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1 212 临床与病理杂志 J Clin Pathol Res 219, 39(1) doi: /j.issn View this article at: MiRN-26 通过抑制 CDK9 表达对鼻咽癌 CNE2 细胞的生长及转移的影响 王晓辉, 沙树奎, 闫嘉俊, 姚明月 ( 南阳市中医院耳鼻咽喉头颈外科, 河南南阳 4733) [ 摘要 ] 目的 : 探讨 mirn-26 对人鼻咽癌 CNE2 细胞的增殖和转移能力的影响, 并分析细胞周期蛋白依赖性激酶 9(cyclin-dependent kinase 9,CDK9) 在其中的作用 方法 : 采用实时荧光定量 PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction,rt-qpcr) 法检测 mir-26 在鼻咽上皮 NP69 细胞和人鼻咽癌 CNE2 细胞中的表达水平后, 将 mir-26 模拟物或对照物分别导入 CNE2 细胞 通过 CCK-8 试验 nnexin V-FITC/PI 染色 克隆形成试验 Transwell 细胞迁移试验和 Transwell 细胞侵袭试验分别评价 mir-26 过表达对 CNE2 细胞活力 凋亡 克隆形成 迁移和侵袭的影响 最后采用蛋白质印迹法检测 CDK9 在 NP69 细胞和 CNE2 细胞中的表达 进一步检测过表达 CDK9 对 mir-26 过表达 CNE2 细胞的迁移和侵袭的影响 结果 :MiR-26 在 CNE2 细胞系中低表达 MiR-26 过表达降低 CNE2 细胞的活性 克隆形成 迁移 侵袭并诱导细胞凋亡 CNE2 细胞中 CDK9 呈现高表达 过表达 mir- 26 显著抑制 CNE2 细胞中 CDK9 表达水平 ; 而 CDK9 过表达能逆转 mir-26 过表达对 CNE2 细胞侵袭与迁移的抑制作用 结论 :MiRN-26 对 CNE2 细胞的生长和转移起抑制作用, 可通过抑制 CDK9 表达来介导 [ 关键词 ] mirn-26; 细胞周期蛋白依赖性激酶 9; 鼻咽癌 ; 增殖 ; 转移 Effect of mirn-26 on the growth and metastasis of nasopharyngeal carcinoma CNE2 cells by inhibiting expression of CDK9 WNG Xiaohui, SH Shukui, YN Jiajun, YO Mingyue (Department of Otolaryngology, Head and Neck Surgery, Nanyang Hospital of Traditional Chinese Medicine, Nanyang Henan 4733, China) bstract Objective: To investigate the effect of mir-26 on proliferation and metastasis of human nasopharyngeal carcinoma CNE2 cells, and to analyze the role of cyclin-dependent kinase 9 (CDK9). Methods: Expression levels of mir-26 in nasopharyngeal epithelial NP69 cells and human nasopharyngeal carcinoma CNE2 cells were detected by real-time quantitative polymerase chain reaction (RT-qPCR). The mimic and control of mir- 26 were introduced into CNE2 cells, respectively. CCK-8 assay, nnexin V-FITC/PIstaining, clone formation assay, transwell migration assay and transwell invasion assay were used to evaluate the effect of mir-26 over- 收稿日期 (Date of reception): 通信作者 (Corresponding author): 王晓辉,

