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1 理 CNIC94-02 行 94 年 年 林 林 李 95 年 2 28 理

2 CNIC94-02 ( 1) 行 94 年 年 年 02 28

3 (collagens) 類 (dermis) (extracellular matrix)( 70%) 來 力 type type type 年 金 -1 [matrix metalloproteinase-1 MMP-1 (interstitial collagenase)] MMP-2 (gelatinase A) MMP-9 (gelatinase B) 度 老 利 不 量 理 type mrna 量 MMP-1 MMP-2 MMP-9 泌 量 不 量 MMPs 老 力 老 利

4 行 1. 理 精 行 4. 率 (MTT assay) 5. 濾 量 6. (gelatin-based zymography) 7. 論 95 % 精 度 利 - 硫 (Phenol-sulfuric acid assay) 行 度 95% 精 量 度 4.5 mg/ml 不 精 度 離 10 fractions 量 行 利 (TSKgelGMPWxl column)(elsd) 來 行 MTT 0.75 mg/ml 量 理 48 3T3 率 降 60% 3T3

5 理 量 0.5 mg/ml MMPs 48 3T3 0.5 mg/ml 理 0~120 行 (gelatin-based zymography) MMPs 0.5 mg/ml 理 24~120 MMP-2 MMP mg/ml 量 MMP-2 MMP-9 理 量 更 0.1~0.5 mg/ml 度 理 48 行 gelatin-based zymography 理 量 MMP-2 MMP mg/ml 理 量 理 48 降 MMP-2 MMP-9

6 MMP-2 MMP-9 老 更 精 露 10 異 刺 精 露 刺 - + -

7 理 CNIC94-02 行 94 年 年 年 02 27

8 年 來 連 見 龍 不 類 行 類 老 行 數 來 參 行 略 不 留 了 料 料 流 行 行 流 ( 路 行 ) 1

9 易 年 來 糖 行 陸 年 來 流 行 契 行 行 參 1. 說 立 料 料 龍 不 類 異 2. 路 2

10 行 料 料 來 說 類 料 料 錄 / 理 purified water, sodium pca, maltitol, cucumber 聯 extract, cabbage rose water, ammonium glycyrrizate, disodium EDTA GARNIER water alcohol denat, dipropylene glycol, glycerin, salicyilc acid, zinc pca, triclosan, spiraea ulmaria extract, niacinamide pef-60.hydrogenated castor oil, benzophenone-4.sodium hydroxyde fragrance salicylic acid 0.5% water decyl polyglucose disodivm lauryl sulfosuccinate 露 johnson&johnson sodivm methyl cocoyl taurate cocamidopropyl korea ud betaine sodivm lavreth-13 carboxylate cetyl alcohol polyquaternium-37, silica, water, glycerin, peg-12 mens Biore dimethicone, titanium dioxide, menthol, methylparaben avene thermal spring water 96%, plant origin corn0.25% 3

11 / 理 1 water 2 alcohol denat 3 glycerin 4 betaine 5 steartrimonium chloride 6 peg-60 hydrogenated 逸 castor oil 7 c12-14 pareth-9 8 betula platyphylla japonica bark extract 9 hydrolyzed silk 10 menthol 11 fragrance F5 / 麗 camellia oleifera, protein, sodium lauryl ether 綠 茶 sulfate, methyl paraben, propyl paraben, perfume, distilled water. OGUMA Aqua ion complex elite 離,aqua,o2 Key. 尿. e.. 精. 良 - [ ] water.potassium.stearate.peg-8.marystate.glycerln. Pewfect Whip potassium laurate.glycol, se, lauuric acid, polquaternium-7, beeswax, 精, c, KOSE,,, 4

12 / 理 alcohol denat 49.75,water (aqua) 42.26,glycerin (96% aqueous solution) 2.00, salicylic acid 1.00, peg ,aloe barbadensis gel 0.99, cucumber (cucumis sativus) extract (60% in butylene glycol & water) 0.99, oat (avena sativa) extract (10% in butylene glycol & water) 0.99, ARTISTRY 麗 hydroxypropylcellulose 0.50, panthenol 0.25, 理 dipotassium glycyrrhizinate 0.05, chamomile (anthemis nobilis) extract (1%) & butylene glycol & water 0.05, ethyl ester of hydrolyzed silk (20% in ethanol) 0.10, water & glycerin & phospholiplids & sphingolipids & cholesterol 0.01, sodium hyaluronate 0.01, ginseng (panax ginseng) extract (1%) & propylene glycol & water 0.05 蘆 柳 蘭 麗 麗 離 羅 蘭 蓮 麗 精 麗 蘭 N01 蘆.. 麗 C.. nmf. ().. water, butylene glycol, perilla ocymoides extract, horsetail (equisetum arvenis) extract, artemisia DHC mongolia leaf extract, carbomer, sodium 露 hyaluronate, aminomethyl propanol, serine, paraben, dipotassium glycyrrhizate DHC olea europaea olive fruit oil 精 5

