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1 彰女學報第四期 (219) 民國 18 年 7 月出版 1 黃芩萃取物及其組成分抑制痤瘡丙酸桿菌誘導之發炎反應 謝鳴綺 摘要 痤瘡桿菌是痤瘡等發炎疾病的重要因子, 會刺激單核球等細胞分泌大量促發炎細胞激素 IL-1β IL-8, 造成發炎反應 黃芩是一種傳統中草藥, 在中醫合併其他藥物用來治療痤瘡, 其主要活性成分有 Biclin biclein wogonin 和 oroxylin A, 具有抗發炎 抑制腫瘤生成等效果 本研究以痤瘡桿菌刺激人類單核球細胞 (THP-1) 為發炎模式, 先測試黃芩正丁醇 乙酸乙酯 (EtOAc) 粗萃物的抗發炎效果, 發現黃芩 EtOAc 粗萃物及其所含有的七種黃酮類化合物 oroxylin A wogonin 7-O-methylwogonin skullcpflvone II 5,7, 4'-trihydroxy-8-methoxyflvone 5,6,2'-trihydroxy-7, 8-dimethoxyflvone 和 gnhungenin, 均可顯著抑制 IL-1β 和 IL-8 分泌 其中 wogonin 效果最佳, 抑制 IL-1β 和 IL-8 分泌之 IC 5 分別為 4.9μM 8.7μM, 其次為 5,7,4'-trihydroxy-8-methoxyflvone 抑制 IL-1β 和 IL-8 分泌之 IC 5 為 11.3μM 和 1.2μM 之後以小鼠耳朵注射痤瘡桿菌模式, 檢測耳朵厚度和組織均質液 IL-1β IL-6 和 TNF-α 濃度, 發現七個化合物皆可抑制耳朵發炎和腫脹現象且抑制三種細胞激素的分泌 綜合而論, 黃芩萃取物和其活性成分能有效抑制痤瘡桿菌引起的發炎反應, 具改善痤瘡潛力 關鍵詞 : 痤瘡 黃芩 抗發炎 介白素 -1β 介白素 -8

2 2 彰女學報第四期 黃芩萃取物及其組成分抑制痤瘡丙酸桿菌誘導之發炎反應 謝鳴綺 一 緒論 ( 一 ) 研究動機超過 8% 的人在青春期或成年早期都曾患有痤瘡, 大多數會痊癒, 少數會留下疤痕或是色素沉澱 痤瘡桿菌的大量增生 角質細胞異常 皮脂大量分泌和發炎反應為其成因 黃芩是目前被中醫使用治療痤瘡的傳統中草藥 研究發現其有抗菌 抗發炎等功效, 目前已發現幾個黃芩中主要的活性成分,biclein biclin 和 wogonin (Li et l., 21) 這些化合物被發現有抗發炎 抗氧化 抗腫瘤等功效, 研究發現 biclein 可抑制 cispltin 誘導腎損傷的 MAPKs 和 NF-κB 的作用 (Shu et l., 215); 在一用 LPS 刺激微膠細胞研究中發現,wogonin 可以抑制細胞激素 TNF-α IL-1 和促發炎的轉譯因子 NFκ-B(Pio et l., 24) 故本研究希望能探討黃芩萃取物和其中分離之黃酮類化合物抗 P. cnes 誘導之發炎的效果 ( 二 ) 研究目的本篇研究使用黃芩正丁醇和乙酸乙酯 (EtOAc) 粗萃物及從 EtOAc 粗萃物中分離的七個黃酮類化合物 oroxylin A wogonin 7-O-methylwogonin skullcpflvone II 5,7, 4'-trihydroxy-8-methoxyflvone 5,6,2'-trihydroxy- 7,8-dimethoxyflvone 和 gnhungenin, 並以抑制 het-killed P. cnes 誘導人類單核球細胞細胞化學趨化激素 IL-1β 和 IL-8 生成為指標, 篩選出能夠減少 IL-1β 和 IL-8 生成之黃酮類化合物, 再以 P. cnes 誘導之動物模式探討其抗發炎效果, 期盼能找出七個黃酮類化合物中最有效的成分

3 黃芩萃取物及其組成分抑制痤瘡丙酸桿菌誘導之發炎反應 3 二 材料與方法 ( 一 ) 研究材料 1. 黃芩黃芩, 為脣形科黃芩 (Scutellri biclensis Georgi) 的乾燥根, 性寒味苦, 具有清熱瀉火 解毒止血和安胎的功效, 產地為中國河北 陝西 內蒙古 日本 韓國和俄羅斯 黃芩中包含超過 3 種的黃酮類化合物 其藥理活性包括抗發炎 抗氧化 抗菌 抗腫瘤 抗病毒等 (Buer & Xio, 211) 黃芩被中醫用來治療痤瘡, 以口服或外敷方式合併黃連 黃柏等中藥一起使用 黃芩具有抗菌的能力, 研究發現可抑制多種念珠菌屬 (cndid species) 的生長 (Senevirtne et l., 28) 國內也有人發現黃芩可以抑制 P. cnes 的生長 ( 鄭景峯, 25) 黃芩萃取物也可抗發炎,Yoon 等人發現黃芩水萃物可抑制以 LPS 誘導 Rw264.7 細胞生成的促發炎 NO IL-6 IL-1 IL-12(Yoon et l., 29) 黃芩主要活性成分為 :Biclin Biclein Wogonin Oroxylin A Scutellrin, 詳細介紹如表 1-1( 備註 :Wogonin 和 Oroxylin A 為實驗樣品, 在表 1-2 介紹 ) 本實驗使用黃芩 Butnol 和 EtOAc 粗萃物和從 EtOAc 粗萃物分離的黃酮化合物 oroxylin A wogonin 7-O-methylwogonin Skullcpflvone II 5,7, 4'-trihydroxy-8-methoxyflvone 5,6,2'-trihydroxy-7,8-dimethoxyflvone 和 Gnhungenin ( 以 FL1-FL7 代稱 ), 其結構 抗發炎文獻資料如表 1-2