2 MiRN-26 通过抑制 CDK9 表达对鼻咽癌 CNE2 细胞的生长及转移的影响王晓辉, 等 213 Keywords expression on cell viability, apoptosis, colony formation, migration and invasion in CNE2 cells, respectively. Finally, Expression levels of CDK9 in CNE2 cells and NP69 cells were detected by Western blot. The effect overexpression of CDK9 on migration and invasion in over-expression of mir-26 of CNE2 cells was further detected. Results: MiR-26 was lower expression in CNE2 cells. Over-expression of mir-26 decreased cell viability, colony formation, migration and invasion and induced apoptosis in CNE2 cells. CDK9 was higher expression in CNE2 cells. Over-expression of mir-26 inhibited Expression of CDK9 in CNE2 cells. However, over-expression of CDK9 could reverse the inhibitory effect of over-expression of mir-26 on the invasion and migration of CNE2 cells. Conclusion: MiRN-26 inhibits the growth and metastasis in CNE2 cells, which may be mediated though inhibiting Expression of CDK9. mirn-26; cyclin-dependent kinase 9; nasopharyngeal carcinoma; proliferation; metastasis 鼻咽癌是我国南方和东南亚地区最常见的头颈 部肿瘤, 同时也是这些地区最严重的公共卫生问题 之一 [1] 目前, 放射治疗 ( 简称 放疗 ) 是鼻咽癌 的首选治疗方法, 尽管放化疗已被证明能提高生 存, 鼻咽癌 5 年局部控制率虽已达到 8%~9%, 但 仍有 15%~3% 的患者会发生远处转移 [2] 因此, 阐明鼻咽癌转移的机制对于改善预后和治疗效果 具有重要意义 微小 RN(microRNs,miRN) 通 过与靶 mrn 的特异性结合参与基因表达的转录后 调控, 会导致翻译抑制或 mrn 降解 [3] MiRN 在 不同种类的肿瘤中充当肿瘤抑制基因或癌基因的功 能, 调控多种癌细胞的增殖 侵袭 迁移和凋亡 [4] MiR-26 参与多种疾病的发生发展, 包括肺病 [5] 心 力衰竭 [6] [7] 阿尔茨海默病及各种癌症 [8] 在透明 细胞肾细胞癌 胃癌和横纹肌肉瘤中,miR-26 通 常表达下调 [9-1], 在肿瘤的发生发展中起负向调节 细胞周期和抑癌作用 然而 mir-26 在鼻咽癌发生 发展中的作用机制尚不清楚 细胞周期蛋白依赖 性激酶 9(cyclin-dependent kinase 9,CDK9) 是正转 录延长因子 b(p-tefb) 的激酶, 在细胞周期调控和 细胞凋亡中起重要作用 [11] CDK9 与许多转录因子 (transcription factor,tf) 相互作用, 并调节抗凋 亡蛋白的表达以维持癌细胞的存活 [12] CDK9 在大 多数恶性肿瘤中表达失调, 并在鼻咽癌中其表达 上调 [13] 抑制 CDK9 活性可导致短寿命抗凋亡蛋白 迅速下调, 抑制细胞增殖, 诱导癌细胞凋亡 因此 推测抑制 CDK9 可能有利于鼻咽癌的治疗 本研究 旨在探索 mir-26 对鼻咽癌细胞的生长与转移的影 响, 并分析 CDK9 与 mir-26 之间的关系 1 材料与方法 1.1 材料 人鼻咽癌细胞系 CNE2 及鼻咽上皮细胞系 NP69 购自上海素冉生物公司 ; 胎牛血清 RPMI-164 培养基 表皮生长因子 脂质体 2 试剂和辣根过氧化物酶购自美国 Invitrogen 公司 ;TRIzol 试剂盒 RN 反转录试剂盒和 nnexin/pi 染色试剂盒购自美国 ppliedio 公司 ;PrimeScirpt RT 试剂盒 SYR 预混 E x Taq 购自北京 Tak ara 公司 ;CDK9 和 Tublin 蛋白一抗购自美国 Santa Cruz 公司 ; PVDF 膜 C 蛋白测定试剂盒 化学发光 (ECL) 试剂盒购自美国 Millipore 公司 ;CCK-8 检测试剂盒购自广州赖德生物公司 ; 跨孔室购自美国康宁公司 1.2 方法 细胞培养 CNE2 细胞系在添加 1% 胎牛血清的 RPMI- 164 中培养,NP69 为永生化的人鼻咽上皮细胞系, 在 KSFM 培养基中培养, 该培养基中添加表皮生长因子 所有细胞系在 37,5%CO 2 加湿室中培养 RN 提取与实时荧光定量 PCR 使用 TRIzol 试剂盒从细胞系中分离出包括 mirn 的总 RN 分别使用 RN 反转录试剂盒和 PrimeScirpt RT 试剂盒进行反转录 使用 SYR 预混 E x Ta q 在 I 75 实时 PCR 系统 (Life Technologies, 美国 ) 上进行实时荧光定量 PCR(realtime quantitative polymerase chain reaction,rtqpcr) 以 U6 作为内参对照 用 2 Ct 法计算 mirn 的相对表达水平 MiRN 和慢病毒转染 MiR-26 模拟物 (mir-26 mimic) 和阴性对照 (mir-26-) 均来源于上海 GenePharma 公司 根据制造商的说明, 使用脂质体 2 试剂 (Invitrogen, 美国 ) 进行辅助 mir-26 mimic 转染 48 h CDK9 过表达及对照慢病毒购自上海吉凯生物公

3 214 临床与病理杂志, 219, 39(1) 司, 转染 48 h 转染的细胞后进行实验 细胞增殖试验使用 CCK-8 检测试剂盒检测细胞活性 MiR- 26 模拟物或 转染 CNE2 细胞 48 h 后, 收集细胞, 以每孔 个细胞的密度接种到 96 孔板中 根据说明书, 连续 4 d 测定细胞生长速率 实验结束后, 将 CCK-8 溶液加入各孔中, 于 37 下孵育 1.5 h, 用微板阅读器 (io-rad) 测量 49 nm 的光密度 细胞凋亡分析用 mir-26 模拟物或 转染 CNE2 细胞 48 h 后, 收集细胞, 在 PS 中洗涤, 然后在室温下与 5 μl 结合缓冲液 5 μl FITC 结合蛋白 V 和 5 μl 碘化丙啶 (PI) 孵育 15 min 流式细胞仪检测细胞凋亡率 集落形成试验用 mir-26 模拟物或 转染 CNE2 细胞 48 h 后, 将细胞接种于 6 孔板 (5 个细胞 / 孔 ) 中 每 4 d 更换 1 次培养基 2 周后, 用 PS 冲洗, 甲醇固定,.5% 结晶紫染色 在倒置显微镜 (Olympus, 日本 ) 下计数菌落数 (>5 个细胞 ) 迁移和入侵试验采用孔径为 8 μm 的 Transwell 跨孔室进行细胞迁移和侵袭检测 用 mir-26 模拟物或 转染 CNE2 细胞 48 h 后, 收集细胞, 然后将无血清 DMEM 培养基制备的细胞悬液 (5 1 4 个细胞 ) 置于上腔, 上腔预先包被 Matrigel( 用于侵袭试验 ) 或不包被 Matrigel( 用于迁移试验 ) 将含有 1%FS 的培养基作为诱导剂添加到下腔室 细胞在 37 下孵育 24 h, 然后用棉签取出上腔室剩余的细胞 下腔室表面侵袭或迁移的细胞用 % 甲醇固定,.5% 结晶紫染色 在倒置显微镜下, 从每个腔室中随机选取 5 个区域, 观察并计数侵袭和迁移的细胞数目 蛋白质印迹法用 RIP 缓冲液裂解转染的细胞 用 C 蛋白测定试剂盒测定蛋白浓度 通过 12%SDS-PGE 将等量的蛋白质 (4 μg) 分离, 然后转移到 PVDF 膜上 用 5% 脱脂牛奶在 4 下隔夜封闭, 然后与 CDK9 和 Tublin 蛋白一抗在 4 下孵育, 与相应的辣根过氧化物酶 (HRP) 孵育 用 ECL 试剂盒进行化学发光显影, 用 Tublin 蛋白作为内参, 使用 Image J 软件对蛋白条带灰度值进行扫描 1.3 统计学处理采用 SPSS 18. 