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1 海 外 检 验 医 学 114 年 月 第 卷 第 期 5>! )!*! "#5 * 114,%(?( 4 论 著 利 用 固 相 萃 取 及 超 高 效 ) 0" 3" 技 术 同 步 筛 查 和 定 量 分 析 唾 液 中 4 种 毒 品 4!" # $ "% &' (&)*) 5 5 5! " # $ % 55 背 景 5 欧 洲 '67 毒 品 酒 精 和 药 物 影 响 下 驾 驶 项 目 要 求 分 析 丹 麦 年 度 从 路 边 随 机 和 匿 名 驾 驶 者 中 收 集 的 唾 液 样 本 为 了 分 析 这 些 样 本 我 们 建 立 了 一 种 超 高 效 液 相 色 谱 8 串 联 质 谱 '9) 0" 3" 的 方 法 用 于 检 测 唾 液 中 4 种 药 物 和 违 禁 化 合 物 检 测 出 的 药 物 有 阿 片 类 药 物 安 非 他 明 可 卡 因 苯 二 氮 类 和 040 四 氢 大 麻 酚 方 法 5 固 相 萃 取 由 :% +9 ;) 系 统 配 备 # %$ 柱 完 成 唾 液 样 本 11 用 % 醋 酸 铵 3 甲 醇,3,41 1 缓 冲 液 稀 释 后 上 柱 然 后 用 / % 乙 腈 和 氢 氧 化 铵 水 溶 液 洗 脱 分 离 得 到 的 药 物 利 用! + '7 '9) 系 统 并 配 备! $! 9 ; 三 重 串 联 四 极 杆 液 质 连 用 仪 质 谱 正 电 喷 雾 离 子 化 模 式 多 反 应 监 控 模 式 定 量 结 果 5 所 有 分 析 物 的 提 取 回 收 率 是 / < 包 括 040 四 氢 大 麻 醇 苯 酰 芽 子 碱 所 有 分 析 物 检 测 限 是 1( 3 总 不 精 确 度 &' 是 (4 <4( 由 于 对 大 多 数 化 合 物 使 用 氘 代 同 位 素 内 标 因 此 这 种 方 法 不 受 基 质 效 应 的 影 响 从 公 路 边 采 集 的 唾 液 样 本 初 步 分 析 显 示 存 在 安 非 他 明 可 卡 因 可 待 因 040 四 氢 大 麻 酚 曲 马 多 和 佐 匹 克 隆 结 论 5'9) 0" 3" 的 方 法 使 得 在 同 一 个 层 析 柱 中 内 检 测 出 4 种 药 物 成 为 可 能 包 括 040 四 氢 大 麻 酚 和 苯 甲 酰 芽 子 碱 这 两 个 物 质 的 有 效 分 析 在 此 前 的 多 成 分 分 析 中 难 以 实 现 55 近 来 唾 液 成 为 毒 品 检 测 的 标 本 特 别 是 在 工 作 场 所 中 检 测 以 及 被 怀 疑 服 用 毒 品 后 驾 驶 的 个 人 检 测 唾 液 中 的 毒 品 可 在 服 用 后 短 时 间 内 一 般 < 被 检 测 出 来 因 此 唾 液 适 合 检 测 短 期 内 是 否 使 用 过 毒 品 例 如 路 边 检 测 相 比 血 液 标 本 使 用 唾 液 标 本 的 最 大 优 势 是 非 创 伤 性 收 集 和 非 医 疗 人 员 收 集 并 且 唾 液 可 在 直 接 观 察 下 收 集 标! "#!$% &!% '!!!!%'! () *! ( +## #!$!! "#!$%&!% '! #,-. /( 0 11! (! 0 / / 0 1 0!%!(%2 ( $(# ( 本 不 易 被 替 换 或 掺 假 唾 液 由 特 定 腺 体 分 泌 其 中 4 是 水 分 以 及 痕 量 的 蛋 白 质 正 常 情 况 下 存 在 于 血 浆 和 电 解 质 组 成 唾 液 的 & 值 一 般 为 (= 范 围 ( <=(4 唾 液 的 & 值 能 够 影 响 药 物 浓 度 最 近 $ / 就 对 几 项 研 究 唾 液 中 药 物 检 测 的 研 究 进 行 了 综 述 这 些 研 究 主 要 集 中 在 检 测 安 非 他 明 大 麻 可 卡 因 和 鸦 片 剂 几 种 毒 品 由 于 可 用 于 药 物 分 析 的 唾 液 量 有 限 因 此 拥 有 低 检 测 下 限 的 多 成 分 分 析 方 法 就 显 得 十 分 关 键 / :$! 等 已 报 道 了 一 种 使 用 : 0" 结 合 固 相 萃 取 与 衍 生 作 用 建 立 的 多 成 分 分 析 方 法 近 些 年 液 相 色 谱 0 串 联 质 谱 ) 0" 3" 因 其 样 品 前 处 理 相 对 较 易 及 分 析 样 品 需 时 较 短 的 优 点 已 经 广 泛 应 用 于 0 法 医 毒 理 学 # 和 " 等 建 立 了 一 种 多

