第 36 卷第 3 期 2018 年 5 月食品科学技术学报 Journal of Food Science and Technology Vol. 36 No. 3 May 狮栓栓专题研究专栏栓狮狮狮狮狮狮狮狮狮狮狮狮狮狮狮狮狮栓编者按 : 食品安全问题是关系到人类健康

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1 第 36 卷第 3 期 2018 年 5 月食品科学技术学报 Journal of Food Science and Technology Vol. 36 No. 3 May 狮栓栓专题研究专栏栓狮狮狮狮狮狮狮狮狮狮狮狮狮狮狮狮狮栓编者按 : 食品安全问题是关系到人类健康和国计民生的重大问题, 而微生物安全是食品安全中的重中之重沙门氏菌副溶血弧菌蜡状芽孢杆菌金黄色葡萄球菌是导致我国致病微生物性食物中毒的主要病原菌重要食源性致病菌风险识别和防控研究对保障食品安全具有重要意义本期选择了两种重要食源性致病菌金黄色葡萄球菌和沙门氏菌研究的两篇文章, 一篇文章研究了我国市售食用菌中金黄色葡萄球菌的污染情况耐药性及肠毒素分布情况 ; 另一篇文章则以等效生长时间冶理论建立了波动温度下猪肉中沙门氏菌的生长预测模型, 可准确地反映出波动温度下猪肉中沙门氏菌的生长规律希望这些工作能够为同类研究提供参考和借鉴 ( 主持人 : 张菊梅研究员 ) doi: / j. issn 鄄文章编号 :2095 鄄 6002(2018)03 鄄 0025 鄄 08 引用格式 : 黄嘉慧, 吴诗, 张峰, 等. 我国市售食用菌中金黄色葡萄球菌污染调查耐药性及其肠毒素基因检测 [ J]. 食品科学技术学报,2018,36(3): HUANG Jiahui, WU Shi, ZHANG Feng, et al. Prevalence, antibiotic resistance, and enterotoxin gene detection of Staphy 鄄 lococcus aureus isolated from retail edible mushrooms in China[ J]. Journal of Food Science and Technology, 2018,36(3): 我国市售食用菌中金黄色葡萄球菌污染调查耐药性及其肠毒素基因检测黄嘉慧 1, 摇吴摇诗 1, 摇张摇峰 1,2, 摇张菊梅 1 1,*, 摇吴清平 (1. 广东省微生物研究所 / 省部共建华南应用微生物国家重点实验室 / 广东省菌种保藏与应用重点实验室 / 广东省微生物应用新技术公共实验室, 广东广州摇 ; 2. 华南理工大学生物科学与工程学院, 广东广州摇 ) 摘摇要 : 调查了年我国市售食用菌中金黄色葡萄球菌的污染情况, 并对分离到的相关菌株进行了肠毒素基因的检测和耐药性分析收集全国 39 个城市 699 份市售食用菌, 利用定性和定量检测方法, 检出金黄色葡萄球菌阳性样品 33 份, 平均污染率 4 郾 72%, 污染水平 9 郾 75MPN / g 24 种抗生素的药敏结果显示, 分离株耐药情况严重, 对利奈唑胺利福平敏感, 对氨苄西林等 22 种抗生素都产生不同程度的耐药 7 株分离株经表型和分子鉴定确定为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌运用聚合酶链式反应法对分离的 39 株金黄色葡萄球菌进行了 18 种肠毒素基因检测, 约 60% 分离株携带 4 ~ 6 种肠毒素基因, 携带率最高的肠毒素基因是 sei, 其次是 sem seg seq sec seb sen 