13 / 理 cetyl alcohol ( )glyceryl stearate ( )peg-75 stearate ( ) ceteth-20 ( ) steareth-20,dl-α-tocopheryl acetate, mulberry extract, potassium azelaoyl diglycinate, cholesteryl hydroxystearate, polyethylene, stearyl alcohol, 利 cetyl palmitate, polysynalane, trioctanoin, caprylic / capric acid triglyceride, dimethicone, 1,3-butylene glycol,xanthan gum, sodium citrate, tetrasodium edetate tetrahydrate, methyl parahydroxybenzoate, propyl parahydroxybenzoate, fragrance, water ( purified) dimethicone(&)dimethicone crosspolymer, polymethylsilsesquioxane magnesium silicate, 利 trioctanoin, microcrystalline wax,carnauba,ceresin 離 candelilla wax,iron oxide red,iron oxide yellow,propylparaben may contain:fragrance mukurossi, myristic acid, water, glycerine, potassiumhydroxide,stearicacid,glycerylmonostear heme 蘭 ate,cocamidoproylamine oxide,allantion,butylene glycol,lemon extract,propyl paraben,methyl paraben,diazolidinyl urea,yellow no.5,blue no.4,fragrance water polysorbate 20 acylates copolymet Kesalan KP / 林 glycerin pvp xanthan gum pvm/ma decadiene PatharanKP 易 crosslymer imiazolidinyl orea simethicone sodium metaphosplate pigment lron oxides water-butylene glycol,witch hazel distillate,ppg-26-buteth-26,mannitol,yest extract,hydrolyzed wheat protein,mannitol,horse chestunt extract,glycogen,yeast extract,calcium methylparaben,essentiloil, water, peg-6(and)peg-32,butylene glycol,peppermint extract, witch hazel distillate,chamomile extract,disodium cocoamphodiacetate, methylparaben,tetrasodium edta, essential oil. 6

14 / 理 water,butylene glycol,acerola extract,glycerin,aloe vera gel,sorbitol(and)parpaya extract(and)lemon 瑩 extract,alcohol,peg-40 hydrogenated castor 露 EX oil,arbutin,sodium citrate,oil-soluble licorice extract,essential oil,fragrance. water, cyclomethicone, isonyl isononanoate, butylene glycol,dimethicone copolyol,glyceryl oleate, nylon-12,aluminum oxide,cetyl dimethicone copolyol,dextrin palmitate,distearyldimonium chloride,polysorbate 60,sodium chloride,stearic acid,zirconium dioxide,methylparaben,butylparaben,tocopherol,ma tricaria oil. water,cyclomethicone,triethyletxanoin,sodium chloride,butylene glycol,caprylic/capric triglycerides-crithmum maritimum 量 extract,potassium dna,disodium adenosine 露 triphosphate,dimethicone copolyol,methylparaben,iodopropynyl butyl carbamate,kohki tea extract,essentilal oil,fragrance. water/cyclomethicone/titaniumdioxide/dimethicone copolyol/polymethyl/methacrylate/glycerin/squalan e/aluminum hydroxide/dodium chloride/stearic 離 蘭 acid/silica/quaternium-18 SPF35 hectorite/methicone/phenoxyeihanol/dimethicone/v inyl dimethicone/copolymer/tocopherol/dipotassium/gly cyrrhizate/sodium hyaluronate octyl methoxycinnamate/butyl methoxydibenzoylmethanewater/cyclomethicone/ti taniumdioxide/dimethicone/copolyol/polymethyl/m ethacrylate/glycerin/squalane/aluminum / hydroxide/dodium chloride/stearic acid/silica/quaternium-18 hectorite/methicone/phenoxyeihanol/dimethicone/v inyl dimethicone/copolymer/tocopherol/ 7

15 / 理 butyshop // 蘆 精 / 精 / 量 精 butyshop natural algae gel/pineappleenzyme/mnf carboxvinyl polymer, propylene glucol, glycerine, ethanol, surfactant, water-cress, burdock/sage, 露 lemon, lvy, soapwort/methylparaben/essentlal oil/dl water acutiloba kitagawa extract, humulus iupulus extract, herba menthae, chitin liquid, mineral water, EQ propylene glycol &diazolidinyl& methylparaben &propyl paraben, benzyl alcohol &methylchloroisothiazolinone, stearilized diomizes water zinc pyrithione, sodium lauryl ether sulfate cocoamidopropyl betaine methyl paraben 朗 朗 pearlescent pate sodium chloride edta-2na methylchoroisethiazolinone polyquaternium-7 citric acid tocopheryl acetate water fragrance coconut oil fatty acid propyene glycol per-75 lanoline methyl paraben propyl 4-hydoxy benzoate potassium hydroxide 朗 朗 ethylenediaminetetrace tic acid tetra sodium salt water glycol distearate phenoxyethanol tocopheryi acetate butylated hydroxy tolune fragrance LANCOME titamium dioxide3.42%/ethylhexyl UV methoxycinnamate % 離 LANCOME 精 ascorbyl glucoside2% 量 /glycolic acid/ / 金 縷 精 /spa 精 8

16 / 理 aluminum chlorohydrate demineralized water poe (20m) stearyl alcohol cyclomethicone tetramer ( stearyl eto(20m) acohol poe(15m)stearyl ether ) isopropyl patmitate fragrance oil methylparaben disodium EDTA 離 ( zinc oxide 6.54% titanium dioxide 2.53% ) water kaolin glycerin talc alcohol denta microcrystalline cellulose sorbitol bentonite eucalyptus globulus oil ethylparaben fragrance zinc oxide iron oxides distilled water glycerine aloe extract 良 蘆 chamomile carbopol lappa extract 露 triethanolamine quinizarine green ss fragrance methyl paraben monoalkyl phoshate, glycol distearate, beads for men water,butylene glycol, peg-400, carbomer, glycerin, DMDM hydantoin, methylparaben, diazoolidinyl buty shop urea, aloe vera, pineapple enayme,algae gel,sodiu m lactate, wheat germ, amidopropyl betaine, fragrance, nmf,fd&c blue no 1 cl sodium paimate/cocate, water,palm kernel fctty 麗 ( 聯 利 acid,peg-600,perfume,glycerin,titanium - doxide,sodium chloride,tetrasodium edta,etidronic ) acid,cl ( ammonium laureth sulfate lysine hydrechloride, histine, methyl tyrosinate,hcl, hydrogenated ) polydecene buty shop 精 buty shop 精 OGUMA ion complex elite 離 aqua o2 Aqua Key 力 Sofamo SAM 露 glycine soja / aloe barbadevsis 9

