中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47 卷第 3 期 2016 年 2 月 475 DNA 条形码可从基因水平上提供一种分类依据本研究选用核基因 ITS2 片段和叶绿体基因 ps

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玑枪井
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1 474 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47 卷第 3 期 2016 年 2 月木瓜属药用植物 DNA 条形码鉴定研究张艳艳 1, 齐红 2, 郭庆梅 1*, 孙稚颖 1, 周凤琴 1, 李圣波 1. 山东中医药大学, 山东济南济南市食品药品检验检测中心, 山东济南山东亚特生态技术有限公司, 山东临沂摘要 : 目的对木瓜属药用植物进行 ITS2 psba-trnh 序列分析, 为其分子鉴定提供依据方法对 5 种木瓜属药用植物的 19 个样本 ITS2 序列进行 PCR 扩增和测序, 用 MEGA6.0 计算其种间种内的 Kimura 2-parameter(K2P) 距离, 及各序列变异位点并构建系统发育树, 并预测 ITS2 二级结构结果 ITS2 序列间存在明显差异,psbA-trnH 序列间也存在稳定差异 ; 构建的系统发育树显示木瓜属的不同基原样本各聚为一支, 能很好将 5 种植物区分, 显示出单系性 ; 比较木瓜属 5 种植物的 ITS2 二级结构存在明显差异结论 ITS 和 psba-trnh 序列可以有效准确鉴别 5 种木瓜属植物关键词 : 木瓜属 ;DNA 条形码 ;ITS;psbA-trnH; 遗传距离中图分类号 :R 文献标志码 :A 文章编号 : (2016) DOI: /j.issn Study on DNA barcoding of medicinal plants in Chaenomeles Lindl. ZHANG Yan-yan 1, QI Hong 2, GUO Qing-mei 1, SUN Zhi-ying 1, ZHOU Feng-qin 1, LI Sheng-bo 3 1. Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Ji nan , China 2. Jinan Food and Drug Control/Testing Center, Jinan , China 3. Shandong Yate Eco-tech Co. Ltd., Linyi , China Abstract: Objective To provide evidence for the molecular identification of medicinal plants in Chaenomeles Lindl. Methods Nineteen ITS2 and psba-trnh sequence samples of five species in Chaenomeles Lindl. were PCR amplified and sequenced. The intra-specific and inter-specific K-2P distances were calculated, and cluster analysis was performed using Neighbor-joining (NJ) method by MEGA 6.0. Results The original plant of Chaenomeles Lindl. could be identified by the sequence differences of the ITS2 and psba-trnh sequences. Different samples of Chaenomeles Lindl. were gathered together and could be distinguished by NJ tree. There were significant differences among the ITS2 secondary structures in five species of Chaenomeles Lindl. Conclusion ITS2 and psba-trnh are efficient barcodes for the authentication of plants of Chaenomeles Lindl. Key words: Chaenomeles Lindl.; DNA barcoding; ITS; psba-trnh; genetic distance 3 木瓜属 Chaenomeles Lindl. 植物属于蔷薇科, 全世界共有 5 种, 包括木瓜 Chaenomeles sinensis Koehne 皱皮木瓜 C.speciosa (Sweet) Nakai. 毛叶木瓜 C. cathayensis (Hemsl.) Schneid. 西藏木瓜 C. thibetica Yü 及日本木瓜 C. japonica (Thunb.) Lindl. ex Spach 木瓜为一味传统中药, 中国药典 2010 年版规定 : 木瓜为蔷薇科植物贴梗海棠 ( 皱皮木瓜 ) Chaenomeles speciosa (Sweet) Nakai. 的干燥近成熟果实我国是木瓜属植物起源中心和分布中心, 变异类型和品种资源十分丰富木瓜属植物形态变异较大, 种间过渡性状多, 在亲缘关系和遗传多样性的研究中存在诸多分歧, 因此需要寻求一种快速且准确的方法进行鉴别 DNA 条形码鉴定技术是通过比较一段通用 DNA 片段, 对物种进行快速准确的识别和鉴定 [1] 目前研究者们已经提出了 10 多条植物候选 DNA 条形码序列 [2], 其中核糖体 DNA (nrdna) 中的 ITS2 区具有进化速率快高度重复长度适中等优点, 成为药用植物 DNA 条形码研究中最为重要候选序列之一 [3] [4] Chen 等分析比较了 7 个候选 DNA 条形码, 建议将 ITS2 作为药用植物标准 DNA 条形码,psbA-trnH 作为 ITS2 的辅助序列对药用植物进行鉴定对于木瓜属物种在分类学中难以区分的类群, 采用收稿日期 : 基金项目 : 国家科技支撑计划 (2011BAI 06 B06); 山东省科技发展计划项目 (2011GSF 11904) 作者简介 : 张艳艳, 女, 硕士研究生, 研究方向为中药质量控制与资源研究 yan13579.com@qq.com * 通信作者郭庆梅, 女, 教授, 博士生导师, 研究方向为中药质量控制与资源研究 qmguo@sina.com

