缘 怨 园 中 国 肿 瘤 生 物 治 疗 杂 志, 圆 园 员 源 年 员 园 月, 圆 员 ( 缘 ) 员 摇 员 援 员 摇 杂 耘 孕 栽 怨 基 因 甲 基 化 应 用 于 筛 查 悦 砸 悦 的 原 理 杂 耘 孕 栽 怨 的 结 构 和 生 理 作 用 杂 耘 孕 栽 怨 基 因 位

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1 中 国 肿 瘤 生 物 治 疗 杂 志 摇 澡 贼 贼 责 : 辕 辕 憎 憎 憎 援 遭 蚤 燥 贼 澡 藻 则 援 燥 则 早 悦 澡 蚤 灶 允 悦 葬 灶 糟 藻 则 月 蚤 燥 贼 澡 藻 则, 韵 糟 贼 援 圆 园 员 源, 灾 燥 造 援 圆 员, 晕 燥 援 缘 缘 愿 怨 凿 燥 蚤 : 员 园 援 猿 愿 苑 圆 辕 躁 援 蚤 泽 泽 灶 援 员 园 园 苑 鄄 猿 愿 缘 载 援 圆 园 员 源 援 园 缘 援 园 圆 园 综 摇 述 利 用 杂 耘 孕 栽 怨 基 因 甲 基 化 检 测 筛 查 结 直 肠 癌 的 研 究 进 展 砸 藻 泽 藻 葬 则 糟 澡 责 则 燥 早 则 藻 泽 泽 燥 枣 皂 藻 贼 澡 赠 造 葬 贼 藻 凿 杂 耘 孕 栽 怨 早 藻 灶 藻 蚤 灶 贼 澡 藻 凿 藻 贼 藻 糟 贼 蚤 燥 灶 枣 燥 则 糟 燥 造 燥 则 藻 糟 贼 葬 造 糟 葬 灶 糟 藻 则 员, 圆 宋 乐 乐 员, 李 月 敏 猿 源, 宫 媛, 何 宝 明 ( 员 援 解 放 军 第 猿 园 怨 医 院 放 疗 科, 北 京 员 园 园 园 怨 员 ; 圆 援 博 尔 诚 ( 北 京 ) 科 技 有 限 公 司, 北 京 员 园 园 员 苑 远 ; 猿 援 解 放 军 总 医 院 消 化 科, 北 京 员 园 园 愿 缘 猿 ; 源 援 解 放 军 第 猿 园 怨 医 院 核 医 学 科, 北 京 员 园 园 园 怨 员 ) [ 摘 摇 要 ] 摇 结 直 肠 癌 发 病 率 位 居 全 球 恶 性 肿 瘤 第 三 位, 早 期 诊 断 和 治 疗 可 以 大 大 降 低 结 直 肠 癌 的 病 死 率 由 于 目 前 临 床 较 普 遍 使 用 的 粪 便 潜 血 和 结 肠 镜 检 查 患 者 依 从 性 低, 所 以 外 周 血 杂 藻 责 贼 蚤 灶 怨 ( 杂 耘 孕 栽 怨 ) 基 因 甲 基 化 检 测 为 结 直 肠 癌 早 期 诊 断 和 筛 查 提 供 了 一 个 较 为 有 前 景 的 选 项 截 至 目 前 有 数 项 临 床 试 验 证 明 此 检 测 对 结 直 肠 癌 的 灵 敏 度 和 特 异 性 较 高, 与 癌 分 期 有 一 定 相 关 性, 其 检 测 效 果 优 于 化 学 法 粪 便 潜 血 检 测 及 糖 蛋 白 类 肿 瘤 标 志 物, 与 免 疫 学 粪 便 潜 血 检 测 和 粪 便 阅 晕 粤 检 测 相 比, 也 具 备 一 定 优 势 此 检 测 对 结 直 肠 癌 前 病 变 如 腺 瘤 的 检 测 效 果 仍 有 待 观 察, 但 其 有 可 能 成 为 结 直 肠 癌 治 疗 效 果 复 发 和 转 移 的 监 测 指 标, 并 对 肿 瘤 的 分 期 和 分 型 有 辅 助 作 用 本 文 将 简 要 介 绍 此 检 测 的 原 理, 重 点 回 顾 以 此 方 法 检 测 结 直 肠 癌 的 临 床 研 究, 并 与 其 他 方 法 进 行 比 较, 最 后 简 述 其 未 来 可 能 的 应 用 方 向 [ 关 键 词 ] 摇 杂 藻 责 贼 蚤 灶 怨 ( 杂 耘 孕 栽 怨 ); 阅 晕 粤 甲 基 化 ; 结 直 肠 癌 ; 腺 瘤 ; 息 肉 ; 便 潜 血 试 验 [ 中 图 分 类 号 ] 摇 砸 苑 猿 缘 援 猿 ; 砸 苑 猿 园 援 圆 摇 摇 摇 摇 [ 文 献 标 志 码 ] 摇 粤 摇 摇 摇 摇 [ 文 章 编 号 ] 摇 员 园 园 苑 鄄 猿 愿 缘 载 ( 圆 园 员 源 ) 园 缘 鄄 园 缘 愿 怨 鄄 园 远 摇 摇 在 欧 洲 和 美 国, 结 直 肠 癌 ( 糟 燥 造 燥 则 藻 糟 贼 葬 造 糟 葬 灶 糟 藻 则, 悦 砸 悦 ) 已 成 为 排 名 第 二 和 第 三 位 新 增 癌 症 病 例 的 原 [ 员 鄄 圆 因 ] 在 中 国, 估 计 圆 园 员 圆 年 新 增 的 悦 砸 悦 病 例 约 源 园 [ 猿 万, 已 成 为 新 发 肿 瘤 病 例 和 死 亡 的 第 三 大 原 因 ] 定 期 筛 查 可 以 早 期 发 现 结 直 肠 癌, 从 而 进 行 早 期 干 预, 以 防 止 疾 病 进 展 甚 至 治 愈 疾 病 然 而, 远 园 豫 耀耀耀耀耀耀耀耀 [ 源 苑 园 豫 患 者 在 首 次 确 诊 时 即 为 中 晚 期 悦 砸 悦 ] 美 国 预 防 服 务 工 作 小 组 ( 哉 灶 蚤 贼 藻 凿 杂 贼 葬 贼 藻 泽 孕 则 藻 增 藻 灶 贼 蚤 增 藻 杂 藻 则 增 蚤 糟 藻 泽 栽 葬 泽 噪 云 燥 则 糟 藻, 哉 杂 孕 杂 栽 云 ) 的 统 计 数 据 显 示, 如 果 健 康 人 每 年 进 行 常 规 定 期 检 查, 实 现 悦 砸 悦 的 早 期 诊 治, 可 避 免 约 远 园 豫 悦 砸 悦 患 者 病 死, 平 均 五 年 生 存 率 可 以 从 [ 缘 源 远 豫 提 高 到 苑 猿 豫 ] 因 此, 有 效 的 早 期 筛 查 方 法, 可 提 高 悦 砸 悦 患 者 的 五 年 生 存 率, 降 低 病 死 率 目 前 临 床 主 要 运 用 两 种 方 法 进 行 悦 砸 悦 筛 查 : 粪 便 潜 血 试 验 ( 云 藻 糟 葬 造 燥 糟 糟 怎 造 贼 遭 造 燥 燥 凿 贼 藻 葬 贼 泽, 云 韵 月 栽 ) 和 结 肠 镜 检 查 云 韵 月 栽 主 要 包 括 早 云 韵 月 栽 ( 愈 创 木 脂 粪 便 潜 血 试 验 ) 蚤 云 韵 月 栽 ( 免 疫 粪 便 潜 血 试 验 ) 和 云 陨 栽 ( 人 体 血 红 蛋 白 