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- 堂旺 翁
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1 中 国 农 业 科 技 导 报, 2013, 15(6):35-39 Journal of Agricultural Science and Technology 摘 虾 青 素 纳 米 粒 的 制 备 及 性 能 研 究 刘 楠 1, 张 晓 燕 2 1, 周 德 庆 (1. 中 国 水 产 科 学 研 究 院 黄 海 水 产 研 究 所, 山 东 青 岛 ; 2. 中 国 海 洋 大 学, 山 东 青 岛 ) 要 : 为 提 高 虾 青 素 的 稳 定 性, 采 用 超 声 的 方 法 将 卵 磷 脂 和 壳 聚 糖 在 水 相 溶 液 中 自 聚 集 形 成 散 性 的 纳 米 粒 对 影 响 纳 米 粒 的 制 备 与 性 质 的 因 素 进 行 分 析, 发 现 在 卵 磷 脂 / 壳 聚 糖 比 例 为 5 1 到 20 1( w / w) 条 件 下, 超 声 15 min 可 形 成 稳 定 的 纳 米 包 载 体 系 粒 径 范 围 在 ~ nm 之 间 且 带 有 正 电 荷, 粒 径 分 布 均 匀 在 电 镜 下 观 察 为 不 规 则 的 球 状 制 备 得 到 虾 青 素 纳 米 粒 的 包 封 率 和 包 载 量 为 51.02% 和 10.34% 虾 青 素 纳 米 载 体 在 ph 1.2 ph 6.8 和 ph 7.4 的 条 件 下,72h 内 释 放 约 66.97% 30.34% 和 28.19%, 具 有 较 好 的 控 制 缓 慢 释 放 的 作 用 可 见, 壳 聚 糖 / 卵 磷 脂 纳 米 载 体 是 理 想 的 虾 青 素 功 能 食 品 载 体 关 键 词 : 虾 青 素 ; 纳 米 粒 ; 释 放 doi: / j.issn 中 图 分 类 号 :TS201.2 文 献 标 识 码 :A 文 章 编 号 : (2013) Preparation and Properties Research of Astaxanthin Loaded Nanocapsules LIU Nan 1, ZHANG Xiao yan 2, ZHOU De qing 1 (1.Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy Fishery Sciences, Shandong Qingdao ; 2.Ocean University of China, Shandong Qingdao , China) Abstract:To improve the stability of astaxanthin, lecithin and chitosan had been used to prepare nanocapsules by self aggregation as carriers for astaxanthin. The factors were investigated that effect on the preparation of nanocapsules, such as ratio of lecithin and chitosan and time of sonication. With the conditions of 5 1 to 20 1 (w / w) ratio of lecithin and chitosan, sonication for 15min, the stable nanocapsules could be obtained with mean size of nm to nm and positive surface charges. The results of TEM measurement confirmed that the nanocapsules have irregular spherical shape. The encapsulation efficiency of astaxanthin was % and loading capacity was %. Nanocapsules loaded with astaxanthin showed a controlled release profile with different ph values. After 72 h at ph 1.2, ph 6.8 and ph 7.4, astaxanthin had been slowly released from nanocapsules 66.97%, 