2015年臺灣國際科學展覽會
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- 坂块 武
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1 2015 年 臺 灣 國 際 科 學 展 覽 會 優 勝 作 品 專 輯 作 品 編 號 參 展 科 別 生 物 化 學 作 品 名 稱 CYP11A1 導 致 非 類 固 醇 生 成 細 胞 的 粒 線 體 形 變 CYP11A1 Changes Mitochondrial Morphology in Nonsteroidogenic Cells 得 獎 獎 項 大 會 獎 : 一 等 獎 美 國 ISEF 正 選 代 表 : 美 國 第 66 屆 國 際 科 技 展 覽 會 英 特 爾 傑 出 青 年 女 性 科 學 家 獎 就 讀 學 校 臺 北 市 立 第 一 女 子 高 級 中 學 指 導 教 師 鍾 邦 柱 許 一 懿 作 者 姓 名 李 瓖 芸 關 鍵 字 CYP11A1 粒 線 體 形 變
2 作 者 簡 介 我 是 李 瓖 芸, 就 讀 北 一 女 中 數 理 資 優 班 高 三, 從 高 一 寒 假 開 始 在 中 研 院 分 生 所 做 專 題 研 究 在 這 一 年 半 的 研 究 過 程 中, 我 學 習 到 各 種 分 生 實 驗 技 術, 也 培 養 了 科 學 家 的 邏 輯 思 維 與 研 究 精 神 泡 實 驗 室 的 生 活 雖 然 有 時 很 辛 苦, 但 更 多 時 候 是 有 趣 的, 當 終 於 有 成 果 時, 那 種 成 就 感 也 令 人 興 奮 一 路 走 來, 真 的 很 感 謝 鍾 老 師 簡 瑜 學 姐 和 一 懿 老 師 的 支 持 與 幫 助! i
3 摘 要 一 般 認 為 粒 線 體 形 變 與 神 經 細 胞 的 細 胞 凋 亡 有 關, 但 其 實 粒 線 體 形 變 也 發 生 在 類 固 醇 生 成 細 胞, 如 卵 巢 與 腎 上 腺 皮 質 的 分 化 過 程 中, 且 伴 隨 著 類 固 醇 製 造 酵 素 CYP11A1 的 大 量 表 現 因 此, 我 們 提 出 以 下 的 假 說 : 第 一,CYP11A1 會 使 粒 線 體 發 生 形 變 ; 第 二, 粒 線 體 形 變 參 與 類 固 醇 賀 爾 蒙 的 製 造 ; 第 三, 粒 線 體 形 變 能 導 致 細 胞 某 種 程 度 上 的 分 化 : 由 不 適 合 製 造 類 固 醇 轉 變 為 適 合, 並 降 低 其 代 謝 率 我 們 觀 察 CYP11A1 內 生 與 否 的 細 胞 株 的 粒 線 體 外 形 及 其 內 褶 膜, 發 現 內 生 CYP11A1 的 細 胞 具 有 球 形 粒 線 體 與 拱 狀 內 褶 膜 接 著 我 以 CYP11A1 表 現 質 體 轉 染 COS-1 細 胞, 觀 察 其 粒 線 體 並 測 量 其 ATP 產 率, 證 實 了 外 送 CYP11A1 能 使 粒 線 體 發 生 形 變, 同 時 改 變 細 胞 的 代 謝 率 這 個 發 現 對 粒 線 體 形 變 的 研 究 具 有 突 破 性 的 影 響 1
4 Abstract It has been known that the change of mitochondrial morphology is related to apoptosis in some cells such as neuron. However, previous research shows that mitochondrial shapes are changed and that cristal structures are remodeled during the differentiation of steroidogenic cells in ovary and adrenal cortex, accompanied by abundant expression of steroidogenic enzyme, CYP11A1. Therefore, we propose the following hypotheses: 1. CYP11A1 changes mitochondrial morphology (in both steroidogenic and nonsteroidogenic cells). 2. The changes of mitochondrial morphology play a part in the production of steroid hormone. 3. The changes of mitochondrial morphology can, to some extent, lead to cell differentiation. Nonsteroidogenic cells become competent to produce steroid and have lower metabolic rate when being transfected with exogenous CYP11A1. We found that Y1 cells with endogenous CYP11A1 contain spherical mitochondria with arched cristae, while cells without endogenous CYP11A1 such as NIH-3T3 and COS-1 have elongated mitochondria with lamellar cristae. By transfecting COS-1 cells with CYP11A1-expressing plasmids, observing mitochondrial morphology, and measuring ATP production rate, I confirmed that CYP11A1 changes mitochondrial morphology in nonsteroidogenic cells and regulates the ATP synthesis. This discovery is an important breakthrough and may have a profound influence on the research of mitochondrial morphology. 2
5 CYP11A1 導 致 非 類 固 醇 生 成 細 胞 的 粒 線 體 形 變 壹 前 言 一 粒 線 體 形 變 粒 線 體 (mitochondria) 是 細 胞 的 能 量 工 廠, 負 責 製 造 ATP 粒 線 體 是 動 態 的 胞 器, 藉 由 不 斷 地 融 合 (fusion; 由 MFN1 MFN2 OPA1 等 調 控 ) 和 分 裂 (fission; 由 FIS1 DRP1 等 調 控 ) 控 制 其 形 狀 大 小 和 數 量, 其 他 相 關 調 控 因 子 如 圖 1 在 一 般 狀 態 下, 融 合 和 分 裂 的 速 度 會 保 持 平 衡, 使 粒 線 體 維 持 長 條 形 (elongated; 圖 2) 但 在 某 些 細 胞 中, 粒 線 體 形 狀 可 能 發 生 轉 變 分 裂 的 速 度 若 比 融 合 快, 則 粒 線 體 的 長 度 會 縮 短 而 呈 現 球 形 (spherical; 圖 3.4) 本 研 究 中, 定 義 粒 線 體 長 寬 比 大 於 3:1 者 為 長 條 形 小 於 2:1 者 為 球 形, 而 介 於 兩 者 之 間 為 橢 圓 形 (oval) 圖 1 粒 線 體 融 合 及 分 裂 的 調 控 因 子 ( 取 自 EMBO Rep Sep;11(9): ) 圖 2 長 條 形 粒 線 體 與 板 層 狀 內 褶 膜 圖 3 球 形 粒 線 體 與 管 囊 狀 內 褶 膜 圖 4 拱 形 內 褶 膜 3
6 內 褶 膜 (mitochondrial cristae) 是 粒 線 體 內 膜 向 基 質 內 褶 形 成 的 一 種 結 構 在 不 同 種 類 的 細 胞 中, 內 褶 膜 的 數 目 形 態 和 排 列 方 式 可 能 有 較 大 差 別, 其 中 主 要 有 兩 種 形 態, 分 別 稱 為 板 層 狀 (lamellar; 圖 2 及 圖 5 左 ) 與 管 囊 狀 (tubular-vesicular; 圖 3 及 圖 5 右 ) 另 外 本 研 究 中 亦 有 觀 察 到 拱 形 (arched; 圖 4) 內 褶 膜 圖 5 粒 線 體 內 褶 膜 的 立 體 結 構 ( 取 自 網 路 : 關 於 粒 線 體 形 變 在 生 理 病 理 上 意 義 的 研 究 至 今 發 展 約 莫 十 年 已 有 許 多 研 究 發 現, 粒 線 體 的 功 能 不 再 只 局 限 於 產 生 ATP 提 供 能 量 等 細 胞 代 謝 的 範 疇 ; 此 胞 器 的 形 狀 大 小 與 數 量 的 改 變 對 於 細 胞 凋 亡 自 噬 等 現 象 亦 有 調 控 作 用 亦 有 論 文 指 出, 代 謝 極 為 活 躍 的 神 經 元 高 度 依 賴 粒 線 體 的 融 合 裂 變 與 傳 輸, 其 粒 線 體 的 形 變 現 象 與 神 經 退 化 性 疾 病 有 關, 例 如 帕 金 氏 症 與 阿 茲 海 默 症 皆 攸 關 於 粒 線 體 的 形 變, 若 能 適 當 調 節 其 粒 線 體 的 融 合 與 分 裂 作 用 便 可 以 改 善 其 症 狀 但 粒 線 體 形 變 對 於 細 胞 發 育 分 化 及 類 固 醇 荷 爾 蒙 的 關 係 的 研 究 甚 少, 因 此 我 們 將 深 入 探 討 其 重 要 性 二 CYP11A1 CYP11A1(P450 cholesterol side-chain cleavage enzyme) 是 一 種 位 於 粒 線 體 內 膜 的 酵 素, 負 責 催 化 膽 固 醇 (cholesterol) 轉 換 為 孕 烯 醇 酮 (pregnenolone), 是 類 固 醇 荷 爾 蒙 生 成 代 謝 過 程 的 第 一 步 ( 詳 見 第 三 點 類 固 醇 荷 爾 蒙 ) CYP11A1 主 要 表 現 在 腎 上 腺 皮 質 層 與 卵 巢 中 的 黃 體 及 卵 囊 膜 細 胞 還 有 睪 丸 的 萊 氏 細 胞 4