4 4 彰女學報第四期 表 1-1 黃芩主主要活性成分分介紹 表 1-2 黃芩 EtOAc 粗萃萃物分離之 FL1~FL7 介紹

5 黃芩萃取取物及其組成分分抑制痤瘡丙丙酸桿菌誘導導之發炎反應 5 備註 :(-)) 為無相關資資料,FL5- FL7 研究究發現有抗抗病毒 抗氧化等作用用 2. 痤瘡桿菌痤瘡瘡桿菌 (P. cnes) 是一一種親脂性的的兼性厭氧氧格蘭氏陽陽性菌, 存在在於皮膚的毛囊管 口腔 腸胃胃道和生殖殖器管道中, 對於痤痤瘡的形成扮演重要角角色 除了上述,P. cnes 也是是攝護腺 人工關節 手術植入入物 椎間盤和眼部等等處發炎的主要微生生物 (Yu et l., 215) P. cnes 生存在毛囊囊和皮脂腺中, 代謝皮皮脂產生游離脂肪酸, 皮膚上的 P. cnes 會生成短鏈脂肪酸進而抑制 S. ureus 和 Streptococcus pyogenes 等病原原菌的入侵 (Tomid et l., 213) ), 另外其可可生成丙酸並分泌細細菌素, 像是是硫肽, 這些物質可抑抑制 S. ureus 和其他治病菌的生生長 (Brown et l., 29; Shu et l., 213) 研究究發現在痤瘡瘡病人臉部部無感染的的皮膚區域域給予 P. cnes, 會造成成發炎和膿包的形成, 而將 P. cnes 注射射到角質核細細胞中, 會造成其破破裂和發炎反反應的發生, 這些證證據顯示 P. cnes 為痤痤瘡的關鍵鍵致病因子 (Tnghetti, 213) P. cnes 會釋放游離脂脂肪酸, 並刺刺激 IGF-1 和 IL-1α 等生成, 使粉刺生成成 3. 單核球細細胞單核核球 (monocyte) 是巨噬噬細胞的前驅物, 參與與在皮膚發發炎中, 其受受到刺激會進入皮膚膚中並分化為為巨噬細胞, 是一種種抗原呈現現細胞 巨噬細胞在發發炎初期, 會被活化化並有消滅病病原體的能能力, 研究究發現其會會誘導超過 4 種基因因, 以消滅細菌和分分泌相關細胞胞激素或趨趨化素來調調節相關細細胞功能 (Vlledor et l., 21)

6 6 彰女學報第四期 大量的 P. cnes 聚集生長造成單核球細胞分泌促發炎細胞激素 IL-1β IL-8 和 TNF-α(Vowels et l., 1995), 藉由調控 TLRs(toll-like receptors) 來影響這些細胞激素的生成 (Jugeu et l., 25),TLRs 參與在宿主對抗細菌 寄生蟲 真菌等外來微生物抗原的先天性免疫反應中 (Kim et l., 22; Nete et l., 24), 可活化巨噬細胞和使其凋亡而引起發炎反應 (Into et l., 24; Lopez et l., 23) 在人類單核球細胞 (THP-1) 中,TLR2 藉由 MyD88 Fs 相關蛋白和 cspse-8 誘導 NF-κB 的活化和自體凋亡 (Aliprntis et l., 1999) ( 二 ) 實驗方法 1. 樣品製備乾燥黃芩 1.7 公斤, 在室溫下以乙醇萃取兩次, 每次五天, 萃取物經減壓濃縮後剩下殘留物為 52.4 公克, 再經正丁醇和乙酸乙酯進行分配萃取, 得到兩種 Butnol 和 EtOAc 粗萃物 再將 EtOAc 粗萃物以管柱層析法分離, 並經 HPLC 更進一步的純化, 分離出七個化合物 FL1-FL7 2. 細胞培養 人類單核球細胞 (Humn cute monocytic leukemi, THP-1) 以 RPMI 164 培養細胞, 含 2 μm L-glutmin 1% fetl bovine serum.5 mm 2-mercptoethnol 以及 1% 的抗生素, 置於 37 o C,5% CO 2 的細胞培養箱中培養, 約兩到三天更換一次培養液 3. 痤瘡桿菌 (1) 培養方式本實驗所使用之痤瘡桿菌 (Propionibcterium cnes, P. cnes) (BCRC1723), 是由人類臉部痤瘡患部所分離出來之菌株 以 Brin hert infusion (BHI) broth, 含 1% Glucose, 置於 37 o C 的厭氧缸培養 (2) 處理方式 live P. cnes 以不含抗生素之 RPMI 配製成 4 mg/ml 的 stock solution, 而 het-killed P. cnes 則將 P. cnes 置於 1 水浴加熱 3 分鐘, 使其死亡, 實驗用不含抗生素之 RPMI 配製成 4 mg/ml 的 stock solution, 再用超音波震盪機震盪 3 分鐘 4. 細胞存活率測定 -MTT ssy 將 THP-1 cells (2 1 6 cells/ml) 種於 96-well plte 中, 每 well 含有 1 μl 的細胞液, 實驗組分別加入 1 μl 不同濃度的實驗樣品溶液, 控制組則加入 1

7 黃芩萃取物及其組成分抑制痤瘡丙酸桿菌誘導之發炎反應 7 μl 的細胞培養液, 置於 37 o C,5% CO 2 的細胞培養箱中培養 24 小時 24 小時後, 每 well 加入 5 μl 的 MTT 溶液於細胞培養箱中反應 2 小時 移去上清液後, 每 well 加入含.4 N HCl 的 Isopropnol 將紫色結晶溶出, 利用 ELISA reder 讀取 55nm 之吸光值 實驗組與控制組之吸光值經計算後, 可求得細胞存活率, 公式如下 : 細胞存活率 (%)= 實驗組之吸光值 / 控制組之吸光值 1% 5. in vitro 抑制 IL-1β IL-8 生成之活性評估 -ELISA ssy 本實驗使用 het-killed P.cnes 刺激 THP-1 cells, 使 THP-1 cells 產生促發炎的細胞激素 IL-1β 和 IL-8 主要由單核球 巨噬細胞等免疫細胞分泌, 是一種促發炎細胞激素, 具有化學趨化作用, 能吸引嗜中性球至患部吞噬外來病原, 造成患部細胞浸潤及發炎反應, 本研究使用 IL-1β 和 IL-8 作為指標, 評估黃芩 Butnol EtOAc 粗萃物及 FL1-FL7 化合物的抗發炎活性, 並運用具有抗發炎作用的藥劑 :luteolin 作為本實驗的正對照組 (1) 不同處理方式 P. cnes 誘導 THP-1 細胞產生 IL-8 蛋白質的關係將 THP-1 cells 以 cells/ml 的密度種於 96-well plte 中, 每 well 含有 1 μl 的細胞液, 之後加入 1 μl 含有 P. cnes + 含抗生素培養液 P. cnes + 不含抗生素培養液 het killed P. cnes + 不含抗生素培養液, 置於 37 o C,5% CO 2 的細胞培養箱中共培養 24 小時後收集上清液, 之後使用市售套組分析 IL-8 的含量 (2) Het-killed P. cnes 誘導 THP-1 細胞產生 IL-1β IL-8 蛋白質將 THP-1 cells 以 cells/ml 的密度種於 96-well plte 中, 每 well 含有 1 μl 的細胞液, 之後加入 1 μl 含有 het-killed P. cnes [2 μg/ml, M.O.I.=75, 換算方式如下 ] 的 Butnol EtOAc 粗萃物 FL1-FL7 luteolin 溶液, 控制組加入 1 μl 不含 P. cnes 的 PRMI 培養液, 置於 37 o C,5% CO 2 的細胞培養箱中共培養 24 小時後收集上清液, 之後使用市售套組分析 IL-1β IL-8 的含量 M.O.I.(Multiplicity of Infection) 病毒感染倍數, 指環境中一顆細胞受到多少顆病菌感染 ( 細菌數量 / 細胞數量 ): 實驗使用 P. cnes 2μg/mL 以培養液稀釋法 (Broth Dilution Method), 得到菌液濃度為 CFU/mL, 而 THP-1 cells 密度為 cells/ml, 換算後 M.O.I. 為 75 (3) IC 5 的計算以 P. cnes 刺激組 (FoL1) 的抑制百分率為 %, 求各濃度抑制百分率 (%) 為多少