30.34% and respectively. The nanocapsules may provide a promising carrier system for the protecting and delivery of astaxanthin as carriers for functional food. Key words:astaxanthin; nanocapsules; release 壳 聚 糖 ( chitosan), 化 学 名 称 为 聚 葡 萄 糖 胺 (1 4) 2 氨 基 B D 葡 萄 糖, 存 在 于 甲 壳 类 动 物 和 昆 虫 的 外 骨 骼, 能 被 生 物 体 内 的 溶 菌 酶 降 解 生 成 天 然 的 代 谢 产 物 具 有 无 毒 可 被 生 物 体 完 全 吸 收 的 特 点 [1] 由 于 壳 聚 糖 具 有 生 物 相 容 性 生 物 降 解 性 和 低 免 疫 原 性 等 生 物 活 性, 在 食 品 医 药 化 妆 品 领 域 被 广 泛 应 用 壳 聚 糖 属 于 线 性 多 糖 大 分 子, 可 对 其 进 行 多 种 化 学 修 饰, 近 年 来 作 为 纳 米 [2~ 制 备 材 料 受 到 人 们 的 瞩 目 4] 在 本 次 实 验 中 采 用 未 经 过 化 学 修 饰 的 壳 聚 糖 作 为 骨 架 材 料 制 备 纳 米 载 体, 降 低 了 化 学 修 饰 的 成 本 和 风 险 卵 磷 脂 是 细 胞 膜 的 主 要 成 分, 与 细 胞 具 有 良 好 的 生 物 相 容 性 作 为 载 体 材 料 将 有 利 于 活 性 物 质 的 吸 收 [5] 本 文 选 择 壳 聚 糖 作 为 骨 架 材 料, 通 过 引 入 收 稿 日 期 : ; 接 受 日 期 : 基 金 项 目 : 国 家 自 然 科 学 基 金 项 目 ( ); 中 国 水 产 科 学 研 究 院 级 基 本 科 研 业 务 费 专 项 (2013A1003) 资 助 作 者 简 介 : 刘 楠, 助 理 研 究 员, 博 士, 主 要 从 事 功 能 食 品 的 研 究 E mail:liunan@ ysfri.ac.cn 通 讯 作 者 : 周 德 庆, 研 究 员, 博 士, 主 要 从 事 水 产 品 加 工 与 质 量 安 全 控 制 研 究 E mail: zhoudq@ ysfri.ac.cn
2 36 中 国 农 业 科 技 导 报 15 卷 卵 磷 脂 疏 水 基 团, 使 其 在 水 相 条 件 下 自 聚 集, 经 重 新 排 列 后 形 成 具 有 亲 水 性 外 壳 和 疏 水 性 的 内 核 结 构 的 纳 米 粒 [6] 本 文 重 点 研 究 了 壳 聚 糖 与 卵 磷 脂 的 比 例 和 超 声 时 间 对 纳 米 粒 的 形 成 和 性 能 影 响 并 对 其 稳 定 性 和 释 放 规 律 进 行 了 研 究 作 为 虾 青 素 的 载 体 将 提 高 虾 青 素 的 稳 定 性 并 有 效 的 促 进 其 吸 收 1 材 料 与 方 法 1.1 材 料 虾 青 素 标 准 品 ( 纯 度 98% 以 上,Sigma); 壳 聚 糖 ( 黏 度 100 mpa.s, 脱 乙 酰 度 92.5%, 青 岛 海 汇 生 物 工 程 有 限 公 司 ); 胃 蛋 白 酶 (500 U / mg,sigma 公 司 ); 胰 蛋 白 酶 ( >250.N.F.U / mg 于 2 ~ 8 保 存, Solarbio 公 司 ); 透 析 袋 (MWCO = Da, 国 药 集 团 化 学 试 剂 有 限 公 司 ); 卵 磷 脂 ( 国 药 集 团 化 学 试 剂 有 限 公 司 ); Tween 80( 国 药 集 团 化 学 试 剂 有 限 公 司 ); 磷 酸 氢 二 钾 磷 酸 二 氢 钾 硫 氰 酸 氨 盐 酸 和 乙 醇 等 均 为 分 析 纯 1.2 虾 青 素 纳 米 粒 的 制 备 方 法 称 取 一 定 量 的 壳 聚 糖 溶 解 于 mol / L 的 盐 酸 溶 液 中, 充 分 搅 拌, 得 到 浓 度 为 2% 的 壳 聚 糖 盐 酸 溶 液, 静 置 以 去 除 溶 液 中 的 气 泡 用 注 射 器 ( 注 射 针 头 d = 0.7 mm) 滴 加 的 方 法, 在 磁 力 搅 拌 的 条 件 下 加 入 一 定 体 积 溶 有 虾 青 素 的 卵 磷 脂 乙 醇 溶 液, 并 加 入 1.5% 的 Tween 80 作 为 乳 化 剂 然 后 经 过 超 声 作 用 后 形 成 纳 米 粒 1.3 虾 青 素 纳 米 粒 的 表 征 纳 米 颗 粒 的 粒 径 和 zeta 电 位 的 测 定 采 用 马 