7 圖 6 與 膽 固 醇 結 合 的 人 類 CYP11A1 ( 取 自 維 基 百 科 : 圖 7 CYP11A1 催 化 的 反 應 ( 取 自 維 基 百 科 : CYP11A1 作 用 時 需 要 來 自 電 子 傳 遞 鏈 的 電 子 ( 圖 7), 由 鐵 氧 還 蛋 白 (adrenodoxin) 與 鐵 氧 還 蛋 白 還 原 酶 (adrenodoxin reductase) 從 NADPH 傳 遞 給 CYP11A1, 因 此 細 胞 必 須 同 時 具 有 這 三 種 蛋 白 質 的 表 現,CYP11A1 才 具 有 作 用 活 性 我 們 從 Dr. Walter L. Miller 的 實 驗 室 取 得 F2 及 VE 質 體 :F2 質 體 帶 有 CYP11A1 鐵 氧 還 蛋 白 與 鐵 氧 還 蛋 白 還 原 酶, 並 以 實 驗 證 實 具 有 最 大 活 性 的 排 列 順 序 排 列 ( 圖 8) VE 質 體 則 是 將 F2 質 體 上 的 CYP11A1 突 變 掉 纈 胺 酸 成 為 穀 胺 酸 而 來, 其 CYP11A1 不 具 有 活 性, 可 作 為 F2 的 對 照 組 圖 8 F2 及 VE 質 體 ( 資 料 來 源 : 參 考 文 獻 ( 六 )) 5
8 三 類 固 醇 荷 爾 蒙 類 固 醇 荷 爾 蒙 是 人 體 生 理 所 需 的 微 量 激 素, 可 分 為 雄 激 素 (androgens) 雌 激 素 (estrogens) 孕 激 素 (progestogens) 皮 質 類 固 醇 (corticosteroids) 等 四 類, 由 膽 固 醇 (cholesterol) 經 不 同 酵 素 不 同 途 徑 製 造 而 來 ( 圖 9), 由 內 分 泌 器 官 如 腎 上 腺 (adrenal gland) 及 性 腺 (gonads) 分 泌, 再 經 由 血 液 傳 送 全 身, 調 節 體 內 的 糖 分 鹽 分 水 分 礦 物 質 等 重 要 元 素 及 許 多 生 理 反 應 其 分 泌 量 受 下 視 丘 腦 下 垂 體 控 制, 過 多 或 過 少 都 將 引 起 生 物 體 的 病 症 圖 9 人 類 類 固 醇 賀 爾 蒙 製 造 途 徑 ( 取 自 維 基 百 科 : 6
9 貳 研 究 動 機 目 前 關 於 粒 線 體 形 變 的 研 究 大 多 是 以 神 經 心 臟 和 肌 肉 細 胞 為 材 料, 發 現 粒 線 體 形 變 常 意 味 著 細 胞 即 將 凋 亡, 因 而 衍 生 相 關 疾 病 之 前 本 實 驗 室 發 現 ( 參 考 文 獻 ( 二 )) 在 小 鼠 懷 孕 期 間 卵 巢 黃 體 的 成 熟 過 程 中 伴 隨 著 粒 線 體 形 變 ( 由 濾 泡 顆 粒 細 胞 的 長 條 形 板 層 狀 內 褶 膜 ( 圖 10 右 上 ), 變 為 黃 體 細 胞 的 球 形 管 囊 狀 內 褶 膜 ( 圖 10 左 上 )), 而 且 在 分 化 過 程 中, 參 與 黃 體 製 造 助 孕 酮 過 程 的 一 個 酵 素 CYP11A1 表 現 量 也 會 增 加 ( 圖 11), 而 且 它 不 正 常 的 表 現 量 也 會 對 粒 線 體 形 變 產 生 影 響 : 在 CYP11A1 過 量 表 現 的 基 因 轉 殖 小 鼠, 濾 泡 細 胞 分 化 為 黃 體 細 胞 時, 粒 線 體 形 變 不 完 全, 呈 現 長 條 形 的 外 形 與 管 囊 狀 內 褶 膜 ( 圖 10 左 下 ),CYP11A1 下 游 產 物 助 孕 酮 的 產 量 也 減 少 圖 10 小 鼠 懷 孕 期 間 黃 體 (LC) 與 顆 粒 細 胞 (GC) 的 粒 線 體 圖 11 小 鼠 卵 巢 IHC 染 色 圖 圖 中 顏 色 越 深 處 表 現 越 大 量 的 CYP11A1 ( 取 自 Biology of reproduction, 89(4), ) 這 引 發 了 我 們 好 奇, 粒 線 體 的 形 變 是 不 是 由 CYP11A1 調 控 的? 如 果 讓 非 類 固 醇 生 成 細 胞 表 現 CYP11A1, 粒 線 體 會 不 會 因 此 形 變? 粒 線 體 形 變 會 不 會 影 響 細 胞 的 代 謝? 7
10 參 研 究 目 的 一 觀 察 : 比 較 具 備 CYP11A1 表 現 與 否 的 細 胞 株 的 粒 線 體 形 態 二 提 出 假 設 :CYP11A1 是 否 會 使 粒 線 體 發 生 形 變 三 設 計 實 驗 : 轉 染 CYP11A1 表 現 質 體 至 細 胞 中 並 觀 察 是 否 會 使 粒 線 體 發 生 形 變 四 了 解 粒 線 體 形 變 與 細 胞 代 謝 的 關 係 : 測 量 轉 染 前 後 細 胞 的 ATP 產 率 肆 研 究 設 備 與 器 材 一 基 本 器 材 : 微 量 滴 管 吸 量 分 注 器 Tip 實 驗 手 套 實 驗 衣 50 c.c. 離 心 管 15 c.c. 離 心 管 1.5 c.c. 微 量 離 心 管 試 管 架 桌 上 型 離 心 機 去 離 子 蒸 餾 水 (ddh2o) 酒 精 PBS 緩 衝 溶 液 電 子 天 平 恆 溫 水 浴 槽 二 細 胞 培 養 : 10-cm 培 養 皿 玻 璃 滴 管 10c.c. 滴 管 細 胞 培 養 箱 無 菌 操 作 台 水 浴 槽 複 式 顯 微 鏡 DMEM/F12 培 養 液 (DMEM/F12 + P/S + 10% FBS) DMEM 培 養 液 (DMEM + P/S + 10% FBS) Y1 cell NIH-3T3 cell COS1 cell Trypsin-EDTA 液 態 氮 三 製 備 穿 透 式 電 子 顯 微 鏡 樣 本 : 6 well 培 養 皿 Embedding film 4 冷 房 緩 衝 溶 液 (0.1M cacodylate buffer, ph 7.2/ 4% sucrose) 固 定 液 (2.5% glutaraldehyde/ 0.1M cacodylate buffer, ph7.2) 固 定 液 (1% OsO4/ 0.1M cacodylate buffer, ph7.2) 染 色 液 1% uranyl acetate 酒 精 spurr 烘 箱 8
11 四 製 備 CYP11A1 表 現 質 體 : ( 一 )CYP11A1 基 因 片 段 pegfp-n1 載 體 圖 12 pegfp-n1 載 體 的 基 因 圖 譜 取 自 ( 二 ) 聚 合 酶 鏈 鎖 反 應 (PCR):PCR buffer dntp 引 子 PCR 儀 器 ( 三 ) 膠 體 電 泳 :Agarose 50X TAE buffer 錐 形 瓶 微 波 爐 製 膠 模 型 6x DNA Loading Dye 10x Taq buffer 1K DNA Ladder marker 電 泳 槽 EtBr UV 箱 ( 四 ) 限 制 酶 (XhoI EcroRI) 10X digest buffer ( 五 )T4 DNA ligase 10X ligase buffer ( 六 ) 細 菌 轉 型 養 菌 :HIT competent cell LB 培 養 基 LB agar 養 菌 盤 養 菌 管 錐 形 瓶 抗 生 素 Kanamycin 及 Ampicillin 三 角 玻 棒 酒 精 燈 37 暖 房 震 盪 器 ( 七 ) 質 體 純 化 : 高 速 離 心 機 Qiagen kit ( 八 ) 細 胞 轉 染 :Trans-LTI Transfection Reagent Opti-MEM 9
12 伍 研 究 過 程 與 方 法 一 細 胞 培 養 : ( 一 ) 細 胞 株 種 類 : 1. Y1: 小 鼠 腎 上 腺 皮 質 癌 細 胞, 內 生 CYP11A1 2. COS1: 猴 腎 臟 細 胞, 不 內 生 CYP11A1 3. NIH-3T3: 胚 胎 纖 維 母 細 胞, 不 內 生 CYP11A1 ( 二 ) 培 養 環 境 : 恆 溫 攝 氏 37 度 二 氧 化 碳 濃 度 5% ( 三 ) 培 養 容 器 : 直 徑 10 公 分 培 養 皿 ( 四 ) 配 製 培 養 液 :DMEM/F12 + P/S + 10% FBS( 用 於 Y1) 與 DMEM + P/S + 10% FBS( 用 於 COS-1 NIH-3T3) 1. 將 DMEM/F12 或 DMEM 培 養 液 粉 末 一 包 ddh2o 890mL P/S( 抗 生 素 ) 10mL FBS( 胎 牛 血 清 ) 100 ml 加 入 已 滅 菌 的 燒 杯, 並 置 於 電 磁 加 熱 攪 拌 器 由 磁 攪 拌 子 攪 拌 2. 加 入 NaHCO3(DMEM/F12:2.4g,DMEM:3.7g), 持 續 攪 拌 3. 利 用 酸 鹼 度 計 測 酸 鹼 值, 並 以 鹽 酸 與 氫 氧 化 鈉 調 其 ph 值 至 約 7.2~ 利 用 抽 氣 過 濾 套 組 過 濾 培 養 液 10
13 二 製 備 穿 透 式 電 子 顯 微 鏡 樣 本 : ( 一 ) 種 植 細 胞 : 準 備 12 洞 培 養 皿, 在 每 一 洞 放 置 塑 膠 薄 片 (Aclar embedding film) 細 胞 培 養 數 代 後, 種 植 1x10 5 細 胞 於 培 養 皿 中, 使 細 胞 密 度 達 九 成 以 上 ( 二 ) 去 除 培 養 液 後 以 緩 衝 溶 液 (0.1M cacodylate buffer, ph 7.2/ 4% sucrose/ 0.05% CaCl2) 潤 洗 細 胞 ( 三 ) 以 固 定 液 (2.5% glutaraldehyde/ 0.1M cacodylate buffer, ph7.2) 在 4 固 定 1 小 時 ( 四 ) 在 4 以 緩 衝 溶 液 潤 洗 細 胞 3 次, 每 次 5 分 鐘 ( 五 ) 以 固 定 液 (1% OsO4/ 0.1M cacodylate buffer, ph7.2) 在 4 固 定 1 小 時 ( 六 ) 在 4 以 ddh20 潤 洗 細 胞 3 次, 每 次 5 分 鐘 ( 七 ) 以 染 色 液 1% uranyl acetate 在 4 染 色 1 小 時 ( 八 ) 在 4 以 ddh20 潤 洗 細 胞 3 次, 每 次 5 分 鐘 ( 九 ) 在 室 溫 以 酒 精 脫 水 : 依 序 浸 泡 在 50%(7 分 鐘 ) 70%(7 分 鐘 ) 90%(7 分 鐘 ) 酒 精 各 一 次 及 100% 無 水 酒 精 (5 分 鐘 ) 三 次 ( 十 ) 在 室 溫 以 酒 精 /spurr( 樹 脂 ) 混 合 溶 液 滲 透 細 胞 樣 本 : 依 序 浸 泡 在 酒 精 :spurr=1:1(30 分 鐘 ) 1:2(40 分 鐘 ) 各 一 次 及 純 spurr(1 小 時 ) 三 次 ( 十 一 ) 置 於 70 烘 箱 中 包 埋 20 小 時 11
