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1 853 对实验性大鼠甲状腺肿的影响 * 田先翔,王瑞,泮剑英,吴勇,鲁云,郑国华 ( 湖北中医药大学药学院,武汉摇 ) 摘摇 要摇 目的摇 研究对实验性大鼠甲状腺肿模型的影响及其作用机制 方法摇 将 SD 大鼠随机分为 6 组:,,低 中 高剂量组, 除外,其余各组大鼠连续灌服 丙基硫氧嘧啶(20 mg kg d ) 造模 低 中 高剂量组同时灌服水溶液,剂量分别为 4. 4, 8. 8,17. 6 g kg d ;灌服左甲状腺素钠片,7. 8 滋g kg d 60 d 后测定大鼠甲状腺 垂体的脏器 指数以及血清中游离三碘甲状腺氨酸原氨酸( FT3 ) 游离甲状腺素( FT4 ) 及促甲状腺素( TSH) 含量,甲状腺 垂体做病理 学检查,免疫荧光法观察其组织中碱性成纤维细胞生长因子( bfgf) 转化生长因子 茁( TGF鄄茁) 和 B 淋巴细胞瘤鄄2( Bcl鄄 2) 基因的表达 结果摇 与比较,低 中 高剂量组甲状腺指数均明显降低( P<0. 05),垂体指数无 明显改变( P>0. 05) ;FT3 FT4 有升高趋势,TSH 有降低趋势,但差异无统计学意义( P>0. 05) ;病理检查结果显示,与模型 对照组比较,各剂量组甲状腺形态结构有较大改善,腺体扩张,甲状腺滤泡恢复呈中等大小,上皮细胞呈立方 或扁平状,滤泡腔内充满丰富胶质,bFGF Bcl鄄2 阳性表达明显降低( P<0. 01),TGF鄄茁 阳性表达明显升高( P<0. 01) 结 论摇 具有较好的抗甲状腺肿大作用,其机制可能与促进甲状腺细胞凋亡 抑制甲状腺细胞增殖有关 关键词摇 ;甲状腺肿;药效;免疫荧光 中图分类号摇 R286;R965摇 摇 摇 文献标识码摇 A摇 摇 摇 文章编号摇 (2014) Effects of Huoxuexiaoying Tablet on the Goiter Model of Rats TIAN Xian鄄xiang,WANG Rui,PAN Jian鄄ying,WU Yong,LU Yun, ZHENG Guo鄄hua( College of Pharmacy, Hubei University of Chinese Medicine,Wuhan ,China ) ABSTRACT摇 Objective摇 To investigate the effects and mechanism of huoxuexiaoying tablet on experimental goiter of rats. 摇 Methods摇 The rats were randomly divided into six groups: the control, the model control group, huoxuexiaoying tablet at different doses,and the sodium levothyroxine group ( Euthyrox group). Except for the rats in the control,the rats in other groups were given with propylthiouracil (20 mg kg d ) by intragastric ( i. g. ) administration every day for 60 days. Meanwhile, some rats were treated with huoxuexiaoying tablet at low (4. 4 g kg d ),middle (8. 8 g kg d ) and high dose (17. 6 g kg d ) orally,and those in the Euthyrox group were given with 7. 8 滋g kg d Euthyrox by i. g. administration. The rats in the control group were administrated with the same volume of saline ( N. S). After 60 days of treatment,the rats were sacrificed,the organ indexes of thyroid and pituitary and the levels of free triiodothyronine ( FT3 ) free thyroxin ( FT4 ) and thyroid stimulating hormone( TSH) in serum,were tested. The expression of basic fibroblast growth factor( bfgf),transforming growth factor鄄茁( TGF鄄茁) and B鄄cell lymphoma 2 gene ( Bcl鄄2) were examined by immunofluorescence. 