尔 文 纳 米 粒 度 分 析 仪, 测 试 角 为 90, 测 试 温 度 为 25 纳 米 粒 的 形 态 采 用 透 射 电 子 显 微 镜 (transmission electron microscope,tem) 进 行 观 察, 使 用 碳 支 撑 膜 的 铜 网, 样 品 通 过 悬 滴 法 制 备 将 铜 网 浸 入 聚 合 物 溶 液 中, 用 滤 纸 吸 去 多 余 的 水, 再 用 1% 磷 钨 酸 进 行 负 染, 晾 干, 进 行 观 察 1.4 虾 青 素 纳 米 粒 包 载 量 与 包 封 率 取 定 量 的 载 药 纳 米 粒 悬 浮 液, 在 醋 酸 和 乙 醇 溶 液 的 作 用 下 将 纳 米 粒 破 碎, 使 包 载 于 纳 米 粒 内 部 的 虾 青 素 完 全 释 放 出 来, 用 二 氯 甲 烷 抽 提 后, 用 分 光 光 度 计 在 480nm 处 测 定 吸 光 值, 计 算 虾 青 素 含 量, 按 式 (1) 和 (2) 计 算 虾 青 素 纳 米 粒 的 包 载 量 和 包 封 率 : 包 封 率 (EE)= 虾 青 素 纳 米 乳 中 虾 青 素 的 质 量 100% (1) 虾 青 素 投 入 量 包 载 量 (LC)= 虾 青 素 纳 米 乳 中 虾 青 素 的 质 量 100% (2) 虾 青 素 纳 米 乳 的 质 量 1.5 纳 米 虾 青 素 载 体 的 体 外 释 放 选 取 不 同 ph( ) 的 溶 液 作 为 释 放 介 质, 考 察 纳 米 粒 在 不 同 ph 环 境 下 的 释 放 特 征 精 密 移 取 1.0 ml 上 述 虾 青 素 纳 米 粒 于 透 析 袋 中 (MWCO = Da), 然 后 将 密 封 的 透 析 袋 置 于 20 ml 释 放 介 质 中, 每 组 平 行 3 个 样 品, 在 37 条 件 下 振 荡 进 行 体 外 释 放 实 验, 于 0. 5 h 1 h 2 h 4 h 6 h 8 h 12 h 24 h 48 h 和 72 h 取 出 全 部 释 放 介 质, 并 补 充 等 量 体 积 的 新 鲜 介 质, 采 用 分 光 光 度 计 测 定 药 物 浓 度, 波 长 为 480 nm, 按 式 (3) 计 算 虾 青 素 累 积 释 放 率 释 放 率 = 释 放 出 的 虾 青 素 量 100% (3) 虾 青 素 总 量 1.6 虾 青 素 纳 米 载 体 的 稳 定 性 在 避 光 条 件 下, 配 制 虾 青 素 乙 醇 溶 液 (0.8 mg / ml) 和 虾 青 素 纳 米 粒 溶 液 ( 相 当 于 纳 米 粒 中 虾 青 素 的 含 量 是 0.8 mg / ml), 每 组 平 行 3 个 样 品 恒 温 条 件 ( ) 下 避 光 静 置 进 行 实 验, 于 6 h 12 h 24 h 36 h 48 h 和 60 h 测 定 吸 光 值, 计 算 虾 青 素 含 量, 按 式 (4) 计 算 虾 青 素 保 留 率 虾 青 素 保 留 率 = 2 结 果 与 分 析 虾 青 素 保 留 量 100% (4) 虾 青 素 总 量 2.1 壳 聚 糖 与 卵 磷 脂 的 比 例 对 纳 米 粒 制 备 的 影 响 由 于 壳 聚 糖 带 正 电 荷, 卵 磷 脂 带 负 电 荷, 因 此 一 定 范 围 内 正 负 电 荷 相 互 结 合, 随 着 卵 磷 脂 / 壳 聚 糖 比 重 ( w / w) 的 增 大, 必 然 会 影 响 纳 米 颗 粒 的 zeta 电 位, 以 及 纳 米 颗 粒 平 均 粒 径 的 大 小 图 1 显 示 了 不 同 比 例 的 卵 磷 脂 和 壳 聚 糖 (w / w) 对 纳 米 粒 平 均 粒 径 及 zeta 电 位 的 影 响 如 图 1 所 示, 在 一 定 的 比 例 下 卵 磷 脂 与 壳 聚 糖 可 以 自 聚 集 形 成 粒
3 6期 37 刘 楠等 虾青素纳米粒的制备及性能研究 径范围在 120 180 nm 的纳米粒 随着卵磷脂比 例的增加 纳米粒的表面电位从带正电荷向负电 荷转变 大量试验证明 zeta 电位处于±30 ±85 mv 图中可知制备得到的纳米粒粒径均匀 体系的均 一性表明其稳定性 时 分散体系较为稳定 7 从图中可以看出在卵 磷脂与壳聚糖比例在 5 1 到 20 1 的条件下可形成 较为稳定的纳米粒 表面电位为 42 36 61 24 mv 粒径范围在 137 51 139 46 nm 图 2 超声时间对纳米粒平均粒径的影响 Fig 2 Effect of sonication time on mean size of nanocapsules 图 1 不同比例的卵磷脂和壳聚糖 w w 对纳米 注 