统计学软件进行数据分析, 数据以均数 ± 标准差 ( x ± s ) 表示 采用双尾非配对 t 检验分析两组间差异的统计学意义 所有实验至少独立进行 3 次 P<.5 为差异有统计学意义 2 结果 2.1 MiR-26 在 CNE2 细胞中低表达与 NP69 细胞相比,CNE2 细胞中 mir-26 表达显著降低 (P<.1, 图 1) 为进一步探讨 mir-26 在鼻咽癌中的生物学作用, 将 mir-26 模拟物或对照物分别转染 CNE2 细胞,RT-qPCR 结果显示 : mir-26 模拟物转染组的 CNE2 细胞的 mir-26 表达较 转染组增加了 3 倍以上 ( 图 1) 15 5 NP69 CNE2 4 * 3 2 MiR-26-mimic 差异倍数 /% 差异倍数 /% 图 1 MiR-26 在 CNE2 细胞中的表达 Figure 1 Expression of mir-26 in CNE2 cells ()mir-26 在鼻咽上皮细胞系 (NP69) 和人鼻咽癌细胞系 (CNE2) 中的表达水平 P<.1 vs NP69 cells;()cne2 细胞转染 mir-26 mimic 后,miR-26 的表达水平 *P<.1 vs group () Expression of mir-26 in nasopharyngeal epithelial cell line (NP69) and human nasopharyngeal carcinoma cell line (CNE2). P<.1 vs NP69 cells; () Expression level of mir-26 in CNE2 cells after transfected with mir-26 mimic. *P<.1 vs group.

4 MiRN-26 通过抑制 CDK9 表达对鼻咽癌 CNE2 细胞的生长及转移的影响王晓辉, 等 MiR-26 过表达降低 CNE2 细胞的活性并诱 导凋亡 CCK-8 检测结果显示 : 与 转染组相比, mir-26 模拟物转染组的 CNE2 细胞在 1~4 d 的 D (49 nm) 值均显著降低 ( P <.1, 图 2), 说明 mir-26 过表达抑制 CNE2 细胞的活性 流式细胞 仪检测显示 :mir-26 的高表达显著提高 CNE2 细 胞的凋亡百分率 (P<.1; 图 2,2C) 2.3 MiR-26 过表达降低 CNE2 细胞的生长能力 细胞集落形成结果显示 :mir-26 模拟物转 染组的 CNE2 细胞的集落数较 转染组明显减少 (P<.1, 图 3), 提示细胞生长能力下降 2.4 MiR-26 过表达降低 CNE2 细胞的迁移和侵袭能力 Transwell 试验结果显示 : 与 转染组比较, mir-26 模拟物转染组的 CNE2 细胞的侵袭细胞 数 (P <.1; 图 4,4) 和迁移细胞数 (P <.1; 图 4C,4D) 均明显降低, 说明 mir-26 过表达减弱 CNE2 细胞侵袭和迁移 2.5 MiR-26 过表达降低 CNE2 细胞 CDK9 的表达与 NP69 细胞相比,CNE2 细胞中 CDK9 表达显著增加 ( P<.1; 图 5, 5); mir- 26 过表达显著抑制了 CNE2 细胞中 CDK9 蛋白质表达水平 ( P<.1; 图 5C, 5D) 与 mir- 26 mimic 转染组比较, 过表达 CDK9 促进 mir-26 过表达的 CNE2 细胞侵袭数明显增加 ( P<.1; 图 5E, 5F) 和细胞迁移数也明显增加 ( P<.1; 图 5G, 5H) 提示 CDK9 过表达逆转 mir-26 过表达对 CNE2 细胞侵袭迁移抑制作用, 进一步说明 CDK9 参与 mir-26 对 CNE2 细胞生长与转移的调控 1.5 MiR-26-mimic 1. D (49 nm) * Time/days C PI PI FITC FITC MiR-26-mimic poptotic rate/% 1 5 MiR-26-mimic 图 2 mir-26 过表达抑制 CNE2 细胞的活性并诱导凋亡 Figure 2 Over-expression of mir-26 inhibits cell viability and induces apoptosis in CNE2 cells () 过表达 mir-26 后 CNE2 细胞的活性水平 ;() 流式细胞术检测 CNE2 细胞过表达 mir-26 后的凋亡情况 ;(C) 流式细胞术的统计结果 P<.1,*P<.1 vs 组 () Cell viability level of CNE2 cells after over-expression of mir-26; () Flow cytometry was used to detect apoptosis of CNE2 cells after over-expression of mir-26; (C) Statistical results of flow cytometry. P<.1, *P<.1 vs group.