山东亚特生态技术有限公司, 山东临沂 266071 摘要 : 目的对木瓜属药用植物进行 ITS2 psba-trnh 序列分析, 为其分子鉴定提供依据方法对 5 种木瓜属药用植物的 19 个样本 ITS2 序列进行 PCR 扩增和测序, 用 MEGA6.

2 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47 卷第 3 期 2016 年 2 月 475 DNA 条形码可从基因水平上提供一种分类依据本研究选用核基因 ITS2 片段和叶绿体基因 psba-trnh 片段对木瓜属植物进行 DNA 分子鉴定, 为解决分类学争议提供分子依据 1 材料与方法 1.1 材料试剂及仪器材料 2014 年 4 月在山东亚特生物有限公司木瓜种植基地采集, 采摘各植株的幼嫩叶片, 硅胶干燥保存原植物经山东中医药大学周凤琴教授鉴定为毛叶木瓜 C. cathayensis (Hemsel) Schneid. 皱皮木瓜 C. speciosa (Sweet) Nakai 日本木瓜 C. japonica (Thunb.) Lindl ex Spach 西藏木瓜 C. thibetica Y 和光皮木瓜 C. sinensis (Thouin) Koehne, 数字影像信息及凭证标本保存于山东中医药大学实验样品材料见表 1 表 1 样品信息 Table 1 Samples information 编号材料登录号 XZ01 西藏木瓜 YC0131MT01 XZ02 西藏木瓜 Y0131CMT02 RB01 日本木瓜 YC0132MT01 RB02 日本木瓜 YC0132MT02 RB03 日本木瓜 YC0132MT03 ZP01 皱皮木瓜 YC0133MT01 ZP02 皱皮木瓜 YC0133MT02 ZP03 皱皮木瓜 YC0133MT03 ZP04 皱皮木瓜 YC0133MT04 ZP05 皱皮木瓜 YC0133MT05 ZP06 皱皮木瓜 YC0133MT06 ZP07 皱皮木瓜 YC0133MT07 ZP08 皱皮木瓜 YC0133MT08 ZP09 皱皮木瓜 YC0133MT09 GP01 光皮木瓜 YC0134MT01 GP02 光皮木瓜 YC0134MT02 MY01 毛叶木瓜 YC0135MT01 MY02 毛叶木瓜 YC0135MT02 MY03 毛叶木瓜 YC0135MT 试剂植物基因组 DNA 提取试剂盒和琼脂糖凝胶 DNA 回收试剂盒购自北京天根生物技术有限公司 ;2 Master Mix ( Taq DNA Polymerase )( recombinant ); D2000 plus DNA Ladder(100~5 000)(Solarbio); 氯仿 β- 巯基乙醇无水乙醇 ( 山东禹王实业有限公司 ); 引物由上海生工有限公司合成仪器 Takara PCR 扩增仪 (GJD35-TP600); DYY-8C 型电泳仪和电泳槽 ( 北京六一仪器厂 ); 微波炉 ( 美的 );ESJ 系列电子分析天平 ; 数显恒温水浴锅 HH-4( 国华电器有限公司 ); 离心机 ( 德国 Eppendorf);KEDA 成像仪及操作系统 ( 美国柯达公司 ); 紫外分析仪 UV-2000( 上海天能科技有限公司 ); DNA 测序仪 3730XL(Applied Biosystems 公司 ) 1.2 方法 DNA 提取实验材料均为硅胶干燥叶片, 取样约 20 mg, 液氮充分研磨, 利用 DNA 提取试剂盒提取 DNA PCR 扩增及测序利用 ITS2 psba-trnh 2 个序列的通用引物分别对所提取的 DNA 中靶序列进行 PCR 扩增反向 PCR 反应体积为 20 μl, 体系内含 : 2 Taq master mix 12.5 μl ddh 2 O 9.5 μl 引物各 1 μl (2.5 μmol/l) DNA 模板 1 μl(30 ng) 扩增程序为 94,5 min;94 30 s,56 30 s,72 45 s,40 个循环 ;72 10 min PCR 扩增产物电泳检测后, 切胶纯化, 使用 ABI 3730XL 测序仪双向测序 ITS psba-trnh 2 个序列的引物序列见表 2 表 2 DNA 条形码引物 Table 2 DNA barcode primers information 序列引物名称引物序列 (5 3 ) ITS2 2F ATGCGATACTTGGTGTGAAT ITS2 3R GACGCTTCTCCAGACTACAAT psba-trnh F GTTATGCATGAACGTAATGCTC psba-trnh R CGCGCATGGTGGATTCACAATCC 数据处理测序峰图利用 CodonCode Aligner V 2.06(CodonCode Co., 美国 ) 校对拼接, 去除引物区,ITS2 序列使用基于隐马尔可夫模型的 HMMer 注释方法除去两端的 5.8S 和 28S 区段获得 ITS2 间隔区序列 [5] psba-trnh 序列切除两端引物获得完整序列然后, 将所有序列用软件 MEGA (Molecular Evolutionary Genetics Analysis)6.0 分析比对并计算 Kimura-2-parameter(K2P) 距离, 用 NJ 邻接法 (neighbor-2-joining method) 构建系统发育树利用相似性搜索法 (BLAST1) 最近距离法 (Nearest distance) 等方法进行鉴定分析利用 bootstrap(1 000 次重复 ) 检验各分支的支持率利 [6] 用 Schultz 等建立的 ITS2 数据库及其网站 ( 预测 ITS2 二级结构