特 异 性 粪 便 免 疫 化 学 试 验 ) 作 为 常 规 使 用 的 筛 查 方 法, 早 云 韵 月 栽 易 受 食 物 药 物 和 其 他 因 素 的 影 响, 可 导 致 假 阳 性 结 果, 且 稳 定 性 较 差 ; 陨 云 韵 月 栽 的 敏 感 度 和 特 异 性 明 显 优 于 早 云 韵 月 栽, 但 此 检 测 仍 然 是 定 性 试 验, 如 果 样 品 采 集 后 放 置 过 久 ( 超 过 缘 凿 ), 其 检 出 率 明 显 [ 远 下 降 ] ; 云 陨 栽 与 杂 耘 孕 栽 怨 检 测 相 似, 其 敏 感 度 较 高, 但 价 格 更 昂 贵 相 比 之 下, 结 肠 镜 检 查 是 侵 入 性 的, 需 要 肠 道 准 备, 以 确 保 大 肠 管 腔 视 野 良 好 另 外, 肠 镜 检 查 有 一 系 列 并 发 症, 如 肠 活 检 部 位 出 血 肠 穿 孔 和 [ 苑 感 染 ] ; 该 检 查 有 多 种 禁 忌 证, 如 严 重 的 心 脏 疾 病 心 肺 功 能 不 全 急 性 腹 泻 严 重 溃 疡 性 结 肠 炎 结 肠 克 罗 恩 病 腹 膜 炎 和 妊 娠 等 因 此, 无 论 是 云 韵 月 栽 还 是 结 肠 镜 检 查, 患 者 依 从 性 均 较 差 上 海 市 疾 病 预 防 控 制 中 心 监 测 显 示, 仅 有 不 到 缘 豫 的 上 海 市 民 做 [ 愿 过 粪 便 隐 血 试 验 检 查, 猿 豫 做 过 肠 镜 检 查 ] 目 前, 亟 待 更 方 便 更 准 确 的 悦 砸 悦 检 查 方 法 以 提 高 筛 查 率 近 缘 年 来, 以 血 浆 检 测 为 基 础 的 泽 藻 责 贼 蚤 灶 怨 ( 杂 耘 孕 栽 怨 ) 基 因 甲 基 化 测 试 为 悦 砸 悦 的 早 期 诊 断 提 供 了 较 有 前 景 的 筛 查 方 法 迄 今 为 止 的 临 床 筛 查 试 验 证 明, 甲 基 化 杂 耘 孕 栽 怨 基 因 是 悦 砸 悦 发 生 过 程 中 早 期 的 特 异 性 生 物 标 志 物 在 悦 砸 悦 的 早 期 阶 段, 甲 基 化 杂 耘 孕 栽 怨 基 因 的 阅 晕 粤 从 坏 死 或 凋 亡 的 肿 瘤 细 胞 被 释 放 到 外 周 循 环 血 液, 通 过 检 测 外 周 血 杂 耘 孕 栽 怨 基 因 的 甲 基 化 水 平 可 以 判 定 悦 砸 悦 的 患 病 风 险 ] [ 基 金 项 目 ] 摇 中 国 博 士 后 科 学 基 金 特 别 资 助 项 目 ( 晕 燥 援 圆 园 员 园 园 猿 苑 苑 愿 ) 孕 则 燥 躁 藻 糟 贼 泽 怎 责 责 燥 则 贼 藻 凿 遭 赠 贼 澡 藻 孕 燥 泽 贼 凿 燥 糟 贼 燥 则 葬 造 杂 糟 蚤 藻 灶 糟 藻 云 燥 怎 灶 凿 葬 贼 蚤 燥 灶 燥 枣 悦 澡 蚤 灶 葬 ( 晕 燥 援 圆 园 员 园 园 猿 苑 苑 愿 ) [ 作 者 简 介 ] 摇 宋 乐 乐 ( 员 怨 苑 怨 原 ), 男, 北 京 市 人, 博 士, 副 研 究 员, 硕 士 生 导 师, 主 要 从 事 肿 瘤 发 病 机 制 肿 瘤 诊 断 与 治 疗 以 及 钙 离 子 通 道 结 构 功 能 和 相 关 疾 病 的 研 究 ; 李 月 敏 ( 员 怨 远 愿 原 ), 女, 博 士, 副 主 任 医 师, 肿 瘤 放 疗 科 主 任, 主 要 从 事 恶 性 肿 瘤 的 基 础 和 临 床 研 究 为 共 同 第 一 作 者 [ 通 信 作 者 ] 摇 李 月 敏 ( 蕴 蚤 再 怎 藻 皂 蚤 灶, 糟 燥 则 则 藻 泽 责 燥 灶 凿 蚤 灶 早 葬 怎 贼 澡 燥 则 ), 耘 鄄 皂 葬 蚤 造 : 造 蚤 赠 怎 藻 皂 蚤 灶 圆 圆 源 岳 泽 蚤 灶 葬 援 糟 燥 皂 ; 宋 乐 乐 ( 杂 燥 灶 早 蕴 藻 造 藻, 糟 燥 鄄 糟 燥 则 则 藻 泽 责 燥 灶 凿 蚤 灶 早 葬 怎 贼 澡 燥 则 ), 耘 鄄 皂 葬 蚤 造 : 泽 燥 灶 早 造 藻 造 藻 岳 泽 蚤 灶 葬 援 糟 燥 皂 为 共 同 通 信 作 者

2 缘 怨 园 中 国 肿 瘤 生 物 治 疗 杂 志, 圆 园 员 源 年 员 园 月, 圆 员 ( 缘 ) 员 摇 员 援 员 摇 杂 耘 孕 栽 怨 基 因 甲 基 化 应 用 于 筛 查 悦 砸 悦 的 原 理 杂 耘 孕 栽 怨 的 结 构 和 生 理 作 用 杂 耘 孕 栽 怨 基 因 位 于 染 色 体 员 苑 择 圆 缘 援 猿, 泽 藻 责 贼 蚤 灶 家 族 是 一 组 高 度 保 守 的 郧 栽 孕 结 合 蛋 白, 广 泛 存 在 于 人 类 细 [ 员 园 胞, 它 们 在 细 胞 分 裂 过 程 中 提 供 结 构 支 撑 ] 在 人 类, 总 共 有 员 猿 个 泽 藻 责 贼 蚤 灶 基 因, 相 应 编 码 员 缘 个 多 [ 员 员 鄄 员 圆 肽 ] 所 有 泽 藻 责 贼 蚤 灶 可 以 形 成 异 聚 复 合 物 并 参 与 高 级 结 构 的 组 成, 例 如 丝 状 结 构 戒 指 状 结 构 和 笼 状 结 构 的 形 成 这 些 独 特 的 结 构 是 控 制 细 胞 过 程 所 必 需 的, 在 肌 动 蛋 白 动 力 学 血 管 生 成 细 胞 运 动 细 胞 增 殖 细 胞 形 状 细 胞 质 分 裂 微 管 调 节, 囊 泡 靶 向 与 胞 吐 作 用 方 面 均 有 重 要 的 生 理 作 用 最 近 在 人 类 细 胞 [ 员 猿 鄄 员 源 ] 中 的 研 究 表 明, 泽 藻 责 贼 蚤 灶 蛋 白 可 以 围 绕 细 菌 病 原 体 形 成 笼 样 结 构, 以 固 定 并 防 止 它 们 入 侵 其 他 细 胞 目 前 认 为, 泽 藻 责 贼 蚤 灶 泽 形 成 稳 定 的 六 聚 体 或 八 聚 体, 六 聚 体 包 含 各 两 分 子 杂 耘 孕 栽 圆 杂 耘 孕 栽 远 和 杂 耘 孕 栽 苑, 而 [ 员 源 八 聚 体 包 含 两 分 子 杂 耘 孕 栽 怨 ] [ 员 缘 ] 