2 =1 海 外 检 验 医 学 114 年 月 第 卷 第 期 5>! )!*! "#5 * 114,%(?( 成 分 分 析 方 法 用 于 检 测 唾 液 中 的 药 品 滥 用 情 况 但 用 这 种 方 法 既 不 能 检 出 040 四 氢 大 麻 酚 & 也 = 不 能 检 出 苯 甲 酰 芽 子 等 报 道 了 一 种 多 成 分 分 析 方 法 利 用 液 0 液 萃 取 能 够 检 测 & 和 几 种 苯 二 氮 类 药 物 但 是 这 种 方 法 对 于 苯 甲 酰 芽 子 碱 的 回 收 率 非 常 低 1( <1(/ 最 近 等 人 报 道 运 用 9 的 方 法 同 时 检 测 & 和 苯 二 氮 类 药 物 但 这 种 方 法 的 回 收 率 较 低 =( 为 了 评 估 欧 洲 国 家 驾 车 者 服 用 精 神 类 药 物 的 流 行 程 度 欧 盟 委 员 会 最 近 启 动 了 6'7 服 用 毒 品 酒 精 和 药 物 后 驾 驶 项 目 4 作 为 6'7 协 会 的 参 与 者 我 们 建 立 了 一 种 多 成 分 分 析 方 法 用 于 唾 液 检 测 这 种 使 用 9 和 超 高 效 ) 0" 3" '9) 0 " 3" 联 用 的 方 法 能 够 有 效 地 筛 查 和 定 量 6'7 项 目 中 的 4 种 毒 品 3 违 禁 化 合 物 其 中 种 化 合 物 是 所 有 项 目 参 与 国 都 检 测 的 项 目 其 他 = 种 仅 丹 麦 检 测 材 料 与 方 法 一 化 学 品 和 试 剂 以 下 化 合 物 均 从 ) # : *& 公 司 购 买 吗 啡 安 非 他 明 脱 氧 麻 黄 碱 / 0 亚 甲 基 二 氧 安 非 他 明 "+ / 0 亚 甲 基 二 氧 甲 基 安 非 他 明 ""+ 可 待 因 0 乙 酰 吗 啡 美 沙 酮 可 卡 因 苯 甲 酰 芽 子 碱?0 甲 基 二 乙 醇 胺 " + 去 甲 基 安 定 =0 氨 基 硝 西 泮 =0 氨 基 氯 硝 西 泮 =0 氨 基 氟 硝 西 泮 甲 氨 二 氮 卓 劳 拉 西 泮 佐 匹 克 隆 丁 丙 诺 啡 =0 氨 基 氟 硝 西 泮 0# / 氟 硝 西 泮 0# / 溴 西 泮 氟 硝 西 泮 和 氯 硝 西 泮 购 自 6 +3 公 司 奥 沙 西 泮 安 定 购 自 $!! "#!%9 #$ 公 司 以 下 试 剂 从 %! 公 司 购 得 & & 0# / 安 非 他 明 0# 脱 氧 麻 黄 碱 0# " +0# ""+0# "+0# 美 沙 酮 0# / 可 卡 因 0# / 苯 甲 酰 芽 子 碱 0# 吗 啡 0# 0 乙 酰 吗 啡 0# 可 待 因 0# 曲 马 多 0# / 唑 吡 坦 0# 安 定 0 # 去 甲 基 安 定 0# 硝 西 泮 0# 奥 沙 西 泮 0# 阿 普 唑 仑 0# 氯 硝 西 泮 0# =0 氨 基 氯 硝 西 泮 0# 丁 丙 诺 啡 0# 曲 马 多 和 硝 西 泮 购 自? #!! +3 公 司 唑 吡 坦 购 自 公 司 阿 普 唑 仑 购 自 9A + 公 司 佐 匹 克 隆 0# 购 自 6!!% 公 司 所 有 对 照 品 纯 度 均 4 除 丁 丙 诺 啡 0# 为 4= ) 0" 级 甲 醇 和 乙 腈 从 公 司 购 买 醋 酸 铵 和 氢 氧 化 铵 水 溶 液 从 " 公 司 购 买 纯 水 由 "%0 纯 水 仪 "% 公 司 制 备 用 于 流 动 相 样 品 提 取 物 再 溶 解 %3) & ( 样 品 前 处 理 1( %3) & ( 的 醋 酸 铵 缓 冲 液 每 月 配 置 并 储 存 于 B 这 两 种 缓 冲 液 用 盐 酸 调 至 最 终 & 值 并 用 1( 的 $! 膜 "% 公 司 过 滤 备 用 用 于 液 相 色 谱 的 流 动 相 缓 冲 液 每 周 更 换 空 白 对 照 唾 液 由 1 个 未 服 用 药 物 的 受 试 者 的 唾 液 制 备 而 得 这 些 受 试 者 自 愿 并 知 情 同 意 受 试 唾 液 样 品 离 心 收 集 上 清 并 储 存 于 8 1 B 备 用 二 唾 液 样 品 空 白 对 照 唾 液 精 确 称 取 11 和 由 唾 液 采 集 器!