cathayensis (Hemsel) Schneid. 皱皮木瓜 C. speciosa (Sweet) Nakai 日本木瓜 C. japonica (Thunb.) Lindl ex Spach 西藏木瓜 C. thibetica Y 和光皮木瓜 C.

3 476 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47 卷第 3 期 2016 年 2 月 2 结果与分析 2.1 相似性搜索法鉴定结果进入 NCBI 对实验样品的 ITS2 psba-trnh 序列使用 BLAST 方法进行鉴定和序列验证 [7], 结果显示实验样品与木瓜属查询序列的相似度达 96% 以上, 此鉴定结果说明实验药材样本来源于蔷薇科木瓜属 2.2 ITS2 序列种内种间比较分析木瓜属 5 种不同种质植物 ( 皱皮木瓜光皮木瓜西藏木瓜日本木瓜毛叶木瓜 ) 序列比对后长度为 225 bp,g+c 量在 69.6%( 表 3) 对比实验中木瓜属 19 个样本的种间 ITS2 序列 ( 图 1) 发现共有 40 处位点变异, 其中光皮木瓜的总变异率最低 (0.88%), 毛叶木瓜的总变异率最高 (4.94%) 根据 K2P 参数遗传距离模型计算得到种间最大遗传距离为 0.124, 在光皮木瓜与皱皮木瓜之间不同种间最小遗传距离 0.005, 在皱皮木瓜与日本木瓜之间, 说明这 2 种亲缘关系较近种内遗传距离分布于 0~0.015 由此可知 ITS2 序列可以用于木瓜属植物的分子鉴定, 但部分种间差异则不能通过 ITS2 序列的位点碱基差异区分开表 3 ITS2 序列信息 Table 3 Main information of ITS2 sequences 物种全长 /bp G+C/% 缺失率 /% ( 转换 / 颠换 )/% 总变异率 /% 西藏木瓜日本木瓜皱皮木瓜光皮木瓜毛叶木瓜表示该位点碱基缺失, 下同 means the site base deletion, same as below 图 1 木瓜属植物的 ITS2 变异位点图 Fig. 1 Variable sites of ITS2 sequence of plants in Chaenomeles Lindl. 2.3 psba-trnh 序列种内种间比较分析对比过程中发现各物种的 psba-trnh 的长度不一, 序列长度变异从 260~313 bp 波动,G+C 量 25.1%~28.5%, 见表 4 对序列进行分析, 结果日本木瓜和皱皮木瓜总变异率最低 (0.64%), 毛叶木瓜的总变异率最高 (17.20%) 序列比对结果显示 ( 图 2), 把空位当作缺失发现, 西藏木瓜和毛叶木瓜 2 个种在 162 bp 有一大段缺失 53 个碱基, 与皱皮木瓜相比, 日本木瓜毛叶木瓜分别缺失 1 个碱基, 光皮木瓜缺失 4 个碱基, 种间的位点变异较少木瓜属 psba-trnh 序列 K2P 遗传距离分布于 0~0.036, 其中光皮木瓜与皱皮木瓜的 K2P 遗传距离最大, 毛叶木瓜和西藏木瓜种间遗传距离为 0, 亲缘关系很近, 与 ITS2 结果一致 psba-trnh 种间平均 K2P 遗传距离 0.007, 种内最大遗传距离为 ITS2 序列二级结构从木瓜属 5 个种的二级结构比较可以看出不同基原植物间 ITS2 二级结构非常相似, 均由一个中心环及 4 个螺旋 (Helix) 区构成 ( 图 3), 比较木瓜属二级结构发现, 其中 IV 区较为保守, 主要差异在螺旋 I II III 区, 其中光皮木瓜无论是从茎环 (Loop) 的数目大小角度和长度等方面, 都与其他 4 种有很大区别毛叶木瓜在螺旋 II 区较其他种缺少一个茎环, 日本木瓜在螺旋 I 区多一个茎环, 不同物种间茎环大小位置有或多或少的区别, 见图中方框所示因此, 通过 ITS2 二级结构, 可以将木瓜属 5 个近缘种直观地鉴别出来