图中数据为均值±SE n 3 表示 P 0 01 水平上差异 显著 Note The results are expressed as means ± SE n 3 presents significant difference at P 0 01 颗粒平均粒径及 zeta 电位的影响 Fig 1 Effect of different lecithin chitosan w w ratio on mean size and zeta potential of nanocapsules 2 2 超声时间对纳米粒制备的影响 超声波技术与设备近年来得到广泛的应用和 普及 利用超声辅助实现纳米颗粒的制备研究也 越来越多 8 9 试验中采用超声处理的方法辅助 纳米颗粒的制备 并以纳米颗粒的平均粒径为指 标 确定超声时间的范围 图 2 显示了超声时间 对纳米颗粒平均粒径的影响 随着超声时间的延 长 纳米粒的粒径逐渐减少 在超声 15min 的条件 下可得到平均粒径较小的纳米粒 121 34 nm 随 着超声时间再次增加 由于体系热量的增加使得 图 3 卵磷脂 壳聚糖 20 1 w w 条件下 制备的纳米粒 TEM 图 Fig 3 TEM micrographs of nanocapsules with lection chitosan 20 1 w w 纳米粒子出现不稳定的团聚 结果导致较大的颗 粒出现 2 3 纳米粒形态特征 利用 TEM 观 察 纳 米 颗 粒 的 形 态 结 果 如 图 3所示 TEM 观察的结果显示纳米粒成不规则 球形 与纳米粒度仪测定的平均粒径相比较小 推测可能跟溶剂效应有关 即由于粒度仪测定时 样品处于水溶液中 而 TEM 测定时样品是在干燥 的状 态 下 纳 米 颗 粒 因 脱 水 作 用 导 致 粒 径 更 小 10 11 图 4 显示了纳米粒的粒径分布情况 从 图 4 卵磷脂 壳聚糖 20 1 w w 条件下 制备的纳米粒的粒径分布 Fig 4 Size distribution of nanocapsules with lection chitosan 20 1 w w
4 38 中 国 农 业 科 技 导 报 15 卷 2.4 虾 青 素 纳 米 载 体 的 包 载 率 与 包 载 量 在 虾 青 素 纳 米 载 体 的 制 备 过 程 中, 虾 青 素 的 投 入 量 对 包 载 率 与 包 载 量 都 有 显 著 的 影 响 ( 图 5) 随 着 虾 青 素 投 入 量 的 加 大, 虾 青 素 纳 米 乳 的 载 药 量 逐 渐 增 加, 而 包 封 率 却 逐 渐 降 低 从 图 中 可 知 两 个 折 线 的 交 点 为 较 适 合 的 虾 青 素 投 入 量 根 据 实 验 所 采 用 的 条 件, 当 虾 青 素 的 投 入 量 为 10 mg 时, 较 为 接 近 该 点 此 条 件 下 得 到 的 虾 青 素 纳 米 载 体 的 包 载 率 为 %, 包 载 量 为 10.34% 纳 米 虾 青 素 载 体 的 释 放 对 ph 具 有 敏 感 特 征, 即 ph 低 的 外 界 环 境 中, 可 以 较 迅 速 的 将 虾 青 素 从 中 释 放 出 来 ; 而 ph 较 高 时, 释 放 行 为 则 较 缓 慢 如 纳 米 虾 青 素 载 体 在 ph 1.2 下 72 h 内 释 放 约 66 97%, 明 显 高 于 在 ph 6.8 和 ph 7.4 中 虾 青 素 的 释 放 量 (30 34% 和 28.19%) 实 验 说 明 虾 青 素 利 用 纳 米 技 术 包 载 后 具 有 一 定 的 缓 释 作 用, 可 以 更 好 的 为 人 体 吸 收 和 利 用 3 讨 论 图 5 虾 青 素 的 投 入 量 对 包 载 率 与 包 载 量 的 影 响 Fig.5 Effect of amount of astaxanthin on encapsulation efficiency and loading capacity. 2.5 纳 米 虾 青 素 载 体 的 体 外 释 放 模 拟 生 物 体 内 环 境 选 择 三 种 不 同 ph 的 PBS (phosphate buffered saline) 溶 液 作 为 释 放 介 质, 研 究 载 药 纳 米 粒 中 虾 青 素 的 释 放 特 征 从 图 6 可 知, 壳 聚 糖 大 分 子 具 有 生 物 相 容 性 和 可 降 解 性 等 特 点, 被 广 泛 应 用 于 制 备 各 种 载 体 为 提 高 虾 青 素 的 稳 定 性, 卵 磷 脂 和 壳 聚 糖 在 超 声 的 作 用 下 在 水 相 溶 液 中 自 聚 集 形 成 包 载 虾 青 素 纳 米 粒 本 文 探 索 了 在 不 同 条 件 下 形 成 