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1 ICS C 61 WS 中华人民共和国卫生行业标准 尿中砷形态测定液相色谱 - 原子荧光法 Determination of urinary arsenic speciation liquid chromatography-atomic fluorescence spectrometry 发布 实施 中华人民共和国国家卫生健康委员会发布

2 前 言 本标准按照 GB/T 给出的规则起草 本标准起草单位 : 北京市疾病预防控制中心 重庆市疾病预防控制中心 广东省疾病预防控制中心 安徽省疾病预防控制中心 北京朝阳医院 山西省疾病预防控制中心 本标准主要起草人 : 刘丽萍 王小艳 张妮娜 张洁 王晶 韦莹 李惠玲 郭舒岗 陈绍占 戴锐睿 I

3 尿中砷形态测定 液相色谱 - 原子荧光法 1 范围本标准规定了测定尿中砷形态 ( 亚砷酸盐 [As(III)] 砷酸盐[As(V)] 一甲基砷(MMA) 和二甲基砷 (DMA)) 的液相色谱 - 原子荧光法 本标准适用于尿中砷形态 ( 亚砷酸盐 [As(III)] 砷酸盐[As(V)] 一甲基砷(MMA) 和二甲基砷 (DMA)) 的测定 2 规范性引用文件下列文件对本文件的应用是必不可少的 凡是注日期的引用文件, 仅注日期的版本适用于本文件 凡是不注日期的引用文件, 其最新版本 ( 包括所有的修改单 ) 适用于本文件 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理尿样按一定比例稀释后, 以液相色谱进行分离, 分离后的目标化合物在酸性介质下与硼氢化钾 (KBH 4 ) 反应, 生成气态砷化合物, 用原子荧光光谱仪进行测定, 保留时间定性, 以峰高或者峰面积绘制标准曲线法定量 4 仪器 4.1 玻璃器皿均需以硝酸溶液 (1+4) 浸泡 24 h, 用水反复冲洗, 最后用纯水冲洗干净 4.2 液相色谱 原子荧光光谱联用仪 4.3 ph 计 ( 精度 0.01) 4.4 电子天平 ( 感量 0.1 mg) 4.5 超声波清洗器 4.6 离心机, 转速 8000 r/min 4.7 纯水制备仪 5 试剂 1

4 5.1 实验用水及试剂要求 : 除非另有说明, 本方法所用试剂均为优级纯, 纯水为 GB/T 6682 规定的一级水 5.2 盐酸 (HCl,ρ=1.19 g/ml) 5.3 氢氧化钾 (KOH) 5.4 硼氢化钾 (KBH 4 ) 5.5 磷酸氢二铵 [(NH 4 ) 2 HPO 4 ] 5.6 甲酸 (HCOOH,99 %) 5.7 标准物质 : 亚砷酸根 (AsO 3-3 ), 砷酸根 (AsO 3-4 ), 一甲基砷 (CH 4 AsO - 3 ), 二甲基砷 (C 2 H 6 AsO - 2 ) 均为有证标准物质 6 试剂配制 6.1 载流, 盐酸溶液 (7+93) 量取 70 ml 盐酸, 用纯水稀释至 1000 ml 6.2 还原剂 (20 g/l 硼氢化钾溶液 -3.5 g/l 氢氧化钾溶液 ) 称取 3.5 g 氢氧化钾溶解于 900 ml 纯水中混匀, 加入 20 g 硼氢化钾, 用纯水稀释至 1000 ml, 混匀 6.3 甲酸溶液 (10+90) 量取 10 ml 甲酸用纯水稀释至 100 ml 6.4 流动相 (15 mmol/l 磷酸氢二铵溶液 ) 称取 1.98 g 的磷酸氢二铵溶解于 1000 ml 纯水中, 用甲酸溶液 (10+90) 调节 ph 至 6.0, 超声脱气 5 min, 备用 6.5 砷形态标准溶液配制 砷形态标准储备溶液 [ρ(as)=10.0 mg/l]: 分别准确称取适量亚砷酸根 砷酸根 一甲基砷 二甲基砷四种砷形态标准物质, 用纯水配制成含砷浓度为 10.0 mg/l 的砷形态单标标准储备溶液, 置于 4 冰箱中保存 砷形态混合标准溶液 [ρ(as)=1.0 mg/l]: 分别准确移取 10.0 mg/l 的四种砷形态单标标准储备溶液 1.00 ml 置于 10 ml 容量瓶中, 用纯水定容至刻度, 现用现配 2