本研究反映了我国市售食用菌金黄色葡萄球菌污染的潜在风险, 相关分离株具毒性潜力, 且耐药性严重, 应引起重视关键词 : 金黄色葡萄球菌 ; 食用菌 ; 污染水平 ; 肠毒素基因 ; 耐药性中图分类号 : TS201 郾 3; TS201 郾 6; TS255 郾 1 摇摇摇摇摇文献标志码 : A 收稿日期 : 基金项目 : 中国博士后科学基金资助项目 (2017M612623); 广州市科技计划项目 ( , ); 广东省科学院创新驱动发展能力专项 (2017GDASCX 0201,2017GDASCX 0817) 作者简介 : 黄嘉慧, 女, 研究实习员, 主要从事食品微生物安全方面的研究 ; * 吴清平, 男, 中国工程院院士, 研究员, 主要从事食品微生物安全监测和检测方面的研究, 通信作者

2 26 食品科学技术学报摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇 2018 年 5 月摇摇金黄色萄球菌 ( Staphylococcus aureus) ( 简称金葡菌 ) 是引起细菌性食物中毒的重要食源性致病菌之一在美国, 金葡菌每年大约引起例食物中毒 [1] ; 在我国,20% ~ 25% 的细菌性食物中毒病例是由金葡菌引起的 [2] 金葡菌的肠毒素 ( Staphylo 鄄 coccal enterotoxins,ses) 是引发细菌性食物中毒最主要的因素这些肠毒素可耐高温, 不易失活, 人体摄 [3 - 入几微克便可导致食物中毒 4] 伴随着抗生素的大量使用, 细菌耐药性问题日趋严重, 成为全球公共卫生体系面临的一个严峻挑战研究表明, 食品中的耐药菌耐药基因可以通过食物链传播到人, 从而对食品安全和人类健康造成严重危害食用菌是我国主要的农产品, 含有丰富的人体所需的营养物质, 广受人们的青睐, 然而, 在食用菌培植加工贮藏运输销售等过程中, 均可能受到各种微生物的污染 [5] 此前, 国内外并没有食用菌中金葡菌污染情况等相关调查研究为全面了解我国市售食用菌中金葡菌的污染情况, 本研究拟对全国 39 个城市市售食用菌的金葡菌污染情况进行系统调查, 并在此基础上对分离到的金葡菌进行耐药性和肠毒素基因分析, 了解和掌握我国市售食用菌源中金葡菌的遗传特性, 希望为预防和控制我国食用菌中金葡菌的污染研究提供借鉴和参考 1 摇材料与方法 1 郾 1 摇样品采集 2011 年 7 月至 2016 年 6 月, 从全国 39 个城市的超市和集贸市场采集 699 份食用菌样品, 包括 220 份金针菇,114 份平菇,110 份香菇,95 份杏鲍菇,160 份其他类型的食用菌样品 ( 见表 1) 采样地点覆盖我国大部分的省会城市和直辖市采样方法严格参考 GB 4789 郾 [6] 中 :4 样品的采集规则冶进行所有样品在采集后立即放入无菌采集袋中, 并用低温采样箱进行保存, 在 24 h 内 ( 依据距离的长短 ) 运回实验室后立即进行样品处理 1 郾 2 摇试剂与材料 10% 氯化钠胰酪胨大豆肉汤生理盐水金葡菌显色培养基营养琼脂 ( NA) 培养基 Muller 鄄 Hinton (MH) 培养基脑心浸液营养肉汤 (BHI) 冻干血浆, 广东环凯微生物有限公司 ; 微球菌葡萄球菌和相关菌属鉴定试剂盒 ( 比色法 ) API Staph20500, 法国梅里埃公司 ; 药敏纸片, 英国 Oxoid 公司 ; 细菌核酸采样点广州河源汕头韶关深圳湛江北海南宁福州厦门三亚海口澳门香港南昌成都合肥武汉上海昆明表 1 摇中国采样分布 Tab. 1 摇 Locations of sampling sites for this study in China 采样时间样品量 / 采样时间样品量 / 采样点 ( 年月 ) 份 ( 年月 ) 份 ~ 长沙 ~ 杭州贵阳南京兰州哈尔滨西安太原北京济南长春西宁银川呼和浩特沈阳石家庄郑州拉萨乌鲁木齐 DNA 小量提取试剂盒, 广州迈宝生物科技有限公司 ;Dream Taq TM Green PCR Master Mix (2x), 美国 Fermentas 公司 ;Taq 酶及 PCR 所需试剂, 赛默飞世