研 究 表 明, 杂 耘 孕 栽 怨 在 八 聚 体 中 占 据 了 终 端 的 位 置, 对 亚 基 聚 合 起 关 键 作 用, 并 稳 定 整 个 多 聚 体 杂 耘 孕 栽 怨 在 子 细 胞 [ 员 远 的 胞 质 分 裂 过 程 的 最 后 分 离 阶 段 至 关 重 要 ] 如 果 杂 耘 孕 栽 怨 表 达 不 正 常 或 无 杂 耘 孕 栽 怨 表 达, 胞 质 分 裂 可 能 会 受 到 严 重 影 响 杂 耘 孕 栽 怨 在 泽 藻 责 贼 蚤 灶 多 聚 体 中 的 关 键 作 用 可 能 是 杂 耘 孕 栽 怨 基 因 超 甲 基 化 及 转 录 受 到 抑 制 时 引 起 结 直 肠 组 织 癌 变 的 关 键 因 素 员 援 圆 摇 杂 耘 孕 栽 怨 与 肿 瘤 发 生 的 关 系 最 近 的 研 究 表 明, 泽 藻 责 贼 蚤 灶 与 癌 症 发 生 有 明 显 关 [ 员 苑 鄄 员 愿 系, 这 些 癌 症 包 括 乳 腺 癌 ] [ 员 怨 结 肠 癌 ] 卵 巢 [ 圆 园 鄄 圆 圆 癌 ] [ 圆 猿 头 颈 部 癌 症 ] [ 圆 源 白 血 病 和 淋 巴 瘤 ] 它 也 可 能 在 唐 氏 综 合 症 遗 传 性 神 经 痛 性 肌 萎 缩 和 细 菌 感 染 中 有 病 理 作 用 在 小 鼠 胚 胎 中 敲 除 杂 耘 孕 栽 怨 基 [ 圆 缘 因 对 胚 胎 是 致 命 的 ] 在 乳 腺 癌 和 卵 巢 癌, 杂 耘 孕 栽 怨 基 因 的 区 域 是 杂 合 性 缺 失 中 一 个 频 繁 删 除 的 区 域, 进 一 步 提 示 该 基 因 [ 圆 远 可 能 是 一 个 肿 瘤 抑 制 基 因 ] 在 一 些 肿 瘤 细 胞 系, 杂 耘 孕 栽 怨 的 灾 源 的 转 录 本 的 表 达 消 失 或 减 少, 但 缘 鄄 氮 [ 圆 园 杂 胞 苷 治 疗 后 其 表 达 可 被 重 新 激 活 ] 此 外, 在 杂 耘 孕 栽 怨 赃 灾 圆 转 录 本 的 启 动 子 区 域 的 阅 晕 粤 甲 基 化 是 悦 砸 悦 癌 变 的 标 志 [ 圆 苑 ], 该 基 因 的 异 常 调 控 可 导 致 悦 砸 悦 的 发 生 这 些 证 据 均 支 持 该 基 因 作 为 肿 瘤 抑 [ 圆 愿 ] 制 基 因 的 观 点 研 究 还 发 现, 在 结 肠 癌 活 检 组 织 激 光 显 微 切 割 的 上 皮 细 胞 和 间 质 中, 随 着 疾 病 从 腺 瘤 进 展 到 不 典 型 增 生 再 到 癌, 组 织 中 杂 耘 孕 栽 怨 基 因 皂 砸 晕 粤 的 表 达 进 行 性 减 少, 而 且 悦 砸 悦 组 织 中 杂 耘 孕 栽 怨 的 表 达 量 显 著 低 于 健 康 对 照 组 ; 杂 耘 孕 栽 怨 基 因 超 甲 基 化 与 皂 砸 晕 粤 表 达 缺 失 之 间 存 在 显 著 相 关 性 的 现 象 强 烈 表 明, 杂 耘 孕 栽 怨 皂 砸 晕 粤 的 下 调 和 杂 耘 孕 栽 怨 基 因 表 达 的 减 少 可 能 是 结 肠 组 织 中 良 性 病 变 进 展 为 恶 性 病 变 的 原 因 阅 晕 粤 甲 基 化 主 要 发 生 在 鄄 悦 鄄 磷 酸 鄄 郧 ( 鄄 悦 责 郧 ) 位 点 悦 责 郧 位 点 中, 胞 嘧 啶 与 鸟 嘌 呤 毗 邻 并 以 线 性 方 式 连 接 目 前 认 为, 哺 乳 动 物 中, 远 园 豫 耀耀耀耀耀耀耀耀 怨 园 豫 的 悦 责 郧 [ 圆 怨 鄄 猿 园 处 于 甲 基 化 状 态 ] 未 甲 基 化 的 悦 责 郧 通 常 成 簇 分 布 并 形 成 悦 责 郧 岛 悦 责 郧 岛 经 常 存 在 于 许 多 基 因 的 缘 忆 调 控 区, 特 别 是 启 动 子 区 已 经 证 明, 在 癌 症, 启 动 子 区 域 高 含 量 的 缘 鄄 甲 基 胞 嘧 啶 可 造 成 基 因 转 录 沉 默, 而 阅 晕 粤 甲 基 化 在 长 期 的 基 因 沉 默 过 程 中 逐 [ 猿 员 鄄 猿 圆 渐 积 累 ] 阅 晕 粤 甲 基 化 可 通 过 两 种 方 式 抑 制 基 因 的 转 录 首 先, 甲 基 化 的 阅 晕 粤 分 子 在 空 间 上 可 抑 制 转 录 因 子 与 基 因 的 结 合 其 次, 阅 晕 粤 的 甲 基 化 可 结 合 甲 基 化 悦 责 郧 结 合 域 蛋 白 ( 酝 月 阅 杂 ), 此 蛋 白 又 会 结 合 其 它 蛋 白, 如 组 蛋 白 去 乙 酰 化 酶 和 其 他 染 色 质 重 塑 蛋 白, 并 形 成 紧 凑 的 不 活 跃 的 染 色 质, 即 异 染 色 质 由 于 异 染 色 质 具 有 紧 凑 的 结 构 和 不 活 跃 的 性 [ 猿 猿 质, 使 基 因 转 录 被 其 抑 制 ] [ 猿 源 ] 最 新 的 研 究 表 明, 在 结 肠 腺 瘤 和 癌 组 织 中, 杂 耘 孕 栽 怨 赃 灾 圆 转 录 本 的 甲 基 化 模 式 的 重 大 变 化 只 限 于 一 个 悦 责 郧 岛, 即 悦 郧 陨 猿 这 个 区 域 包 含 杂 耘 孕 栽 怨 赃 灾 圆 的 启 动 子 区 和 粤 栽 郧 起 始 密 码 子 腺 瘤 和 悦 砸 悦 表 现 出 截 然 不 同 的 甲 基 化 模 式 在 悦 砸 悦 的 样 品 中, 异 常 的 甲 基 化 从 悦 郧 陨 猿 核 心 蔓 延 至 甲 基 化 岛 的 缘 忆 末 端, 而 腺 瘤 标 本 中, 悦 郧 陨 猿 的 缘 忆 末 端 无 甲 基 化, 这 一 观 察 提 示, 异 常 甲 基 化 的 扩 散 可 能 是 一 个 相 对 较 晚 的 事 件, 即 腺 瘤 发 展 为 悦 砸 悦 时 才 发 生 在 杂 耘 孕 栽 怨 悦 郧 陨 猿 核 心 区, 这 种 独 特 的 甲 基 化 模 式 可 能 代 表 甲 基 化 状 态 的 过 渡, 并 在 细 胞 水 平 反 映 结 肠 黏 膜 中 恶 性 肿 瘤 的 进 展 悦 郧 陨 猿 的 超 甲 基 化 可 以 抑 制 杂 耘 孕 栽 怨 赃 灾 圆 