8 8 彰女學報第四期 抑制百分率 (%) = [ 1 ( Psmple- Pblk)/( PFoL1 - Pblk)] x 1% P FoL1 : 給予 2μg/mL Het killed P. Acnes(M.O.I.=75) 刺激下,THP-1 細胞 cytokines 生成量 Pblk: 在無任何刺激下,THP-1 細胞 cytokines 生成量 P smple :P. cnes 與各濃度樣品存在下,THP-1 細胞 cytokines 生成量將各濃度樣品之抑制百分率與其濃度作圖 ( 用 sigmplot12. 軟體的 stndrd curve 作圖 ), 並以內插法求抑制百分率為 5% 時的樣品濃度, 即為 IC 5 6. in vivo 抗發炎活性評估參考 Nktsuji 等人 (29) 於文獻中建立的動物實驗模式, 將 P. cnes 活菌注射在 ICR 小鼠耳朵皮下組織中引起發炎反應, 實驗組則注射含有 P. cnes 與 FL1-FL7, 評估 FL1-FL7 的 in vivo 抗發炎效果 (1) 實驗動物本實驗使用的動物為 6 周大的 ICR 公鼠, 給予市售 chow diet 及飲水, 自由進食適應 3 天後分組進行實驗 (2) 菌液配製根據預實驗測定 6 nm 吸光值下菌液的相對活菌數, 以無菌的 1X PBS 將活化的 P. cnes 調整濃度至 CFU/mL 吸光值與菌液濃度對照 : 72 小時活化 OD 6nm CFU/mL BCRC 約 (3) 樣品配製 FL1-FL7 於細胞實驗中能抑制 IL-1β 和 IL-8 生成, 因此進一步探討 FL1-FL7 之 in vivo 抗發炎效果 FL1-FL7 stock solution 以 DMSO 回溶樣品成 4μg/mL, 再以無菌之 1X PBS 稀釋至實驗濃度 :2 μg per 1 μl (4) 注射方式將小鼠以乙醚麻醉之後使用.3 ml 的胰島素針抽取實驗樣品與菌液後進行注射, 注射時以棉花棒撐起小鼠耳朵, 以大約 2~3 度的角度入針, 入針後緩緩將 1 μl 菌液與樣品注入耳朵皮下組織, 如有水泡隆起即代表注射成功

9 黃芩萃取取物及其組成分分抑制痤瘡丙丙酸桿菌誘導導之發炎反應 9 先進進行刺激時間點測試, 每組各 3 隻小鼠, 注射菌液後 小時候犧牲採樣樣 確認刺激激時間後, 每組各 6 隻小鼠, 注射菌液和 7 種樣品品 (5) 動物犧犧牲與組織織採樣樣品品及菌液注射射後依不同同實驗分組組時間點以以乙醚犧牲小鼠 犧牲牲後剪下小鼠耳朵並並使用微測徑徑器測量耳耳朵厚度, 並計算抑抑制率 (% inhibition) 耳朵朵厚度增加百百分比 = 實驗組之耳耳朵厚度 / 控制組之耳耳朵厚度 1% (6) P. cnes 誘導小鼠鼠耳朵產生 IL-1β IL-6 和 TNF-α 蛋白質將測測完厚度的小小鼠耳朵冰冰存 -8,, 隔天取出出剪小塊, 放入研磨管管中, 並加入 lysis buffer 7μL, 以電動動研磨器研研磨約 3 秒 ~1 分鐘, 接著以 4 1g 離心 1 分鐘, 取出出組織均質液液到 1.5mLL 微量離心心管中, 再以 4 14rpm 離心 1 分鐘, 得到上清液, 再以市售 ELISA kit 分析析鼠耳組織織所產生的 IL-1β IL-6 和 TNF-αα 蛋白質濃濃度 7. 統計分析每次次實驗都至少少進行三次次獨立試驗, 各實驗驗結果數值以 men ± SD (n = 3) 表示, 並以 SPSS (Sttisticl Product ndd Service Solutions) 121 版統計軟軟體進行實驗數據的的統計分析, 實驗結果果之數據以單單因子變異異數分析 (one wy ANOVA) 檢定組間差異異之顯著性, 再以 LSD (Lest Significnt Difference) 法進行事事後比較, 檢定各實實驗組別與 vehicle group (het-killed P. cnes lone) 間是否具有有顯著差異 (p <.5,, p <.1, p <. 1) 檢定定各實驗組組別彼此之間是否具有有顯著差異時, 使用 Duncn 檢定法進行行事後比較, 各組別間間標示不同同的小寫英文文字母, 則代表該組組別之間具有有統計上的的顯著差異 (p <.5) 三 結果 ( 一 )in vitro 抗發炎作用 1. 細胞存活活率測定 ( MTT) 實驗驗樣品的實驗驗濃度選定, 以不影影響細胞存存活率為原則, 避免影影響細胞生長進而造造成細胞數目目不同而成成為實驗的的干擾因素素

