在 20 世 纪 的 60~70 年 代 即 广 泛 应 用, 在 兽 医 上 尤 为 滥 用, 以 致 细 菌 对 四 环 素 类 的 耐 药 现 象 颇 为 严 重, 一 些 常 见 病 原 菌 的 耐 药 率 很 高

28 四 环 类 抗 生 素 一 类 具 有 并 四 苯 结 构 的 广 谱 抗 生 素 基 本 结 构 : 可 变 部 分 H 3 C C H 3 N H O H 1 O H O O H O O H O H 2 N

29 四 环 类 抗 生 素 分 类 天 然 类 : 土 霉 素 四 环 素 金 霉 素 半 合 成 类 : 多 西 环 素 米 诺 霉 素 甲 烯 霉 素

30 四 环 素 H 3 C O H H 3 C N C H O H O H O O H O O H O H 2 N

31 土 霉 素 H 3 C O H O H C H N 3 C H H O H O H O O H O O H O H 2 N

32 理 化 性 质 (1) 黄 色 结 晶 粉 末 味 苦 在 水 中 的 溶 解 度 很 小, 其 溶 解 度 与 溶 液 的 ph 值 有 关, 在 ph4.5~7.2 之 间 时 难 溶 于 水, 但 若 酸 性 或 碱 性 增 强, 则 溶 解 度 增 加 在 醇 ( 如 甲 醇 和 乙 醇 ) 中 的 溶 解 度 较 大, 在 乙 酸 乙 酯 丙 酮 乙 腈 等 有 机 溶 剂 中 溶 解 较 小 (2) 与 金 属 离 子 形 成 不 溶 螯 合 物, 如 : 钙 离 子 (3) 稳 定 性 四 环 素 类 药 物 在 干 燥 条 件 下 稳 定 但 遇 光 色 加 深 在 酸 性 或 碱 性 溶 液 中 不 够 稳 定, 或 药 效 显 著 降 低 或 产 生 毒 性 ( 密 闭 防 潮 避 光 保 存 )

33 四 环 素 土 霉 素 的 提 取 g 样 品 30 ml EDTA 二 钠 mol / L 磷 酸 ( 1 : 1 ) 摇 匀 2 ml50% 三 氯 乙 酸 EDTA 磷 酸 混 合 液 定 容 至 50 ml 匀 浆 1 min 45 保 温 15min 静 置 分 层, 离 心 10min 上 清 液 过 滤 取 25.0 ml 滤 液, 待 净 化

34 四 环 素 土 霉 素 的 净 化 活 化 吸 附 剂 2mL 甲 醇 : 除 去 固 相 萃 取 柱 填 料 存 在 的 杂 质 10mL 蒸 馏 水 : 置 换 甲 醇 5mL5%EDTA 二 钠 溶 液 10mL 蒸 馏 水

35 25.0mL 样 品 提 取 液 四 环 素 土 霉 素 的 净 化 四 环 素 类 药 物 杂 质 10mL 蒸 馏 水 4 10mL 甲 醇 进 样 水 溶 性 杂 质 如 :EDTA Na 2 磷 酸 三 氯 乙 酸 等 洗 涤 洗 脱 四 环 素 类 药 物

36 氯 霉 素 性 状 : 白 色 针 状 或 微 带 黄 绿 色 的 针 状 长 片 状 结 晶 或 结 晶 性 粉 末 ; 味 苦 水 中 溶 解 度 2.5 g/l (25 ), 在 甲 醇 乙 醇 丙 酮 丙 二 醇 中 易 溶 在 干 燥 时 稳 定, 在 弱 酸 性 和 中 性 溶 液 中 较 安 定, 煮 沸 也 不 见 分 解, 遇 碱 类 易 失 效 用 途 : 用 于 治 疗 由 伤 寒 杆 菌 痢 疾 杆 菌 大 肠 杆 菌 流 感 杆 菌 布 氏 杆 菌 肺 炎 球 菌 等 引 起 的 感 染