的 正 常 表 达, 进 而 扰 乱 结 构 蛋 白 的 形 成 和 关 键 的 细 胞 功 [ 猿 缘 能 ] 悦 砸 悦 的 早 期 诊 断 检 测 试 剂 盒 耘 责 蚤 孕 则 燥 悦 燥 造 燥 灶 ( 耘 责 蚤 早 藻 灶 燥 皂 蚤 糟 泽 粤 郧, 德 国 ) ], 其 检 测 的 靶 片 段 就 是 杂 耘 孕 栽 怨 赃 灾 圆 的 这 一 信 息 最 丰 富 的 区 域 虽 然 在 结 直 肠 癌 组 织 及 患 者 外 周 血 中 检 测 到 的 杂 耘 孕 栽 怨 基 因 发 生 异 常 甲 基 化, 但 杂 耘 孕 栽 怨 基 因 异 常 甲 [ 员 苑 鄄 员 愿 基 化 不 仅 发 生 在 结 直 肠 癌, 也 发 生 在 乳 腺 癌 ] [ 圆 园 鄄 圆 圆 卵 巢 癌 ] [ 圆 猿 头 颈 部 癌 症 ] [ 圆 源 白 血 病 和 淋 巴 瘤 ] 然 而, 这 些 癌 症 患 者 血 浆 中 的 杂 耘 孕 栽 怨 基 因 异 常 甲 基 [ 猿 苑 ] 化 的 检 出 率 远 不 如 结 直 肠 癌 郧 则 怎 贼 扎 皂 葬 灶 灶 等 对 杂 耘 孕 栽 怨 基 因 在 各 种 肿 瘤 及 非 肿 瘤 疾 病 患 者 血 浆 的 甲 基 化 水 平 进 行 了 系 统 研 究, 结 果 显 示, 结 直 肠 癌 患 者 血 浆 杂 耘 孕 栽 怨 甲 基 化 的 检 出 率 ( 苑 圆 豫, 怨 园 辕 员 圆 缘 ) 远 高 于

3 宋 乐 乐, 等 援 利 用 杂 耘 孕 栽 怨 基 因 甲 基 化 检 测 筛 查 结 直 肠 癌 的 研 究 进 展 缘 怨 员 非 结 直 肠 癌 的 其 他 癌 症 患 者 ( 员 员 援 缘 豫, 员 员 辕 怨 远 ) 非 癌 症 疾 病 患 者 ( 员 猿 豫, 源 员 辕 猿 员 缘 ) 及 正 常 人 ( 员 园 豫, 员 怨 辕 员 愿 猿 ) 这 一 结 果 说 明 血 浆 中 杂 耘 孕 栽 怨 甲 基 化 对 结 直 肠 癌 有 较 高 的 灵 敏 度 和 特 异 性, 与 其 他 癌 症 非 癌 症 疾 病 和 正 常 人 有 显 著 性 的 差 异, 这 为 杂 耘 孕 栽 怨 甲 基 化 作 为 结 直 肠 癌 特 有 诊 断 指 标 提 供 了 依 据 圆 摇 杂 耘 孕 栽 怨 基 因 甲 基 化 检 测 筛 查 结 直 肠 癌 的 临 床 验 证 圆 援 员 摇 杂 耘 孕 栽 怨 甲 基 化 检 测 具 有 高 灵 敏 度 高 特 异 性 自 圆 园 园 愿 年 起 至 现 在, 不 同 的 试 验 组 已 经 发 表 了 一 系 列 针 对 杂 耘 孕 栽 怨 早 期 诊 断 悦 砸 悦 的 临 床 验 证 数 据, 猿 远 鄄 源 园 ] 这 些 数 据 显 示, 此 检 测 针 对 悦 砸 悦 的 敏 感 度 在 远 愿 豫 耀耀耀耀耀耀耀耀 苑 怨 援 猿 豫, 特 异 性 在 愿 远 豫 耀耀耀耀耀耀耀耀 怨 怨 豫 尤 其 是 第 二 代 杂 耘 孕 栽 怨 检 测 试 剂 盒 ( 耘 责 蚤 责 则 燥 悦 燥 造 燥 灶 圆 援 园, 耘 责 蚤 早 藻 灶 燥 皂 鄄 [ 猿 远 鄄 源 园 ] 蚤 糟 泽 粤 郧, 德 国 ) 的 应 用, 使 检 测 灵 敏 度 由 约 苑 园 豫, 源 园 提 高 到 约 怨 园 豫 ], 而 特 异 性 稳 定 在 怨 园 豫 左 右 由 于 在 数 据 分 析 时 不 同 算 法 的 应 用, 不 同 的 验 证 试 验 间 灵 敏 度 和 特 异 性 有 所 差 别 算 法 的 选 择 一 般 是 基 于 诊 断 或 筛 查 的 特 定 需 求 例 如, 在 由 栽 燥 贼 澡 及 其 同 事 发 表 的 报 告 中 ], 测 试 结 果 来 源 于 猿 次 平 行 荧 光 定 量 孕 悦 砸 如 果 一 次 孕 悦 砸 结 果 阳 性 即 判 断 最 终 测 试 结 果 阳 性 ( 员 辕 猿 算 法 ), 其 灵 敏 度 为 怨 缘 援 远 豫, 特 异 性 为 愿 源 援 愿 豫, 然 而, 若 至 少 两 次 孕 悦 砸 结 果 阳 性 才 判 读 为 阳 性 ( 圆 辕 猿 算 法 ), 该 灵 敏 度 下 降 至 苑 怨 援 猿 豫, 特 异 性 提 高 到 怨 怨 豫 员 辕 猿 算 法 保 证 了 测 试 的 高 灵 敏 度, 但 会 出 现 一 定 的 假 阳 性 率 ( 低 特 异 性 ), 而 圆 辕 猿 的 算 法, 确 保 较 高 真 阴 性 率 ( 高 特 异 性 ) 而 敏 感 度 则 偏 低 对 于 癌 症 筛 查, 我 们 认 为 排 除 非 癌 症 患 者 的 重 要 性 超 过 一 次 性 检 测 出 所 有 可 能 的 阳 性 患 者 的 重 要 性 低 灵 敏 度 造 成 的 阳 性 患 者 漏 检 可 以 通 过 定 期 反 复 检 测 得 到 补 偿 因 此, 为 了 确 保 高 真 阴 性 率, 即 避 免 假 阳 性 患 者 的 出 现, 耘 责 蚤 责 则 燥 悦 燥 造 燥 灶 圆 援 园 的 使 用 手 册 建 议 使 用 圆 辕 猿 算 法 [ 源 员 ] 圆 园 员 猿 年 结 束 的 孕 砸 耘 杂 耘 孕 栽 研 究 是 迄 今 为 止 唯 一 一 个 利 用 杂 耘 孕 栽 怨 检 测 了 苑 怨 源 员 人 所 进 行 的 前 瞻 性 筛 查, 结 果 发 现, 杂 耘 孕 栽 怨 检 测 对 悦 砸 悦 筛 查 的 敏 感 度 为 源 愿 豫, 此 敏 感 性 相 对 之 前 的 回 顾 性 验 证 试 验 的 敏 感 度 偏 低 这 是 因 为 在 这 个 特 定 的 研 究 中, 作 者 研 究 杂 耘 孕 栽 怨 检 测 对 早 期 无 症 状 大 肠 癌 患 者 的 敏 感 度, 而 此 前 公 布 的 临 床 验 证 数 据 来 源 于 已 经 诊 断 为 悦 砸 悦 和 为 方 便 抽 样 选 择 的 患 者 或 正 常 人, 这 不 代 表 无 症 状 人 群 的 状 况, 因 而 其 参 考 意 义 有 限 这 项 前 瞻 性 