3 第 36 卷第 3 期摇摇摇摇黄嘉慧等 : 我国市售食用菌中金黄色葡萄球菌污染调查耐药性及其肠毒素基因检测 27 尔科技 ( 中国 ) 有限公司 ;Biowest 电泳级琼脂糖, 西班牙 Biowest 公司 ;Goldview 襆核酸染料, 生工生物工程 ( 上海 ) 有限公司 ;PCR 纯化试剂盒, 德国 Qiagen 公司 ;DNA 引物合成, 北京六合华大基因科技有限公司各试剂均在有效期内使用 1 郾 3 摇实验方法 1 郾 3 郾 1 摇金黄色葡萄球菌的分离和鉴定对采集的样品同时进行定性和定量检测, 检测方法在 GB 4789 郾的基础上略做调整将食用菌样品用无菌的剪刀剪碎, 搅拌均匀后取样 25 g 加入 225 ml 生理盐水的无菌均质袋中均质摇匀, 制成 1 颐 10 的样品液, 并从中取 1 ml 加入到装有 9 ml 10% 氯化钠胰酪胨大豆肉汤的试管中, 制成 1 颐 100 的样品液, 按照此方法制成 1 颐的样品液每个梯度 3 个平行, 将样品液放置于恒温培养箱中 37 益培养 48 h 后, 将每个梯度浓度的样品液分别划线于金葡菌显色板培养基上,37 益中培养 24 ~ 48 h 金葡菌的典型菌落在显色平板上为粉色湿润边缘平整, 挑取 3 ~ 4 个疑似典型菌落划线于营养琼脂平板中,37 益培养 (24 依 1)h 挑取单菌落进行血浆凝固酶实验, 对其阳性菌株进行 API Staph 生化鉴定, 鉴定结果显示为 Staphylococcus aureus, 且鉴定率逸 70% 的, 即可记为阳性 1 郾 3 郾 2 摇耐药性实验金葡菌抗生素敏感性实验参照 Kirby 鄄 Bauer [7] 法进行所有菌株经 NA 平板活化后加入生理盐水稀释至终浓度为 1 伊 10 7 cfu / ml, 涂布于 MH 平板上, 待菌液干后将抗生素纸片贴在培养基表面,37 益培养 24 h 选取目前临床上常用于治疗金葡菌感染的 14 类 24 种抗生素, 其中包括 : 阿莫西林克拉维酸 (AMC,30 滋 g) 氨苄西林 (AMP,10 滋 g) 头孢吡肟 (FEP,10 滋 g) 头孢西丁 ( FOX,30 滋 g) 青霉素 ( P, 10 滋 g) 头孢他啶 ( CAZ,30 滋 g) 阿米卡星 ( AK,30 滋 g) 庆大霉素 ( CN,10 滋 g) 卡那霉素 ( K,30 滋 g) 链霉素 ( S,25 滋 g) 氯霉素 ( C,30 滋 g) 克林霉素 (DA,2 滋 g) 红霉素 ( E,15 滋 g) 泰利霉素 ( TEL,15 滋 g) 环丙沙星 ( CIP,5 滋 g) 诺氟沙星 ( NOR, 10 滋 g) 四环素 ( TE,30 滋 g), 利奈唑胺 ( LZD,30 滋 g) 利福平 (RD,5 滋 g) 复方新诺明 ( SXT,25 滋 g) 喹奴普汀 / 达富普汀 ( QD,15 滋 g) 替拉考宁 ( TEC,30 滋 g) 呋喃妥因 ( F,300 滋 g) 和褐霉素 ( FD,10 滋 g) Staphylococcus aureus ATCC25923 和 Escherichia coli ATCC25922 作为质控菌株采用游标卡尺测定抑菌圈大小, 精确到 0 