14 三 CYP11A1 表 現 質 體 製 備 與 確 認 : ( 一 ) 利 用 聚 合 酶 鏈 鎖 反 應 (PCR) 技 術, 以 設 計 好 的 不 同 引 子 分 別 取 得 表 現 CYP11A1 的 全 長 DNA 片 段, 及 不 包 含 粒 線 體 標 的 序 列 的 CYP11A1 DNA 片 段 引 子 上 包 含 限 制 酶 EcoR1 與 Xho1 能 作 用 的 切 點 序 列 1. 聚 合 酶 鏈 鎖 反 應 : 取 1.5mL 微 量 離 心 管 加 入 下 表 所 列 溶 液 並 混 合 均 勻 將 其 置 於 PCR 儀 器,PCR 反 應 條 件 為 :enzyme activation 分 鐘 ;95 30 秒 (denature) 55 1 分 鐘 (anneal) 72 1 分 30 秒 (extend) 共 30 個 循 環 ;72 5 分 鐘 4 暫 停 2X PCR buffer 2mM dntp 10μM Forward Primer 10μM Reverse Primer DNA KODFX ddh2o 1X 25μL 10μL 1.5μL 1.5μL 1μL 1μL 10μL 50μL 2. 純 化 PCR 產 物 (PCR purification) : 使 用 QIAquick PCR purification kit 加 入 PCR 產 物 體 積 五 倍 的 PB( 酸 性 試 劑 ), 混 合 均 勻 若 呈 現 橙 色 或 紫 色, 加 10μL 3M 硫 酸 鈉 將 液 體 移 至 離 心 管 中, 並 且 高 速 離 心 一 分 鐘, 將 下 方 離 心 液 倒 出 接 著 加 750μL PE( 酒 精 ), 混 合 均 勻 在 高 速 離 心 一 分 鐘, 將 下 方 離 心 液 倒 出 將 離 心 管 置 於 1.5 ml 微 量 離 心 管 上 方, 並 加 50μL EB( 復 溶 劑 ) 或 去 離 子 純 水, 高 速 離 心 一 分 鐘 3. 測 定 DNA 濃 度 : 樣 品 在 260 nm 及 280 nm 吸 光 值 之 比 較, 以 判 定 DNA 的 純 度 及 濃 度 ( 二 ) 利 用 限 制 酶 EcoRI XhoI 切 割 CYP11A1( 插 入 段 ) 及 pegfp-n1 載 體 DNA: 12
15 取 1.5mL 微 量 離 心, 加 入 下 表 所 列 溶 液 並 混 合 均 勻 接 著 至 於 37 恆 溫 水 浴 槽 作 用 20 分 鐘 4μg pegfp-n1( 依 照 測 得 濃 度 加 適 當 體 積 ) XhoI 5μL EcoRI 5μL 10X digestion buffer 10μL ddh2o( 依 載 體 溶 液 體 積 調 整, 使 總 體 積 為 100μL) 100μL ( 三 ) 利 用 膠 體 電 泳 分 離 pegfp-n1 載 體 的 大 小 片 段, 僅 保 留 將 與 插 入 段 接 合 的 片 段 再 利 用 QIAquick Gel Extraction 萃 取 DNA ( 四 ) 利 用 接 合 酶 接 合 CYP11A1 與 pegfp-n1 的 DNA 片 段 : 載 體 與 插 入 段 的 莫 耳 數 比 例 為 1:3, 載 體 DNA 總 量 為 100 ng, 並 取 0.6mL 微 量 離 心 管 加 入 下 表 所 列 溶 液 並 混 合 均 勻 置 於 4 反 應 過 夜 此 步 驟 所 得 為 環 狀 的 質 體 DNA pegfp-n1 insert 10X ligation buffer T4 DNA ligase ddh2o 20μL 8.4μL 4μL 2μL 5.6μL 40μL ( 五 ) 利 用 non-heatshock 轉 型 (Transformation) 細 胞, 將 質 體 DNA 引 入 勝 任 細 胞 (competent cell), 以 達 大 量 複 製 DNA 的 目 的 : 在 DNA 混 合 液 中 加 入 卡 納 黴 素 (kanamycin) 以 及 HIT mixture 接 著 將 接 合 溶 液 均 勻 抹 平 在 LB agar plate 上, 置 於 37 烘 箱 培 養 16~18 小 時 以 微 量 滴 管 挑 單 一 菌 落, 在 離 心 管 震 盪 培 養 16~18 小 時 以 小 量 培 養, 接 著 在 錐 形 瓶 中 震 盪 培 養 16~18 小 時 以 大 量 培 養 ( 六 ) 質 體 純 化 (Plasmid DNA midi-preparation): 將 菌 液 倒 入 離 心 瓶 中, 並 使 用 天 平 使 每 一 離 心 瓶 重 量 相 等 以 6000g 離 心 10 分 鐘 後, 倒 掉 上 清 液, 加 13
16 入 8c.c. RES buffer, 上 下 沖 洗 使 之 混 合 均 勻 加 8c.c. LYS buffer, 緩 緩 上 下 搖 晃 靜 置 5 分 鐘 將 濾 管 架 在 試 管 架 上, 並 以 加 12c.c. EQU buffer 潤 濕 管 壁 加 8c.c. NEV buffer, 慢 慢 上 下 搖 晃 10~15 次, 應 出 現 棉 絮 狀 物 質 把 液 體 倒 入 濾 管, 加 8c.c. Wash buffer, 移 至 50c.c. 離 心 管 上 加 5c.c.ELV buffer 與 3.5mL 異 丙 醇, 震 盪 均 勻, 靜 置 2 分 鐘 將 液 體 倒 入 特 製 過 濾 針 筒 中, 慢 慢 把 液 體 壓 出, 加 2c.c.70% 酒 精, 重 複 3 次 加 0.2c.c. ddh2o, 將 液 體 壓 入 1.5c.c. 離 心 管 測 DNA 濃 度 ( 七 ) 取 一 部 分 質 體 樣 本 再 次 以 限 制 酶 切 割 跑 膠, 以 確 認 製 作 出 的 質 體 是 否 正 確 圖 13 CYP11A1 表 現 質 體 製 備 與 確 認 過 程 示 意 圖 14
17 四 脂 質 體 轉 染 法 : 轉 染 前 使 細 胞 在 10 cm 培 養 皿 長 到 約 五 至 七 成 滿, 並 更 換 成 不 含 抗 生 素 的 培 養 液 將 下 表 所 列 溶 液 依 序 加 入 1.5 ml 微 量 離 心 管, 輕 輕 用 微 量 滴 管 混 合 均 勻 靜 置 於 室 溫 25 分 鐘 最 後, 將 混 合 液 加 入 COS-1 細 胞 的 培 養 液 中, 輕 輕 搖 晃 混 合 均 勻, 使 其 作 用 隔 夜 後 更 換 回 原 培 養 液 並 再 隔 一 天 才 開 始 做 實 驗 以 讓 細 胞 恢 復 穩 定 Opti-MEM 1.5mL DNA 15μg TransIT-LTI Reagent 45μL 五 施 加 膽 固 醇 : 在 轉 染 F2 及 VE 質 體 的 實 驗 中, 另 區 分 是 否 施 加 膽 固 醇 兩 種 組 別 施 加 膽 固 醇 的 組 別 條 件 為 : 添 加 5μM 20α-hydroxycholesterol, 作 用 4 小 時 此 種 膽 固 醇 不 需 StAR 運 送 到 粒 線 體 內 膜, 可 以 直 接 作 為 CYP11A1 的 受 質, 使 CYP11A1 作 用 產 生 下 游 產 物 孕 烯 醇 酮 (P5) 六 測 量 ATP 產 率 : ( 一 ) 用 Trypsin-EDTA 使 細 胞 自 培 養 皿 上 脫 落, 離 心 3000rpm 5 分 鐘 收 集 細 胞 ( 二 ) 用 細 胞 計 數 盤 數 細 胞, 記 錄 細 胞 密 度 ( 三 ) 取 3x104 細 胞 置 於 1.5c.c. 離 心 管 中, 離 心 3000rpm 5 分 鐘 後 丟 棄 上 清 液 ( 四 ) 加 300μL lysis buffer 於 室 溫 作 用 5 分 鐘, 將 細 胞 裂 解, 釋 放 ATP ( 五 ) 加 300μL diluent buffer 稀 釋 ( 六 ) 離 心 10000rpm 1 分 鐘, 使 細 胞 的 其 他 成 分 沈 澱 ( 七 ) 取 出 上 清 液 置 於 新 的 離 心 管 中, 暫 時 放 在 冰 上 保 存 ( 八 ) 分 別 配 製 10-1~10-6mM 的 ATP 溶 液 作 為 標 準 樣 品 15
18 ( 九 ) 將 實 驗 樣 本 及 標 準 樣 本 裝 入 專 用 的 黑 色 孔 盤 中, 每 孔 50μL ( 十 ) 避 光 取 適 量 luciferase 呈 色 劑 ( 能 與 ATP 結 合 並 呈 色 ), 帶 到 專 用 儀 器 操 作 區 ( 十 一 ) 儀 器 會 自 動 添 加 luciferase 並 記 錄 吸 光 值 ( 十 二 ) 取 得 吸 光 值 資 料 後, 用 excel 根 據 標 準 樣 品 的 吸 光 值 畫 出 標 準 曲 線, 便 能 推 得 實 驗 樣 品 的 ATP 濃 度 16