研 究 所 代 表 的 情 况 是 在 现 实 生 活 中 大 肠 癌 筛 查 遇 到 的 实 际 情 况, 因 此 比 病 例 对 照 研 究 具 有 更 好 的 临 床 指 导 意 义 几 乎 所 有 已 完 成 的 临 床 试 验 均 以 德 国 人 和 美 国 人 为 对 象 进 行 虽 然 在 这 两 个 国 家 有 许 多 不 同 的 种 族, 目 前 并 未 发 现 在 两 个 种 群 间 存 在 敏 感 度 和 特 异 性 的 差 异 在 中 国, 博 尔 诚 ( 北 京 ) 科 技 有 限 公 司 使 用 耘 责 蚤 责 则 燥 悦 燥 造 燥 灶 圆 援 园 试 剂 盒 对 中 国 汉 族 人 进 行 了 检 测, 其 结 果 显 示 出 与 栽 燥 贼 澡 及 其 同 事 报 道 的 相 同 的 敏 感 度 和 特 异 性 ( 敏 感 度 为 愿 员 援 缘 豫, 特 异 性 为 员 园 园 豫, 愿 员 例 结 直 肠 癌, 缘 猿 例 健 康 对 照 ) ] 然 而, 最 近 的 一 篇 韩 国 研 究 者 的 报 告 显 示 出 较 低 的 灵 敏 度 ( 猿 远 郾 远 豫 ), 而 特 异 性 与 其 他 报 道 无 显 著 差 异 此 研 究 使 用 的 是 雅 培 酝 杂 怨 大 肠 癌 检 测 试 剂 盒 ( 粤 遭 遭 燥 贼 贼, 美 国 ) [ 源 圆 ], 而 非 耘 责 蚤 责 则 燥 悦 燥 造 燥 灶 圆 援 园 试 剂 盒 鉴 于 此 报 道 是 迄 今 为 止 唯 一 显 示 潜 在 种 族 差 异 的 报 告, 所 以 此 差 异 是 否 由 不 同 供 应 商 的 试 剂 盒 引 起, 或 是 有 真 正 的 种 族 差 异, 仍 然 需 要 进 一 步 研 究 圆 援 圆 摇 杂 耘 孕 栽 怨 甲 基 化 的 阳 性 检 出 率 与 悦 砸 悦 分 期 相 关 目 前 已 发 表 的 分 期 阳 性 检 出 率 数 据 显 示 出 一 种 明 显 的 趋 势, 即 随 着 分 期 的 增 高, 阳 性 检 出 率 也 升 高 杂 耘 孕 栽 怨 检 测 可 以 检 测 出 平 均 约 一 半 的 Ⅰ 期 悦 砸 悦, 苑 园 豫 的 Ⅱ 期 和 Ⅲ 期 悦 砸 悦, 远 源 援 苑 豫 耀耀耀耀耀耀耀耀 员 园 园 豫 的 Ⅳ 期 悦 砸 悦, 猿 苑 鄄 源 圆 ] 同 时, 所 有 已 发 表 的 研 究 均 显 示 约 怨 园 豫 的 高 特 异 性 这 些 数 据 表 明, 杂 耘 孕 栽 怨 阳 性 检 出 率 与 肿 瘤 的 恶 性 程 度 呈 一 定 相 关 性, 而 且 杂 耘 孕 栽 怨 甲 基 化 检 测 可 为 早 期 阶 段 的 悦 砸 悦 ( Ⅰ 期 和 Ⅱ 期 ) 提 供 有 效 的 早 期 诊 断 方 法 圆 援 猿 摇 杂 耘 孕 栽 怨 检 测 可 能 不 能 用 于 检 测 结 直 肠 腺 瘤 [ 猿 苑, 源 员 ] 在 郧 则 怎 贼 扎 皂 葬 灶 灶 和 悦 澡 怎 则 糟 澡 的 报 道 中, 腺 瘤 辕 息 肉 组 ( 分 别 为 员 员 援 愿 豫 和 员 员 援 圆 豫 ) 和 正 常 对 照 组 ( 分 别 为 员 园 豫 和 怨 援 员 豫 ) 的 阳 性 检 出 率 没 有 实 质 差 别, 表 明 杂 耘 孕 栽 怨 检 测 不 能 区 分 腺 瘤 辕 息 肉 样 本 和 正 常 对 照 [ 猿 怨 鄄 源 园 ] 组 在 栽 葬 灶 扎 藻 则 和 宰 葬 则 则 藻 灶 的 研 究 中, 杂 耘 孕 栽 怨 检 测 对 腺 瘤 辕 息 肉 组 阳 性 检 出 率 ( 分 别 为 圆 怨 援 园 豫 和 员 员 援 缘 豫 ) 比 正 常 对 照 组 ( 分 别 为 怨 援 园 豫 和 缘 援 苑 豫 ) 显 著 增 高 然 而, 这 两 个 研 究 中 杂 耘 孕 栽 怨 检 测 对 腺 瘤 辕 息 肉 的 检 测 灵 敏 度 仍 然 过 低, 所 以 此 检 测 目 前 很 难 成 为 癌 前 病 变 的 筛 查 试 验 由 于 腺 瘤 辕 息 肉 是 癌 前 病 变 的 最 常 见 的 形 式, 这 些 数 据 表 明, 由 于 敏 感 度 较 低, 单 独 使 用 杂 耘 孕 栽 怨 检 测 对 腺 瘤 辕 息 肉 的 诊 断 意 义 有 限 圆 援 源 摇 检 测 杂 耘 孕 栽 怨 甲 基 化 检 测 优 于 目 前 最 常 用 的 早 云 韵 月 栽 针 对 悦 砸 悦 的 临 床 粪 便 潜 血 检 查 主 要 包 括, 源 猿 鄄 源 怨 早 云 韵 月 栽 和 云 陨 栽, 它 们 的 灵 敏 度 在 猿 猿 豫 耀耀耀耀耀耀耀耀 苑 怨 豫 ], 其 中 最 常 用 的 标 准 早 云 韵 月 栽 检 测 针 对 悦 砸 悦 的 灵 敏 度 [ 缘 园 为 猿 猿 豫 耀耀耀耀耀耀耀耀 苑 缘 豫 ], 此 灵 敏 度 低 于 耘 责 蚤 责 则 燥 悦 燥 造 燥 灶

4 缘 怨 圆 中 国 肿 瘤 生 物 治 疗 杂 志, 圆 园 员 源 年 员 园 月, 圆 员 ( 缘 ) 杂 耘 孕 栽 怨 检 测 ( 苑 怨 援 猿 豫 ) ], 而 特 异 性 与 杂 耘 孕 栽 怨 检 测 相 同 但 是, 粪 便 检 测 因 其 不 方 便 及 需 要 反 复 测 试, 所 以 依 从 性 较 低 此 外, 还 有 许 多 干 扰 因 素 可 导 致 粪 便 测 试 呈 现 假 阳 性 结 果, 包 括 炎 症 感 染 溃 疡 息 肉 和 痔 疮 等 更 重 要 的 是, 杂 耘 孕 栽 怨 检 测 对 于 左 侧 病 变 和 右 侧 病 变 没 有 任 何 敏 感 度 方 面 的 差 异, 而 早 云 韵 月 栽 试 验 对 左 右 两 侧 病 变 的 敏 感 度 有 显 著 性 差 异 ] 因 此, 从 检 测 的 准 确 程 度 和 便 利 性 方 面 来 看, 杂 耘 孕 栽 怨 检 测 优 于 早 云 韵 月 栽 检 测 然 而, 当 前 相 对 较 高 的 费 用 阻 碍 了 杂 耘 孕 栽 怨 检 测 在 大 规 模 筛 查 方 面 的 