郾 01 mm 具有 3 种或 3 种以上类型抗生素抗性的菌株定义为多重耐药菌株, 其中, 对头孢西丁 (FOX) 产生耐药的菌株, 初步认定为耐甲氧西林金葡菌 ( methicililin 鄄 resistant Staphylococcus aureus,mrsa), 继而进行 meca / C 基因检测 [8-9], 确定为 MRSA 对于利奈唑胺耐药的菌株, 经梯度浓度稀释法 (MIC 法 ) [10-12] 进行再次验证 1 郾 3 郾 3 摇肠毒素基因检测利用 PCR 扩增技术检测所有金葡菌分离株的 18 种肠毒素基因 ( sea, seb, sec, sed, see, seg, seh, sei, sej, sek, sel, sem, sen, seo, sep, seq, ser,seu) [7] 引物及扩增条件参考 Varshney 等的方法经 PCR 扩增后, 取 5 滋 L PCR 产物上样于 1 郾 5% 琼脂糖凝胶 ( 含 Goldview 染料 ) 进行电泳分离, 电压 120 V 电泳 25 min, 利用 UV 凝胶成像系统 ( GE Health 鄄 care,wi,usa) 进行图片采集, 图片保存为 TIFF 格式以备进一步研究 1 郾 3 郾 4 摇统计学分析细菌的 MPN 值的平均计数基于 basic 鄄 10 log 鄄 arithms 方法计算当 MPN 值小于 0 郾 3 MPN / g 时, 设定值为 0 郾 15, 当 MPN 值大于 110 MPN / g 时, 则取最大值卡方检验用于金葡菌阳性样品的污染率和污染水平的检验所有的数据都运用 SPSS V21 郾 0 软件进行分析 2 摇结果与分析 2 郾 1 摇金黄色葡萄球菌在我国食用菌中的污染情况本次调查, 从 39 个城市中采集 699 份食用菌样品, 检出 33 份金葡菌阳性样品, 平均污染率为 4 郾 72%, 平均污染水平 9 郾 75 MPN / g, 具体结果如表 2 33 份阳性样品分别包括金针菇 18 份 (8 郾 18% ), 平菇 3 份 (2 郾 63% ), 香菇 4 份 (3 郾 64% ), 杏鲍菇 4 份 (4 郾 21% ), 其他菇类 4 份 (4 郾 72% ) 从污染程度来看, 金针菇平菇的平均污染水平高于 10 MPN / g, 而香菇杏鲍菇和其他菇类的污染水平则低于 1 MPN / g 39 个城市中, 有 20 个城市的食用菌检出金葡菌阳性样品, 阳性率最高的城市是拉萨 (15 郾 15%,5 / 33), 其次为海口 (12 郾 12%,4 / 33), 汕头 ( 9 郾 09%, 3 / 33,), 广州 ( 6 郾 06%, 2 / 33 ), 湛江 (6 郾 06%, 2 / 33 ), 北海 ( 6 郾 06%, 2 / 33 ), 西宁 (6 郾 06%, 2 / 33 ), 香港 ( 3 郾 03%, 1 / 33 ), 厦门 (3 郾 03%, 1 / 33 ), 三亚 ( 3 郾 03%, 1 / 33 ), 郑州

4 28 食品科学技术学报摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇 2018 年 5 月 (3 郾 03%, 1 / 33 ), 合肥 ( 3 郾 03%, 1 / 33 ), 西安 (3 郾 03%, 1 / 33 ), 武汉 ( 3 郾 03%, 1 / 33 ), 北京 (3 郾 03%, 1 / 33 ), 上海 ( 3 郾 03%, 1 / 33 ), 杭州 (3 郾 03%, 1 / 33 ), 长春 ( 3 郾 03%, 1 / 