2 ITS2 序列种内种间比较分析木瓜属 5 种不同种质植物 ( 皱皮木瓜光皮木瓜西藏木瓜日本木瓜毛叶木瓜 ) 序列比对后长度为 225 bp,g+c 量在 69.

4 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47 卷第 3 期 2016 年 2 月 477 表 4 psba-trnh 序列信息 Table 4 Main information of psba-trnh sequences 物种全长 /bp G+C/% 缺失率 /% ( 转换 / 颠换 )/% 总变异率 /% 西藏木瓜日本木瓜皱皮木瓜光皮木瓜毛叶木瓜图 2 木瓜属植物的 psba-trnh 变异位点图 Fig. 2 Variable sites of psba-trnh sequence of plants in Chaenomeles Lindl. I IV II III 皱皮木瓜日本木瓜西藏木瓜毛叶木瓜木瓜图 3 ITS2 二级结构比较 Fig. 3 Comparison on secondary structure of ITS2 2.5 聚类分析木瓜属植物分布广泛, 种间性状交叉普遍, 种间关系不清晰, 导致木瓜属植物在分类处理上存在较大争议, 而基于 DNA 条形码序列构建木瓜属系统发育树, 不仅能通过树形图分支结果判断物种, 还能在一定程度上还原其系统进化关系从 ITS2 序列聚类分析结果来看 ( 图 4-A), 木瓜属 5 个种种内的不同样本分别聚为一支, 其中, 样本中皱皮木瓜聚为一支, 后与日本木瓜分支聚为一支, 呈现较近的亲缘关系西藏木瓜与毛叶木瓜分支聚为一支持率较高的分支, 亲缘关系较高而光皮木瓜形成支持率为 100% 单独分支, 表现出单系性, 与其他同属能够很明显区分开依据 ITS2 序列构建的分子系统树可将木瓜属 5 个种很好地区分开 psba-trnh 序列的 NJ 树 ( 图 4-B) 中, 光皮木瓜与其他种间呈现明显的单系性 ; 日本木瓜毛叶木瓜皱皮木瓜种质品种内优选聚类 ; 西藏木瓜与

2 Variable sites of psba-trnh sequence of plants in Chaenomeles Lindl. I IV II III 皱皮木瓜日本木瓜西藏木瓜毛叶木瓜木瓜图 3 ITS2 二级结构比较 Fig. 3 Comparison on secondary structure of ITS2 2.