19 陸 研 究 結 果 與 討 論 實 驗 一 : 以 穿 透 式 顯 微 鏡 觀 察 內 生 及 不 內 生 CYP11A1 的 粒 線 體 形 態 : 內 生 CYP11A1 的 細 胞 具 有 球 形 粒 線 體 與 拱 形 內 褶 膜, 而 不 內 生 CYP11A1 的 細 胞 具 有 長 條 形 粒 線 體 與 板 層 狀 內 褶 膜 一 電 子 顯 微 鏡 照 片 圖 14 不 同 倍 率 下 Y1 COS1 與 NIH-3T3 細 胞 粒 線 體 形 態 的 比 較 圖 中 可 見 內 生 CYP11A1 的 Y1 細 胞 粒 線 體 呈 球 形 且 內 褶 膜 為 拱 形, 而 不 內 生 CYP11A1 的 COS1 與 NIH-3T3 細 胞 粒 線 體 都 呈 長 條 形 且 內 褶 膜 為 板 層 狀, 如 同 一 般 常 見 的 細 胞 二 結 果 整 理 表 1 不 同 細 胞 株 是 否 內 生 CYP11A1 與 其 粒 線 體 形 態 的 比 較 細 胞 株 種 類 是 否 內 生 CYP11A1 粒 線 體 外 形 粒 線 體 內 膜 形 態 Y1 內 生 且 有 活 性 球 形 拱 形 COS1 不 內 生 長 條 形 板 層 狀 NIH-3T3 不 內 生 長 條 形 板 層 狀 17
20 實 驗 二 : 製 作 CYP11A1 完 全 表 現 質 體 以 及 缺 乏 粒 線 體 標 的 基 因 序 列 的 CYP11A1 表 現 質 體, 轉 染 至 COS-1 細 胞 後 以 螢 光 顯 微 鏡 及 電 子 顯 微 鏡 觀 察 螢 光 顯 微 鏡 觀 察 發 現 缺 乏 粒 線 體 標 的 序 列 會 使 CYP11A1 散 布 在 整 個 細 胞 質 中, 全 長 基 因 則 能 使 CYP11A1 只 表 現 在 粒 線 體 電 子 顯 微 鏡 觀 察 結 果 顯 示, 外 送 CYP11A1 能 使 COS-1 細 胞 的 長 條 形 粒 線 體 與 板 狀 內 褶 膜 形 變 為 球 形 粒 線 體 與 管 囊 狀 內 褶 膜 一 以 螢 光 顯 微 鏡 觀 察 經 質 體 轉 染 後 的 COS-1 細 胞 : pegfp-n1 所 帶 有 的 綠 螢 光 基 因 能 使 細 胞 轉 譯 出 的 插 入 段 蛋 白 質 (CYP11A1) 發 出 綠 色 螢 光, 因 此 能 以 螢 光 顯 微 鏡 觀 察 CYP11A1 分 布 位 置 轉 染 不 帶 有 插 入 段 的 pegfp-n1 的 COS-1 細 胞 中, 幾 乎 整 顆 細 胞 都 發 出 綠 色 螢 光 ; 轉 染 pegfp-n1-cyp11a1( 全 長 ) 的 COS-1 細 胞 中, 綠 色 螢 光 的 分 布 散 佈 在 細 胞 質, 呈 現 點 狀 顆 粒 狀, 可 以 初 步 推 斷 CYP11A1 只 分 布 在 粒 線 體 中 ; 轉 染 pegfp-n1-cyp11a1( 缺 乏 粒 線 體 標 的 序 列 ) 的 COS-1 細 胞 中, 綠 色 螢 光 均 勻 分 布 於 細 胞 質 中 另 外, 轉 染 缺 乏 粒 線 體 標 的 序 列 Cyp11a1 的 細 胞 很 容 易 死 亡, 因 此 沒 有 繼 續 做 後 續 的 電 顯 觀 察 圖 15 轉 染 質 體 的 COS-1 細 胞 螢 光 顯 微 照 片 pegfp-n1 載 體 能 使 轉 譯 出 的 插 入 段 蛋 白 質 (CYP11A1) 帶 有 綠 螢 光, 因 此 能 以 螢 光 顯 微 鏡 觀 察 CYP11A1 分 布 位 置 圖 中 轉 染 pegfp-n1 的 COS-1 細 胞 中, 綠 色 螢 光 散 布 在 整 顆 細 胞 ; 轉 染 pegfp-n1- Cyp11a1 ( 全 長 ) 的 COS-1 細 胞 中, 綠 色 螢 光 的 分 布 呈 現 點 狀 顆 粒 狀 ; 轉 染 pegfp-n1- Cyp11a1 ( 缺 乏 粒 線 體 標 的 序 列 ) 的 COS-1 細 胞 中, 綠 色 螢 光 均 勻 分 布 於 細 胞 質 中, 螢 光 較 為 黯 淡 18
21 二 以 電 子 顯 微 鏡 觀 察 經 質 體 轉 染 後 的 COS-1 細 胞 : 未 經 過 質 體 轉 染 的 COS-1 細 胞 以 及 轉 染 了 未 插 入 Cyp11a1 基 因 的 pegfp-n1 載 體 的 細 胞 中, 粒 線 體 多 數 為 長 條 形, 並 具 有 板 狀 內 褶 膜 ; 轉 染 pegfp-n1-cyp11a1( 全 長 ) 的 COS-1 細 胞 中, 大 部 分 粒 線 體 呈 現 球 形, 並 具 有 管 囊 狀 內 褶 膜 圖 16 未 轉 染 轉 染 pegfp-n1 及 pegfp-n1-cyp11a1( 全 長 ) 的 COS-1 細 胞 電 子 顯 微 鏡 照 片 外 送 CYP11A1 能 使 COS-1 細 胞 的 長 條 形 粒 線 體 與 板 狀 內 褶 膜 形 變 為 球 形 粒 線 體 與 管 囊 狀 內 褶 膜 19
22 三 針 對 粒 線 體 形 態 ( 球 形 粒 線 體 的 比 例 ) 進 行 統 計 : 圖 17 未 轉 染 轉 染 pegfp-n1 及 pegfp-n1-cyp11a1( 全 長 ) 的 COS-1 細 胞 中 球 形 粒 線 體 所 佔 的 比 例 圖 中 n 值 為 所 計 算 的 細 胞 數 量 由 圖 可 知, 轉 染 Cyp11a1 後 細 胞 中 的 球 形 粒 線 體 增 加 了 由 於 電 顯 切 片 的 角 度 不 同, 長 條 形 的 粒 線 體 也 可 能 切 出 圓 形 的 截 面, 因 此 未 轉 染 及 僅 轉 染 載 體 的 細 胞 仍 有 一 定 比 例 的 球 形 粒 線 體, 實 為 實 驗 無 法 避 免 的 誤 差 而 質 體 的 轉 染 成 功 率 也 尚 無 法 達 到 百 分 之 百, 因 此 轉 染 Cyp11a1 的 細 胞 球 形 粒 線 體 比 例 不 到 100% 但 整 體 而 言, 實 驗 組 與 對 照 組 之 間 仍 有 達 到 統 計 上 的 顯 著 差 異 20
23 實 驗 三 : 將 具 有 CYP11A1 作 用 活 性 的 F2 質 體 及 經 突 變 而 不 具 活 性 的 VE 質 體 轉 染 至 COS-1 細 胞 後 以 電 子 顯 微 鏡 觀 察 一 電 子 顯 微 鏡 照 片 圖 18 未 轉 染 及 轉 染 F2 或 VE 質 體 的 細 胞 粒 線 體 形 態 由 圖 可 見, 轉 染 F2 和 VE 的 細 胞, 粒 線 體 出 現 明 顯 的 管 囊 狀 內 褶 膜 21
24 二 針 對 粒 線 體 外 形 與 內 褶 膜 形 態 進 行 分 類 統 計, 並 撰 寫 程 式 分 析 資 料 圖 19 未 轉 染 及 轉 染 F2 或 VE 質 體 的 細 胞 粒 線 體 內 褶 膜 形 態 統 計 由 圖 可 見, 轉 染 F2 或 VE 質 體 均 能 使 細 胞 粒 線 體 管 囊 狀 (Tubular-vesicular) 內 褶 膜 增 加 板 層 狀 (Lamellar) 內 褶 膜 減 少, 顯 示 不 論 CYP11A1 是 否 具 有 活 性, 都 能 改 變 細 胞 的 粒 線 體 內 褶 膜 形 態 圖 20 未 轉 染 及 轉 染 F2 或 VE 質 體 的 細 胞 粒 線 體 外 形 統 計 由 圖 可 見, 轉 染 F2 或 VE 質 體 後, 細 胞 中 長 條 形 粒 線 體 的 比 例 降 低 了 22
25 實 驗 四 : 測 量 轉 染 質 體 前 後 細 胞 的 ATP 產 率 一 自 製 的 CYP11A1 完 全 表 現 質 體 與 其 對 照 組 pegfp-n1 載 體 圖 21 轉 染 載 體 或 CYP11A1 完 全 表 現 質 體 的 細 胞 ATP 產 率 由 圖 可 見, 轉 染 CYP11A1 的 細 胞,ATP 產 率 僅 為 轉 染 載 體 的 1/3, 顯 示 粒 線 體 形 變 會 降 低 細 胞 的 代 謝 率 轉 染 載 體 的 組 別 ATP 產 率 較 未 轉 染 組 低, 可 能 是 因 為 綠 螢 光 蛋 白 發 光 會 消 耗 細 胞 的 ATP 23
26 二 具 有 作 用 活 性 的 F2 質 體 與 其 對 照 組 VE 質 體 圖 22 轉 染 F2 或 VE 質 體 及 是 否 施 加 膽 固 醇, 細 胞 ATP 產 率 的 比 較 由 圖 可 見, 轉 染 F2 或 VE 質 體 均 使 細 胞 ATP 產 率 下 降, 顯 示 粒 線 體 形 變 會 降 低 細 胞 的 代 謝 率 施 加 膽 固 醇 的 組 別 ATP 產 率 均 較 高, 可 能 是 因 為 膽 固 醇 也 能 作 為 細 胞 的 營 養 來 源 柒 結 論 一 內 生 CYP11A1 的 細 胞 ( 如 Y1) 具 有 球 形 粒 線 體 與 拱 狀 內 褶 膜, 而 不 內 生 CYP11A1 的 細 胞 ( 如 COS1 及 NIH-3T3) 具 有 長 條 形 粒 線 體 與 板 狀 內 褶 膜 二 外 送 CYP11A1 能 使 長 條 形 粒 線 體 與 板 狀 內 褶 膜 形 變 為 球 形 粒 線 體 與 拱 狀 或 管 囊 狀 內 褶 膜, 證 實 CYP11A1 能 使 粒 線 體 發 生 形 變 此 作 用 不 論 CYP11A1 是 否 具 有 作 用 活 性 都 會 發 生 三 粒 線 體 形 變 為 球 形 拱 狀 或 管 囊 狀 內 褶 膜 後, 會 減 緩 細 胞 的 呼 吸 作 用,ATP 產 率 下 降 24