10 1 彰女學報第四期 (1) 黃芩 Butnol 和 EtOAc 粗萃物黃芩 Butnol 粗萃物在 25μg/mL 濃度會對 THP-1 cell 產生毒性而排除該濃度 實驗結果以 μg/mL 作為後續實驗使用的濃度 而 EA 粗萃物在 2μg/mL 濃度會對 THP-1 cell 產生毒性而排除該濃度選用 μg/mL 作為後續實驗使用的濃度 12 1 Cell vibility (% control) control EtOAc extrct (μg/ml) 圖 1-1 以 MTT 方法測試不同濃度之黃芩 EtOAc 粗萃物處理 THP-1 cell 之細胞存活率 (2) 黃芩 EtOAc 粗萃物分離之黃酮類化合物 FL1-FL7 實驗結果如表 1-3,FL1 FL2 FL4 和 FL5 以 5, 1, 15μM 作為後續實驗使用的濃度 FL3 以 3, 6, 12μM 作為後續使用的濃度 FL6 以 15, 3, 6μM 作為後續使用的濃度 FL7 以 6, 9, 12μM 作為後續使用的濃度 2. 抑制 IL-1β IL-8 生成之活性評估 (ELISA ssy) (1) 不同處理方式 P. cnes 誘導 THP-1 細胞產生 IL-8 蛋白質的關係 P. cnes 以活菌或經熱殺皆能達到誘發皮膚發炎狀態 (Lyte et l., 29), 我們以不同方式處理 P. cnes, 以含抗生素的培養液 活菌和熱殺處理 (P. cnes =2μg/mL), 發現三者皆達到誘導 THP-1 細胞生成 IL-8 的效果 ( 圖 1-3) 從文獻得知, 樣品具有抑菌效果, 由於我們想探討的是樣品抗發炎效果, 因此選用 het-killed P. cnes 作為後續研究的刺激物 (2) 黃芩 Butnol 和 EtOAc 粗萃物以不同濃度黃芩 Butnol 和 EtOAc 粗萃物和 het-killed P. cnes(m.o.i. =75) 與 THP-1 cell 共同培養 24 小時, 收取上清液, 以 ELISA 方法分析促發炎激素 IL-1β 和 IL-8, 發現在 Butnol 粗萃物 5 15 和 2μg/mL( 圖 1-4) 和 EtOAc 粗

11 黃芩萃取物物及其組成分分抑制痤瘡丙丙酸桿菌誘導之之發炎反應 11 萃物 5 和 1μg/mL( 圖 1-5) 有顯著抑制效效果,Butnol 和 EtOAc 粗萃萃物的 IL-1β 和 IL-8 的 IC 5 如圖 1-1 圖 1-11 (3) 黃芩 EtOAc 粗萃萃物分離之之黃酮類化合合物 FL1-FL7 將不不同濃度黃芩 EtOAc 粗萃物分離離之黃酮類類化合物 FL1-FL7 和 het-killed P. cnes (M.O.I. =75) 與 THP-1 cell 共同培培養 24 小時, 收取上清清液, 以 ELISA 方法分析促發發炎激素 IL-1β 和 IL-8, 發現每每個化合物都有顯著抑抑制效果 ( 如如表 1-3),, 而 FL1-FL7 的 IL-1β 和 IL-8 的 IC 5 ( 因未達 5% 抑制率,FL1 和 FL6 沒有計算 IL-1β 的 IC 5,FL44 沒有計算 IL-8 的 ICC 5 ) 圖 1-3 P. cnes(2μg/ml) 以不同處處理方式誘誘導 THP-11 細胞生成成 IL IL-1β concentrtion (pg/ml) c b IL-8 concentrtion (ng/ml) c b control DMSO Butnol extrctt (μg/ml) Luteolin (μm) control DMSO Butnol extrct (μg/ml) 1 Luteolin (μm) Het-killed P. cnes (M.O.I.=75) Het-killed P. cnes (M.O.I.=75) 圖 1-4 黃芩 Butnol 粗萃物抑抑制 het-killed P.cnes 誘導 THP-1 細胞之之 IL-1β IL-8 cytokines 生成

12 12 彰女學報第四期 12 1 IL-1β concentrtion (pg/ml) b b IL-8 concentrtion (ng/ml) c b control DMSO control DMSO EtOAc extrct (μg/ml) Luteolin (μm) EtOAc extrct (μg/ml) Luteolin (μm) Het-killed P. cnes (M.O.I.=75) Het-killed P. cnes (M.O.I.=75) 圖 1-6 黃芩 EtOAc 粗萃物抑制 het-killed P.cnes 誘導 THP-1 細胞之 IL-1β IL-8 cytokines 生成 12 (A) Butnol extrct IC5=8.5μM 1 (B) EtOAc extrct IC5=6.6μM 1 8 % of inhibition % of inhibition μm μm 圖 1-7 黃芩 Butnol 和 EtOAc 粗萃物抑制 het-killed P.cnes 誘導 THP-1 細胞之 IL-1β cytokines 生成效果 (% 抑制率和 IC 5 )

13 黃芩萃取物及其組成分抑制痤瘡丙酸桿菌誘導之發炎反應 (A) Butnol extrct IC5=135.5μM 6 (B) EtOAc extrct IC5=5.6μM 1 5 % of inhibition % of inhibition μm μm 圖 1-8 黃芩 Butnol 和 EtOAc 粗萃物抑制 het-killed P.cnes 誘導 THP-1 細胞之 IL-8 cytokines 生成效果 (% 抑制率和 IC 5 ) 表 1-3 FL1-FL7 以 MTT 方法測試細胞存活率和抑制 het-killed P.cnes 誘導 THP-1 細胞之 IL-1β IL-8 cytokines 生成情形 IC 5 樣品 濃度 細胞存活率 IL-8 濃度 IL-8 的 IC 5 IL-1β 濃度 (μm) (% of control) (ng/ml) (μm) (ng/ml) Control ( ) 93.2 ± ±.2.8±.7 IL-1β 的 IC 5 (μm) DMSO (+) 1 ± ± ±.2 FL ± ± ±.2 NA ± ± ± ± ± ± ± 3. ND ND FL ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± 4. ND ND FL ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± 2.4 ND ND FL ± ± 1.9 NA 1.6 ± ± ± ± ± ± ± ± 1.8 ND ND FL ± ± ± ± ± ±.2

14 14 彰女學報第四期 ± ±.6.8 ± ± 2.8 ND ND FL ± ± ±.2 NA ± ± ± ± ± ± ± 3.1 ND ND FL ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± 3.2 ND ND Abbrevites: IC 5 vlue, concentrtion tht provide 5% inhibition; ND, not-determined; NA, not pplicble. ( ), control experiment without P. cnes tretment ws conducted in prllel. (+), cells were co-incubted with DMSO (s vehicle) nd P. cnes (M.O.I. = 75) for 24 h. 3. in vivo 抗發炎活性評估從細胞實驗中觀察到 FL1-FL7 可以抑制 het-killed P. cnes induced THP-1 cell 生成的 IL-1β 和 IL-8, 以 P. cnes 皮下注射鼠耳動物模式來檢視樣品的抗發炎效果 為了確認樣品的安全性和 in vivo 實驗濃度, 先以單純注射 FL1-FL7 至小鼠耳朵, 根據小鼠外觀目測 ( 外觀無紅腫等現象 ) 選擇不造成刺激的劑量, 定 2μg/1μL/er 進行實驗 將 P. cnes 活菌注射在 ICR 小鼠耳朵皮下組織中誘發小鼠耳朵紅腫發炎 先進行預實驗, 以注射 P. cnes 後不同時間點的外觀和促發炎細胞激素變化來決定之後的刺激時間, 實驗 A 注射 P. cnes 小時後犧牲小鼠, 紀錄耳朵組織厚度變化, 發現三個時間點都達到誘發小鼠耳朵腫脹的效果 ( 圖 1-9), 接著取下鼠耳組織均質, 均質液以 ELISA 方法分析促發炎細胞激素 IL-6 和 IL-1β, 發現 IL-1β 在刺激 12 小時後可生成最高的量 ( 圖 1-1), 而 IL-6 則是刺激 6 小時後較高 ( 圖 1-1) 我們選擇以刺激 12 小時作為後續實驗的模式 接下來將 P. cnes 和樣品一起注射, 實驗 B 注射 P. cnes 與 FL1-FL7 於 12 小時後犧牲小鼠, 在厚度方面,FL1-FL7 皆能顯著降低 ICR 小鼠耳朵的厚度, 降低 P. cnes 刺激所造成之腫脹現象 ( 圖 1-11 表 1-4) 之後將鼠耳磨碎均質, 組織均質液以 ELISA 方法分析促發炎細胞激素 IL-6 IL-1β 和 TNF-α, 發現 FL1-FL7 對於 IL-1β IL-6 和 TNF-α 皆有抑制的效果 ( 圖 1-12 圖 1-13 和圖 1-14),