纳 米 粒 的 性 质 在 卵 磷 脂 / 壳 聚 糖 比 例 为 5 1 到 20 1 的 条 件 下, 可 形 成 较 为 稳 定 的 纳 米 包 载 体 系 其 zeta 电 位 在 ~ mv 之 间 zeta 电 位 是 一 个 粒 子 在 特 定 介 质 中 获 得 的 全 部 电 荷, 是 表 征 胶 体 分 散 系 稳 定 性 的 重 要 指 标 [12] zeta 电 位 处 于 ±30 ~ ±85 mv 时, 分 散 体 系 较 为 稳 定 在 超 声 15 min 的 条 件 下 可 形 成 平 均 粒 径 为 nm 的 稳 定 纳 米 包 载 体 系, 并 且 随 着 超 声 时 间 的 延 长 粒 径 没 有 明 显 的 变 化 在 电 镜 下 观 察 自 聚 集 形 成 的 纳 米 粒 为 不 规 则 的 球 状, 且 大 小 均 匀, 与 测 得 的 粒 径 分 布 结 果 一 致 制 备 得 到 虾 青 素 纳 米 粒 的 包 封 率 和 包 载 量 受 到 虾 青 素 投 入 量 的 影 响, 随 着 虾 青 素 投 入 量 的 增 加, 虾 青 素 的 载 药 量 逐 渐 增 加, 而 包 封 率 却 逐 渐 降 低 在 实 验 条 件 范 围 内 较 为 接 近 理 想 值 的 虾 青 素 投 入 量 为 10 mg, 此 条 件 下 得 到 的 纳 米 粒 的 包 载 率 为 51 02%, 包 载 量 为 10.34% 制 备 得 到 虾 青 素 纳 米 粒 具 有 良 好 的 控 释 效 果 在 ph 1. 2 ph 6.8 和 ph 7.4 的 条 件 下,72 h 内 释 放 率 分 别 为 66.97% 30.34% 和 28.19%, 具 有 较 好 的 控 制 缓 慢 释 放 的 作 用 可 见, 壳 聚 糖 / 卵 磷 脂 纳 米 载 体 是 理 想 的 虾 青 素 功 能 食 品 载 体 参 考 文 献 图 6 虾 青 素 纳 米 载 体 在 不 同 的 ph 下 的 体 外 释 放 曲 线 Fig.6 In vitro release profiles of astaxanthin loaded nanocapsules at different ph values. [1] Lakshmi S N, Cato T L. Biodegradable polymers as biomaterials [J]. Prog. Polymer Sci., 2007, 32( 8-9): [2] 何 秋 星, 王 学 文, 宋 平. 壳 聚 糖 / 卵 磷 脂 复 合 微 球 固 定 木 瓜 蛋 白 酶 的 研 究 [J]. 日 用 化 学 工 业, 2011, 41(6):
5 6 期 刘 楠 等 : 虾 青 素 纳 米 粒 的 制 备 及 性 能 研 究 39 He Q X, Wang X W, Song P, Study of immobilization of papain with chitosan / lecithin microspheres [ J ]. China Surfactant Detergent Cometics, 2011, 41(6): [3] Sonvico F, Cagnani A, Rossi A, et al.. Formation of self organized nanoparticles by lecithin / chitosan ionic interaction [J]. Int. J. Pharm., 2006, 324(1): [4] Katayoun D, Sahar F. Role of chitosan nanoparticles in the oral absorption of Gemcitabine [ J]. Int. J. Pharm., 2012, 437 (1-2): [5] Nan L, Hyun Jin P. Chitosan coated nanoliposomes as vitamin E carrier [J]. J. Microencap., 2009, 26(3): [6] Lingyun C, Yumin D, Zhigang T, et al.. Effect of the degree of deacetylation and the substitution of carboxymethyl chitosan on its aggregation behavior [ J ]. J. Polymer Sci. Part B: Polymer. Physics, 2005, 43(3): [7] 曹 雪 琴, 钱 国 坻, 娄 颖. zeta 电 位 与 分 散 染 料 的 分 散 稳 定 性 [J]. 