5 6.5.3 砷形态混合标准使用系列溶液 [ρ(as)=0~100.0 µg/l]: 分别准确移取一定量的 1.0 mg/l 砷形态混 合标准溶液, 用纯水逐级稀释成 0.0 µg/l 2.0 µg/l 5.0 µg/l 10.0 µg/l 50.0 µg/l µg/l 四种 砷形态混合标准系列使用溶液, 现用现配 7 样品收集 运输和保存 收集不少于 10 ml 尿液, 置于洁净的聚丙烯塑料或玻璃试管中, 严密封口以防蒸发 现场收集尿 样后, 在 4 下保存运输 ; 样品应该尽快测定, 在 4 下可保存 30 d 8 分析步骤 8.1 试样的前处理取 1mL 均匀的尿样用纯水稀释 3 倍, 用 0.45 µm 水系滤膜过滤后上机测定 如果尿样中有沉淀, 先将尿样离心 10 min(8000 r/min), 取一定量的上清液按以上方法测定 如果样品中砷形态浓度超过标准曲线上限, 则将尿样按一定比例稀释后测定 8.2 液相色谱参考条件 色谱柱条件 : 阴离子交换色谱柱 ( 柱长 250 mm, 内径 4.1 mm), 或等效柱 阴离子交换色谱保护柱 ( 柱长 25 mm, 内径 2.3 mm), 或等效柱 流动相组成 :15 mmol/l 磷酸氢二铵溶液 (ph=6.0) 作为流动相,1.0 ml/min 流速洗脱, 进样体积为 100 µl 8.3 原子荧光检测参考条件原子荧光检测参考条件如下 : 光电倍增管负高压 :280 V; 砷空心阴极灯总电流 :90 ma; 辅阴极灯电流 :40 ma; 原子化方式 : 火焰原子化 ; 原子化器温度 : 中温 ; 氩载气流量 :300 ml/min; 氩屏蔽气流量 :600 ml/min; 还原剂 :20 g/l 硼氢化钾溶液 -3.5 g/l 氢氧化钾溶液 ; 3

6 载流 : 盐酸溶液 (7+93) 8.4 标准曲线的测定分别吸取 100 µl 四种砷形态的混合标准使用系列溶液, 依次注入液相色谱 - 原子荧光光谱联用仪进行分离及检测, 得到色谱图, 以保留时间定性 以标准系列溶液中砷形态的浓度为横坐标, 以色谱峰高或峰面积为纵坐标, 绘制标准曲线 标准溶液色谱图见附录 A 中图 A 试样溶液的测定吸取 100 µl 试样溶液注入液相色谱 原子荧光光谱联用仪进行分析, 得到色谱图, 以保留时间定性 根据标准曲线得到试样溶液中砷形态的含量 试样溶液色谱图见图 A.2 9 分析结果的计算 尿样中砷形态 [As(III) As(V) MMA DMA] 的含量 ( 以砷计 ) 按式 (1) 计算 : X i =(C i - C 0 ) K (1) 式中 : X i 尿样中砷形态的含量 ( 以砷计 ), 单位为微克每升 (µg/l); C i 由标准曲线查得的试样溶液中砷形态的浓度 ( 以砷计 ), 单位为微克每升 (µg/l); C 0 由标准曲线查得的现场空白中砷形态的浓度 ( 以砷计 ), 单位为微克每升 (µg/l); K 尿样稀释倍数 10 方法特性 10.1 检出限本方法中亚砷酸盐 一甲基砷 二甲基砷检出限均为 0.5 µg/l, 定量限为 1.5 µg/l; 砷酸盐检出限为 0.8 µg/l, 定量限为 2.4 µg/l 10.2 精密度 6 个实验室对含砷形态为 6.0 μg/l~400.0 μg/l 的尿样进行 6 次重复测定, 相对标准偏差均小于 5.0% 10.3 准确度采用尿中砷形态成分标准物质及加标回收考察方法准确性,6 个实验室测定的不同浓度的样品加标回收率在 80%~120% 之间 4

7 11 质量保证和质量控制要点 11.1 实验环境 器皿 试剂 采样及运输过程应避免砷污染 11.2 每次样品测定时均应配制和测定标准系列, 标准曲线回归方程的相关系数绝对值应 推荐采用平行样品 冻干人尿中砷形态成分标准物质及加标回收作为质量控制手段 11.4 随样品采集同时进行空白采集 5

8 附录 A ( 资料性附录 ) 砷形态标准溶液及试样溶液色谱图 A.1 砷形态标准溶液色谱图 10 µg/l 亚砷酸 [As(III)], 二甲基砷 (DMA), 一甲基砷 (MMA), 砷酸 [As(V)] 标准溶液色谱 图, 见图 A.1 A.2 试样溶液色谱图 试样溶液色谱图见图 A.2 图 A.1 砷形态标准溶液 (10 µg/l) 色谱图 图 A.2 试样溶液中砷形态色谱图 6

g ml 10% ph 色谱条件 kinetex C μm 100 A 4. 6 mm 150 mm 25 5 μl A B 10 mmol /L ml /min

g ml 10% ph 色谱条件 kinetex C μm 100 A 4. 6 mm 150 mm 25 5 μl A B 10 mmol /L ml /min 25 4 2013 8 监测技术 5 1 2 1 ( 1. 江苏省疾病预防控制中心, 江苏南京 210009; 2. 南京医科大学第二附属医院, 江苏南京 210029) 5 Phenomenex kinetex C 18 2. 6 μm 4. 6 mm 150 mm 10 mmol /L ph 2. 5 + 60 40 DAD 280 nm 5 20. 0 mg /L ~ 100 mg /L 0.

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