15 黃芩萃取物及其組成分抑制痤瘡丙酸桿菌誘導之發炎反應 15 FL1 -FL7 皆可顯著抑制 IL-6 和 TNF-α 的生成, 而 FL3 -FL7 可顯著抑制 IL-1β 的生成 25 2 Er thickness (% of PBS injected-er) control 6h 12h 24h with P. cnes injected 圖 1-9 不同時間點 小時以 P. cnes 誘發 ICR 小鼠耳朵腫脹發炎之影響 IL-1β concentrtion (pg/ml) # # c # b control P. cnes IL-6 concentrtion (pg/ml) # c # b control P. cnes 6h 12h 24h 6h 12h 24h 圖 1-1 不同時間點 PBS 和 P. cnes 注射小鼠耳朵後組織均質液的 IL-1β IL-6 cytokines 生成情形

16 16 彰女學報第四期 25 Er thickness (% of PBS injected-er) control DMSO FL1 FL2 FL3 FL4 FL5 FL6 FL7 (2μg) with P. cnes injected 圖 1-11 FL1-FL7 對 P. cnes 誘發 ICR 小鼠耳朵腫脹發炎之影響 表 1-4 FL1-FL7 抑制 P. cnes 誘發 ICR 小鼠耳朵腫脹發炎之效果 (% 抑制率 ) 抑制率 (%) P. cnes with P. cnes injected FL1 FL2 FL3 FL4 FL5 FL6 FL7 c 33.9 ± ±. 6.4, b 27.8 ± 37.9 ± 36.3 ± 38.3 ± 3.7 ± 27. ± 7.7 b 5.8, b 17.6, b , b 8.6 b 1 IL-1β concentrtion (pg/ml) controldmso FL1 FL2 FL3 FL4 FL5 FL6 FL7 (2μg/1μL) with P. cnes injected 圖 1-12 FL1-FL7 對於 P. cnes 注射 12 小時後小鼠耳朵組織均質液的 IL-1β cytokines 生成情形

17 黃芩萃取物及其組成分抑制痤瘡丙酸桿菌誘導之發炎反應 IL-6 concentrtion (pg/ml) controldmso FL1 FL2 FL3 FL4 FL5 FL6 FL7 (2μg/1μL) with P. cnes injected 圖 1-13 FL1-FL7 對於 P. cnes 注射 12 小時後小鼠耳朵組織均質液的 IL-6 cytokines 生成情形 1 TNF-α concentrtion (pg/ml) , b b controldmso FL1 FL2 FL3 FL4 FL5 FL6 FL7 (2μg/1μL) with P. cnes injected 圖 1-14 FL1-FL7 對於 P. cnes 注射 12 小時後小鼠耳朵組織均質液的 TNF-α cytokines 生成情形

18 18 彰女學報第四期 四 討論 ( 一 ) 黃芩粗萃物 in vitro 抗發炎活性評估 P. cnes 分泌的 peptidoglycn 可以誘導單核球細胞 (THP-1 cell) 促發炎 IL-1β 和 IL-8 等細胞激素或化學趨化物的生成造成痤瘡等皮膚疾病的發炎反應 (W. R. Lee et l., 214) 本實驗使用 het-killed P. cnes 刺激 THP-1 細胞, 發現黃芩 Butnol EtOAc 粗萃物皆能顯著抑制 IL-1β 和 IL-8 的分泌量 以 IC 5 比較兩者的抑制效果, 黃芩 EtOAc 粗萃物在 IL-1β 和 IL-8 皆較佳, 而根據 Chen 等人研究顯示黃芩 EtOAc 粗萃物含有較多的黃酮類化合物 ( 黃芩 Butnol 粗萃物分離的活性物質為 biclin 和 scutellrein, 而 EtOAc 粗萃物可分離出 biclin biclein wogonin oroxylin-a scutellrein 和 5,7,2 -trihydroxy-6-methoxyflvone), (H. J. Chen et l., 213), 顯示可能因其中含較多的活性成分, 而抑制發炎效果較佳 在上述這些活性物質中,biclin 和 biclein 已被廣泛研究和應用在抗發炎方面, 多篇研究顯示 biclin 有很好的抗發炎效果 (Dong et l., 215; Lixun et l., 21; Min et l., 215), 其可藉由和化學趨化物 IL-8 MCP 等結合, 而抑制發炎作用 (Bo Qun Li, 2) Biclein 則可抑制 NF-κB 和 MAPK pthwy 來抑制發炎作用 (He et l., 215; W. Wng et l., 215) 本實驗雖未探討黃芩粗萃物抑制 het-killed P. cnes 刺激 THP-1 細胞生成 IL-1β 和 IL-8 的機制, 其可能藉由上述方式來作用 ( 二 ) FL1-FL7 的 in vitro 和 in vivo 抗發炎活性評估從 EtOAc 粗萃物分離的七種化合物 FL1-FL7(oroxylin A wogonin 7-O-methylwogonin skullcpflvone II 5,7, 4'-trihydroxy-8-methoxyflvone 5,6,2'-trihydroxy-7,8-dimethoxyflvone 和 gnhungenin), 皆能抑制 het-killed P. cnes 刺激 THP-1 細胞生成的 IL-1β 和 IL-8 FL2(wogonin) 在細胞實驗中有最好的抗發炎效果, 其他研究中也觀察到同樣的情形, 一篇以 LPS 刺激 RAW264.7 小鼠巨噬細胞研究中, 發現 wogonin 可顯著抑制 NO 和 PGE 2 的生成 (Yen-Chou Chen, 21); 另一研究, 以 LPS 誘導 BV-2 老鼠神經細胞,wogonin 可顯著抑制 NO 和 TNF-α IL-1β 的生成 (H. Lee et l., 23) 抑制效果其次為 FL5(5,7, 4'-trihydroxy-8-methoxyflvone), 觀察兩者結構發現,5,7, 4'-trihydroxy-8-methoxyflvone 比 wogonin 在 C4' 上多了一個 OH 基, 可能是其抗發炎效果低於 wogonin 的原因之一 另外 C5 和 C7 上的 OH 基