17 / 理 刺 Anti-acne 蘭 精 Lotion 刺 Anti-acne Mask bamboo vinger propylene glycol glycerin 力 利 octoxynolll(&)polysorbate 20 alcohol methlparaben fragrance water may contai : food yellow 4 food blue 2 food yellow 3 food red 10 蘭 蘭 zinc stearate mg-stearate talc titaninm dioxide perfume colours castor oil bees wax camauba wax perfumes Avon Canada, Inc. UNO CLEANSE SHISEIDO LTD. PACK a c e β 蘿 b5 polyvinyl alcohol alcohol butylene glycol CO., water silica xanthan gum sodium citrate sodium hexametaphosphate methylparaben menthol citric acid titanium dioxide water ethoxydiglycol sorbitol peg-12 laurate 露 () peg-20 sorbitan isostearate polysorbate 21 chondrus crispus (carrageenan) bht methylparaben fragrance 麗 露 ha tea tree oil sebomile perfume water glycerin lauric acid myristic acid stearic acid sodium laruoyl glutamate propylene glycol 聯 利 peg-150 stearate peg-60 glyceryl isostearate algae 泥 bht heclorite potassium hydroxide methylparaben propylparaben fragrnce ci ci Jovi-color 蘭 羚 mica titanium mineral oil talc 滑 dioxide propyl Needme beeswax cetyl alcohol lanolin zonc oxide iron oxide 10

18 / 理 water polyvinyl alcohol polyvinyl ethylebe stearate polyviny pyrrolidone iron oxide water rubber latex ammonium acrylates copolymer acrylates copolymer ammonium ( ) hydroxide ATELIER MARQUILAGE talc glycerol mineral oil PRO 蘆 se napca NaPCA 麗 精 ( 梨 糖 ) 尿 糖 cetearyl alcohol cetearch-20 精 water propylene glycol triethylhexanoin maltitol neopentyl glycol dicaprate peg-60 hydrogenated castor oil cholesteryl hydroxystearate peg-5 glyceryl stearate glyceryl 麗 stearate dimethicone evening primrose oil E.P.O. carbomer fragrance hydroxyethylcellulose arginine methylparab-en tocopheryl acetate pca ethyl cocoyl arginate butylparaben propylparaben behenyl alcohol staryl glycyrrhizinate ammonium glycyrrhizinate sodium hexametaphosphate trimetkylgly cine zinc oxid aloe extrat kaolin 福 g.m.s cucumber extract perfumery propyl ( 綠 ) 4-hydroxybenzoate 異 蠟 methylpropanediol cetearyl ethylhexanoate c13-14 異 laureth-7 pvm/ma 麗 蠟 異 糖 類 oleth-10 精 11

19 / 理 綠 茶 squlene isohexadecane capryic/capric triglycerride isostearyl isostearate green tea extract aloe vear propyl paraben green tea essential oil talc kaolin mica magnesium myristate titanium dioxide lron oxides ci mineral oil iron oxides ci iron oxides ci fragrance 拉 陸 caprylic/capric triglyceride jojoba oil butylparaben propylparaben byiyl methoxydibenzoylmethane octyl methoxycinnamate tocopherol water sodium lauroyl glutamate peg-8 propylene glycol montmorillonite decyl glucoside sodium 麗 hydrogenated tallowoyl giutamate sodium cocoyl glutamate polyethylene glycol monostearate peg-75 mentha piperita(peppermint)oil methylparaben potassium sorbate 蘭 castor oil bees wax camauba wax perfumes 蘭 zinc stesrste mg-stearate talc titanium dioxide perfume colours 索 c16-18 c13-14 異 ppg-2 梨 -20 laureth-7 12

20 / 理 2-ethylhexyl-4methoxycinnamate 9% low temperature burned zinc oxide 15.39% titanium dioxide 1.998% stearyl glycyrrhetinate octamethylcyclotetrasiloxane decamethylcyclopentasiloxane isostearic acid SUN PLAY methyl polysiloxane isononyl isononanoate 雷 () 離 vitamin E ascorbyl tetra-2-hexyldecanoate polyoxyethylene methylpolysiloxane copolymer silicic anhydride methyl polysiloxane methylhydrogenpolysiloxane aluminium hydroxide stearic acid 1.3-butylene glycol aloe extract witch hazel extract silk powder purified water perfume methyl parahydroxybenzoate pure water glycerin potassium cocoate gingko extract trehalose sodium coceth sulfate sodium lactate propylene glycol ethyleneglycol 力 distearate edta potassium chloride methyl paraben propyl paraben fragrance water sodium laureth sulfate cocamidopropyl betaine glycol distearate dimethiconol glycerin laureth-4 laureth-25 panthenyl ethyl ether polyquatemium-28 ppg-9 serine sorbitol tea-lactate tea-dodecylbenzene sulfonate urea 聯 利 guar hydroxypropyltrimonium chloride lauryl diethylenediaminoglycine lauryl aminopropylglycine bis(c13-15 alkoxy)pg amodimethicone allantoin fragrance sd alcohol 39-c arginine lactic acid citric acid sodium chloride sodium lactate bht methylparaben propylparaben 2-bromo-2-nitropropane-1.3-diol 麗 蘆 e mica pigments colors 13