$! 公 司 收 集 的 唾 液 用 于 本 次 研 究 在 唾 液 收 集 器 中 称 取 不 定 量 唾 液 /11 < 11 用 固 定 体 积 % 的 缓 冲 液 稀 释 在 定 量 了 1 个 唾 液 采 集 池 此 样 品 池 似 应 为 加 入 11 空 白 对 照 唾 液 的 采 集 池 的 基 础 上 我 们 发 现 平 均 的 缓 冲 液 含 量 相 当 于 1 1 C 唾 液 样 品 的 质 量 可 通 过 称 量 加 入 唾 液 样 品 的 样 品 池 再 减 去 样 品 池 的 平 均 质 量 获 得 称 量 A 单 个 样 品 质 量 D 用 于 11 唾 液 提 取 的 缓 冲 液 质 量 使 用 公 式 A C D E 11 可 对 准 确 称 量 的 样 品 唾 液 D 缓 冲 液 质 量 进 行 校 正 因 而 单 个 样 品 中 相 当 于 11 空 白 唾 液 的 样 品 可 被 定 量 的 最 小 值 为 11 因 此 可 完 成 平 行 测 定 部 分 样 品 使 用 人 工 唾 液 >! %!! 公 司 三 制 备 标 准 品 溶 液 所 有 标 准 品 化 合 物 和 氘 化 类 似 物 都 以 甲 醇 或 乙 腈 为 溶 剂 配 制 成 11 3) 或 111 3) 的 储 备 液 分 装 于 8 1 B 保 存 以 甲 醇 为 溶 剂 的 两 种 主 要 工 作 溶 液 包 含 所 有 化 合 物 除 了 & 和 佐 匹 克 隆 因 为 稳 定 性 原 因 分 别 用 甲 醇 和 乙 腈 溶 解 浓 度 为 1 3) 每 月 配 置 并 以 % 的 体 积 分 装 储 存 于 8 1 B 测 试 当 天 含 有 4 种 化 合 物 的 标 准 品 溶 液 由 1 3) 的 工 作 溶 液 用 甲 醇 进 一 步 稀 释 而 成 在 11 的 唾 液 中 添 加 1 % 标 准 品 溶 液 最 后 形 成 1( (11(111 3 的 校 正 品 标 准 品 在 提 取 前 与 11% 的!$ 缓 冲 液 混 合 两 种 初 始 内 标 7 储 存 溶 液 + 3) 每 月 用 甲 醇 配 制 溶 液 + 氘 化 内 标 奥 沙 西 泮 安 非 他 明 可 待 因 可 卡 因 苯 甲 酰 芽 子 碱 0 乙 酰 吗 啡 美 沙 酮 脱 氧 麻 黄 碱 安 定 "+ 唑 吡 坦 ""+ 曲 马 多 和 " + 溶 液 =0 氨 基 氟 硝 西 泮 =0 氨 基 硝 西 泮 阿 普 唑 仑 氯 硝 西 泮 =0 氨 基 氯 硝 西 泮 氟 硝 西

3 海 外 检 验 医 学 114 年 月 第 卷 第 期 5>! )!*! "#5 * 114,%(?( = 泮 丁 丙 诺 啡 去 甲 基 安 定 硝 西 泮 为 了 便 于 操 作 吗 啡 3) & 1 3) 和 佐 匹 克 隆 3) 的 氘 化 内 标 分 开 储 存 内 标 储 存 溶 液 用 甲 醇 新 鲜 配 制 成 1 3) 或 (1 3) 的 稀 释 液 除 佐 匹 克 隆 用 乙 腈 稀 释 然 后 添 加 1 % 到 11 的 唾 液 中 作 为 内 标 每 种 化 合 物 的 内 标 浓 度 是 基 于 6'7 项 目 参 与 国 制 定 的 $0 浓 度 设 定 在 线 补 充 表 内 标 溶 液 用 于 所 有 确 认 实 验 标 准 品 质 控 品 和 测 试 标 本 质 控 品 由 空 白 对 照 唾 液 和 所 有 待 测 成 分 配 制 而 成 并 储 存 于 8 1 B 标 准 品 由 空 白 对 照 唾 液 添 加 各 种 待 测 成 分 的 甲 醇 或 乙 腈 储 存 液 制 备 而 成 用 于 标 准 品 和 质 控 品 的 空 白 唾 液 样 品 来 源 于 出 于 自 愿 并 知 情 同 意 的 实 验 室 人 员 四 色 谱 条 件 应 用! 公 司 的 + '7 超 高 效 液 相 色 谱 和 + $'9) & / 层 析 柱 11 E ( ( 柱 温 / B 流 速 1( %3 流 动 相 由 溶 液 + %3) 醋 酸 铵 & ( 和 溶 液 11 甲 醇 组 成 流 动 相 梯 度 见 表 进 样 量 为 1 % 55 五 质 谱 $! 9 ; 串 联 四 极 杆 质 谱 仪! 正 电 喷 雾 离 子 化 模 式 毛 细 管 电 压, 离 子 源 温 度 1 B 脱 溶 剂 气 体 温 度 11 B 锥 孔 气? 