19 黃芩萃取物及其組成分抑制痤瘡丙酸桿菌誘導之發炎反應 19 被發現為黃酮類化合物抑制 LPS 誘導 NO 生成的重要關鍵, 而 C8 上的 OCH 3 則可增強抑制作用 (Hung et l., 27) ; 另一研究發現當去除 C8 上的 OCH 3 (chrysin), 會顯著降低抗發炎效果, 確認了 C8 上的 OCH 3 對於 wogonin 抗發炎作用的地位 (Phm et l., 212) 這些可能是這兩個化合物能達到最佳抑制效果的原因 FL7(Gnhungenin) 在 C5 C7 和 C8 雖也有同樣結構, 但可能因增加了 C2' 和 C5' 上的 OH 基及 C6' 的 OCH 3, 降低了抗發炎的效果 FL1(oroxylin A) 對 IL-8 抑制也達到很好的效果,IL-1β 抑制率則接近 5%, oroxylin A 的 C6 上有 OCH 3, 可能為其作用點, 研究發現 oroxylin A 可抑制 LPS 刺激 RAW264.7 細胞的 COX2 和 inos 的 mrna 表現量 (Phm et l., 212; Ye et l., 214) FL4(skullcpflvone II) 對 IL-1β 抑制達到有很好的效果, 但 IL-8 抑制率則未達 5%, 就其結構來說, 其 A 環上具有最多的 OCH 3, 可能是影響其抗發炎效果的因素 FL3(7-O-methylwogonin) 和 FL6(5,6,2'-trihydroxy- 7,8-dimethoxyflvone) 在 A 環的結構一樣, 差別於 5,6,2'-trihydroxy- 7,8-dimethoxyflvone 在 B 環多了兩個 OH 基, 單比較兩者抑制 IL-8 的 IC 5, 後者比前者效果好, 可能和其 B 環結構有關 而在一以 LPS 刺激 J774A.1 老鼠巨噬細胞發現,7-O-methylwogonin 可降低 NO PGE 2 IL-1β IL-6 的生成 (Chndrsekrn et l., 211), 顯示其抗發炎效果 FL7(gnhungenin) 在七個化合物中為抗發炎效果最差的, 其 C5' 上有一個 OCH 3, 可能是影響因素 從 in vitro 實驗結果, 顯示七個黃酮類化合物皆具有抗發炎的效用, 因此以 P. cnes 引起小鼠耳朵腫脹與發炎來評估其 in vivo 的抗發炎活性 從實驗 A 發現不同時間點給予注射 P. cnes, 並沒有造成厚度差異, 表示在 6 小時即引起發炎現象且維持至少到 24 小時, 而組織均質液中的促發炎細胞激素 IL-6 則在 6 小時表現最高依時間降低,IL-6 是急性發炎的重要指標, 由於 IL-1β 在 12 小時最高, 為觀察兩者後以刺激 12 小時為後續實驗模式 從實驗 B 發現, 給予七個化合物在外觀方面皆能改善紅腫現象, 而測量耳朵厚度, 也皆能顯著抑制 P. cnes 引起之發炎反應, 七個化合物抑制率沒有差異 接著探討 P. cnes 注射小鼠耳朵引起促發炎細胞激素 IL-1β IL-6 和 TNF-α 的分泌量, 發現七個化合物皆有抑制效果, 並不能看出哪一個黃酮類化合物最有效, 而黃芩粗萃物本身具有抗菌作用, 七個化合物中 oroxylin A wogonin 被發現可抗菌 (Frnzblu & Cross, 1986; Luitel et l., 21), 因此其抑制發炎可能和抗菌作用相關, 另本實驗使用的劑量可能為一影響因子, 若測試數個劑量並計算 IC 5, 或可看出七個化合物的抗發炎效果區別

20 2 彰女學報第四期 ( 三 ) 結論黃芩 Butnol EtOAc 粗萃物和化合物 oroxylin A wogonin 7-Omethylwogonin skullcpflvone II 5,7, 4'-trihydroxy-8-methoxyflvone 5,6,2'-trihydroxy-7,8-dimethoxyflvone 和 gnhungenin 在 P. cnes 誘導 in vitro 和 in vivo 模式中, 皆有顯著抑制抗發炎的效果 以 het-killed P. cnes 誘導 THP-1 細胞生成促發炎激素模式中,wogonin 和 5,6'-dihydroxy-6,7,8,2' tetrmethoxyflvone 具有最佳的抗發炎效果, 而以 P. cnes 引起小鼠耳朵腫脹與發炎模式中, 七個黃酮類化合物區分不出那一個有最佳效果 結果顯示黃芩粗萃物和其中分離之黃酮類化合物皆具良好抗發炎效果, 未來可以進一步了解相關機制, 發展成為改善痤瘡的藥物 五 參考文獻 鄭景峯. (25). 六十種中藥材熱水萃出物對痤瘡病原菌之抑菌性. 大同大學生物工程學系所學位論文 Aliprntis, A. O., Yng, R.-B., Mrk, M. R., Suggett, S., Devux, B., Rdolf, J. D., Zychlinsky, A. (1999). Cell ctivtion nd poptosis by bcteril lipoproteins through toll-like receptor-2. Science, 285(5428), Bo Qun Li, T. F., Wng-Hu Gong, Nncy Dunlop, Hsing-fu Kung, Yodong Yn, Jin Kng, Ji Ming Wng. (2). The flvonoid biclin exhibits nti-inflmmtory ctivity by binding to chemokines. Immunophrmcology, 49, Bo Qun Li, T. F., Wng-Hu Gong, Nncy Dunlop, Hsing-fu Kung, Yodong Yn, Jin Kng, Ji Ming Wng. (2). The flvonoid biclin exhibits nti-inflmmtory ctivity by binding to chemokines. Immunophrmcology, 49, Buer, R., & Xio, P.-G. (211). Rdix Scutellrie Hungqin: Springer. Brown, L. C. W., Acker, M. G., Clrdy, J., Wlsh, C. T., & Fischbch, M. A. (29). Thirteen posttrnsltionl modifictions convert 14-residue peptide into the ntibiotic thiocillin. Proceedings of the Ntionl Acdemy of Sciences, 16(8),