27 捌 未 來 展 望 本 研 究 為 粒 線 體 形 變 的 研 究 開 啟 了 新 的 局 面, 顛 覆 了 粒 線 體 形 變 代 表 細 胞 凋 亡 的 觀 念, 證 實 了 CYP11A1 會 使 粒 線 體 發 生 形 變, 而 其 原 因 可 能 是 為 了 提 高 它 製 造 類 固 醇 賀 爾 蒙 的 能 力 在 動 物 體 內, 粒 線 體 形 變 是 伴 隨 在 類 固 醇 生 成 細 胞 的 分 化 過 程 中 的 重 要 事 件, 是 細 胞 分 化 為 具 有 製 造 類 固 醇 賀 爾 蒙 能 力 的 標 誌 本 研 究 中 已 經 成 功 藉 由 轉 染 F2 質 體 至 非 類 固 醇 生 成 細 胞, 而 使 粒 線 體 形 變 並 製 造 孕 烯 醇 酮, 並 改 變 細 胞 的 代 謝 率, 某 種 程 度 上 可 以 解 釋 為 粒 線 體 形 變 造 成 的 細 胞 分 化 未 來 希 望 藉 由 動 物 類 固 醇 生 成 細 胞 的 原 代 培 養 (primary culture) 來 更 進 一 步 證 明 粒 線 體 形 變 與 細 胞 分 化 的 關 係 另 外, 關 於 CYP11A1 使 粒 線 體 形 變 的 機 制, 目 前 已 知 與 CYP11A1 本 身 的 作 用 活 性 無 關, 未 來 可 藉 由 轉 染 不 同 片 段 的 CYP11A1 質 體 來 篩 選 出 造 成 粒 線 體 形 變 的 關 鍵 蛋 白 質 構 造 玖 參 考 文 獻 一 Campello, S., Scorrano, L. (2010) Mitochondrial shape changes: orchestrating cell pathophysiology. EMBO Rep., 11(9): 二 Chien Yu, et al. (2013) Misregulated progesterone secretion and impaired pregnancy in Cyp11a1 transgenic mice. Biology of reproduction, 89(4), 91. 三 Hu, M.C., et al. (2002) Steroid deficiency syndromes in mice with targeted disruption of Cyp11a1. Molecular Endocrinology, 20(4):930. 四 Itoh, K., et al. (2013) Mitochondrial dynamics in neurodegeneration. Trends Cell Biology, 23(2):
28 五 Miller, W.L., et al. (2011) The molecular biology, biochemistry, and physiology of human steroidogenesis and its disorders. Endocrine Review, 32(4):579. 六 Harikrishna, J.A., Black, S.M., et al. (1993) Construction and function of fusion enzymes of the human cytochrome P450scc system. DNA and cell biology, 12(5): 七 Huang, M.C., Miller, W.L. (2001) Creation and activity of COS-1 cells stably expressing the F2 fusion of the human cholesterol side-chain cleavage enzyme system. Endocrinology, 142(6):
29 評 語 評 語 觀 察 CYP11A1 與 粒 線 體 發 生 形 變 的 關 係, 發 現 內 生 CYP11A1 的 細 胞 具 有 球 型 粒 線 體 與 拱 狀 內 摺 膜 也 證 實 外 選 CYP11A1 的 使 粒 線 體 發 生 形 變, 對 未 來 實 驗 提 供 可 行 的 方 向, 值 得 進 行 後 續 的 實 驗 評 語
摘要
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项 目 批 准 号 81273814 归 口 管 理 部 门 申 请 代 码 收 件 日 期 H2716 360145 y 国 家 自 然 科 学 基 金 委 员 会 资 助 项 目 计 划 书 资 助 类 别 : 面 上 项 目 亚 类 说 明 : 非 连 续 资 助 类 项 目 附 注 说 明 : 项 目 名 称 : 益 气 养 肺 法 拮 抗 bfgf 对 肺 癌 微 环 境 介 导 化 疗
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壹、
1 1 20ml. 10 35% 10 3 2 2 250ml. 10 2 (30c.c) 1 75ml 2 4 3 2 1 1 2 1. 2. 1c 3 4 5 1. 2. 3. 4. 5. 1. 2 6 2. 1 3. 7 1. 2. 3. 1. 2. 1 3. 8 1. 9 2. 50 3. 4. 10 5. 10 6. 25c.c. 4 7. 8. 50c.c. 9. 10. 11 12 25.63
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2007 5 1 2 2..2 3..3 4..4 5 6 6..12 1...15 1 1 1 2 3 4 2 1 2 3 4 1 2 1 1 2 3 1% 4 70% 5 0.05 0.2% 6 2 2 1 7 10% 3 5% 2 0.3 5% 3 70 80% 4 5 90% 40% 9 1 80% 70% 6 40% 15 5 1 12 24 70% 70% 7 70% 2% 1 2 3
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从 菜 鸟 到 高 手 - 手 把 手 教 你 qpcr 教 程 II --- 定 量 PCR 原 理 常 见 问 题 分 析 和 数 据 统 计 分 析 前 言 由 于 Real-time qpcr 的 众 多 优 点, 现 在 已 经 是 生 命 科 学 领 域 的 一 项 常 规 技 术 越 来 越 多 的 研 究 文 章 中 涉 及 RT-PCR 的 实 验, 也 基 本 上 被 real-time
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第 一 章 服 装 制 作 工 艺 基 础 知 识 第 一 节 服 装 术 语 服 装 术 语 是 服 装 技 术 专 用 语, 如 服 装 的 每 一 个 品 种 服 装 上 的 每 一 块 裁 片 服 装 制 作 过 程 中 每 一 种 操 作, 以 及 所 使 用 的 工 具 服 装 制 作 过 程 中 出 现 的 各 种 弊 病 和 要 达 到 的 某 些 质 量 要 求 等, 都 有 其
Phire Hot StartII DNA 聚合酶
重 要 提 示 Phusion 人 源 样 本 直 接 PCR 试 剂 盒 产 品 货 号 :F-150,200rxns x 20μl 变 性 温 度 为 98 C 退 火 温 度 与 众 多 常 规 DNA 聚 合 酶 ( 如 Taq DNA 聚 合 酶 ) 不 同, 具 体 请 参 照 6.3 延 伸 时, 若 扩 增 子 片 段 1kb, 则 延 伸 时 间 设 定 为 15s 即 可 ; 若
摘 要 我 們 一 開 始 參 加 科 展 就 以 能 食 用 為 目 的, 之 前 在 課 餘 時 間 曾 做 過 一 次 膨 糖, 覺 得 好 吃 又 新 奇, 決 定 以 膨 糖 為 主 題, 進 行 相 關 研 究 實 驗 過 程 中, 我 們 發 現 要 成 功 做 出 膨 糖 和 糖 水
新 北 市 103 學 年 度 中 小 學 科 學 展 覽 會 作 品 說 明 書 科 別 : 物 理 組 別 : 國 小 作 品 名 稱 :" 膨 了 一 聲 飛 出 了 糖 之 濃 不 濃 差 很 大 關 鍵 詞 : 膨 糖 糖 水 溶 液 編 號 : 摘 要 我 們 一 開 始 參 加 科 展 就 以 能 食 用 為 目 的, 之 前 在 課 餘 時 間 曾 做 過 一 次 膨 糖, 覺 得
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2-1 DNA 1 DNA(plasmid DNA) pet21ahmyh hmyh (6A C) BL-21 Gold strain, 2003 2-1 pet21ahmyh Qiagen mini-preparation kit DNA DNA DNA( hmyh ) DNA( hmyh ) DNA DNA 2-2 DNA DNA AS-PCR 2 DNA DNA genomic DNA 30
CD20检测试剂盒（免疫组化）说明书
平 滑 肌 肌 动 蛋 白 检 测 试 剂 盒 ( 免 疫 组 化 ) 说 明 书 产 品 名 称 通 用 名 称 : 平 滑 肌 肌 动 蛋 白 检 测 试 剂 盒 ( 免 疫 组 化 ) 英 文 名 称 :Smooth Muscle Actin Detection KIT (Immunohistochemistry) 包 装 规 格 30 人 份 / 盒 ;60 人 份 / 盒 预 期 用 途
绎 阴 元元 510515 Caco-2 Caco-2 P 课题调查对象：
1 大 陆 地 方 政 府 大 文 化 管 理 职 能 与 机 构 整 合 模 式 比 较 研 究 武 汉 大 学 陈 世 香 [ 内 容 摘 要 ] 迄 今 为 止, 大 陆 地 方 政 府 文 化 管 理 体 制 改 革 已 经 由 试 点 改 革 进 入 到 全 面 推 行 阶 段 本 文 主 要 通 过 结 合 典 型 调 查 法 与 比 较 研 究 方 法, 对 已 经 进 行 了 政 府
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中 国 农 学 通 报 212,28():2-27 Chinese Agricultural cience Bulletin 血 清 11 型 鸭 疫 里 默 氏 菌 的 分 离 鉴 定 1,2 2, 2, 2, 2, 2, 2, 杨 晓 辉, 程 龙 飞, 陈 红 梅, 施 少 华, 傅 光 华, 万 春 和, 黄 瑜 ( 1 福 建 省 农 业 科 学 院 畜 牧 兽 医 研 究 所, 福 州
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第 3 章 孵 化 技 术 本 章 按 照 种 蛋 孵 化 的 程 序, 介 绍 了 蛋 的 构 造 与 形 成 种 蛋 的 管 理 家 禽 的 胚 胎 发 育 人 工 孵 化 的 条 件 和 控 制 孵 化 机 的 构 造 与 管 理 孵 化 效 果 的 检 查 与 分 析 以 及 初 生 雏 的 处 理 等 内 容 对 种 蛋 的 选 择 与 消 毒 孵 化 条 件 的 标 准 与 控 制 孵
标题