流 量 11 )3 雾 化 气? 流 量 11 )3 碰 撞 气 为 氩 气 压 力 ( E1 8/! 流 量 1( %3 标 准 品 用 醋 酸 铵 缓 冲 液 & ( 和 甲 醇,, 1 1 配 制 成 3) 溶 液 分 别 对 待 测 物 和 同 位 素 内 标 的 多 反 应 监 控 "6" 离 子 对 锥 孔 压 力 以 及 碰 撞 能 量 参 数 进 行 调 整 利 用 形 三 通 将 注 射 泵 偶 联 '9) 使 样 品 进 入 质 谱 '9) 传 递 流 速 为 1( %3 在 "6" 模 式 下 使 用 "! ) ( 软 件! 和 自 动 化 数 据 处 理 系 统 $!) 分 析 数 据 质 谱 通 过 "6" 通 道 离 子 对 的 比 值 和 保 留 时 间 识 别 待 测 物 比 值 区 间 设 定 为 1 当 比 值 低 于 1 时 设 为 /1 保 留 时 间 范 围 设 为 计 算 待 测 物 和 内 标 特 有 的 "6" 图 谱 的 曲 线 下 面 积 对 标 本 进 行 定 量 待 测 物 和 相 应 内 标 的 曲 线 下 面 积 的 比 值 与 标 准 品 曲 线 比 较 即 可 计 算 出 待 测 物 精 确 浓 度 用 于 每 种 分 析 品 的 内 标 保 留 时 间 和 "6" 离 子 对 见 表 六 样 品 制 备 :% 固 相 萃 取 仪 :% 公 司 配 备 # %$ 固 相 萃 取 柱 /1 / %,!! 公 司 萃 取 柱 事 先 用 % 甲 醇 和 % 纯 水 活 化 唾 液 样 品 11 加 入 1% 内 标 溶 液 用 % 醋 酸 铵 1( %3) & ( 3 甲 醇 缓 冲 液,,41 1 稀 释 并 以 %3 流 速 过 萃 取 柱 依 次 用 % 纯 水 和 % 纯 水 3 甲 醇,,4 洗 柱 洗 脱 液 由 4 % 乙 腈 和 % 氢 氧 化 铵 水 溶 液 氢 氧 化 铵 溶 于 11 水 混 合 而 成 用 ( % 洗 脱 液 洗 脱 两 次 收 集 于 管 中 间 不 干 柱 洗 脱 物 于 室 温 利 用 氮 气 挥 干 溶 剂 并 重 新 用 11 % 的 流 动 相 醋 酸 铵 缓 冲 液 %3) & ( 和 甲 醇,, 1 1 溶 解 七 材 料 与 方 法 确 认 ( 校 准 为 了 确 定 是 使 用 线 性 还 是 二 次 标 准 曲 线 实 验 取 4 个 标 准 品 点 / 个 平 行 标 准 品 浓 度 分 别 是 1 1( 1( (1 (1 (1 1(1 1(1 11(1 3 标 准 品 由 11 空 白 唾 液 最 多 1 % 标 准 品 储 备 液 和 1 % 内 标 溶 液 用 纯 水 稀 释 至 相 应 浓 度 ( 不 精 确 度 和 回 收 率 为 了 评 价 不 精 确 性 和 回 收 率 分 别 在 # 内 在 种 浓 度 下 进 行 个 平 行 待 测 品 检 测 浓 度 分 别 是 1( (11(111(1 3 标 准 品 均 在 测 试 前 新 鲜 配 制 11 空 白 唾 液 加 入 所 有 待 测 物 浓 度 分 别 为 1( (11(111(1 3 分 析 前 种 不 同 浓 度 的 样 品 由 空 白 唾 液 和 所 有 待 测 物 组 成 每 个 / % 第 天 分 析 时 从 种 浓 度 样 品 中 分 别 取 个 平 行 样 品 11 唾 液 总 共 个 样 品 以 及 标 准 品 分 别 加 入 1 % 内 标 溶 液 进 行 固 相 萃 取 第 天 重 复 回 收 率 为 测 量 浓 度 3 添

4 = 海 外 检 验 医 学 114 年 月 第 卷 第 期 5>! )!*! "#5 * 114,%(?( 加 浓 度 E11 不 精 确 度 由 当 天 样 品 的 不 精 确 度 决 定 长 期 总 的 不 精 确 度 由 个 月 以 上 对 照 测 量 值 每 次 分 析 的 一 个 低 值 对 照 和 一 个 高 值 对 照 决 定 /( 基 质 效 应 " 提 取 回 收 率 记 忆 效 应 和 离 子 抑 制 本 研 究 评 价 了 唾 液 峰 面 积 响 应 的 基 质 效 应 " 组 唾 液 样 品 每 组 个 其 中 个 来 源 于