21 黃芩萃取物及其組成分抑制痤瘡丙酸桿菌誘導之發炎反應 21 Chn, B. C., Ip, M., Lu, C. B., Lui, S. L., Jolivlt, C., Gnem-Elbz, C.,... Leung, P. C. (211). Synergistic effects of biclein with ciprofloxcin ginst NorA over-expressed methicillin-resistnt Stphylococcus ureus (MRSA) nd inhibition of MRSA pyruvte kinse. J Ethnophrmcol, 137(1), doi: 1.116/j.jep Chndrsekrn, C. V., Thiygrjn, P., Deepk, H. B., & Agrwl, A. (211). In vitro modultion of LPS/clcimycin induced inflmmtory nd llergic meditors by pure compounds of Androgrphis pnicult (King of bitters) extrct. Int Immunophrmcol, 11(1), doi: 1.116/j.intimp Cho, W. W., Kuo, Y. H., & Lin, B. F. (21). Anti-inflmmtory ctivity of new compounds from Androgrphis pnicult by NF-kppB trnsctivtion inhibition. J Agric Food Chem, 58(4), doi: 1.121/jf93629j Chen, H. J., Ling, T. M., Lee, I. J., Hung, Y. T., & Lin, Y. L. (213). Scutellrie rdix suppresses LPS-induced liver endothelil cell ctivtion nd inhibits heptic stellte cell migrtion. J Ethnophrmcol, 15(3), doi: 1.116/j.jep Chen, Y.-C., Yng, L.-L., & Lee, T. J. (2). Oroxylin A inhibition of lipopolyscchride-induced inos nd COX-2 gene expression vi suppression of nucler fctor-κb ctivtion. Biochemicl Phrmcology, 59(11), Chi, Y. S., Lim, H., Prk, H., & Kim, H. P. (23). Effects of wogonin, plnt flvone from Scutellri rdix, on skin inflmmtion: in vivo regultion of inflmmtion-ssocited gene expression. Biochemicl Phrmcology, 66(7), Cushnie, T. P., Hmilton, V. E., & Lmb, A. J. (23). Assessment of the ntibcteril ctivity of selected flvonoids nd considertion of discrepncies between previous reports. Microbiol Res, 158(4), doi: 1.178/ Dong, S.-j., Zhong, Y.-q., Lu, W.-t., Li, G.-h., Jing, H.-l., & Mo, B. (215). Biclin Inhibits Lipopolyscchride-Induced Inflmmtion Through Signling NF-κB Pthwy in HBE16 Airwy Epithelil Cells. Inflmmtion, 1-9.

22 22 彰女學報第四期 Frnzblu, S. G., & Cross, C. (1986). Comprtive in vitro ntimicrobil ctivity of Chinese medicinl herbs. Journl of ethnophrmcology, 15(3), He, X., Wei, Z., Zhou, E., Chen, L., Kou, J., Wng, J., & Yng, Z. (215). Biclein ttenutes inflmmtory responses by suppressing TLR4 medited NF-κB nd MAPK signling pthwys in LPS-induced mstitis in mice. Interntionl immunophrmcology, 28(1), Hong, H., & Liu, G.-Q. (24). Protection ginst hydrogen peroxide-induced cytotoxicity in PC12 cells by scutellrin. Life sciences, 74(24), Hung, G.-C., Chow, J.-M., Shen, S.-C., Yng, L.-Y., Lin, C.-W., & Chen, Y.-C. (27). Wogonin but not Nor-wogonin inhibits lipopolyscchride nd lipoteichoic cid-induced inos gene expression nd NO production in mcrophges. Interntionl immunophrmcology, 7(8), Into, T., Kiur, K., Ysud, M., Ktok, H., Inoue, N., Hsebe, A.,... Shibt, K.-i. (24). Stimultion of humn Toll-like receptor (TLR) 2 nd TLR6 with membrne lipoproteins ofmycoplsm fermentnsinduces poptotic cell deth fter NF-κB ctivtion. Cellulr Microbiology, 6(2), doi: 1.146/j x Jng, H.-Y., Ahn, K.-S., Prk, M.-J., Kwon, O.-K., Lee, H.-K., & Oh, S.-R. (212). Skullcpflvone II inhibits ovlbumin-induced irwy inflmmtion in mouse model of sthm. Interntionl immunophrmcology, 12(4), Johri, J., Kinmehr, A., Mustf, M. R., Abubkr, S., & Zndi, K. (212). Antivirl ctivity of biclein nd quercetin ginst the Jpnese encephlitis virus. Int J Mol Sci, 13(12), doi: 1.339/ijms Jugeu, S., Tenud, I., Knol, A. C., Jrrousse, V., Quereux, G., Khmmri, A., & Dreno, B. (25). Induction of toll-like receptors by Propionibcterium cnes. Br J Dermtol, 153(6), doi: /j x Kng, K. A., Zhng, R., Pio, M. J., Che, S., Kim, H. S., Prk, J. H.,... Hyun, J. W. (212). Biclein inhibits oxidtive stress-induced cellulr dmge vi ntioxidnt effects. Toxicol Ind Helth, 28(5), doi: / Kim, J., Ocho, M. T., Krutzik, S. R., Tkeuchi, O., Uemtsu, S., Legspi, A. J.,... Modlin, R. L. (22). Activtion of Toll-Like Receptor 2 in Acne Triggers

23 黃芩萃取物及其組成分抑制痤瘡丙酸桿菌誘導之發炎反應 23 Inflmmtory Cytokine Responses. The Journl of Immunology, 169(3), doi: 1.449/jimmunol Li, M.-Y., Chen, C.-C., Hsiu, S.-L., & Cho, P.-D. L. (21). Anlysis nd comprison of biclin, biclein nd wogonin contents in trditionl decoctions nd commercil extrcts of Scutellrie Rdix. Journl of Food nd Drug Anlysis, 9(3). Lee, H., Kim, Y. O., Kim, H., Kim, S. Y., Noh, H. S., Kng, S. S.,... Suk, K. (23). Flvonoid wogonin from medicinl herb is neuroprotective by inhibiting inflmmtory ctivtion of microgli. FASEB J, 17(13), doi: 1.196/fj.3-57fje Lee, W. R., Kim, K. H., An, H. J., Kim, J. Y., Hn, S. M., Lee, K. G., & Prk, K. K. (214). Protective effect of melittin ginst inflmmtion nd poptosis on Propionibcterium cnes-induced humn THP-1 monocytic cell. Eur J Phrmcol, 74, doi: 1.116/j.ejphr Li, H., Fn, H., Wng, Z., Zheng, J., & Co, W. (213). Potentition of scutellrin on humn tongue crcinom xenogrft by low-intensity ultrsound. PLoS One, 8(3), e Li-Weber, M. (29). New therpeutic spects of flvones: the nticncer properties of Scutellri nd its min ctive constituents Wogonin, Biclein nd Biclin. Cncer Tret Rev, 35(1), doi: 1.116/j.ctrv Lixun, Z., Jingcheng, D., Wenqin, Y., Jinhu, H., Bojun, L., & Xioto, F. (21). Biclin ttenutes inflmmtion by inhibiting NF-kppB ctivtion in cigrette smoke induced inflmmtory models. Pulm Phrmcol Ther, 23(5), doi: 1.116/j.pupt Lopez, M., Sly, L. M., Luu, Y., Young, D., Cooper, H., & Reiner, N. E. (23). The 19-kD Mycobcterium tuberculosis Protein Induces Mcrophge Apoptosis Through Toll-Like Receptor-2. The Journl of Immunology, 17(5), doi: 1.449/jimmunol Luitel, H. N., Rjbhndri, M., Kluni, S. K., Awle, S., Msud, K., & Gewli, M. B. (21). Chemicl constituents from Oroxylum indicum (L.) Kurz of Neplese origin. Scientific World, 8(8), Min, W., Ahmd, I., Chng, M. E., Burns, E. M., Qin, Q., & Yusuf, N. (215). Biclin Protects Kertinocytes From Toll Like Receptor 4 Medited DNA