37 四 环 素 土 霉 素 的 提 取 g 样 品 30 ml 磷 酸 盐 缓 冲 液 ( ph = 6. 0 ) 摇 匀 2 ml50% 三 氯 乙 酸 磷 酸 盐 缓 冲 溶 液 定 容 至 50 ml 匀 浆 1 min 室 温 放 置 15min 滤 纸 过 滤 滤 液 µ m 滤 膜 过 滤 上 机

38 色 谱 条 件 色 谱 柱 :C 18 柱 ; 检 测 器 : 紫 外 检 测 器 ; 波 长 :265 nm; 流 动 相 :0.01mol/L 磷 酸 氢 二 钠 (ph=2.5 含 有 0.001mol/LEDTA 二 钠 )+ 乙 腈 = 65:35 流 动 相 中 加 NaH2PO4 及 调 节 ph 值 目 的 : 改 善 四 环 素 类 药 物 在 C18 柱 上 的 分 离 度 和 峰 形 柱 温 : 室 温 ; 流 速 :1.0ml/min

39 磺 胺 类 药 物 残 留 量 的 测 定

40 磺 胺 类 药 物 结 构 磺 胺 类 药 物 的 基 本 结 构 4 R'HN 1 SO 2 NHR

41 常 用 的 磺 胺 类 药 物 H 2 N H 2 N N O O O S N H 磺 胺 甲 噁 唑 N O O S N N H 磺 胺 嘧 啶 CH 3 H 2 N H 2 N O N O O S N CH 3 H CH 3 磺 胺 异 噁 唑 CH 3 H 3 CO N O O S N N H 磺 胺 多 辛

42 磺 胺 类 药 物 的 性 质 及 用 途 磺 胺 类 药 物 一 般 为 白 色 或 微 黄 色 结 晶 性 粉 末, 无 臭, 味 微 苦, 遇 光 易 变 质, 色 渐 变 深, 大 多 数 本 类 药 物 在 水 中 溶 解 度 极 低, 较 易 溶 于 稀 碱, 但 形 成 钠 盐 后 则 易 溶 于 水, 其 水 溶 液 呈 强 碱 性 易 溶 于 沸 水 甘 油 盐 酸 氢 氧 化 钾 及 氢 氧 化 钠 溶 液, 不 溶 于 氯 仿 乙 醚 苯 石 油 醚 磺 胺 类 (SAs) 药 物 可 以 治 疗 禽 霍 乱 禽 伤 寒 禽 副 伤 寒 禽 白 痢 鸡 传 染 性 鼻 炎 火 鸡 亚 利 桑 那 病 等, 此 外 对 家 禽 各 种 球 虫 病 卡 氏 白 细 胞 原 虫 病 等, 也 有 较 好 效 果

43 磺 胺 类 残 留 量 检 测 标 准 方 法 1. GB/T 河 豚 鱼 鳗 鱼 中 十 八 种 磺 胺 类 药 物 残 留 量 的 测 定 液 相 色 谱 串 联 质 谱 法 2. 农 业 部 958 号 公 告 水 产 品 中 磺 胺 类 药 物 残 留 量 的 测 定 液 相 色 谱 法 3. 农 业 部 781 号 公 告 牛 奶 中 磺 胺 类 药 物 残 留 量 的 测 定 液 相 色 谱 串 联 质 谱 法 4. 农 业 部 1077 号 公 告 水 产 品 中 17 种 磺 胺 类 及 15 种 喹 诺 酮 类 药 物 残 留 量 的 测 定 液 相 色 谱 串 联 质 谱 法 5. SB/T 畜 禽 肉 中 磺 胺 二 甲 嘧 啶 磺 胺 甲 恶 唑 的 测 定

44 磺 胺 类 残 留 量 检 测 标 准 方 法 6. GB 食 品 安 全 国 家 标 准 动 物 性 食 品 中 13 种 磺 胺 类 药 物 多 残 留 的 测 定 高 效 液 相 色 谱 法 7. GB/T 动 物 源 性 食 品 中 磺 胺 类 药 物 残 留 量 的 测 定 液 相 色 谱 质 谱 / 质 谱 法 8. SN/T 出 口 动 物 源 性 食 品 中 磺 胺 类 药 物 残 留 量 的 测 定 免 疫 亲 和 柱 净 化 HPLC 和 LC MS/MS 法 9. GB/T 动 物 源 性 食 品 中 磺 胺 类 药 物 残 留 测 定 方 法 放 射 受 体 分 析 法 10. GB/T 牛 奶 和 奶 粉 中 16 种 磺 胺 类 药 物 残 留 量 的 测 定 液 相 色 谱 串 联 质 谱 法 11. GB/T 蜂 蜜 中 16 种 磺 胺 残 留 量 的 测 定 方 法 液 相 色 谱 串 联 质 谱 法