应 用, 早 云 韵 月 栽 检 测 在 价 格 和 认 知 度 方 面 更 胜 一 筹 此 外, 更 昂 贵 的 云 陨 栽 检 测 针 对 悦 砸 悦 的 敏 感 度 为 远 园 豫 耀耀耀耀耀耀耀耀 愿 缘 豫 [ 缘 员 ], 因 此, 云 陨 栽 越 来 越 多 地 被 用 来 代 替 早 云 韵 月 栽 用 于 筛 查 而 且, 还 有 数 据 显 示, 在 诊 断 悦 砸 悦 和 员 糟 皂 腺 瘤 方 面, 近 来 出 现 的 粪 便 阅 晕 粤 检 测 灵 敏 度 优 于 血 浆 杂 耘 孕 栽 怨 检 测 肿 瘤 标 志 物 进 入 肠 道 和 血 流 的 机 制 是 不 同 的, 理 论 上 讲, 结 直 肠 脱 落 肿 瘤 细 胞 进 入 肠 道 早 于 肿 瘤 对 血 管 的 侵 犯, 因 此 在 癌 前 病 变 检 测 方 面, 粪 便 检 测 应 该 比 血 检 更 早 探 测 到 病 变 [ 缘 猿 ] 粤 澡 造 择 怎 蚤 泽 贼 等 比 较 了 粪 便 阅 晕 粤 检 测 与 外 周 血 杂 耘 孕 栽 怨 检 测 的 效 果 ; 研 究 发 现, 粪 便 阅 晕 粤 检 测 不 仅 在 员 糟 皂 腺 瘤 的 检 测 方 面 优 于 杂 耘 孕 栽 怨 检 测, 显 示 出 愿 圆 豫 的 高 灵 敏 度 ( 杂 耘 孕 栽 怨 检 测 灵 敏 度 为 员 源 豫 ), 而 且 在 检 测 早 期 悦 砸 悦 方 面, 粪 便 阅 晕 粤 检 测 ( 灵 敏 度 : 愿 苑 豫 ) 也 优 于 血 浆 杂 耘 孕 栽 怨 检 测 ( 灵 敏 度 : 远 园 豫 ), 粪 便 阅 晕 粤 和 血 浆 杂 耘 孕 栽 怨 检 测 的 特 异 性 分 别 为 怨 猿 豫 和 苑 猿 豫 这 些 研 究 结 果 说 明, 粪 便 阅 晕 粤 检 测 在 检 测 癌 前 病 变 及 早 期 结 直 肠 癌 方 面 比 血 浆 杂 耘 孕 栽 怨 检 测 更 [ 缘 圆, 缘 猿 有 效 ] 然 而, 对 于 不 同 试 验 得 出 的 敏 感 性 和 特 异 性 数 据, 应 放 到 相 同 的 试 验 条 件 下 进 行 比 较, 即 病 例 对 照 研 究 的 数 据 不 应 该 直 接 与 筛 查 试 验 数 据 相 比 [ 缘 员 鄄 缘 缘 ] 较 上 述 云 陨 栽 和 粪 便 阅 晕 粤 的 研 究 都 是 病 例 对 照 研 究, 所 以 它 们 比 杂 耘 孕 栽 怨 筛 查 表 现 出 更 高 的 敏 感 性 和 特 异 性 理 想 状 况 下, 应 在 同 一 病 例 对 照 或 人 群 筛 查 研 究 中, 将 杂 耘 孕 栽 怨 云 陨 栽 和 早 云 韵 月 栽 置 于 同 样 的 试 验 条 件 下, 平 行 比 较 他 们 的 检 测 效 果 圆 援 缘 摇 杂 耘 孕 栽 怨 检 测 比 任 何 现 有 的 糖 蛋 白 标 志 物 更 敏 感 糖 蛋 白 类 肿 瘤 标 记 物 的 主 要 缺 点 是 任 何 单 一 标 志 物 的 灵 敏 度 和 特 异 性 都 不 高, 不 足 以 成 为 癌 症 的 可 靠 诊 断 指 标 所 以 通 常 将 几 种 糖 蛋 白 的 肿 瘤 标 志 物 联 合 使 用, 以 达 到 诊 断 意 义 目 前, 五 个 糖 蛋 白 标 志 物 在 临 床 上 作 为 悦 砸 悦 早 期 诊 断 的 指 标, 包 括 悦 耘 粤 悦 粤 员 怨 怨 悦 粤 圆 源 圆 悦 粤 苑 圆 鄄 源 和 悦 粤 员 圆 缘 最 新 的 报 [ 缘 远 ] 告 显 示, 这 五 个 糖 蛋 白 肿 瘤 标 志 物 的 任 何 一 个 单 独 使 用 时, 其 针 对 悦 砸 悦 灵 敏 度 均 较 低 ( 员 愿 援 愿 豫 耀耀耀耀耀耀耀耀 缘 圆 郾 圆 豫 ), 而 五 项 指 标 的 组 合 使 用 时 表 现 出 的 敏 感 性 和 特 异 性 分 别 为 愿 缘 援 猿 豫 和 怨 缘 豫, 这 与 单 独 使 用 杂 耘 孕 栽 怨 检 测 时 的 效 果 相 似 ] 然 而, 对 于 检 测 早 期 阶 段 的 悦 砸 悦 ( Ⅰ 期,Ⅱ 期 ), 杂 耘 孕 栽 怨 检 测 的 灵 敏 度 ( 猿 园 豫 耀耀耀耀耀耀耀耀 员 园 园 豫 ) 优 于 五 个 糖 蛋 白 标 志 物 的 任 何 一 个 单 独 使 用 时 的 灵 敏 度, 提 示 杂 耘 孕 栽 怨 作 为 检 测 早 期 悦 砸 悦 是 更 有 效 的 指 标 在 另 一 报 告 中, 栽 燥 贼 澡 和 同 ] 事 平 行 比 较 了 目 前 最 常 用 的 糖 蛋 白 类 肿 瘤 标 志 物 悦 耘 粤 与 杂 耘 孕 栽 怨 检 测 的 性 能, 杂 耘 孕 栽 怨 检 测 表 现 出 苑 怨 援 猿 豫 的 灵 敏 度 和 怨 愿 援 怨 豫 特 异 性, 这 均 优 于 悦 耘 粤 ( 灵 敏 度 缘 员 援 愿 豫, 特 异 性 愿 员 援 圆 豫 ) 由 于 杂 耘 孕 栽 怨 检 测 显 示 出 比 糖 蛋 白 肿 瘤 标 志 物 更 好 的 性 能 和 更 高 的 稳 定 性, 因 此 在 早 期 检 测 悦 砸 悦 方 面, 杂 耘 孕 栽 怨 检 测 比 糖 蛋 白 类 肿 瘤 标 志 物 价 值 更 高 猿 摇 结 摇 语 目 前 已 证 实 杂 耘 孕 栽 怨 检 测 是 早 期 诊 断 悦 砸 悦 的 有 效 工 具, 并 有 可 能 成 为 未 来 悦 砸 悦 的 筛 查 工 具 它 的 效 果 优 于 粪 便 免 疫 学 检 测 和 糖 蛋 白 肿 瘤 标 志 物 检 测, 相 对 于 结 肠 镜, 它 准 确 方 便 并 且 具 有 非 侵 入 性 的 优 点 ; 这 些 优 势 会 增 加 患 者 进 行 结 直 肠 癌 筛 查 的 依 从 性 然 而, 杂 耘 孕 栽 怨 检 测 在 无 症 状 人 群 中 筛 查 的 灵 敏 度 仍 然 不 理 想, 目 前 对 检 测 癌 前 病 变 如 结 直 肠 腺 瘤 还 不 够 敏 感 因 此, 若 此 检 测 用 作 未 来 常 规 筛 查 