吉林农业大学学报 ２０１６ ３８ １ ８７ ９１ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｊｉｌｉｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｈｔｔｐ ｘｕｅｂａｏ ｊｌａｕ ｅｄｕ ｃｎ Ｅ ｍａｉｌ ｊｌｎｄｘｂ ｖｉｐ ｓｉｎａ ｃｏｍ 神 经 生 长 因 子 ｍｒｎａ 在 鹅 等 级 前 卵 泡 中 的 表达 刘璐璐 隋玉健 朱海洋 武惠岩 杨 辉 孙永峰 吉林农业大学动物科学技术学院 长春 １３０１１８
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論 : 類 90028 老 寧 : 量 力 狀 力 降 了 力 便 料 不 不 立 不 利 療 了 不 度 狀 不 度 類 狀 up regulate TLR 類 : 葉 Discorea yam 來 神 1 益 益 精 列 料 料 兩 類 1. 來 殺 2. 淋 識 力 B APC macrophage monocyte immature dendritic cell idc 淋 2 Dendritic
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知 识 目 标 : 了 解 药 物 鉴 别 的 意 义 学 习 目 标 理 解 药 物 鉴 别 试 验 的 项 目 掌 握 药 物 鉴 别 试 验 的 常 用 方 法 能 力 目 标 : 能 熟 练 应 用 药 物 鉴 别 的 常 用 方 法 对 药 物 进 行 鉴 别 第 一 节 概 述 药 物 的 鉴 别 试 验 是 根 据 药 物 的 组 成 分 子 结 构 和 理 化 性 质, 采 用 化
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中 華 民 國 一 百 零 一 年 二 月 臺 大 農 業 推 廣 通 訊 雙 月 刊 91 Agricultural Extension Newsletter Bimonthly College of Bio-Resources and Agriculture, National Taiwan University 發 行 人 / 徐 源 泰 主 編 / 岳 修 平 編 輯 / 陳 雅 美 張 連
3 案 件 受 理 3.1 刑 事 案 件 的 送 检 人 员 需 提 供 公 检 法 司, 以 及 保 卫 部 门 的 盖 有 公 章 的 鉴 定 委 托 书 或 公 函, 并 出 示 本 人 的 工 作 证 民 事 案 件 的 送 检 人 员 需 提 供 委 托 单 位 或 个 人 的 委 托
法 庭 科 学 DNA 实 验 室 检 验 规 范 GA-T383-2002 1 范 围 本 标 准 规 定 了 法 庭 科 学 DNA 实 验 室 检 验 应 遵 守 的 基 本 要 求 本 标 准 适 用 于 所 有 从 事 法 庭 科 学 检 验 的 DNA 实 验 室 2 定 义 本 标 准 采 用 下 列 定 义 2.1 前 期 检 验 prior examination DNA 检 验
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127 Insulin IR Glucose transport GLUT4 P P IRS PI3K P GLUT4 Akt/PKB GSK-3 P Inactive GSK-3 Active GS Active GS Inactive P Glycogen synthesis 128 129 IRS-1 PH PTB 1242 IRS-2 PH PTB NGDY NDQY 1338 IRS-3
10 Animal Husbandry & Veterinary Medicine 2012 Vol. 44 No. 4 cantly in the presence of indicating that the resistant protein was not expressed in the
2012 44 4 9 2 2 3 1. 225009 2. 200240 3. 200072 R PCR p215c3lyz R pqe-31 R IPTG Western blotting pqe- p215c3lyz COS- DH5α OD 600 Western blotting p215c3lyz Western blotting R R S852. 4 A 0529-5130 2012
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荧光定量PCR
荧 光 定 量 PCR 荧 光 定 量 PCR 原 理 荧 光 定 量 PCR 最 早 称 TaqMan PCR, 后 来 也 叫 Real-Time PCR, 是 美 国 PE(Perkin Elmer) 公 司 1995 年 研 制 出 来 的 一 种 新 的 核 酸 定 量 技 术 该 技 术 是 在 常 规 PCR 基 础 上 加 入 荧 光 标 记 探 针 或 相 应 的 荧 光 染 料
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/ DNA DNA Clean & Concentrator DCC 讓您笑嘻嘻! DM TEL (02)2720-2215 TEL (05)2844-162 TEL (03)6684-5 8 6 TEL (06)2890-665 TEL (04)2463-3591 TEL (07)3470-143 免付費客服專線 讓您笑嘻嘻!... 1 Zymo Clean-Spin Technology spin
目 录 第 一 部 分 序 厦 门 大 学 嘉 庚 学 院 简 介... 3 第 二 部 分 教 学 管 理 厦 门 大 学 嘉 庚 学 院 教 师 工 作 规 范... 5 厦 门 大 学 嘉 庚 学 院 课 程 班 管 理 说 明... 15 厦 门 大 学 嘉 庚 学 院 本 科 生 毕 业
教 师 手 册 厦 门 大 学 嘉 庚 学 院 教 务 部 二 〇 一 一 年 编 目 录 第 一 部 分 序 厦 门 大 学 嘉 庚 学 院 简 介... 3 第 二 部 分 教 学 管 理 厦 门 大 学 嘉 庚 学 院 教 师 工 作 规 范... 5 厦 门 大 学 嘉 庚 学 院 课 程 班 管 理 说 明... 15 厦 门 大 学 嘉 庚 学 院 本 科 生 毕 业 论 文 ( 设 计
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農 業 群 專 業 科 目 ( 二 ) 1. 有 關 生 命 現 象 之 配 對, 下 列 何 者 錯 誤? (A) 光 合 作 用 - 新 陳 代 謝 (B) 金 蟬 脫 殼 - 繁 殖 (C) 趨 光 性 - 感 應 (D) 狗 急 跳 牆 - 運 動 2. 下 列 何 者 是 膜 狀 構 造 的 胞 器? (A) 粒 線 體 (B) 核 糖 體 (C) 中 心 粒 (D) 染 色 體 3. 下
B 责 任 编 辑 杨 丽 娜 版 式 王 玮 吉 校 对 叶 程 月 防 御 寒 潮 特 刊 综 合 众 志 成 城 严 阵 以 待 防 御 寒 潮 区 发 改 局 做 好 粮 食 市 场 保 供 稳 价 本 报 讯 ( 通 讯 员 李 雪 峰 )
中 共 黄 岩 区 委 机 关 报 第 2124 期 本 期 8 版 2016 年 1 月 22 日 星 期 五 农 历 乙 未 年 腊 月 十 三 富 强 民 主 文 明 和 谐 自 由 平 等 公 正 法 治 爱 国 敬 业 诚 信 友 善 新 闻 热 线 :89160000 实 行 24 小 时 值 班 制 度 开 展 地 毯 式 安 全 隐 患 排 查 我 区 全 面 发 动 坚 决 打 赢
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205 2015. 6 ACADEMICS No. 6 Jun. 2015 100875 The Riddle stepmother wicked arts ill - disposed 131 2015. 6 witch the old woman red eyes 1 Strega Nona Grandma Witch 2 Strega Nona old woman 132 8 5 4 3 3
1 ( ) 1 38 38 39 40 40 41 ( ) 42 43 ( ) 44 45 48 49 51 51 51 52 53 1 53 54 55 55 56 56 58 60 60 61 62 63 64 67 67 69 70 72 2 72 74 75 76 76 77 78 78 79 79 81 81 83 86 87 88 88 89 90 90 91 92 93 93 95 97
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我 难 度 : 高 级 对 们 现 不 在 知 仍 道 有 听 影 过 响 多 少 那 次 么 : 研 英 究 过 文 论 去 写 文 时 作 的 表 技 引 示 巧 言 事 : 部 情 引 分 发 言 该 生 使 在 中 用 过 去, 而 现 在 完 成 时 仅 表 示 事 情 发 生 在 过 去, 并 的 哪 现 种 在 时 完 态 成 呢 时? 和 难 过 道 去 不 时 相 关? 是 所 有
國家圖書館典藏電子全文
i ii Abstract The most important task in human resource management is to encourage and help employees to develop their potential so that they can fully contribute to the organization s goals. The main
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第 24 卷 第 5 期 2015 年 5 月 碘 131 doi:10.3978/j.issn.1005-6947.2015.05.005 http://dx.doi.org/10.3978/j.issn.1005-6947.2015.05.005 Chinese Journal of General Surgery, 2015, 24(5):643 647. Chinese Journal of