5 海 外 检 验 医 学 114 年 月 第 卷 第 期 5>! )!*! "#5 * 114,%(?( =/ 个 不 同 未 服 用 毒 品 的 受 试 者 另 一 个 来 自 空 白 对 照 唾 液 每 个 样 品 都 进 行 固 相 萃 取 第 一 组 是 提 取 后 添 加 所 有 待 测 物 而 第 二 组 是 提 取 前 添 加 待 测 物 所 有 唾 液 样 品 中 的 待 测 物 终 浓 度 为 1(1 3 / 个 平 行 参 考 品 浓 度 1(1 3 溶 解 于 流 动 相 中 直 接 进 行 '9) 0" 3" 分 析 +

6 = 海 外 检 验 医 学 114 年 月 第 卷 第 期 5>! )!*! "#5 * 114,%(?( 通 过 计 算 绝 对 峰 面 积 计 算 出 每 种 分 析 物 的 " 值 本 研 究 中 用 以 下 公 式 计 算 " 值 " C E11 公 式 中 + 等 于 流 动 相 中 参 考 品 的 峰 面 积 等 于 空 白 唾 液 在 提 取 后 添 加 待 测 品 的 峰 面 积 " 值 大 于 1 表 明 离 子 化 抑 制 " 值 小 于 1 表 明 离 子 化 增 强 提 取 回 收 率 等 于 提 取 前 添 加 待 测 品 的 个 样 品 的 平 均 绝 对 峰 面 积 3 萃 取 后 添 加 待 测 品 的 个 样 品 的 平 均 绝 对 峰 面 积 记 忆 效 应 由 测 量 最 高 浓 度 的 标 准 品 之 后 空 白 样 品 的 峰 面 积 来 评 估 我 们 测 试 了 所 有 分 析 物 和 内 标 中 组 分 离 子 化 对 离 子 化 抑 制 和 增 强 的 影 响 待 测 物 和 内 标 选 择 最 多 种 化 合 物 混 合 连 续 注 入 质 谱 是 为 了 保 证 所 有 化 合 物 有 类 似 的 响 应 "D& D 不 小 于 / 3A 并 且 所 有 化 合 物 都 有 基 线 分 离 色 谱 为 了 每 种 待 测 物 在 两 个 "6" 通 道 都 产 生 持 续 增 加 的 响 应 利 用 注 射 泵 和 形 三 通 连 接 '9) 传 递 流 速 1( %3 将 化 合 物 提 取 后 1(1 3 醋 酸 铵 缓 冲 液 %3) & ( 和 甲 醇,, 1 1 以 流 速 %3 注 入 '9) 个 未 服 用 毒 品 的 自 愿 者 提 供 的 空 白 唾 液 样 品 提 取 后 自 动 进 样 1 % 观 察 到 基 线 响 应 有 轻 微 的 增 加 并 且 流 动 相 中 所 有 待 测 物 11 3) 分 别 从 自 动 加 样 器 中 进 样 同 时 伴 随 注 射 泵 进 样 我 们 分 析 了 待 测 物 单 独 进 样 用 于 评 价 共 洗 脱 的 待 测 物 可 能 出 现 的 增 加 或 抑 制 然 后 比 较 所 得 的 基 线 响 应 与 空 白 流 动 相 的 基 线 响 应 结 果 一 标 准 曲 线 我 们 分 析 了 纯 唾 液 在 线 补 充 表 以 及 唾 液 与!$ 缓 冲 液 混 合 物 表 / 的 待 测 物 3 内 标 峰 面 积 相 应 比 值 标 准 曲 线 既 符 合 线 性 也 符 合 二 次 回 归 曲 线 在 4 个 标 准 品 浓 度 点 进 行 / 次 平 行 实 验 相 关 系 数 1(441 1(4 1 拟 合 曲 线 偏 差 1 最 低 检 出 下 限 )% 使 用 纯 唾 液 制 备 的 标 准 品 时 所 有 待 测 物 的 加 权 线 性 回 归 拟 合 可 达 到 1(4 1 除 了 & 丁 丙 诺 啡 =0 氨 基 氯 硝 西 泮 氯 硝 西 泮 劳 拉 西 泮 0 乙 酰 吗 啡 以 及 可 待

7 海 外 检 验 医 学 114 年 月 第 卷 第 期 5>! )!*! "#5 * 114,%(?( =

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10 = 海 外 检 验 医 学 114 年 月 第 卷 第 期 5>! )!*! "#5 * 114,%(?(

11 海 外 检 验 医 学 114 年 月 第 卷 第 期 5>! )!*! "#5 * 114,%(?( =4 因 这 些 化 合 物 通 过 拟 合 加 权 二 阶 回 归 1(4 1 "! ) ( 软 件 在 线 补 充 图 纯 唾 液 中 待 测 物 的 标 准 品 浓 度 范 围 是 1( <11 3 除 了 可 卡 因 溴 西 泮 和 硝 西 泮 的 范 围 是 (1 <11 3 在 线 补 充 表 对 于 用 唾 液 与!$ 缓 冲 液 混 合 物 制 备 的 标 准 品 在 1( <11 3 范 围 内 所 有 化 合 物 均 能 达 到 线 性 表 / 最 高 标 准 品 浓 度 11 3 就 是 所 有 待 测 物 的 最 高 检 出 上 限 '% 所 有