5 216 临床与病理杂志, 219, 39(1) 18 Number of colonies 12 6 MiR-26-mimic MiR-26-mimic 图 3 MiR-26 过表达抑制 CNE2 细胞的生长能力 Figure 3 Over-expression of mir-26 inhibits growing ability of CNE2 cells () 过表达 mir-26 后 CNE2 细胞的集落形成实验结果 ( 2);() 集落形成实验统计结果 P<.1 vs 组 () Results of colony formation of CNE2 cells after over-expression of mir-26 ( 2); () Statistical results of colony formation experiment. P<.1 vs group. 15 Invasion Invasive cells 5 * MiR-26-mimic MiR-26-mimic C D 3 Migration Migrative cells 2 MiR-26-mimic MiR-26-mimic 图 4 mir-26 过表达抑制 CNE2 细胞的迁移和侵袭能力 Figure 4 Over-expression of mirn-26 inhibits the migration and invasion in CNE2 cells () 过表达 mir-26 后 CNE2 细胞侵袭实验结果 ( 2);() 细胞侵袭实验结果统计结果 ;(C) 过表达 mir-26 后 CNE2 细胞细胞迁移实验结果 ( 2);(D) 细胞迁移实验结果统计结果 P<.1,*P<.1 vs 组 () Invasion of CNE2 cells after over-expression of mirn-26 ( 2); () Statistical results of cell invasion experiment; (C) Migration of CNE2 cells after over-expression of mirn-26 ( 2). (D) Statistical results of cell migration experiment. P<.1, *P<.1 vs group.

6 MiRN-26 通过抑制 CDK9 表达对鼻咽癌 CNE2 细胞的生长及转移的影响王晓辉, 等 CDK9 CDK9 Tublin Protein fold change 2 NP69 CNE2 NP69 CNE2 C D 15 CDK9 CDK9 Tublin MiR-26-mimic Protein fold change 5 MiR-26-mimic E F 15 * Invasion Invasive cells 5 MiR-26 mimic MiR-26 mimic+cdk9 over-expression MiR-26 mimic MiR-26 mimic+cdk9 over-expression G H 3 Migration Migrative cells 2 MiR-26 mimic MiR-26 mimic+cdk9 over-expression MiR-26 mimic MiR-26 mimic+cdk9 over-expression 图 5 CDK9 在 CNE2 细胞系中的表达 Figure 5 Expression of CDK9 in CNE2 cells ()CDK9 在 NP69 细胞和 CNE2 细胞中的表达水平 ;()CDK9 在 NP69 细胞和 CNE2 细胞中的表达水平的统计结果 ;(C)CDK9 在 CNE2 细胞细胞过表达 mir-26 后的表达水平 ;(D)CDK9 在 CNE2 细胞细胞过表达 mir-26 后的表达水平的统计结果 ;(E) 过表达 CDK9 后 mir-26 模拟物转染的 CNE2 细胞侵袭实验结果 ( 2);(F) 细胞侵袭实验的统计结果 ;(G) 过表达 CDK9 后 mir- 26 模拟物转染的 CNE2 细胞迁移实验结果 ( 2);(H) 细胞迁移实验结果统计结果 P<.1,*P<.1 vs NP69 cells or group or control () Expressions of CDK9 in NP69 cells and CNE2 cells; () Statistical results of expressions of CDK9 in NP69 cells and CNE2 cells; (C) Expression level of CDK9 in CNE2 cells after over-expression of mirn-26; (D) Statistical results of expression level of CDK9 in CNE2 cells after over-expression of mirn-26; (E) Invasion of mir-26 mimic-transfected CNE2 cells after over-expression of CDK9 ( 2); (F) Statistical results of cell invasion experiment; (G) Migration of mir-26 mimic-transfected CNE2 cells after over-expression of CDK9 ( 2); (H) Statistical results of cell migration experiment. P<.1, *P<.1 vs NP69 cells or group or control.