摇 Results摇 Compared with the model,organ indexes of thyroid were significantly reduced by huoxuexiaoying tablet at three doses ( P < 0. 05),but not for the pituitary ( P>0. 05). The levels of FT3 and FT4 were in a elevating trend,but TSH decreased with no significance ( P>0. 05). The morphological structure of thyroid was greatly improved by huoxuexiaoying tablet in comparison with the model. In which the gland dilated,thyroid follicular restored to moderate size,epithelia were cubic or flattened and follicular cavity filled with abundant glial. The expression of bfgf and Bcl鄄2 decreased significantly ( P < ) while TGF鄄茁 expression increased notably ( P < 0. 01). 摇 Conclusion摇 Huoxuexiaoying tablet has a great anti鄄goiter effect,the mechanism of which may be related to promoting thyroid cells apoptosis and inhibiting thyroid cells proliferation. KEY WORDS摇 Huoxuexiaoying tablet; Goiter; Pharmacodynamics; Immunofluorescence 摇 摇 活血消瘿方是湖北中医药大学附属医院名老中医 收稿日期摇 摇 修回日期摇 基金项目摇 * 2010 年湖北省教育厅重点项目( D ) 作者简介摇 田先翔(1971-),男,湖北仙桃人,副教授,硕士 生导 师, 博 士, 主 要 从 事 中 药 药 理 学 研 究 电 话: 027 aliyun. com 通讯作者摇 郑国华(1964 -),男,天津人,教授,博士生导 师,博士,主要从事中药新制剂与新剂型的研究 电话:027 sina. com 陈如泉教授治疗结节性甲状腺肿( nodular goiter,ng) 的经验方,该方以桃仁与莪术为主药 [1],对 NG 有肯定 的临床疗效 临床观察表明,治疗 NG 总 有效率为 87. 9% [2],经治疗的患者 NG 症 状明显缓解( 甲状腺肿大缩小,甚至消失),治疗效果 明确 [3鄄4] 笔者在本实验中观察对实验性 甲状腺肿大鼠的治疗作用并初步探讨其作用机制 1摇 材料与方法摇 1. 1摇 动物摇 SD 大鼠,雄性,体质量 120 ~ 150 g;雌性,

2 Herald of Medicine Vol郾 33 No郾 7 July 体质量 100 ~ 120 g SPF 级,共 96 只,雌雄各半 由 素钠组大鼠同时灌以左甲状腺素钠片[8] (将左甲状腺素 ,动物生产许可证号:SCXK( 鄂)2008鄄005, 日灌胃剂 量 为 1 ml kg ),7. 8 滋g kg d,连 续 湖北 省 实 验 动 物 中 心 提 供, 动 物 合 格 证 号: NO. 雌雄分笼饲养 1. 2摇 试药摇 丙硫氧嘧啶片( 上海朝晖药业有限公司, 钠用0. 9% 氯化钠溶液分别配制成7. 8 滋g ml 溶液,每 60 d 末次给药前 1 d 禁食不禁水 末次给药后1 h颈总 动脉取血处死动物,留取血清和相关组织备检 规格:每片 50 mg,批号:101201),左甲状腺素钠片( 商 1. 