21 / 理 butyshop 金 縷 金 露 精 蘆 精 NU SKIN 蘆 napca NaPCA 麗 尿 糖 梨 20 尿 shiconic oil lithospermum offcinale extract aloe vera triisostearin squlane refined olive oil sodium lactate dl-tocopherol acetate steareth-2 steareth-21 diisopropyl dimer dilinoleate cetyl palmitate cestearyl alcohol butyshop stearic acid beeswax vaseline dimethyl cycloiloxane &modified organo-polysiloxane allantoin xanthan gum glycerin alkydimethylbenzyl ammonium saccharinate hydogenated lecithin methylparaben lmdiazolidinyl fragrance butyshop 露 蘆 精 purified water stearic acid glycerin peg 8 propylene glycol triclosan myristic acid potassium hydroxide lauric acid glyceryl stearate peg- 100 stearate synthetic beeswax fragrance water potassium c9-15 alkyl phosphate sorbitol betaine lauramdopropyl betaine phosphoric acid alcohol ethylhexylgl ycerin peg-6 acrylates/ c10-30 alkyl acrylate crosspolymer titanium dioxide peg-65m sodium benzoate pborpylene glycol bht fragrance 14

22 / 理 water butyene glycol peg-32 glycerin pullulan amidinoproline citrus junos peel extract 瑩 chamomilla recutita (matricaria) extract thujopsis dolabraya extract isoceteth-20 disodium phosphate succinic acid alcohol methylparaben fragrance bht chamomile et 0.50water glycerin neopentyl glycol dicaprate behenyl alcohol dimethicone chtyl-pg hydroxyethyl palmitamide histidine 瑩 butylene glycol amidinoproline alcohol citrus junos peel extract methylparaben distearyldimonium chloride fragrance thujopsis dolabrata extract mineral oil polyoxyethylene glyceryl triisostearate oleyl alcohol simmondsia ETUDE 精 chinensis seed oil camellia oil water propyl 靈 paraben meadowfoam seed oil lso propyl myristate squalane butyl paraben water edta-2na glycerine patassium hydroxide lauric acid myristic acid stearic acid glyceryl ETUDE 精 stearate (and) peg-100 stearate urea carica papaya 靈 fruit extract saponaria offilinalis extract sodium chondroitin sulfate sodium lactate perfume p-phenylendiamine(0.2 ), n4, n4-bis- hydroxythyl 麗 -p-phenylenediamine sulfate(0.15 ), p-amino-ocresol(0.36 ), m-aminophenol(0.6 ),1-phenyl 麗 1-3-methy 1-5-perazolone(0.2 ) hydrogen peroxide35 (17 ) water, hydrogenated vegetable oil, polydecene, stearyl alcohol, beeswax, glycerin, glyceryl stearate, polyethylene, sd alcohol 40-b,peg-40 茶 stearate, cetyl alcohol, c12-15 pareth-12, silica,camellia sinensis leaf extract, fragrance, cellulose gum, triethanolamine, magnesium aluminum silcate, methylparaben 15

23 / 理 kaolin,bees wax,cucumber extract, mariggold extract,collagea allantoin,methyl paraben, propyl 龍 paraben, vitamin E oil, titanium dioxide, squalane, stearic acid, triethanolamine, perfume, distilled water each gram contains:erythromycin 20mg (potency) LUSH 麗, 嶺,, 見, 精, 金 盏 精,, 葉 綠 UV 利 oxybenzone,octyl 離 methoxycinnamate,octocrylene,titanium dioxide 論 1. 料 料 數 不 料 都 料 不 料 料 料 力 力 料 料 金 料 立 16

24 2. Cosmeceutical cosmeceutical 療 不 年 來 cosmeceutical 類 例 龍 老 料 類 老 A 年 peptide 老 料 例 Argireline 六 (hexapeptide) 利 女 福 3. 料 行 例 麗 (Kanebo) Sensai( ) 列 La Mer 拉 黎 (Sisley) 列 精 17

25 嘉 南 藥 理 科 技 大 學 專 題 研 究 計 畫 成 果 報 告 計 畫 編 號 :CNIC 計 畫 名 稱 : 化 粧 品 抗 老 化 成 分 檢 測 方 法 的 改 進 研 究 執 行 期 間 :94 年 1 月 1 日 至 94 年 12 月 31 日 整 合 型 計 畫 個 別 型 計 畫 計 畫 總 主 持 人 : 楊 朝 成 計 畫 主 持 人 : 子 計 畫 主 持 人 : 洪 偉 章 中 華 民 國 94 年 12 月 31 日