12 1 海 外 检 验 医 学 114 年 月 第 卷 第 期 5>! )!*! "#5 * 114,%(?( 样 品 浓 度 超 过 '% 时 用 纯 水 稀 释 1 倍 D4 在 线 补 充 图 显 示 纯 唾 液 样 品 添 加 =(1 3 化 合 物 的 色 谱 图 '67 项 目 中 使 用!%!0! % 收 集 的 阳 性 唾 液 样 品 色 谱 图 见 图 二 检 出 限 不 精 确 度 和 回 收 率 )% 定 义 为 当 不 精 确 度 &' 1 偏 差 1 时 并 且 保 留 时 间 和 离 子 比 值 达 到 允 许 误 差 的 最 低 浓 度 0/ 对 于 纯 唾 液 样 品 所 有 分 析 物 的 )% 设 为 1( 3 除 了 可 卡 因 溴 西 泮 和 硝 西 泮 为 (1 3 在 线 补 充 表 对 于 唾 液 与!$ 缓 冲 液 混 合 物 样 品 所 有 分 析 物 的 )% 设 为 1( 3 表 / 有 些 分 析 物 可 能 会 有 更 低 的 )% 但 是 基 于 '67 项 目 的 $0 值 限 制 设 置 的 )% 是 足 够 低 的 &' 和 回 收 率 由 个 不 同 标 准 浓 度 的 分 析 结 果 计 算 包 括 )% 和 '% 以 及 个 中 间 浓 度 &' 和 偏 差 一 般 认 为 在 '% 的 和 )% 的 1 是 可 接 受 的 / 对 于 纯 唾 液 样 品 所 有 分 析 物 在 个 浓 度 均 达 到 精 确 度 标 准 除 了 可 待 因 它 在 (1 3 时 的 不 精 确 度 ( 轻 微 超 过 限 制 在 线 补 充 表 回 收 率 在 所 有 个 标 准 浓 度 都 没 有 明 显 差 异 结 果 令 人 满 意 除 了 溴 西 泮 和 劳 拉 西 泮 在 在 高 于 )% 时 偏 差 轻 微 高 于 分 别 为 =(4 和 8 (= 安 非 他 明 脱 氧 麻 黄 碱 和 ""+ 在 )% 时 偏 差 大 于 1 达 ( < ( 对 于 唾 液 与!$ 缓 冲 液 混 合 物 样 品 所 有 化 合 物 均 达 到 精 确 度 和 回 收 率 标 准 除 了 氟 硝 西 泮 在 1(1 3 时 偏 差 达 =( 三 基 质 效 应 离 子 抑 制 提 取 回 收 率 和 记 忆 效 应 纯 唾 液 样 品 和 唾 液 与!$ 缓 冲 液 混 合 物 样 品 的 基 质 效 应 以 百 分 数 列 于 在 线 补 充 表 和 表 / 中 纯 唾 液 样 品 分 析 物 的 基 质 效 应 在 / 以 内 唾 液 与!$ 缓 冲 液 混 合 物 样 品 的 基 质 效 应 在 /4 以 内 即 小 于 中 度 基 质 效 应 在 线 补 充 表 显 示 所 有 内 标 的 基 质 效 应 也 处 于 同 样 范 围 提 取 回 收 率 6 是 由 个 不 同 来 源 的 唾 液 的 平 均 峰 面 积 计 算 得 出 6 等 于 个 空 白 样 品 提 取 前 添 加 待 测 物 得 到 的 峰 面 积 与 提 取 后 添 加 待 测 物 得 到 的 峰 面 积 的 比 值 即 6 C 3 E 11 所 有 化 合 物 的 提 取 回 收 率 均 超 过 1 除 了 & 的 回 收 率 只 有 // </ 表 / 和 在 线 补 充 表 内 标 的 提 取 回 收 率 大 小 顺 序 与 相 应 化 合 物 回 收 率 一 致 仅 & 0# / 的 回 收 率 低 于 1 / 在 线 补 充 表 所 有 化 合 物 的 记 忆 效 应 小 于 除 了 溴 西 泮 为 C 通 过 对 个 未 服 用 毒 品 的 自 愿 者 的 唾 液 中 所 有 待 测 物 分 析 从 而 评 价 唾 液 的 离 子 抑 制 效 应 实 验 表 明 这 个 自 愿 者 的 唾 液 样 品 没 有 明 显 的 离 子 抑 制 或 增 强 人 工 唾 液 以 及!%!0! % 缓 冲 液 的 离 子 抑 制 也 进 行 了 检 测 数 据 未 显 示 缓 冲 液 没 有 观 察 到 显 著 的 离 子 抑 制 但 是 人 工 唾 液 样 品 对 4 种 待 测 物 氯 硝 西 泮 安 定 去 甲 西 泮 氟 硝 西 泮 奥 沙 西 泮 阿 普 唑 仑 唑 吡 坦 和 ">? 