去 中 和 ; [3] 消 化 最 好 在 37 培 养 箱 或 室 温 25 以 上 的 环 境 下 进 行 消 化, 消 化 2--5 min 后, 把 培 养 瓶 放 在 显 微 镜 下 观 察, 发 现 胞 质 回 缩 细 胞 间 隙 增 大, 细 胞 变 圆 后, 立 即 将 培 养 瓶
![去 中 和 ; [3] 消 化 最 好 在 37 培 养 箱 或 室 温 25 以 上 的 环 境 下 进 行 消 化, 消 化 2--5 min 后, 把 培 养 瓶 放 在 显 微 镜 下 观 察, 发 现 胞 质 回 缩 细 胞 间 隙 增 大, 细 胞 变 圆 后, 立 即 将 培 养 瓶](/thumbs/42/23090277.jpg "去 中 和 ; [3] 消 化 最 好 在 37 培 养 箱 或 室 温 25 以 上 的 环 境 下 进 行 消 化, 消 化 2--5 min 后, 把 培 养 瓶 放 在 显 微 镜 下 观 察, 发 现 胞 质 回 缩 细 胞 间 隙 增 大, 细 胞 变 圆 后, 立 即 将 培 养 瓶")
第 一 节 细 胞 培 养 的 相 关 技 术 1 细 胞 的 复 苏 概 述 复 苏 细 胞 要 求 快 速 融 化 的 手 段, 这 样 可 以 保 证 细 胞 外 结 晶 在 很 短 的 时 间 内 即 融 化 避 免 由 于 缓 慢 融 化 使 水 分 渗 入 细 胞 内 形 成 胞 内 再 结 晶 对 细 胞 造 成 损 害 用 品 培 养 液 吸 管 离 心 管 培 养 瓶 步 骤 [1]
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目 录 热 菜... 4 酸 菜 鱼... 4 可 乐 鸡 翅... 6 小 白 菜 熬 洋 芋... 7 糖 醋 排 骨... 8 醋 溜 白 菜... 10 酱 排 骨... 10 干 炸 肉... 11 五 香 熏 鱼... 12 豆 角 丝 炒 肉... 12 小
www.xxhjy.com 菜 谱 www.xxhjy.com 目 录 热 菜... 4 酸 菜 鱼... 4 可 乐 鸡 翅... 6 小 白 菜 熬 洋 芋... 7 糖 醋 排 骨... 8 醋 溜 白 菜... 10 酱 排 骨... 10 干 炸 肉... 11 五 香 熏 鱼... 12 豆 角 丝 炒 肉... 12 小 炒 肉... 13 香 菜 炒 鸡 蛋... 14 烧 鸡 块...
論元人戰爭劇與戰爭場面的喜劇精神
2003 年 7 月 頁 183-208 東 華 大 學 人 文 社 會 科 學 學 院 從 陂 塘 到 大 圳 桃 園 臺 地 的 水 利 變 遷 陳 鴻 圖 * 提 要 受 地 形 及 水 文 環 境 的 影 響, 灌 溉 一 直 是 桃 園 臺 地 急 需 解 決 的 問 題, 先 民 利 用 土 壤 及 地 勢 的 特 性, 在 本 區 大 量 興 築 陂 塘, 最 多 時 曾 高 達 八
南華大學數位論文
The Consumption Culture of Wine in Taiwan Abstract This thesis use the literature analysis method to discuss the consumption culture of wine in Taiwan. This thesis attempts to understand the development
实验指导编写模板
顾 勇 编 著 2008 年 3 月 目 录 前 言 2 动 物 生 物 学 实 验 守 则 3 实 验 一 : 动 物 的 细 胞 和 组 织 及 多 细 胞 动 物 的 胚 胎 发 育 5 实 验 二 : 原 生 动 物 系 列 实 验 9 实 验 三 : 蛔 虫 和 环 毛 蚓 的 比 较 解 剖 13 实 验 四 :( 或 日 本 沼 虾 ) 和 棉 蝗 的 比 较 解 剖 与 观 察 18
Abstract Many health improvement projects have been implemented in indigenous communities, mostly with the focus on dealing with alcoholism
2010 3 5-58 * ** The De-Spirited Drink Exploring the Capitalization Process of Indigenous Societies in Taiwan by Hsiao-Chuan HSIA Keywords: alcoholism, indigenous peoples, aboriginals, development of capitalism,
mode of puzzle-solving
91 12 145 174 * * 146 1 1 mode of puzzle-solving 91 12 147 83-105 148 2 3 2 3 151 91 12 149 150 4 4 101-104 91 12 151 identity 5 6 7 5 6 7 100 140 152 8 9 10 8 31-32 9 27-29 10 sense of political efficacy
标题
环 球 中 医 药 2016 年 5 月 第 9 卷 第 5 期 摇 Global Traditional Chinese Medicine, May 2016,Vol 郾 9, No 郾 5 摇 557 两 种 电 针 对 脊 髓 损 伤 14 天 后 大 鼠 运 动 功 能 神 经 元 及 MEK2 p 鄄 ERK1 表 达 的 影 响 论 著 宋 良 玉 摇 吕 威 摇 景 泉 凯 摇 莫 雨
BIBLID 0254-4466(2001)19:1 pp. 249-276 19 1 90 6 ** * ** 88 I 2000 8 249 250 19 1 251 1873-1929 1900 1 1902 1 35 1900 1960 7-12 252 19 1 2 3 2 1900 1902 3 2000 129-197 253 4 5 6 4 1902 1962 103 5 Joseph
竹地板知识.docx
一 什 么 是 竹 地 板? 竹 板 拼 接 采 用 粘 胶 剂, 施 以 高 温 高 压 而 成 地 板 无 毒, 牢 固 稳 定, 不 开 胶, 不 变 形 经 过 脱 去 糖 份, 淀 粉, 脂 肪, 蛋 白 质 等 特 殊 无 害 处 理 后 的 竹 材, 具 有 超 强 的 防 虫 蛀 功 能 地 板 六 面 用 优 质 进 口 耐 磨 漆 密 封, 阻 燃, 耐 磨, 防 霉 变 地 板
Culinary Carving and Plate Decoration 選 購 適 合 切 雕 的 蔬 果 食 材 2
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Microsoft PowerPoint - 東坑芋頭解說
鋤 頭 心 芋 香 情 烈 嶼 芋 香 鬆 綿 好 味 道 蕭 副 總 統 為 烈 嶼 芋 代 言 烈 嶼 芋 尚 讚! 烈 嶼 芋 尚 好 吃! 副 總 統 蕭 萬 長 先 生 讚 不 絕 口 鄉 長 洪 成 發 說 這 故 事 時 臉 上 洋 溢 榮 耀 的 表 情 接 著 說 : 100 年 台 北 花 博 期 間, 全 國 各 地 芋 頭 齊 聚 展 場, 現 場 烹 飪 芋 頭 供 人 品
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北 立 聯 :( :( 利 理 Q10 ATP C 尿 : 歷 : : 1. 2. 論. : 不 ( ). 歷 ( ) 勞 勞 見 行 行 : 行 不 說 說 說 了 理 論 365 :120 :120 不 老 : 歷 論 論 行 兩 北 煉 丹 730 錄 劉 刺 論 論 85 85 金 金 130 130 料 40 41 240 240 錄 類 322 金 ( 劉 李 丹 ): 劉 說 李 論
李東垣 元氣陰火論
李 東 垣 元 氣 陰 火 論 報 告 者 : 田 雅 之 總 綱 脾 胃 氣 機 升 降 生 理 陰 火 發 生 機 理 探 討 -(1) 因 於 脾 胃 氣 機 升 降 失 調 -(2) 而 發 火 與 元 氣 不 兩 立 之 說 -(3) 從 營 衛 觀 點 探 討 氣 虛 發 熱 議 甘 溫 除 熱 法 - 從 藥 物 配 伍 探 討 陰 火 學 說 脾 胃 升 降 生 理 ( 一 ) 經
P3 膠體電泳法
Polyacrylamide Gel Electrophoresis 聚 丙 烯 醯 胺 膠 体 電 泳 莊 榮 輝 3.1 電 泳 原 理 帶 電 分 子 在 電 場 中 能 夠 移 動, 稱 作 泳 動, 泳 動 的 程 度 稱 為 泳 動 率 (mobility).. 泳 動 率 ~ ( 所 外 加 電 壓 mv) ( 分 子 之 淨 電 荷 ) 分 子 與 介 質 間 之 摩 擦 力 上 述
考 试 科 目 代 码 考 试 科 目 名 称 724 教 育 心 理 学 728 建 筑 理 论 综 合 729 中 外 美 术 史 及 理 论 730 美 术 史 论 732 城 乡 规 划 基 本 理 论 与 相 关 知 识 733 细 胞 生 物 学 734 教 育 学 综 合 801 理
2016 年 硕 士 研 究 生 初 试 考 试 自 命 题 科 目 大 纲 查 询 导 航 页 考 试 科 目 代 码 考 试 科 目 名 称 211 翻 译 硕 士 英 语 240 德 语 245 二 外 俄 语 246 二 外 日 语 247 二 外 德 语 248 二 外 法 语 333 教 育 学 综 合 337 工 业 设 计 理 论 344 风 景 园 林 基 础 349 药 学 综
36(4) (2004) Journal of Soil and Water Conservation, 36(4) (2004) earthworms dig soil on surface and prevent plants to grow. But until D