26 一 摘 要 : 皮 膚 的 老 化 具 有 許 多 成 因, 其 中 一 個 廣 泛 引 起 重 視 的 成 因 為 自 由 基 的 形 成 因 此 化 粧 品 之 抗 老 化 成 分 的 研 發 即 有 許 多 學 者 致 力 於 尋 找 具 有 清 除 自 由 基 能 力 的 成 分 清 除 自 由 基 能 力 的 測 定 方 法 主 要 為 分 光 光 度 法 與 化 學 冷 光 發 光 法, 這 些 方 法 受 溶 液 ph 值 的 影 響 頗 大, 有 學 者 提 出 ph 值 相 差 0.1 單 位, 測 定 時 誤 差 可 達 20%; 因 此 尋 找 一 個 較 不 易 受 外 在 因 素 影 響 的 測 定 方 法 就 頗 為 重 要 本 研 究 計 畫 以 自 由 基 的 特 性 為 測 定 方 法 改 良 的 考 慮 藍 本, 利 用 電 化 學 偵 測 的 技 術, 探 討 化 粧 品 之 成 分 的 自 由 基 清 除 效 果, 期 望 能 提 供 化 粧 品 抗 老 成 分 之 研 發 時, 一 個 簡 便 快 速 靈 敏 且 省 試 劑 之 一 個 新 的 偵 測 方 法 二 前 言 : 許 多 證 據 顯 示 氧 化 壓 力 (oxidative stress) 與 自 由 基 的 形 成 抗 氧 化 劑 之 不 足 與 組 織 的 損 傷 有 關 這 些 氧 化 壓 力 會 以 不 同 的 形 式 表 現 出 來 如 脂 質 (lipid) 的 氧 化 會 造 成 香 味 與 顏 色 的 改 變 在 人 體 上 表 現 出 來 的 主 要 就 是 老 化 現 象, 而 最 明 顯 可 觀 察 到 的 就 是 皮 膚 外 觀 的 改 變 因 此 過 去 的 十 年 內, 有 許 多 研 究 就 致 力 於 測 定 物 質 的 抗 氧 化 能 力 在 這 些 研 究 中 主 要 是 利 用 發 色 體 (chromogen) 化 合 物 與 抗 氧 化 劑 之 間 的 反 應 反 應 後, 再 以 光 譜 法 或 比 色 法 測 定 發 色 體 化 合 物 的 殘 餘 濃 度 1-3 最 常 用 的 發 色 體 化 合 物 包 括 2,2 -azino-bis(3-ethylbenzthiazoline)-6-sulfonic acid(abts) 與 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl(DPPH), 因 為 他 們 可 與 抗 氧 化 化 合 物 快 速 的 反 應

27 本 研 究 計 畫 以 電 化 學 偵 測 的 技 術 探 討 抗 氧 化 的 特 性, 將 來 進 一 步 考 慮 利 用 自 由 基 的 特 性 改 良 測 定 方 法, 則 可 探 討 化 粧 品 之 成 分 的 自 由 基 清 除 效 果, 提 供 化 粧 品 抗 老 成 分 之 研 發 時, 一 個 簡 便 快 速 靈 敏 且 省 試 劑 之 新 的 偵 測 方 法 三 材 料 與 方 法 : 3.1 實 驗 用 品 儀 器 : 恆 電 位 儀 材 料 : 白 金 電 極 銀 - 氯 化 銀 電 極 吸 油 面 紙 藥 品 : 水 Ascorbic Acid Phosphate buffer 與 Potassium Chloride 3.2 循 環 伏 安 圖 之 測 量 : 將 待 測 物 以 磷 酸 緩 衝 液 溶 液 配 製 成 待 測 溶 液, 置 於 電 化 學 測 量 反 應 器 中, 以 白 金 電 極 靜 置 待 其 平 衡 後, 以 白 金 電 極 為 工 作 電 極 與 輔 助 電 極 ; 銀 - 氯 化 銀 電 極 為 參 考 電 極 以 循 環 伏 安 法 控 制 電 位 測 量 待 測 溶 液 的 循 環 伏 安 圖 四 結 果 與 討 論 : 在 循 環 伏 安 圖 a 中 4, 酒 精 溶 性 的 抗 氧 化 物 (1 mm)(1) quercetin, (3) curcumin,

28 (4) sinapic acid 與 (5) ferulic acid 的 氧 化 峰 分 別 出 現 於 153 mv, 334 mv, 335 mv 與 491 mv, 同 時 沒 有 可 逆 的 還 原 峰 ;(2) catechin 在 循 環 伏 安 圖 中 之 氧 化 峰 則 沒 有 明 確 的 最 大 值 水 溶 性 抗 氧 化 物 的 循 環 伏 安 圖 b 中,(8) ascorbic acid, (9) uric acid and (10) gallic acid 分 別 於 238, 350 and 400 mv 出 現 不 可 逆 的 氧 化 峰 (7) N-acetyl-lcysteine 的 循 環 伏 安 圖 則 沒 有 明 確 的 氧 化 峰 在 觀 測 的 電 位 範 圍 內, 背 景 電 流 是 可 以 被 忽 略 的 (6) 此 研 究 中 對 皮 膚 表 面 的 狀 態 亦 利 用 吸 油 面 紙 配 合 循 環 伏 安 法 進 行 偵 測, 所 得 到 的 循 環 伏 安 圖 如 下 圖 所 示 若 將 此 方 法 與 抗 老 化 化 粧 品 之 使 用 結 合, 對 於 抗 老 化 化 粧 品 實 際 的 使 用 功 效 將 會 有 更 明 確 的 驗 證 若 以 DPPH 的 偵 測 來 進 一 步 佐 証 化 粧 品 抗 老 成 分 之 自 由 基 清 除 效 果, 此 研 究 將 更 完 備 Current (A) Potential (mv) 五 參 考 文 獻 : 1. I.F.F. Benzie and J.J. Strain, Methods Enzymol., 299, 15-27, C. Rice-Evens and N.J. Miller, Methods Enzymol., 234, , N.J. Miller, C. Rice-Evens, M.G. Davies, V. Gopinathan and A. Milner, Clin. Sci., 84, , S. Milardović, D. Ivekovic and B. S. Grabarić, Bioelectrochemistry, 68, 180-5, 2005.