注 括 号 内 只 有 种 原 文 如 此 达 到 几 乎 11 的 离 子 抑 制 保 留 时 间 和 离 子 比 值 的 &' 值 见 在 线 补 充 表 / 所 有 化 合 物 保 留 时 间 的 &' 都 小 于 离 子 比 值 的 &' 小 于 1 除 了 曲 马 多 离 子 比 值 (/ 的 &' 达 1( 个 月 内 所 有 化 合 物 的 总 不 精 确 度 见 在 线 补 充 表 在 低 对 照 浓 度 时 &' 值 (4 <4( 在 高 对 照 浓 度 时 &' 值 ( < ( 四 路 边 测 试 的 初 步 结 果 丹 麦 所 承 担 的 6'7 项 目 中 交 通 部 和 丹 麦 科 技 大 学 在 警 方 的 协 助 下 采 集 了 路 边 唾 液 标 本 采 集 地 点 在 代 表 性 的 公 路 小 中 等 大 型 公 路 上 随 机 选 取 参 与 者 为 自 愿 参 加 几 百 个 唾 液 样 品 被 送 去 分 析 其 中 个 样 品 不 适 合 分 析 被 丢 弃 个 样 品 中 存 在 一 种 或 多 种 化 合 物 的 浓 度 超 过 6'7 项 目 的 $ 值 表 有 个 样 品 含 有 可 待 因 & 曲 马 多 和 安 非 他 明 可 卡 因 和 佐 匹 克 隆 精 确 评 估 阳 性 结 果 的 频 率 需 等 待 更 大 数 量 的 样 品 测 试 结 果 讨 论 本 文 所 提 出 的 方 法 达 到 了 6'7 项 目 的 $0 值 要 求 在 线 补 充 表 和 表 / 并 且 有 些 化 合 物 的 )% 低 于 项 目 要 求 自 动 化 9 方 法 简 单 并 且 程 序 少 利 于 有 效 处 理 大 规 模 样 品 最 近 报 道 了 ) 0" 3" 偶 联 自 动 化 9 仪 利 用 :% 机 械 手 臂 进 行 自 动 萃 取 的 方 法 作 者 使 用 与 我 们 不 同 的 9 柱 和 洗 脱 溶 剂 苯 甲 酰 芽 子 碱 的 回 收 率 只 有 =( 而 我 们 的 方 法 苯 甲 酰 芽 子 碱 的 回 收 率 可 达 作 者 使 用 的 样 品 体 积 11 % 超 过 我 们 两 倍 因 为 样 品 量 有 限 这 种 方 法 并 不 适 合 唾 液 样 品 检 测 我 们 选 择 称 重 是 因 其 能 在 实 验 室 普 遍 使 用 然 而 吸 取 一 定 量 的 体 积 可 能 更 容 易 而 且 对 于 实 验 操 作 更 方 便 我 们 准 备 标 准 品 时 最 多 加 入 1 % 储 存 液 大 体 积 可 能 是 我 们 方 法 的 局 限 性 加 入 更 小 体

13 海 外 检 验 医 学 114 年 月 第 卷 第 期 5>! )!*! "#5 * 114,%(?( 积 的 更 高 浓 度 的 溶 液 例 如 1 % 可 能 会 更 好 但 是 接 下 来 的 步 骤 是 用 大 体 积 的 缓 冲 液 进 行 稀 释 因 此 这 一 点 可 能 显 得 不 是 那 么 重 要 本 研 究 使 用 的 '9) 0" 3" 方 法 可 以 获 得 更 低 的 )% 以 及 良 好 的 色 谱 分 离 内 可 以 分 析 4 种 化 合 物 使 得 高 通 量 地 分 析 标 本 成 为 可 能 加 样 进 入 '9) 0" 3" 的 提 取 物 体 积 只 有 1 % 使 得 化 合 物 更 易 分 辨 并 且 大 多 数 化 合 物 的 基 质 效 应 会 更 低 在 线 补 充 表 和 表 / 已 报 道 所 选 品 牌 的 甲 醇 离 子 抑 制 率 非 常 低 设 备 同 样 受 益 于 低 体 积 的 上 样 基 质 并 且 每 月 会 清 洗 锥 孔 样 品 制 备 简 单 无 需 额 外 步 骤 使 得 ) 0" 优 于 : 0" 使 用 " 3" 检 测 时 观 察 基 质 效 应 出 现 与 否 十 分 重 要 基 质 中 的 共 洗 脱 组 分 可 以 在 " 界 面 干 扰 分 析 物 导 致 降 低 或 增 加 " 响 应 因 为 每 个 人 唾 液 中 的 组 成 成 分 差 异 很 大 所 以 在 验 证 方 法 研 究 基 质 效 应 时 分 析 从 不 同 个 体 来 源 的 样 