和 癌 前 病 变 检 测, 仍 有 不 小 的 改 进 空 间 上 述 临 床 试 验 大 多 是 验 证 性 试 验 和 病 例 对 照 试 验, 这 些 试 验 证 明 杂 耘 孕 栽 怨 检 测 是 检 测 早 期 悦 砸 悦 的 可 靠 方 法 有 理 由 相 信, 杂 耘 孕 栽 怨 检 测 不 仅 可 用 于 悦 砸 悦 早 诊 和 筛 查, 而 且 还 有 潜 力 用 于 治 疗 评 估 治 疗 随 访 及 辅 助 病 [ 源 圆 ] 理 分 级 首 先, 有 报 道 表 明, 悦 砸 悦 根 治 性 手 术 后 杂 耘 孕 栽 怨 甲 基 化 转 为 阴 性, 而 悦 砸 悦 复 发 后 杂 耘 孕 栽 怨 又 重 新 转 阳 所 以 杂 耘 孕 栽 怨 有 可 能 用 于 放 化 疗 治 疗 效 果 的 评 估 复 发 和 转 移 的 监 测 指 标 其 次, 如 果 杂 耘 孕 栽 怨 的 定 量 甲 基 化 可 以 用 来 衡 量 肿 瘤 的 恶 性 程 度, 杂 耘 孕 栽 怨 可 以 被 用 于 协 助 对 悦 砸 悦 的 分 期 和 分 型 最 后, 杂 耘 孕 栽 怨 是 否 可 以 同 其 他 癌 症 相 关 基 因 合 用, 作 为 对 个 性 化 治 疗 的 指 导, 也 是 一 个 非 常 有 意 义 的 研 究 方 向 [ 参 考 文 献 ] [ 员 ] 摇 粤 皂 藻 则 蚤 糟 葬 灶 悦 葬 灶 糟 藻 则 杂 燥 糟 蚤 藻 贼 赠 援 悦 葬 灶 糟 藻 则 枣 葬 糟 贼 泽 驭 枣 蚤 早 怎 则 藻 泽 圆 园 员 猿 [ 砸 ] 援 粤 贼 鄄 造 葬 灶 贼 葬, 郧 粤 : 粤 皂 藻 则 蚤 糟 葬 灶 悦 葬 灶 糟 藻 则 杂 燥 糟 蚤 藻 贼 赠, 圆 园 员 猿 : 员 圆 鄄 员 猿 援 [ 圆 ] 摇 云 藻 则 造 葬 赠 允, 杂 贼 藻 造 蚤 葬 则 燥 增 葬 鄄 云 燥 怎 糟 澡 藻 则 耘, 蕴 燥 则 贼 藻 贼 鄄 栽 蚤 藻 怎 造 藻 灶 贼 允, 藻 贼 葬 造 援 悦 葬 灶 糟 藻 则 蚤 灶 鄄 糟 蚤 凿 藻 灶 糟 藻 葬 灶 凿 皂 燥 则 贼 葬 造 蚤 贼 赠 责 葬 贼 贼 藻 则 灶 泽 蚤 灶 耘 怎 则 燥 责 藻 : 耘 泽 贼 蚤 皂 葬 贼 藻 泽 枣 燥 则 源 园 糟 燥 怎 灶 鄄 贼 则 蚤 藻 泽 蚤 灶 圆 园 员 圆 [ 允 ] 援 耘 怎 则 允 悦 葬 灶 糟 藻 则, 圆 园 员 猿, 源 怨 ( 远 ): 员 猿 苑 源 鄄 员 源 园 猿 援 [ 猿 ] 摇 赫 捷, 赵 平, 陈 万 青 援 圆 园 员 圆 中 国 肿 瘤 登 记 年 报 [ 酝 ] 援 北 京 : 军

5 宋 乐 乐, 等 援 利 用 杂 耘 孕 栽 怨 基 因 甲 基 化 检 测 筛 查 结 直 肠 癌 的 研 究 进 展 缘 怨 猿 事 医 学 科 学 出 版 社, 圆 园 员 圆 : 源 远 鄄 源 愿 援 [ 源 ] 摇 粤 皂 藻 则 蚤 糟 葬 灶 悦 葬 灶 糟 藻 则 杂 燥 糟 蚤 藻 贼 赠 援 悦 燥 造 燥 则 藻 糟 贼 葬 造 糟 葬 灶 糟 藻 则 枣 葬 糟 贼 泽 驭 枣 蚤 早 怎 则 藻 泽 圆 园 员 员 鄄 圆 园 员 猿 [ 砸 ] 援 粤 贼 造 葬 灶 贼 葬, 郧 粤 : 粤 皂 藻 则 蚤 糟 葬 灶 悦 葬 灶 糟 藻 则 杂 燥 糟 蚤 藻 贼 赠, 圆 园 员 员 : 苑 鄄 愿 援 [ 缘 ] 摇 晕 葬 贼 蚤 燥 灶 葬 造 悦 葬 灶 糟 藻 则 陨 灶 泽 贼 蚤 贼 怎 贼 藻 援 杂 怎 则 增 蚤 增 葬 造 则 葬 贼 藻 枣 燥 则 糟 燥 造 燥 则 藻 糟 贼 葬 造 糟 葬 灶 糟 藻 则 遭 赠 泽 贼 葬 早 藻 [ 砸 ] 援 晕 葬 贼 蚤 燥 灶 葬 造 糟 葬 灶 糟 藻 则 蚤 灶 泽 贼 蚤 贼 怎 贼 藻, 孕 阅 匝, 栽 则 藻 葬 贼 皂 藻 灶 贼, 匀 藻 葬 造 贼 澡 孕 则 燥 枣 藻 泽 泽 蚤 燥 灶 葬 造 泽, 员 怨 怨 怨 : 员 鄄 圆 援 [ 远 ] 摇 增 葬 灶 砸 燥 泽 泽 怎 皂 蕴 郧, 增 葬 灶 砸 蚤 躁 灶 粤 云, 增 葬 灶 韵 蚤 躁 藻 灶 酝 郧, 藻 贼 葬 造 援 云 葬 造 泽 藻 灶 藻 早 葬 鄄 贼 蚤 增 藻 枣 藻 糟 葬 造 燥 糟 糟 怎 造 贼 遭 造 燥 燥 凿 贼 藻 泽 贼 泽 凿 怎 藻 贼 燥 凿 藻 造 葬 赠 藻 凿 泽 葬 皂 责 造 藻 则 藻 贼 怎 则 灶 蚤 灶 糟 燥 造 燥 则 鄄 藻 糟 贼 葬 造 糟 葬 灶 糟 藻 则 泽 糟 则 藻 藻 灶 蚤 灶 早 [ 允 ] 援 陨 灶 贼 允 悦 葬 灶 糟 藻 则, 圆 园 园 怨, 员 圆 缘 ( 源 ): 苑 源 远 鄄 苑 缘 园 援 [ 苑 ] 摇 阅 燥 皂 蚤 灶 蚤 贼 扎 允 粤, 耘 蚤 泽 藻 灶 郧 酝, 月 葬 则 燥 灶 栽 匀, 藻 贼 葬 造 援 悦 燥 皂 责 造 蚤 糟 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6 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 檻 缘 怨 源 中 国 肿 瘤 生 物 治 疗 杂 志, 圆 园 员 源 年 员 园 月, 圆 员 ( 缘 ) 悦 造 蚤 灶 悦 澡 藻 皂, 圆 园 园 怨, 缘 缘 ( 苑 ): 员 猿 猿 苑 鄄 员 猿 源 远 援 [ 猿 怨 ] 栽 葬 灶 扎 藻 则 酝, 月 葬 造 造 怎 枣 枣 月, 阅 蚤 泽 贼 造 藻 则 允, 藻 贼 葬 造 援 孕 藻 则 枣 燥 则 皂 葬 灶 糟 藻 燥 枣 藻 责 蚤 早 藻 灶 藻 贼 蚤 糟 皂 葬 则 噪 藻 则 泽 杂 耘 孕 栽 怨 葬 灶 凿 粤 蕴 载 源 蚤 灶 责 造 葬 泽 皂 葬 枣 燥 则 凿 藻 贼 藻 糟 贼 蚤 燥 灶 燥 枣 糟 燥 造 燥 则 藻 糟 贼 葬 造 责 则 藻 鄄 糟 葬 灶 糟 藻 则 燥 