7 218 临床与病理杂志, 219, 39(1) 3 讨论 由于鼻咽癌的高转移水平 高复发风险和不 良预后,75%~9% 的鼻咽癌患者在疾病达到晚期 时才被诊断 [1] 在过去的十年中, 已有数以千计 的 mirn 被发现, 与鼻咽癌相关的 mirn 为早期 检测 诊断和分期以及预后和治疗结果预测提供 [14] 可利用的工具, 引起临床关注 研究显示 : 在 头颈部癌症谱中,miRN 的表达发生改变 在鼻 咽癌中, 肿瘤抑制因子 mirn 呈低表达 [15], 包括 mirn-29c, mirn-9, let-7 家族,miRN-2 家族, 致癌性 mirn 的高表达 [16], 以及例如 mir- 18a/b, mir-141, mir-155, mir-214 等 然而 mir-26 在鼻咽癌中的作用尚不明确 本研究发现 mir-26 在鼻咽癌 CNE2 细胞低表达, 高表达 mir- 26 能抑制 CNE2 细胞生长与转移 MiRN 通过促进靶 mrn 的降解或抑制靶 mrn 的翻译来转录调节基因表达 MiRN 的异常表达与 [17-19] 人类癌症的发生密切相关 既往研究表明 :mir- 26 通过直接靶向如 MUC1,CDK9 和 G6PD 等多种 基因抑制多种癌细胞增殖 CDK9 是 CDC2 家族的成 员, 具有促进细胞增殖的作用, 对癌症发生有重要 贡献 [17] CDK9 是重要的转录调控因子, 已成为癌症 治疗研究中一个新的明星靶点 [13] CDK9 能促进多种 肿瘤包括鼻咽癌的发生发展 [2] 在本研究中,miR- 26 显著下调鼻咽癌细胞中的 CDK9, 导致细胞生长 [21] 抑制 凋亡增加和转移减弱 而 Georgantas 等研 究表明 :mir-26 对黑色素瘤中 CDK9 的表达无显著 影响, 提示 mir-26 在不同肿瘤中选择性调节 CDK9 的表达 本研究发现 mir-26 可作为 CDK9 抑制剂在 鼻咽癌中的发挥作用, 明确了 mir-26 是鼻咽癌细胞 CDK9 的调控因子, 提示 mir-26/cdk9 通路在鼻咽 癌抑制中的潜在靶点作用 综上,miR-26 在鼻咽癌细胞中显著下调, 并 与 CDK9 水平呈负相关 mir-26 通过阻断 CDK9 下 游相关通路, 从诱导鼻咽癌细胞凋亡 抑制鼻咽 癌细胞增殖 降低鼻咽癌细胞的侵袭迁移能力等 方面发挥抑癌作用 靶向 mir-26/cdk9 通路可能 是治疗鼻咽癌的新途径 笔者团队未来将继续寻 找 mir-26 的靶基因及其下游分子机制 参考文献 1. Long M, Fu Z, Li P, et al. Cigarette smoking and the risk of nasopharyngeal carcinoma: a meta-analysis of epidemiological studies[ J]. MJ Open, 217, 7(1): e Kamran SC, Riaz N, Lee N. Nasopharyngeal carcinoma[ J]. Surg Oncol Clin N m, 215, 24(3): artel DP. Metazoan microrns[ J]. Cell, 218, 173(1): kçakaya P, Ekelund S, Kolosenko I, et al. mir-185 and mir-133b deregulation is associated with overall survival and metastasis in colorectal cancer[ J]. Int J Oncol, 211, 39(2): 赵建, 刘建亮. mir-26 及 cl-2 蛋白在非小细胞肺癌中的表达及意义 [ J]. 解剖科学进展, 214, 2(6): ZHO Jian, LIU Jianliang. Expression and significance of mir-26 and cl-2 in non-small cell lung cancer[ J]. Progress of natomical Sciences, 214, 2(6): Di Pietro L, aranzini M, erardinelli MG, et al. Potential therapeutic targets for LS: mir26, mir28b and mir499 are modulated during disease progression in the skeletal muscle of patients[ J]. Sci Rep, 217, 7(1): 姜磊, 谢冰, 张睿, 等. 