品 结 果 就 非 常 重 要 10 我 们 调 查 了 个 不 同 人 的 唾 液 样 品 和 准 备 样 品 用 的 1 个 人 空 白 唾 液 对 照 的 基 质 效 应 仅 观 察 到 中 度 基 质 效 应 并 且 不 同 个 体 的 基 质 效 应 差 异 不 大 离 子 比 值 的 &' 值 允 许 有 4 区 间 足 够 满 足 普 遍 使 用 的 指 南 要 求 使 用 氘 代 内 标 可 以 实 时 同 步 标 准 化 基 质 效 应 0/ 文 中 几 乎 所 有 待 测 物 都 使 用 了 氘 化 内 标 除 了 溴 西 泮 和 甲 氨 二 氮 卓 无 法 购 得 和 劳 拉 西 泮 氘 化 内 标 无 法 获 得 可 靠 数 据 安 定 0# 可 替 作 内 标 使 用 这 种 方 法 已 充 分 证 实 可 以 检 测 唾 液 与 缓 冲 液 混 合 物 中 的 4 种 化 合 物 成 分 表 / 最 近 对 4 种 样 品 收 集 器 进 行 评 估 显 示!$!%!0 样 品 器 是 最 适 合 对 & 和 其 他 常 见 毒 品 产 生 高 回 收 率 进 一 步 研 究 表 明 经 过 # 冻 存 8 B 后 对 4 种 化 合 物 的 回 收 率 超 过 4 我 们 检 测 了! 公 司 生 产 的 人 工 唾 液 对 几 种 化 合 物 的 离 子 抑 制 率 发 现 使 用 这 种 唾 液 作 为 练 习 测 试 时 离 子 抑 制 可 能 会 成 为 问 题 因 为 样 品 收 集 简 单 以 及 可 以 检 测 短 期 毒 品 使 用 情 况 唾 液 成 为 路 边 检 测 的 最 佳 选 择 = 一 篇 评 论 文 章 显 示 安 非 他 明 大 麻 可 卡 因 和 鸦 片 很 容 易 在 唾 液 中 检 出 并 且 药 物 动 力 学 模 式 与 血 浆 中 发 现 的 相 似 / 由 于 安 非 他 明 可 卡 因 和 鸦 片 本 身 的 特 性 致 使 它 们 在 酸 性 的 唾 液 中 倾 向 浓 缩 而 & 因 其 高 脂 性 和 苯 二 氮 类 因 其 高 蛋 白 结 合 能 力 从 血 中 分 泌 到 唾 液 很 少 所 以 更 难 被 检 测 04 另 一 方 面 抽 烟 使 得 & 易 在 口 腔 沉 积 因 此 唾 液 中 检 测 到 高 浓 度 的 & 可 能 显 示 极 短 期 内 使 用 毒 品 1 '67 项 目 的 宗 旨 是 评 价 唾 液 替 代 血 液 检 测 驾 驶 者 体 内 毒 品 的 可 行 性 当 项 目 结 束 将 会 评 估 关 于 交 通 系 统 中 毒 品 滥 用 的 流 行 病 学 以 及 有 关 唾 液 取 样 和 法 医 实 验 室 分 析 的 操 作 性 '67 项 目 选 用 相 对 低 的 $ 值 表 / 因 此 要 求 分 析 方 法 要 有 低 的 检 出 下 限 为 了 满 足 这 一 要 求 所 有 检 测 的 化 合 物 拥 有 非 常 好 的 回 收 率 致 关 重 要 而 这 一 点 很 难 做 到 =0 在 建 立 这 种 方 法 的 早 期 我 们 将 工 作 集 中 在 提 高 & 丁 丙 喏 啡 和 吗 啡 的 回 收 率 上 并 且 所 有 化 合 物 的 回 收 率 成 功 超 过 1 除 了 & / </ 可 接 受 作 者 贡 献 $ $ $ ( $ $ )) $ $ " / * " ( $ ) " * ) ( " " $ )) $ ) ( $ ( 作 者 潜 在 利 益 冲 突 声 明 +) ) ( $ ) $, - &! (-

14 海 外 检 验 医 学 114 年 月 第 卷 第 期 5>! )!*! "#5 * 114,%(?( 雇 佣 关 系 ( 顾 问 和 咨 询 ( 股 票 所 有 权 ( 酬 劳 ( 研 究 基 金 )) $ ). $ $ / 0-" $ $ 1 ) & $, +!,). ( 专 家 意 见 ( 赞 助 商 参 与 的 工 作 $ " " ) $ " $ ) ) ) ) )) ) ( 志 谢 $ 0( ( ( (&$ ) ) " $ ( ) ( 翻 译 周 莉 仲 人 前 第 二 军 医 大 学 长 征 医 院 实 验 诊 断 科 审 校 史 红 中 华 医 学 会 杂 志 社 参 考 文 献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