5摇 指标检测摇 ,规格:每片 50 滋g) ;( 湖北中医药 滤纸吸尽液体, 精密称 质 量, 计 算 脏 器 指 数 ( 脏 器 指 品名: 优 甲 乐, 德 国 默 克 雪 兰 诺 有 限 公 司, 批 号: 摇 脏器指数摇 迅速钝性剥离甲状腺组织和垂体, 大学附属医院制剂室提供,处方由土鳖虫 蜈蚣 蜣螂 数 = 脏器质量 / 体质量) 虫 桃仁 莪术 王不留行 猫爪草 柴胡等八味药组成, 规格:每片 g,批准文号:鄂药制字 Z ,批 摇 血清 FT3 FT4 TSH 测定摇 采用化学发光法, 照说明书进行 号: ) ; 游 离 三 碘 甲 状 腺 氨 酸 原 氨 酸 ( free 摇 病理检查摇 甲状腺组织和垂体用 4% 多聚甲 thyroxin, FT4 ) 测 定 试 剂 盒 促 甲 状 腺 素 ( thyroid 摇 甲状腺组织 bfgf Bcl鄄2 和 TGF鄄茁 的表达摇 按 ,113033,114256,siemens Healthcare Diagnostics ( DAPI) 显色 组织切片做完免疫荧光后用抗荧光淬 triiodothyronine,ft3 ) 测定试剂盒 游离甲状腺素( free stimulating hormone, TSH) 测 定 试 剂 盒 ( 批 号 分 别 为 Inc) ; 荧 光 一 抗 碱 性 成 纤 维 细 胞 生 长 因 子 ( basic fibroblast growth factor,bfgf,gr247鄄13,abcam) ;荧 光一抗转化生长因子 茁 ( transforming growth factor鄄茁, TGF鄄茁,GR112432鄄2,abcam),荧光一抗抗 B 淋巴细胞 瘤鄄2 基因( B鄄cell lymphoma 2 gene,bcl鄄2,gr118914鄄1, abcam) ;荧光二抗 Bcl鄄2 和 bfgf 为 CY3 标记的山羊 抗兔 TGF鄄茁 为 CY3 标记的山羊抗小鼠( Jakson,批号: 醛固定,石蜡包埋,切片,脱蜡染色后脱水封固 常规 进 行 免 疫 荧 光 制 片, 4 ' 6鄄二 脒 基鄄2鄄苯 基 吲 哚 灭封片剂封片,然后于倒置荧光显微镜下观察摄影 各组中每张切片随机挑选至少 3 个 200 倍视野进行摄 影 应用 Image鄄ProPlus. 0 对照片进行分析,得出其 阳性累积吸光度值 1. 6摇 统计学方法摇 所有数据均用均数依标准差( ) 表示,所有计量资料运用 SPSS. 0 版软件进行 One鄄 Way ANOVA 分析,以 P<0. 05 为差异有统计学意义 ,109626,110030) ;牛血清清蛋白( albumin from 2摇 结果摇 121E058,) ;4 ',6鄄二脒基鄄2鄄苯基吲哚抗荧光淬灭封片 摇 结果见表 1 与比较,甲状 bovine serum, BSA, 上 海 罗 氏 制 药 有 限 公 司, 批 号: 剂 ( diamidino鄄2鄄phenylindole dihydrochloride, DAPI, 上 海 碧 云 天 生 物 技 术 有 限 公 司, 批 号: , ) 1. 3摇 仪器摇 精密电子天平( FA2104N,上海菁海仪器 2. 1摇 对大鼠甲状腺 垂体组织质量的影响 腺指数明显增大,表明甲状腺肿模型造模成功;与模型 对照组比较,低 中 高剂量组大鼠甲状腺 指数均显著降低,垂体指数均差异无统计学意义,提示 可明显缩小肿大的甲状腺 有限公司) ;倒置荧光显微镜( NIKON ECLIPSE TI鄄SR, 2. 2摇 对大鼠血清 FT3 FT4 TSH 的影响摇 1. 4摇 动物造模与给药摇 大鼠适应性饲养 1 周后,按体质 明显降低,TSH 明显升高,表明模型成功 与模型对照 日本尼康) 量分层随机分为 6 组,即,,活 [5] 血消瘿片低 中 高剂量组, 参考文献 [6鄄7]方法,结合本实验室预实验结果对大鼠进行处理 正常 对 照 组 大 鼠 每 天 灌 胃 给 予 0. 9% 氯 化 钠 溶 液 结果见表 2 与比较, FT3 FT4 组相比,低 中 高剂量组 FT3 FT4 均有升 高趋势,TSH 均有降低趋势,但差异无统计学意义 左 甲状腺素钠组 FT3 FT4 明显升高,TSH 明显降低 结 果显示,对甲状腺激素影响不明显 2 ml kg,其余各组大鼠每天灌胃给予丙硫氧嘧啶 2. 3摇 对大鼠甲状腺组织的影响摇 肉眼观 钠 溶 液 配 制 成 2 mg ml 到峡部,大鼠甲状腺明显充血肿大,为绛紫 20 mg kg 造甲状腺肿模型[将丙硫氧嘧啶用 0. 9% 氯化 水 溶 液, 灌 胃 剂 量 为 1 ml (100 g) ] 低 中 高剂量组同时分 别灌服水溶液(将用 0. 9% 氯化钠 溶液分别配制成4. 4,8. 8,17. 6 g ml 水溶液,每日灌胃 剂量为1 ml kg )4. 4,8. 8,17. 6 g kg d ;左甲状腺 察可见,大鼠甲状腺呈淡红色扁平状,难见 色梭锤状,质较坚硬,峡部明显可见,易与其他组织剥 离开来 各剂量组颜色较浅, 质地较软 苏木精鄄伊红( hematoxylin and eosin,he) 染色( 图