45 磺 胺 类 残 留 量 检 测 标 准 方 法 12.GB/T 畜 禽 肉 中 十 六 种 磺 胺 类 药 物 残 留 量 的 测 定 液 相 色 谱 串 联 质 谱 法 13. 农 业 部 1879 号 公 告 饲 料 中 磺 胺 氯 吡 嗪 钠 的 测 定 高 效 液 相 色 谱 法 14.SN/T 进 出 口 蜂 王 浆 中 16 种 磺 胺 类 药 物 残 留 量 的 测 定 液 相 色 谱 质 谱 / 质 谱 法

46 HPLC 法 测 定 磺 胺 类 药 物 残 留 原 理 动 物 性 食 品 样 品 经 过 预 处 理 后, 用 流 动 相 溶 解, 所 得 样 液 用 HPLC- 紫 外 检 测 器 检 测 与 标 准 比 较, 用 保 留 时 间 定 性 标 准 曲 线 法 定 量

47 样 品 的 预 处 理 g 样 品 于 离 心 管 r / min 5 min 3000 离 心 上 清 液 1 残 渣 4. 0 g 无 水 硫 酸 钠 25 ml 乙 腈 匀 浆 合 并 25 ml 乙 腈, 振 荡 10 min r / min 5 min 3000 离 心 上 清 液 2 残 渣

48 净 化 合 并 的 上 清 液 30 ml 正 己 烷, 振 荡 10 脂 肪 min 3000 r / min 离 心 5 min 正 己 烷 乙 腈 10mL 正 丙 醇 50 减 压 干 燥 至 近 干 正 丙 醇 可 以 加 快 溶 剂 蒸 发 的 速 度, 并 且 能 够 减 少 药 物 的 损 失, 提 高 回 收 率 3mL 乙 腈 水 (95:5) 溶 解 残 留 物

49 样 品 溶 液 洗 涤 盛 装 样 品 溶 液 的 鸡 心 瓶 的 95% 乙 腈 水 溶 液 磺 胺 类 药 物 杂 质 净 化 10mL 70% 乙 腈 水 溶 液 杂 质 进 样 洗 脱 磺 胺 类 药 物 洗 脱 液 中 加 入 加 入 5mL 正 丙 醇, 50 下 减 压 干 燥, 然 后 再 准 确 加 入 一 定 量 的 流 动 相 溶 解, 得 到 样 品 处 理 液

50 3 色 谱 条 件 色 谱 柱 :ODS C 18 (4.6 mm 250 mm) 柱 ; 检 测 器 : 紫 外 检 测 器 ; 波 长 :270 nm; 进 样 量 :20 μl; 柱 温 :35 ; 流 动 相 : 乙 腈 + 甲 醇 + 水 + 乙 酸 = 2:2:9:0.2; 流 速 :1.0ml/min

51 4 标 准 曲 线 的 绘 制 准 确 称 取 各 磺 胺 类 兽 药 对 照 品 于 容 量 瓶 中, 以 甲 醇 定 容 作 为 标 准 储 备 液, 吸 取 各 标 准 贮 备 液, 以 甲 醇 稀 释 至 质 量 浓 度 为 0-2.0mg/L 的 标 准 系 列, 各 取 20μL 进 样 分 析, 根 据 峰 面 积 与 相 应 的 质 量 浓 度 进 行 线 性 回 归, 绘 制 标 准 曲 线

52 5 样 品 的 测 定 将 处 理 好 的 待 测 样 品, 在 3 所 述 的 色 谱 条 件 下, 用 HPLC 紫 外 检 测 器 检 测, 与 标 准 比 较, 用 保 留 时 间 定 性 标 准 曲 线 法 定 量

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