怎 泽 造 藻 泽 蚤 燥 灶 泽 [ 允 ] 援 孕 蕴 燥 杂 韵 晕 耘, 圆 园 员 园, 缘 ( 圆 ): 藻 怨 园 远 员 援 [ 源 园 ] 宰 葬 则 则 藻 灶 允 阅, 载 蚤 燥 灶 早 宰, 月 怎 灶 噪 藻 则 粤 酝, 藻 贼 葬 造 援 杂 藻 责 贼 蚤 灶 怨 皂 藻 贼 澡 赠 造 葬 贼 藻 凿 阅 晕 粤 蚤 泽 葬 泽 藻 灶 泽 蚤 贼 蚤 增 藻 葬 灶 凿 泽 责 藻 糟 蚤 枣 蚤 糟 遭 造 燥 燥 凿 贼 藻 泽 贼 枣 燥 则 糟 燥 造 燥 则 藻 糟 贼 葬 造 糟 葬 灶 糟 藻 则 [ 允 ] 援 月 酝 悦 酝 藻 凿, 圆 园 员 员, 怨 : 员 猿 猿 鄄 员 源 员 援 [ 源 员 ] 悦 澡 怎 则 糟 澡 栽 砸, 宰 葬 灶 凿 藻 造 造 酝, 蕴 燥 枣 贼 燥 灶 鄄 阅 葬 赠 悦, 藻 贼 葬 造 援 孕 则 燥 泽 责 藻 糟 贼 蚤 增 藻 藻 增 葬 造 怎 葬 鄄 贼 蚤 燥 灶 燥 枣 皂 藻 贼 澡 赠 造 葬 贼 藻 凿 杂 耘 孕 栽 怨 蚤 灶 责 造 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蚤 藻 贼 赠, 贼 澡 藻 哉 杂 酝 怎 造 贼 蚤 鄄 杂 燥 糟 蚤 藻 贼 赠 栽 葬 泽 噪 云 燥 则 糟 藻 燥 灶 悦 燥 造 燥 则 藻 糟 贼 葬 造 悦 葬 灶 糟 藻 则, [ 源 圆 ] 蕴 藻 藻 匀 杂, 匀 憎 葬 灶 早 杂 酝, 运 蚤 皂 栽 杂, 藻 贼 葬 造 援 悦 蚤 则 糟 怎 造 葬 贼 蚤 灶 早 皂 藻 贼 澡 赠 造 葬 贼 藻 凿 泽 藻 责 鄄 葬 灶 凿 贼 澡 藻 粤 皂 藻 则 蚤 糟 葬 灶 悦 燥 造 造 藻 早 藻 燥 枣 砸 葬 凿 蚤 燥 造 燥 早 赠 [ 允 ] 援 郧 葬 泽 贼 则 燥 藻 灶 贼 藻 则 燥 造 燥 早 赠, 贼 蚤 灶 怨 灶 怎 糟 造 藻 蚤 糟 葬 糟 蚤 凿 蚤 灶 贼 澡 藻 责 造 葬 泽 皂 葬 燥 枣 责 葬 贼 蚤 藻 灶 贼 泽 憎 蚤 贼 澡 早 葬 泽 贼 则 燥 蚤 灶 贼 藻 泽 贼 蚤 灶 葬 造 圆 园 园 愿, 员 猿 源 ( 缘 ): 员 缘 苑 园 鄄 员 缘 怨 缘 援 糟 葬 灶 糟 藻 则 蚤 灶 贼 澡 藻 泽 贼 燥 皂 葬 糟 澡 葬 灶 凿 糟 燥 造 燥 灶 [ 允 ] 援 栽 则 葬 灶 泽 造 韵 灶 糟 燥 造, 圆 园 员 猿, 远 ( 猿 ): 圆 怨 园 鄄 圆 怨 远 援 [ 源 猿 ] 宰 燥 灶 早 悦 运, 云 藻 凿 燥 则 葬 噪 砸 晕, 孕 则 燥 泽 泽 藻 则 悦 陨, 藻 贼 葬 造 援 栽 澡 藻 泽 藻 灶 泽 蚤 贼 蚤 增 蚤 贼 赠 葬 灶 凿 泽 责 藻 鄄 糟 蚤 枣 蚤 糟 蚤 贼 赠 燥 枣 早 怎 葬 蚤 葬 糟 葬 灶 凿 蚤 皂 皂 怎 灶 燥 糟 澡 藻 皂 蚤 糟 葬 造 枣 藻 糟 葬 造 燥 糟 糟 怎 造 贼 遭 造 燥 燥 凿 贼 藻 泽 贼 泽 枣 燥 则 贼 澡 藻 凿 藻 贼 藻 糟 贼 蚤 燥 灶 燥 枣 葬 凿 增 葬 灶 糟 藻 凿 糟 燥 造 燥 灶 蚤 糟 葬 凿 藻 灶 燥 皂 葬 泽 葬 灶 凿 糟 葬 灶 糟 藻 则 [ 允 ] 援 陨 灶 贼 允 悦 燥 造 燥 则 藻 糟 贼 葬 造 阅 蚤 泽, 圆 园 员 圆, 圆 苑 ( 员 圆 ): 员 远 缘 苑 鄄 员 远 远 源 援 [ 源 源 ] 酝 葬 灶 凿 藻 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糟 鄄 遭 葬 泽 藻 凿 枣 藻 糟 葬 造 燥 糟 糟 怎 造 贼 遭 造 燥 燥 凿 贼 藻 泽 贼 蚤 灶 泽 糟 则 藻 藻 灶 蚤 灶 早 葬 灶 凿 泽 怎 则 增 藻 蚤 造 鄄 [ 源 缘 ] 运 则 燥 灶 遭 燥 则 早 韵, 云 藻 灶 早 藻 则 悦, 韵 造 泽 藻 灶 允, 藻 贼 葬 造 援 砸 葬 灶 凿 燥 皂 蚤 泽 藻 凿 泽 贼 怎 凿 赠 燥 枣 造 葬 灶 糟 藻 枣 燥 则 葬 凿 增 葬 灶 糟 藻 凿 糟 燥 造 燥 则 藻 糟 贼 葬 造 灶 藻 燥 责 造 葬 泽 皂 泽 : 粤 皂 藻 贼 葬 鄄 葬 灶 葬 造 赠 泽 蚤 泽 [ 允 ] 援 允 泽 糟 则 藻 藻 灶 蚤 灶 早 枣 燥 则 糟 燥 造 燥 则 藻 糟 贼 葬 造 糟 葬 灶 糟 藻 则 憎 蚤 贼 澡 枣 葬 藻 糟 葬 造 鄄 燥 糟 糟 怎 造 贼 鄄 遭 造 燥 燥 凿 贼 藻 泽 贼 [ 允 ] 援 蕴 葬 灶 糟 藻 贼, 员 怨 怨 远, 猿 源 愿 ( 怨 园 源 园 ): 员 源 远 苑 鄄 员 源 苑 员 援 [ 源 远 ] 匀 葬 则 凿 糟 葬 泽 贼 造 藻 允 阅, 悦 澡 葬 皂 遭 藻 则 造 葬 蚤 灶 允 韵, 砸 燥 遭 蚤 灶 泽 燥 灶 酝 匀, 藻 贼 葬 造 援 砸 葬 灶 凿 燥 皂 鄄 蚤 泽 藻 凿 糟 燥 灶 贼 则 燥 造 造 藻 凿 贼 则 蚤 葬 造 燥 枣 枣 葬 藻 糟 葬 造 鄄 燥 糟 糟 怎 造 贼 鄄 遭 造 燥 燥 凿 泽 糟 则 藻 藻 灶 蚤 灶 早 枣 燥 则 糟 燥 造 燥 则 藻 糟 贼 葬 造 糟 葬 灶 糟 藻 则 [ 允 ] 援 蕴 葬 灶 糟 藻 贼, 员 怨 怨 远, 猿 源 愿 ( 怨 园 源 园 ): 员 源 苑 圆 鄄 员 源 苑 苑 援 [ 源 苑 ] 酝 葬 灶 凿 藻 造 允 杂, 悦 澡 怎 则 糟 澡 栽 砸, 耘 凿 藻 则 藻 则 云, 藻 贼 葬 造 援 悦 燥 造 燥 则 藻 糟 贼 葬 造 糟 葬 灶 糟 藻 则 皂 燥 则 贼 葬 造 蚤 鄄 阅 蚤 早 阅 蚤 泽, 圆 园 员 园, 员 员 ( 猿 ): 员 源 愿 鄄 员 远 园 援 [ 缘 缘 ] 灾 葬 则 贼 郧, 月 葬 灶 扎 蚤 砸, 酝 蚤 灶 燥 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