5 478 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47 卷第 3 期 2016 年 2 月 Bootsrap 次重复, 仅显示支持率 50% 的分支 Bootsrap repeated, the support rate 50% were shown above branches 图 4 基于 ITS2 (A) 和 psba-trnh (B) 序列构建 NJ 树 Fig. 4 sequences A B ZP08 ZP09 ZP05 ZP01 ZP02 ZP06 ZP03 ZP07 ZP04 RB01 RB02 RB03 XZ01 XZ02 MY01 MY02 MY03 GP01 GP02 ZP03 ZP05 ZP01 ZP09 ZP04 ZP06 ZP08 ZP02 ZP07 XZ02 XZ01 MY03 MY01 MY02 RB01 RB02 RB03 GP01 GP02 NJ tree based on ITS2 (A) and psba-trnh (B) 毛叶木瓜种质共聚为一个类群, 表明 2 个物种间亲缘关系密切日本木瓜种质与皱皮木瓜种质亲缘关系较远皱皮木瓜种质聚为一个类群, 但与 ITS2 序列相比较, 种内样品在树状图中位置不稳定 3 讨论木瓜属植物变异类型多变异幅度大, 种间杂交容易, 传统的形态分类鉴别法并不能完全区分各种质资源近年来随着分子生物学的不断发展, 已有研究通过 RAPD AFLP 及 SRAP 等方法对木瓜种质的遗传多样性进行了分析 [8-14], 但在种间种内显示出的多态性程度并不完全一致, 且各种分子标记技术之间缺乏一定的相互印证基于遗传物质 DNA 的条形码鉴定技术, 具有稳定可靠不受外界影响的特点, 是一种新的分子生物鉴定技术本实验应用 DNA 条形码技术测定了木瓜属的 ITS2 和 psba-trnh 序列, 从分子水平证明了 5 个种间的亲缘关系研究结果表明,ITS2 序列在木瓜不同种质个体间存在丰富的变异,psbA-trnH 序列的种内种间变异位点较少 ITS2 序列种内种间的 K2P 遗传距离接近, 说明遗传相似度高, 亲缘关系较近 psba-trnh 序列 K2P 遗传距离显示光皮木瓜与皱皮木瓜之间遗传距离最远, 而毛叶木瓜和西藏木瓜种间遗传距离较小, 亲缘关系紧密, 与 ITS2 结果一致木瓜属 5 个种的 ITS2 二级结构存在明显不同, 说明 ITS2 二级结构有助于更直观地鉴定物种本研究中 ITS2 序列信息聚类结果与 psba-trnh 基本一致,5 个不同种质分别聚为一支, 可以很好地区分开, 其中 4 个种的亲缘关系较近, 仅有光皮木瓜表现出显著的单系性 ;2 个聚类图中西藏木瓜与毛叶木瓜均聚为一支, 显示密切的亲缘关系, 本研 [15] 究支持王明明等对木瓜属品种亲缘关系的 SRAP [16] 分析的研究结果同时, 王明明等的数量分类学研究表明日本木瓜种系较为独立, 与 psba-trnh 聚类结果基本一致 ITS2 序列各分支的支持率较高, 在物种水平的鉴定成功率高, 但 psba-trnh 序列各分支的支持率不高, 主要原因在于种内种间变异位点较少, 各品种区分度不高以上结论说明采用以 ITS2 序列为主,psbA-trnH 序列为辅的鉴定方法能够从分子角度区分木瓜属的种间遗传性, 对于探讨木瓜属不同物种间的分类学关系以及药材资源的合理开发利用亦具有重要的参考价值本研究结果验证了 ITS2 psba-trnh 序列在木瓜属的鉴别能力, 对于实现木瓜分子水平的快速准确鉴定具有重要意义, 可为研究木瓜种质资源的起源和进化提供参考本研究中 DNA 条形码候选序列 ITS2 与 psba-trnh 片段表现了较好的物种鉴定能力, 从分子水平揭示木瓜属各种间的亲缘关系, 适用于木瓜属植物物种鉴定志谢 : 山东省农业科学研究院生物信息中心王兴军教授的课题组提供本研究分子实验平台

4 sequences A B ZP08 ZP09 ZP05 ZP01 ZP02 ZP06 ZP03 ZP07 ZP04 RB01 RB02 RB03 XZ01 XZ02 MY01 MY02 MY03 GP01 GP02 ZP03 ZP05 ZP01 ZP09 ZP04 ZP06 ZP08 ZP02 ZP07 XZ02 XZ01 MY03 MY01 MY02 RB01 RB02 RB03