29 理 CNIC 落 行 94 年 年 林 年

30 落 來 年 來 數 量 落 年 不 理 理 年 來 狀 療 來 不 良 例 年 B6CB/F1 切 度 立 更 了 了 葉 理 落 了 力 便 度 行 易 了 易

31 易 說 度 行 度 更 說 狀 數 量 狀 更 α α 若 α 度 狀 料 ( ) DNA 來 Russell DW. pcmv7-5αr 類 α 切 讀 列 ( ) 來 ( 糖 )( ) 葉 行 % 65 ( )

32 5 HEK293 6 well plate cells/well 37 5% CO 2 24 Lipofetamine 2000 (transfection) pflag-cmv2-5αr2 24 (1ml/well) ( 列 ) µl/well 1.6ml 數 30µl 5µl TLC plate(si60 F 254, Merk), ( 六 = 1 1) photoimage B H H-F H-R G SI SA 0.05µCi 14 C-testosterone 0.05µCi 14 C-testosterone 0.05µCi 14 C-testosterone 0.05µCi 14 C-testosterone 0.05µCi 14 C-testosterone + 50 µm genistein 0.05µCi 14 C-testosterone + 50 µm ( ) 0.05µCi 14 C-testosterone + 50 µm () 0.05µCi 14 C-testosterone + 50 µm 0.05µCi 14 C-testosterone + 20 µm 葉 n=2 SI SA compound 量 1000 不 行 (B) HEK293 力 (H) HEK293 了 5α-HEK293 力

33 (H-R) DHT T B1 B2 H1 H2 H-F1 H-F2 H-R1 H-R2 G1 G2 SI1 SI2 SA1 SA B without cell G genestein 葉 H only HEK293 SI( ) N=2 H-F HEK293-Flag SA() H-R HEK293-Flag-5aR2 了 () 葉 量 (H-R) α 了 更 來 α 不 來 不 不

34 理 CNIC 料 行 94 年 年 林 95 年 02 27

35 女 了 力 vitamin C, hydroquinone, arbutin, kojic acid 酪 了 (Glycyrrhiza glabra)(morus alba) 酪 類 酪 in vitro B16 melanoma 行 KANG TAE LEE 2003 年 料 70% EtOH 1,3 butylene glycol 行 論 70% 精 酪 B-16 量 B-16-1-

36 酪 70 精 UVB 刺 不 良 離 2'-oxyresveratrol 2,3',4,5'-tetrahydroxystilbene I. 精 1. 切 ml 3 3. refluxing 4. 濾

37 II. 酪 1. 量 精 70 units mushroom tyrosinase 0.5 ml L-tyrosine (0.1 mg/ml) 利 度 量 475 nm 100 酪 3. 酪 4. 酪 IC50 1. mouse melanoma B16 2. 精 料 3. (1 % Triton-X/PBS) mm L-DOPA 37 o C, 度 量 475 nm 酪 -3-

38 80% 精 B-16 不 度 PBS-L-tyrosine 80% 精 B-16 PBS-L-tyrosine 量 論 80% 精 粒 酪 粒 stage 不 不 粒 不 粒 酪 不 降 留 B-16 冷 pipet 粒 酪 PBS-L-tyrosine 酪 量 酪 量 量 B-16-4-

39 不 度 PBS-L-tyrosine 論 B-16 B-16 粒 酪 來 粒 離 來 粒 酪 粒 粒 來 stage 粒 酪 降 降 不 力 酪 PBS-L-tyrosine -5-

40 論 80% 精 酪 率 B-16 率 都 度 dose-dependent 了 酪 DOPA 酪 力 了 80% 精 酪 IC µg ml 80% 精 了 B-16 粒 酪 酪 粒 酪 B-16 量 80% 精 了 粒 酪 粒 stage 不 了 B-16 粒 酪 降 -6-

41 六 參 1. Bernard P, Berthon J-Y. Resveratrol: an original mechanism on tyrosinase inhibition. International Journal of Cosmetic Sciences Burchill S A, Bennett D C, Holmes A, Thody A J. Tyrosinase expression and melanogenesis in melanotic and amelanotic B16 mouse melanoma cells. Pathobiology Cabanes J, Chazarra S, Garcia-Carmona F. Kojic acid, A cosmetic skin whitening agent, is a slow-binding inhibitor of catecholase activity of tyrosinase. Journal of Pharmacy and Pharmacology / Janis Ancans, Desmond J Tobin, Martin J Hoogduijn, Nico P Smit, Kazumasa Wakamatsu, Anthony J Thody. Melanosomal ph Controls Rate of Melanogenesis, Eumelanin/Phaeomelanin Ratio and Melanosome Maturation in Melanocytes and Melanoma Cells. Experimental Cell Research Kaatz, H, Streffer K, Wollenberger U,Peter M G. Inhibition of mushroom tyrosinase by kojic acid octanoates. Journal of Biosciences (1-/2) KANG TAE Lee, KWANG SIK Lee, JI HEAN JEONG, BYOUNG KEE JO, MOON YOUNG HEO, HYUN PYO KIM. Inhibitory Effects of Ramulus Mori extracts on Melanogenesis. J. Cosmet. Sci Kenji Ohguchi, Toshiyuki Tanaka, Tadashi Kido, et.al. Effects of hydroxystilbene derivatives on tyrosinase activity. Biochemical and Biophysical Research Communications Maeda K, Fukuda M. Arbutin: mechanism of its depigmenting action in human melanocyte culture. Journal of Pharmacology -7-