3 855 表 1摇 6 组大鼠甲状腺及垂体质量与脏器指数测定结果摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 Tab. 1摇 Results of weight and organ index of thyroid and pituitary in six groups of rats摇 大鼠 / 剂量 / 甲状腺质量 只 ( g kg ) 依 依 依 依 依 依0. 94 摇 摇 与比较,*1 P<0. 01;与比较, P<0. 05 mg 垂体质量 甲状腺指数 垂体指数 依 依0. 19 ( 伊10 ) 依 依 依4. 14 * 依 依 依 依 依 依 依 依 依 依 依 依 依 Compared with normal control group,*1 P<0. 01;compared with model control group, P<0. 05 表 2摇 6 组大鼠血清 FT3 FT4 TSH 含量测定结果摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 Tab. 2摇 Determination results of the serum levels of FT3, FT4 and TSH in six groups of rats摇 大鼠 / 剂量 / 只 ( g kg ) 摇 摇 与正常组比较,*1 P<0. 05;与比较, P<0. 05 FT3 FT4 ( pg ml ) 2. 04依 依 依0. 07 *1 1. 3依0. 3 * 依 依 依 依0. 04 TSH / ( 滋U ml ) 0. 01依 依0. 03 *1 1. 5依 依 依 依 依 依 0. 19依 0. 10依0. 01 Compared with normal control group,*1 P<0. 05;compared with model control group, P< ) 可见,甲状腺内有大量圆形或椭圆形甲 过氧化物酶,减少碘的氧化和酪氨酸碘化及碘化酪氨酸 细胞呈矮立方形 少量的间质,滤泡腔内含有淡红色 抑制 T4 转变为 T3,致使血清之中较强活性的 T3 含量明 状腺滤泡,滤泡壁由单层上皮围成,形成双层壁,上皮 胶状物,内含吸收空泡 甲状腺滤泡增生, 与相比甲状腺滤泡上皮高度明显较高,甲 缩合而抑制甲状腺激素的合成 另外,丙硫氧嘧啶还能 显快速降低 由于 T3 T4 水平降低,通过负反馈调节作 表 3摇 6 组大鼠 Bcl鄄2 bfgf 与 TGF鄄茁 测定结果摇 状上皮细胞肥大增生,细胞由扁平变为立方形,部分呈 柱状,腔内胶质少 低 中 高剂量组甲状 腺形态结构较有较大改善,甲状腺滤泡恢 Tab. 3摇 Determination results of Bcl鄄2 bfgf and TGF鄄茁 in six groups of rats摇 复呈中等大小,上皮细胞呈立方或扁平状,滤泡腔内充 满丰富的胶质 2. 4摇 对丙基硫氧嘧啶致大鼠甲状腺肿模 Bcl鄄2 bfgf 依901 * 依127 * 依 依 依 依 依 依367 型甲状腺 Bcl鄄2 bfgf 及 TGF鄄茁 表达的影响摇 见表 3 增高,TGF鄄茁 表达明显降低;与比较,活血 与比较, Bcl鄄2 bfgf 表达明显 消瘿片低 中 高剂量组和 Bcl鄄2 bfgf 表达明显降低,TGF鄄茁 表达明显升高( 图 2 ~ 4) 3摇 讨论摇 笔者在本研究中采用的丙硫氧嘧啶致大鼠甲状腺 肥大是一种经典的甲状腺肿模型,丙硫氧嘧啶通过抑制 108依 依 依 依64 200依49 TGF鄄茁 6 941依 依1 * 依 依335 摇 摇 与比较,*1 P<0. 01;与比较, P < Compared with normal control group,*1 P < 0. 01; compared with model control group, P<0. 01

4 Herald of Medicine Vol郾 33 No郾 7 July 图 1摇 6 组大鼠甲状腺组织病理检查结果( HE,伊100) 摇 Fig. 1摇 Pathological results of thyroid in six groups of rats( HE,伊100) 摇 图 2摇 6 组大鼠甲状腺组织 Bcl鄄2 表达结果( 伊200) 摇 Fig. 2摇 Bcl鄄2 expression of thyroid in six groups of rats( 伊200) 摇 图 3摇 6 组大鼠甲状腺组织 bfgf 表达结果( 伊200) 摇 Fig. 3摇 bfgf expression of thyroid in six groups of rats( 伊200) 摇 用,促进垂体分泌 TSH,从而导致甲状腺增生肥大 bfgf 为含 155 个氨基酸的阳离子多肽,是重要的 这种模型与人类甲状腺结节有一定的区别 本实验结 促有丝分裂因子,也是形态发生和分化的诱导因子,其 果表明,能够降低模型大鼠甲状腺指数,具 生理作用包括促进创伤愈合与组织修复 促进组织再 有一定 的 消 肿 作 用 活 血 消 瘿 片 虽 然 有 升 高 FT3 FT4,降低 TSH 的作用趋势,但差异无统计学意义,说 生等,是促进细胞生长的调控因子之一,通过与靶细胞 上的受体结合而发挥作用,能够刺激甲状腺滤泡细胞 明对甲状腺激素生成与降解的影响较小, 不断增生及分化 Bcl鄄2 是调控细胞凋亡的主要因子 其治疗 NG 时不影响甲状腺生理功能是其优点 的二聚体比例来抑制细胞凋亡,延长细胞生存期,促进 其缩小甲状腺的作用与促进 FT3 FT4 合成可能无关, 之一,通过调节其与细胞中 bax 蛋白质结合构成不同