印 染 助 剂,1998, 15(6): Cao X, Qian G, Lou Y. Zeta potential and stability of disperse dys [J]. Textile Auxiliaries, 1998, 15(6): [8] 史 建 新, 徐 惠, 张 艳 君, 等. 纳 米 TiO 2 的 分 散 及 表 面 改 性 的 研 究 综 述 [J]. 印 染 助 剂,2007,24(1):5-9. Shi J X, Xu H, Zhang Y J, et al.. Dispersion and surface modification of nanometer TiO 2 [J]. Textile Auxiliaries, 2007, 24(1): 5-9. [9] Jafari S M, He Y, Bhandari B. Production of sub micron emulsions by ultrasound and microfluidization techniques [ J]. J. Food Engin., 2007, 82(4): [10] Prabha S, Zhou W Z, Panyam J, et al.. Size dependency of nanoparticle mediated gene transfection: studies with frac tionated nanoparticles [ J]. Int. J. Pharm., 2002, 244(1-2): [11] Liu C G, Desai K G H, Chen X G, et al.. Linolenic acid modified chitosan for formation of self assembled nanoparticles [J]. J. Agric. Food Chem., 2005,53(2): [12] 李 凤 生. 微 纳 米 粉 体 技 术 理 论 基 础 [ M]. 北 京 : 科 学 出 版 社, 2010, 中 国 生 物 质 能 源 与 生 物 质 利 用 高 峰 论 坛 2014 年 中 国 ( 国 际 ) 生 物 质 能 源 与 生 物 质 利 用 高 峰 论 坛 (BBS 2014) 将 于 2014 年 4 月 23 ~ 25 日 在 上 海 举 办, 会 议 将 发 展 成 为 近 800 位 优 秀 科 学 家 和 企 业 家 代 表 参 与 的 中 国 最 具 影 响 力 的 生 物 质 能 大 会 本 届 论 坛 以 生 物 质 能 : 下 一 个 能 源 巨 人 为 主 题, 涵 盖 生 物 质 各 个 领 域, 主 要 面 向 从 事 生 物 质 原 料 开 发 ( 农 业 畜 牧 业 林 业 ) 生 物 质 发 电 技 术 ( 秸 秆 发 电 沼 气 发 电 和 垃 圾 发 电 ) 生 物 质 燃 料 技 术 ( 固 体 成 型 燃 料 生 物 乙 醇 生 物 柴 油 纤 维 素 乙 醇 微 藻 生 物 燃 料 航 空 生 物 燃 料 ) 生 物 质 热 化 学 转 化 技 术 ( 生 物 质 热 解 气 化 燃 烧 ) 废 弃 物 处 理 与 资 源 化 利 用 技 术 和 对 会 议 内 容 有 强 烈 兴 趣 的 青 年 科 技 工 作 者 与 企 业 家 望 积 极 参 与! 一 会 议 组 织 : 主 办 单 位 : 世 界 生 物 质 能 协 会 中 国 农 村 能 源 行 业 协 会 生 物 质 专 业 委 员 会 中 国 科 学 院 青 岛 生 物 能 源 与 过 程 研 究 所 中 国 商 飞 航 空 节 能 减 排 技 术 中 心 承 办 单 位 : 中 国 新 能 源 网 中 国 生 物 质 能 源 网 中 国 生 物 质 燃 料 网 勤 哲 传 媒 二 会 议 时 间 地 点 : 2014 年 4 月 23 ~ 25 日, 上 海 市 黄 浦 区 三 会 议 议 题 : 生 物 质 固 体 燃 料 与 成 型 ; 生 物 质 固 体 燃 料 与 供 热 ; 生 物 质 发 电 : 直 燃 CHP; 生 物 质 发 电 : 垃 圾 处 理 气 化 ; 纤 维 素 乙 醇 ; 生 物 质 酶 制 剂 ; 微 藻 生 物 燃 料 ; 航 空 生 物 燃 料 ; 生 物 质 沼 气 ; 生 物 质 柴 油 ; 木 本 生 物 质 燃 料 ; 能 源 草 四 联 系 方 式 : 联 系 人 : 王 先 生 电 话 : 传 真 : E mail: david.wang@ bbs summit.com
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