42 and Experimental Therapeutics N Baurin, E Arnoult, T Scior, Q T Do, P Bernard. Preliminary screening of some tropical plants for anti-tyrosinase activity. Journal of Ethnopharmacology Nam-Ho Shin, Shi Yong Ryu, Eun Ju Choi, et.al. Oxyresveratrol as the potent inhibitor on dopa oxidase activity of mushroom tyrosinase. Biochemical and Biophysical Research Communications No J K, Soung D Y, Kim Y J, et.al. Inhibition of tyrosinase by green tea components. Life Sciences / Yeon Mi Kim, Jieun Yun, Chong-Kil Lee, Hwanghee Lee, Kyung Rak Min, Youngsoo Kim. Oxyresveratrol and Hydroxystilbene Compounds INHIBITORY EFFECT ON TYROSINASE AND MECHANISM OF ACTION. The Journal of Biological chemistry

43 理 CNIC94-02( 6) ( ) 行 94 年 年 12 31

44 ( ) 理 COC CPE CB 類 料 例 Abstract The applications of liquid crystal on the Cosmetic products are attracting us recently. In order to understand how is the radio of the molecules mixed together would be keeping in liquid crystal state at Room temperature. Here we used three cholesterol derivatives such as COC CPE CB. We got some data. In my opinion, they are very important for us to prepare the Cosmetics including liquid crystal molecules. And in the future we want to know what the contribution of the epidermal transportation would be happened while the Cosmetics products have been used. 類 列 (nematic) (cholesteric) 列 (smectic) 狀 LCD 領 類 度

45 螺 若 度 降 螺 藍 不 類 類 例 不 不 度 不 不 度 不 類 類 例 不 不 狀 COC CPE CB 類 料 Aderich R 理 類 料 例 精 Pylax (φ5cm 5cm) 30 ~40 1 度 10 錄 度 錄 錄 COC CPE CB 藍 藍 綠 藍 藍 COC CPE CB

46 藍 綠 綠 藍 藍 綠 藍 藍 藍 綠 藍 藍 藍 藍 藍 藍 藍 藍 藍 藍 藍 藍 藍 藍 藍 藍 藍 綠 藍 COC CPE CB

47 ( ) 度 例 行 參 料

48 1. Julia J. Hwang, Subramani N. Iyer, Li-Sheng Li, Randal Claussen, Daniel A. Harrington, and Samuel I. Stupp Natl Acad Sci U S A. 2002, 23; 99 (15): T. M. Koyama, C. R. Stevens, E. J. Borda, K. J. Grobe, and D. A. Cleary* Chem. Educator 1999, 4, Roux; Didier (Merignac, FR); Degert; Corinne (St. Medard en Jalles, FR); Laversanne; Rene (Pessac, FR) United States Patent: 6,103,

49 嘉 南 藥 理 科 技 大 學 專 題 研 究 計 畫 成 果 報 告 計 畫 編 號 :CNIC 計 畫 名 稱 : 化 粧 品 活 性 成 分 經 皮 吸 收 檢 測 系 統 的 改 進 研 究 執 行 期 間 :94 年 1 月 1 日 至 94 年 12 月 31 日 整 合 型 計 畫 個 別 型 計 畫 計 畫 總 主 持 人 : 楊 朝 成 計 畫 主 持 人 : 子 計 畫 主 持 人 : 李 淵 博 中 華 民 國 94 年 12 月 31 日

50 一 摘 要 : 化 粧 品 之 活 性 成 分 的 經 皮 吸 收 效 果 對 於 化 粧 品 的 有 效 性 具 有 絕 對 的 關 連, 以 往 有 關 於 經 皮 吸 收 的 研 究 多 集 中 於 藥 物 方 面, 而 關 於 化 粧 品 方 面 仍 屬 少 見 在 方 法 上 以 使 用 Franz Cell 與 塗 抹 後 直 接 取 皮 並 配 合 HPLC 分 析 為 最 常 見 化 粧 品 的 成 分 通 常 較 藥 物 更 為 複 雜, 同 時 若 非 活 體 測 試, 經 皮 吸 收 的 狀 態 就 必 須 考 慮 如 何 能 夠 更 接 近 活 體 的 狀 態 本 研 究 計 畫 以 Franz Cell 為 改 良 的 藍 本, 期 望 能 提 供 化 粧 品 經 皮 吸 收 研 究 的 一 大 突 破 二 前 言 : 化 粧 品 使 用 的 效 果 常 受 到 有 效 成 分 與 基 劑 的 物 化 特 性 劑 型 濃 度 使 用 方 法 用 量 作 用 部 位, 接 觸 面 積 使 用 持 續 時 間 經 皮 吸 收 助 劑 之 性 質 以 及 身 體 狀 況 等 因 素 影 響 化 粧 品 之 活 性 成 分 的 經 皮 吸 收 效 果 多 年 來 一 直 是 化 粧 品 有 效 性 評 估 之 不 可 或 缺 的 重 要 因 素 之 ㄧ; 化 粧 品 之 有 效 成 分 穿 透 皮 膚 進 入 皮 下 組 織 的 途 徑 有 通 過 細 胞 間 隙 穿 透 及 經 附 屬 器 官 包 括 毛 囊 皮 脂 腺 汗 腺 的 通 道 當 前 對 於 小 分 子 經 皮 吸 收 已 形 成 共 識, 但 對 大 分 子 物 質 的 經 皮 吸 收 的 可 能 性, 人 們 的 認 識 還 很 不 一 致 近 年 來 國 內 外 許 多 研 究 證 明, 大 分 子 有 效 物 質 單 一 使 用 確 實 存 在 有 經 皮 吸 收 速 度 慢 或 不 易 透 過 等 問 題, 但 若 經 由 脂 質 體 改 變 其 脂 溶 性 或 在 相 應 經 皮 吸 收 助 劑 的 輔 助 下, 即 能 有 效 克 服 皮 膚 角 質 層 中 角 蛋 白 絲 和 脂 質 的 屏 障, 使 更 多 的 成 分 滲 入 其 皮 層, 達 到 有 效 的 局 部 濃 度 以 往 有 關 於 經 皮 吸 收 的 研 究 多 集 中 於 藥 物 方 面, 而 關 於 化 粧 品 方 面 仍 屬 少 見 而 在 方 法 上 則 以 使 用 Franz Cell 與 塗 抹 後 直 接 取 皮 並 配 合 HPLC 分 析 為 最