5 857 图 4摇 6 组大鼠甲状腺组织 TGF鄄茁 表达结果( 伊200) 摇 Fig. 4摇 TGF鄄茁 expression of thyroid in six groups of rats( 伊200) 摇 细胞增殖 [9] TGF鄄茁 在炎症 组织修复和胚胎发育方 [3] 摇 陈序吾,陈磊 例结节性甲状腺肿的临床分析[ J]. 能也有重要的调节作用 其机制与促进细胞外基质 [4] 摇 吴淑琼. 活血消瘿方治疗结节性甲状腺肿的临床疗效及 面具有重要的生理功能,对细胞的生长 分化和免疫功 ( extracellular matrixc,ecm) 如胶原蛋白 纤粘连蛋白 的表达和抑制 ECM 的降解,对细胞的形态发生 增殖 和分化过程起着重要作用 在甲状腺肿主要通过甲状 腺滤泡上皮细胞增生,能够抑制其增殖并维持甲状腺 滤泡上皮细胞的正常形态 [10] 实验结果显示,活血消 瘿片可以使甲状腺肿大大鼠的 bfgf 及 Bcl鄄2 表达明 显降低,TGF鄄茁 表达升高,说明抗甲状腺肿 的作用可能与抑制甲状腺组织的增生 促进其分化有 关 其完整作用的机制有待进一步研究 参考文献 [1] 摇 胡俊杰. 的制备工艺及质量标准研究[ D]. 外科理论与实践,2005,10(6) : 其作用机制研究[ D]. 武汉:湖北中医药大学,2010. [5] 摇 徐叔云,卞如濂,陈修. 药理实验方法学[ M]. 2 版. 北京: 人民卫生出版社,2001:1265. [6] 摇 霍光,刘岩. 消瘿合剂对实验性甲状腺小鼠 FT3 及 TSH 的影响[ J]. 辽宁中医药大学学报,2010,12(7) :198. [7] 摇 苟志林,华桦,邓志文,等. 解毒散结方对丙基硫氧嘧啶 致大鼠 甲 状 腺 肿 的 作 用 研 究 [ J]. 中 药 药 理 与 临 床, 2012,28(5) : [8] 摇 张洪海,吕培文,丁毅. 内消连翘丸治疗结节性甲状腺肿 的临床观察[ J]. 北京中医,2006,25(8) : [9] 摇 华川,陈如泉. 芪箭消瘿汤对小鼠甲状腺炎细胞凋亡及 超微结构的影响[ J]. 医药导报,2003,22(9) :594. 武汉:湖北中医药大学,2011. [10] 摇 崔鹏,王英娜,梅兰,等. 化痰散结中药治疗甲状腺肿的 状腺肿 的 临 床 价 值 [ J]. 武 汉 大 学 学 报,2010,32 ( 3 ) : DOI摇 / yydb [2] 摇 吴淑琼,左新河,陈如泉,等. 治疗结节性甲 作用机制[ J]. 中国中药杂志,2012,37(22) : 蕼蕼蕼蕼蕼蕼蕼蕼蕼蕼蕼蕼蕼蕼蕼蕼蕼蕼蕼蕼蕼蕼蕼蕼蕼蕼蕼蕼蕼蕼蕼蕼蕼蕼蕼蕼蕼蕼蕼蕼蕼蕼蕼蕼蕼蕼蕼蕼蕼 2015 年 医药导报 各期药物专栏要目 第 1 期:抗感染用药专栏;摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 第 7 期: 麻醉科用药专栏; 第 2 期:骨科用药专栏;摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 第 8 期: 妇产科用药专栏; 第 3 期:老年病用药专栏;摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 第 9 期: 心血管系统用药专栏; 第 4 期:抗肿瘤用药专栏;摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 第 10 期:精神科疾病用药专栏; 第 5 期:中药与天然药物专栏;摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 第 11 期:内分泌及代谢性疾病用药专栏; 第 6 期:血液系统用药专栏;摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 第 12 期:皮肤性病用药专栏 若投专栏稿件,请至少在该期出版前 6 个月将稿件通过 医药导报 网站( www. yydb. cn 或 www. yydbzz. com) 在线投稿系统投到编辑部,以便及时送审和处理稿件 谢谢! 医药导报 编辑部

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