血清 mir-26 和 mir-132 联合检测在轻度认知障碍诊断中的价值 [ J]. 中华检验医学杂志, 216, 39(7): JING Lei, XIE ing, ZHNG Rui, et al. Combined detection of serum mir-26 and mir-132 in the diagnosis of mild cognitive impairment[ J]. Chinese Journal of Laboratory Medicine, 216, 39(7): 葛新, 曹章, 吕鹏威, 等. mir-26 抑制 SDF-1/CXCR4 信号活化诱导的乳腺癌细胞迁移和增殖 [ J]. 肿瘤基础与临床, 216, 29(4): GE Xin, CO Zhang, LÜ Pengwei, et al. MiR-26 suppresses breast cancer cell migration and proliferation induced by SDF-1/CXCR4 signaling[ J]. Journal of asic and Clinical Oncology, 216, 29(4): 陈晓燕, 王教, 王瓯晨. microrn-26 对人横纹肌肉瘤细胞增殖的影响 [ J]. 实用肿瘤杂志, 29, 24(6): CHEN Xiaoyan, WNG Jiao, WNG Ouchen. Effect of microrn-26 on proliferation of human rhabdomyosarcoma cells[ J]. Journal of Practical Oncology, 29, 24(6): 黄和, 孙维建, 李丕宏, 等. 微小 RN-26 抑制胃癌细胞增殖的机制研究 [ J]. 中华普通外科杂志, 213, 28(8): HUNG He, SUN Weijian, LI Pihong, et al. Study on the mechanism of microrn-26 on inhibition of proliferation in gastric cancer cells[ J]. Chinese Journal of General Surgery, 213, 28(8): Paparidis NF, Durvale MC, Canduri F. The emerging picture of CDK9/ P-TEFb: more than 2 years of advances since PITLRE[ J]. Mol iosyst, 217, 13(2): Gilmour J, ssi S, Noailles L, et al. The co-operation of RUNX1 with LD1, CDK9 and RD4 drives transcription factor complex relocation during haematopoietic specification[ J]. Sci Rep, 218, 8(1): 141.

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戊 酸 雌 二 醇 片 联 合 宫 颈 注 射 利 多 卡 因 用 于 绝 经 后 妇 女 取 环 的 临 床 效 果 评 价 陆 琴 芬, 等 371 Keywords groups, no removal difficulties and failure, was statistically s 370 临 床 与 病 理 杂 志 J Clin Pathol Res 2015, 35(3) http://www.lcbl.net doi: 10.3978/j.issn.2095-6959.2015.03.009 View this article at: http://dx.doi.org/10.3978/j.issn.2095-6959.2015.03.009 戊 酸 雌 二 醇 片 联

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