51 常 見 化 粧 品 的 成 分 通 常 較 藥 物 更 為 複 雜, 要 了 解 其 經 皮 吸 收 的 狀 態 就 必 須 考 慮 如 何 能 夠 更 接 近 活 體 的 狀 態 尤 其 是 化 粧 品 中 的 活 性 成 分, 隨 著 作 用 之 不 同, 其 在 皮 膚 的 穿 透 狀 態 近 年 來 更 是 引 起 重 要 關 切 與 討 論 以 防 曬 劑 為 例, 其 應 附 著 於 皮 膚 表 面 形 成 保 護 層 防 止 紫 外 線 的 傷 害 設 計 的 防 曬 劑 重 要 原 則 就 是 其 對 角 質 層 必 須 要 有 極 佳 的 親 合 力, 能 留 在 皮 膚 的 最 表 層 1,2, 而 穿 透 皮 膚 的 量 要 低 2,3 而 抗 老 化 化 粧 品 之 有 效 成 分 必 須 能 有 效 克 服 皮 膚 角 質 層 中 角 蛋 白 絲 和 脂 質 的 屏 障, 使 更 多 的 成 分 滲 入 其 皮 下 組 織, 達 到 有 效 的 局 部 濃 度 4 本 研 究 計 畫 以 電 化 學 偵 測 的 技 術 取 代 HPLC 的 偵 測 方 式, 提 供 化 粧 品 有 效 成 分 經 皮 吸 收 之 測 定 時, 一 個 簡 便 快 速 靈 敏 且 省 試 劑 之 線 上 偵 測 方 法 三 實 驗 方 法 : 3.1 實 驗 用 品 儀 器 : 恆 電 位 儀 材 料 : 白 金 電 極 銀 - 氯 化 銀 電 極 藥 品 : 水 Ascorbic Acid Phosphate buffer 與 Potassium Chloride 3.2 Franz Cell 之 改 良 設 計 四 結 果 與 討 論 : 利 用 Franz Cell 進 行 經 皮 吸 收 測 定 早 期 以 靜 態 槽 為 主, 如 右 圖 所 示 5 待 測 樣 品 置 於 Donor Chamber, 視 其 穿 透 Membrane 或 皮 膚 ( 鼠 皮 兔 皮 豬 皮 或 人 皮 等 ) 的 情 形, 於 Receptor Chamber 中, 可 穿 透 Membrane 或 皮 膚 的 濃 度 會 逐 漸 增 加,

52 經 由 Sampling Port 定 時 取 樣 以 HPLC 分 析 其 濃 度, 以 確 定 化 粧 品 有 效 成 分 經 皮 吸 收 之 情 形 其 最 大 的 缺 點 在 於 人 體 經 皮 吸 收 之 情 形, 成 分 會 受 到 皮 膚 血 流 的 影 響, 濃 度 的 增 加 應 不 會 如 利 用 靜 態 Franz Cell 所 測 得 的 結 果 因 此,Franz Cell 的 設 計 就 有 動 態 槽 ( 右 上 圖 ) 與 可 與 HPLC 串 接 的 線 上 偵 測 槽 ( 右 圖 ) 本 研 究 中 綜 合 經 皮 吸 收 時 可 能 的 影 響 因 素, 將 Franz Cell 改 為 以 電 化 學 方 式 偵 測, 並 以 流 動 槽 模 擬 皮 下 血 流 使 其 更 接 近 活 體 的 狀 態 ( 如 下 圖 所 示 ) 未 來 將 以 此 測 定 槽 進 行 化 粧 品 有 效 成 分 的 經 皮 吸 收 研 究 五 參 考 文 獻 : 1. Z. Lu, J. Bei and S. Wang, J. Control. Release, 61, , R. Jiang, M.S. Robert, R.J. Prankerd and H.A. Benson, J. Pharm. Sci., 86, 791-6, V.K. Gupta, J.L. Zata and M. Rerek, Pharm. Res, 16, ,