(1) (2) (3) 16 20 35 Effect of Vegetation and Soil Properties on Earthworm Population Li-Ling Lin Professor, Department of Soil and Water Conservation, National Chung Hsing University, Taichung, Taiwan,
2
ISSN 0255-6162 GPN 2006900031 287 93 11 20 161-2 02 26531318 http://www.nlfd.gov.tw 1 2 3 287 4 287 5 44 93 13 1 monocrotophos 0.40 ppm 105 1300 99% 6 3 44 106 93 13 1 0.40 ppm 403 40 7 DNA (HPLC) DNA
怀孕多久会有反应,身体会分泌出一种简称叫hcg的(人绒毛膜促性腺激素)
怀 孕 多 久 会 有 反 应, 身 体 会 分 泌 出 一 种 简 称 叫 hcg 的 ( 人 绒 毛 膜 促 性 腺 激 素 ) www.yzszfgjj.com http://www.yzszfgjj.com 怀 孕 多 久 会 有 反 应, 身 体 会 分 泌 出 一 种 简 称 叫 hcg 的 ( 人 绒 毛 膜 促 性 腺 激 素 ) 其 中 还 可 见 有 节 律 的 胎 心 搏 动
附件四：作品送展表（夾於作品說明書第一頁，請勿裝訂）
嘉 義 市 第 31 屆 中 小 學 科 學 展 覽 會 作 品 說 明 書 科 別 : 生 活 與 應 用 科 學 科 組 別 : 國 小 組 作 品 名 稱 : 果 真 有 酵 - 水 果 酵 素 的 應 用 關 鍵 詞 : 水 果 酵 素 環 保 編 號 : 1 摘 要 本 研 究 主 要 的 目 的 是 蒐 集 常 見 的 水 果, 利 用 多 餘 的 果 皮 和 剩 餘 的 果 肉 製 造
中華民國 第51屆中小學科學展覽會
中 華 民 國 第 51 屆 中 小 學 科 學 展 覽 會 作 品 說 明 書 國 小 組 物 理 科 第 三 名 080115 問 水 哪 得 高 如 許? 為 有 熱 源 伴 水 來 學 校 名 稱 : 桃 園 縣 龍 潭 鄉 三 坑 國 民 小 學 作 者 : 指 導 老 師 : 小 六 陳 嬿 云 黃 啟 晉 小 六 張 婉 怡 關 鍵 詞 : 熱 脹 冷 縮 模 擬 燃 燒 影 響 力
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热 带 海 洋 学 报 JOURNAL OF TROPICAL OCEANOGRAPHY 2011 年 第 30 卷 第 1 期 :107 112 海 洋 生 物 学 http://jto.scsio.ac.cn; http://www.jto.ac.cn 鱾 肖 云 朴 1, 徐 善 良 2, 孙 敏 3, 吕 慧 明 3 (1., 325400; 2., 315211; 3., 315211)
臺 灣 圖 書 館 管 理 季 刊 第 五 卷 第 二 期 / 98 年 4 月 only a small part can be seen. Literature creation is just like iceberg floating on the sea, readers can only
冰 山 理 論 下 的 文 藝 創 作 觀 : 王 鼎 鈞 千 手 捕 蝶 析 論 ( 上 ) 頁 93~104 冰 山 理 論 下 的 文 藝 創 作 觀 : 王 鼎 鈞 千 手 捕 蝶 析 論 ( 上 ) Views of Literature Creation under Iceberg (Part I) 黃 雅 莉 Ya-Li Huang 新 竹 教 育 大 學 語 文 系 教 授 Professor,
5期xin
中 国 农 学 通 报 2014,30(5):23-27 Chinese Agricultural Science Bulletin 大 肠 杆 菌 生 物 膜 的 筛 选 及 生 长 曲 线 测 定 喻 华 英, 李 启 峰 ( 塔 里 木 大 学 动 物 科 学 学 院, 新 疆 阿 拉 尔 843300) 摘 要 : 为 探 究 犊 牛 腹 泻 病 中 大 肠 杆 菌 生 物 膜 的 形 成
陆睿等 重组人纤溶酶原激活剂转基因兔的制备及其表达产物的检测 05,(0) 7 作用较大 半衰期短的缺点 重组人纤溶酶原 HCG 097丽珠集团丽珠制药厂 胎牛血清 激活剂 rhpaf E K 区缺失体 具有出血副作 SH0070.0HyClone M G80Sigma 用小 半衰期长 溶栓活性高等
生物技术通报 研究报告 IOTECHNOLOGY ULLETIN 05, (0):6- 重组人纤溶酶原激活剂转基因兔的制备及其表达产物的 检测 陆睿 宋绍征 祁正强 葛欣 邵宾 成勇 江苏省转基因动物制药工程研究中心扬州 5009 摘 要 人组织纤溶酶原激活剂 ht-pa 是临床血栓疾病治疗的主要生物药品应用转基因动物乳腺生物反应器制备已有 报道但重组人纤溶酶原激活剂 rhpa 在转基因动物中表达尚未见报道
1 MCF-7 VEGF spss 20 5 ~ 6 h Cck-8 6 h r 2 = Cck-8 6 h 450 nm v Cck-8 v = h 450 nm 3 A = A - A A r 2 Cck -8 Mcf-7 1
42 1 Vol 42 No 1 2018 1 Journal of Jiangxi Normal University Natural Science Jan 2018 1000-5862 2018 01-0100-06 MCF-7 VEGF 1 2 1 1 1 1* 1 570228 2 70102 Mcf -7 Cck-8 TUNEL- DAPI Cck-8 Cck-8 TUNEL-DAPI
Part 1 10 P18 1 Structure of Human Body
體 能 訓 練 圖 解 全 書 Part 1 10 P18 1 Structure of Human Body Part 1體能訓練的基礎知識 人體的各級構造 元素 DNA 原子 人體的構造 1 水 有機化合物 水 物質的最小單位 包括氧 碳 氫 氮 鈣 氯 鎂等 蛋白質 脂質 醣類 核酸 礦物 組織 細胞的集合體 細胞 生物體的基本單位 人體的組成 上皮細胞 上皮組織 上皮組織 結締組織 肌肉組織
... (1)....(3)..(5)... (22) (22)......(22)... (22)... (23)....(33)... (33)....(34)....(47)....(51).....(52)......(61)......(62)
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第 30 卷 第 3 期 2015 年 6 月 天 津 科 技 大 学 学 报 Journal of Tianjin University of Science & Technology Vol. 30 No. 3 Jun. 2015 DOI:10.13364/j.issn.1672-6510.20140066 过 表 达 PNP 对 肌 苷 生 产 菌 合 成 利 巴 韦 林 的 影 响 杨 书
Vit. C
reactive oxygen species DPPH 15g/ml 88.8 200g/ml 78 4g/ml DNA 240g/ml 1 ; BHT C E (1) 2 DPPH DNA DNA NRK-52E 3 H 2 O 2 DMEM C (Vit. C) 2,2-dipheny1-1-picrylhydrazyl (DPPH) phenazine methosulfate PMS nitro
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骨 有 明 訊 肌 動 蛋 白 絲 與 細 胞 形 態 關 係 之 研 究 科 別 : 生 物 科 第 48 屆 科 學 展 覽 北 二 區 佳 作 作 者 : 呂 苹 瑋 范 競 勻 指 導 老 師 : 陳 季 瑄 老 師 壹 摘 要 本 研 究 以 人 類 的 子 宮 頸 癌 細 胞 (HeLa cell) 為 細 胞 骨 架 的 觀 察 對 象, 經 過 培 養 與 繼 代, 利 用 免 疫
Abstract Today, the structures of domestic bus industry have been changed greatly. Many manufacturers enter into the field because of its lower thresh
SWOT 5 Abstract Today, the structures of domestic bus industry have been changed greatly. Many manufacturers enter into the field because of its lower threshold. All of these lead to aggravate drastically
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Untitiled
392 抗 癫 药 物 疗 效 与 安 全 性 周 列 民 关 键 词 癫 ; 药 物 疗 法 ; 药 物 毒 性 ; 药 物 过 敏 ; 内 分 泌 系 统 疾 病 ; 妊 娠 ; 综 述 文 献 DOI:10.3969/j.issn.1672-6731.2011.04.005 疾 病 状 态 的 药 物 干 预 是 内 科 治 疗 的 重 要 方 法 之 一, 药 物 疗 效 和 安 全 性 在
女性生殖器官介紹/月經和排卵的關係 (I) (II) (III)
女 性 生 殖 器 官 介 紹 / 月 經 和 排 卵 的 關 係 (I) (II) (III) By: 李 碧 雪 (October 4, 11, 18 & 25, 2010) 女 性 生 殖 器 官 : 1. 卵 巢 2. 內 生 殖 器 官 : 輸 卵 管, 子 宮, 陰 道 3. 外 生 殖 器 官 : 大 陰 唇, 小 陰 唇, 陰 蒂 4. 乳 腺 輸 卵 管 (uterine tubes)