6 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47 卷第 3 期 2016 年 2 月 479 参考文献 [1] Hebert P D, Cywinska A, Ball S L, et al. Biological identifications through DNA barcodes [J]. Proc Biol Sci, 2003, 270(1512): [2] Ning S P, Yan H F, Gang H, et al. Current advances of DNA barcoding study in plants [J]. Biodiv Sci, 2008, 16: [3] 陈士林, 姚辉, 宋经元, 等. 基于 DNA barcoding ( 条形码 ) 技术的中药材鉴定 [J]. 世界科学技术中医药现代化, 2007, 9(3): [4] Chen S L, Yao H, Han J P, et al. Validation of the ITS2 region as a novel DNA barcode for identifying medicinal plant species [J]. PLoS ONE, 2010, 5: e8613. [5] Keller A, Schleicher T, Schultz J, et al. 5.8S-28S rrna interaction and HMM-based ITS2 annotation [J]. Gene, 2009, 430: [6] Schultz J, Muller T, Achtziger M, et al. The internal transcribed spacer2 database-a web server for (not only) low level phylogenetic analyses [J]. Nucl Acids Res, 2006, 34: W704-W707. [7] 陈士林, 庞晓慧, 姚辉, 等. 中药 DNA 条形码鉴定体系及研究方向 [J]. 世界科学技术中医药现代化, 2011, 13(5): [8] 陈红, 张雷, 吕晓贞, 等. 适于木瓜属植物 AFLP 分析用 DNA 提取方法研究 [J]. 北方园艺, 2008(12): [9] 尹长虹, 马燕, 臧德奎. 木瓜属植物 AFLP 分析体系的建立与应用 [J]. 北方园艺, 2010(13): [10] 张亚利. 形态学性状及 AFLP 标记在木瓜海棠新种质鉴别和分类中的应用 [J]. 江苏农科学, 2010(4): [11] 陈红. 木瓜属种质资源的 RAPD AFLP 亲缘关系鉴定及遗传多样性分析 [D]. 济南 : 山东农业大学, [12] 臧德奎, 陈红, 郑林, 等. 木瓜属优良品种亲缘关系的 AFLP 分析 [J]. 林业科学, 2009(8): [13] 夏永秀, 曾秀丽, 廖明安, 等. SRAP 在西藏木瓜属种质资源研究中的应用 [J]. 果树学报, 2010, 27(6): [14] Li G, Quiros C F. Sequence-related amplified polymorphism (SRAP), a new marker system based on a simple PCR reaction: its application to mapping and gene tagging in Brassica [J]. Theor Appl Genet, 2001, 103: [15] 王明明, 陈化榜, 王建华, 等. 木瓜属品种亲缘关系的 SRAP 分析 [J]. 中国农业科学, 2010(3): [16] 王明明, 王建华, 宋振巧, 等. 木瓜属品种资源的数量分类研究 [J]. 园艺学报, 2009(5):

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说明为了反映教运行的基本状态, 为校和院制定相关政策和进行教建设与改革提供据依据, 校从程资源 ( 开类别开量规模 ) 教师结构程考核等维度, 对 2015 年春季期教运行基

说明为了反映教运行的基本状态, 为校和院制定相关政策和进行教建设与改革提供据依据, 校从程资源 ( 开类别开量规模 ) 教师结构程考核等维度, 对 2015 年春季期教运行基内部资料东北师范大教运行基本状态据报告 2015 年春季期教务处 2015 年 10 月 27 日说明为了反映教运行的基本状态, 为校和院制定相关政策和进行教建设与改革提供据依据, 校从程资源 ( 开类别开量规模 ) 教师结构程考核等维度,

中 草 药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47 卷 第 3 期 2016 年 2 月 475 DNA 条 形 码 可 从 基 因 水 平 上 提 供 一 种 分 类 依 据 本 研 究 选 用 核 基 因 ITS2 片 段 和 叶 绿 体 基 因 ps

中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47 卷第 3 期 2016 年 2 月 475 DNA 条形码可从基因水平上提供一种分类依据本研究选用核基因 ITS2 片段和叶绿体基因 ps