24 24 彰女學報第四期 Dmge nd Inflmmtion Following Ultrviolet Irrdition. Photochemistry nd Photobiology. Nete, M. G., vn der Grf, C., Vn der Meer, J. W., & Kullberg, B. J. (24). Toll-like receptors nd the host defense ginst microbil pthogens: bringing specificity to the innte-immune system. Journl of Leukocyte Biology, 75(5), Phm, T.-A. N., Che, H., Phn, P.-T. T., Lee, J.-W., Kim, S.-S., & Prk, H. (212). Oroxylin A nlogs exhibited strong inhibitory ctivities ginst inos-medited nitric oxide (NO) production. Bioorgnic & medicinl chemistry letters, 22(7), Pio, H. Z., Jin, S. A., Chun, H. S., Lee, J.-C., & Kim, W.-K. (24). Neuroprotective effect of wogonin: potentil roles of inflmmtory cytokines. Archives of phrmcl reserch, 27(9), Shu, B. D., Kumr, J. M., & Sistl, R. (215). Biclein, Bioflvonoid, Prevents Cispltin-Induced Acute Kidney Injury by Up-Regulting Antioxidnt Defenses nd Down-Regulting the MAPKs nd NF-κB Pthwys. PLoS One, 1(7). Senevirtne, C. J., Wong, R. W., & Smrnyke, L. P. (28). Potent nti-microbil ctivity of trditionl Chinese medicine herbs ginst Cndid species. Mycoses, 51(1), doi: /j x Shen, Y.-C., Chiou, W.-F., Chou, Y.-C., & Chen, C.-F. (23). Mechnisms in mediting the nti-inflmmtory effects of biclin nd biclein in humn leukocytes. Europen journl of phrmcology, 465(1-2), doi: 1.116/s (3) Shu, M., Wng, Y., Yu, J., Kuo, S., Cod, A., Jing, Y.,... Hung, C.-M. (213). Fermenttion of Propionibcterium cnes, commensl bcterium in the humn skin microbiome, s skin probiotics ginst methicillin-resistnt Stphylococcus ureus. PLoS One, 8(2), e5538. Su, Y., M, L., Wen, Y., Wng, H., & Zhng, S. (214). Studies of the in vitro ntibcteril ctivities of severl polyphenols ginst clinicl isoltes of methicillin-resistnt Stphylococcus ureus. Molecules, 19(8),

25 黃芩萃取物及其組成分抑制痤瘡丙酸桿菌誘導之發炎反應 25 Sun, N., Yu, T., Zho, J.-X., Sun, Y.-G., Jing, J.-B., Dun, Z.-B.,... Li, H.-Q. (215). Antivirl ctivities of nturl compounds derived from trditionl chinese medicines ginst porcine circovirus type 2 (PCV2). Biotechnology nd Bioprocess Engineering, 2(1), Tnghetti, E. A. (213). The role of inflmmtion in the pthology of cne. The Journl of clinicl nd esthetic dermtology, 6(9), 27. Tomid, S., Nguyen, L., Chiu, B.-H., Liu, J., Sodergren, E., Weinstock, G. M., & Li, H. (213). Pn-genome nd comprtive genome nlyses of propionibcterium cnes revel its genomic diversity in the helthy nd disesed humn skin microbiome. MBio, 4(3), e3-13. Vlledor, A. F., Comld, M., Sntmrí-Bbi, L., Llobers, J., & Celd, A. (21). 1 Mcrophge Proinflmmtory Activtion nd Dectivtion: A Question of Blnce. Advnces in immunology, 18, 1. Vowels, B. R., Yng, S., & Leyden, J. J. (1995). Induction of proinflmmtory cytokines by soluble fctor of Propionibcterium cnes: implictions for chronic inflmmtory cne. Infection nd immunity, 63(8), Wisundr, V. Y., Hsu, A., Tn, B. K., & Hung, D. (29). Biclin improves ntioxidnt sttus of streptozotocin-induced dibetic Wistr rts. J Agric Food Chem, 57(1), doi: 1.121/jf Wng, S., Wng, H., Guo, H., Kng, L., Go, X., & Hu, L. (211). Neuroprotection of Scutellrin is medited by inhibition of microglil inflmmtory ctivtion. Neuroscience, 185, doi: 1.116/j.neuroscience Wng, W., Zhou, P.-h., Xu, C.-g., Zhou, X.-j., Hu, W., & Zhng, J. (215). Biclein ttenutes renl fibrosis by inhibiting inflmmtion vi down-regulting NF-κB nd MAPK signl pthwys. Journl of moleculr histology, 1-8. Ye, M., Wng, Q., Zhng, W., Li, Z., Wng, Y., & Hu, R. (214). Oroxylin A exerts nti-inflmmtory ctivity on lipopolyscchride-induced mouse mcrophge vi Nrf2/ARE ctivtion. Biochemistry nd Cell Biology, 92(5), Yen-Chou Chen, S.-C. S., Lih-Geeng Chen, Tony J-F Lee, Ling-Ling Yng. (21). Wogonin, biclin, nd biclein inhibition of inducible nitric oxide. Biochemicl Phrmcology, 61,

26 26 彰女學報第四期 Yoon, S. B., Lee, Y. J., Prk, S. K., Kim, H. C., Be, H., Kim, H. M.,.. Prk, W. (29). Anti-inflmmtory effects of Scutellri biclensis wter extrct on LPS-ctivted RAW mcrophges. J Ethnophrmcol, 125(2), doi: 1.116/j.jep Yu, Y., Chmper, J., & Kim, J. (215). Anlysis of the Surfce, Secreted, nd Intrcellulr Proteome of Propionibcterium cnes. EuPA Open Proteomics. doi: 1.116/j.euprot