33 ), 哈尔滨 (3 郾 03%,1 / 33), 银川 (3 郾 03%,1 / 33) 5 大类食用菌中, 金针菇的污染率最高, 平均污染水平相对较高同时, 金葡菌污染食用菌没有明显的地区分布规律, 这暗示着食用菌在给人们提供丰富营养物质的同时, 也可能带来一定的食品安全风险 2 郾 2 摇食用菌源金黄色葡萄球菌的耐药性分析本次调查, 共分离出 39 株金葡菌阳性菌株, 其中 23 株分离自金针菇样品,4 株分离自平菇样品,4 株分离自香菇样品,4 株分离自杏鲍菇样品,4 株分离自其他类型的食用菌样品对 39 株食用菌源金葡菌均进行了耐药性实验, 药敏结果如表 3 我国食用菌源金葡菌分离株对 22 种抗生素均产生不同程度的耐药或中度耐药, 对利奈唑胺利福平敏感 22 种抗生素中, 耐药情况最严重的是氨苄西林和青霉素, 耐药率高达 92 郾 31%, 其次是红霉素 ( 56 郾 41% ) 四环素 ( 51 郾 28% ) 卡那霉素 (46 郾 15% ) 泰利霉素 ( 35 郾 90% ) 克林霉素 (30 郾 77% ) 链霉素(25 郾 64% ) 褐霉素(20 郾 51% ) 及其他 ( < 20% ) 39 株分离菌株中, 有 7 株对头孢西丁产生耐药,PCR 结果显示 7 株分离株均携带 meca 基因, 确定为 MRSA 39 株分离株中,16 株对 1 ~ 3 种的抗生素发生耐药,16 株对 4 ~ 10 种抗生素发生耐药,7 株对 10 种以上的抗生素发生耐药 ( 高度耐药 ) 7 株高度耐药菌株中,6 株为 MRSA,1 株为 MSSA 对 3 类或 3 类以上的抗生素同时耐药的微生物, 被定义为多重耐药菌本研究中, 33 株 (84 郾 61% ) 分离株对 3 类或以上的抗生素发生中度耐药或耐药由此可以看出, 本研究中食用菌源分离株出现的耐药问题较为严重值得关注的是,7 株高度耐药菌株中的 MRSA 几乎对所有茁鄄内酰胺类药物发生耐药, 对氟喹诺酮类药物敏感,MSSA 则与之相反 2 郾 3 摇金黄色葡萄球菌分离株肠毒素基因分布情况通过 PCR 方法对分离得到的 39 株食用菌分离株的 18 种肠毒素基因携带情况进行检测, 结果如表 4 表 4 显示, sea, seb, sec, sed, see, seg, seh, sei, sej, sek, sel, sem, sen, seo, sep, seq, ser 以及 seu 的检出率分别为 17 郾 95%, 28 郾 21%, 35 郾 90%, 0%, 15 郾 38%,51 郾 28%,100%,71 郾 79%,25 郾 64%,5 郾 13%, 摇摇表 2 摇金黄色葡萄球菌在不同食用菌中的分布情况 Tab. 2 摇 Contents of Staphylococcus aureus in different retail edible mushrooms 平均污染样品金葡菌阳阳性样品污染水平 / 分类性率 / % 编号 (MPN g - 1 ) 水平 / (MPN g - 1 ) PYJ247 0 郾郾 35 ZJC368 2 郾 3 STJ 郾 5 HK518 < 0 郾 3 HKJ HKN548 9 郾 3 SYC568 0 郾 92 BHN648 0 郾 92 金针菇 8 郾 18(18 / 220) XMN798 9 郾 2 SHN849 4 郾 3 HFJ HEBN BJJ 郾 36 WHJ 郾 3 XNJ 郾 4 LSC3369A1 < 0 郾 3 HZC3671 < 0 郾 3 LSC 郾 5 PYJ249 0 郾郾 07 平菇 2 郾 63(3 / 114) STJ LSC 郾 3 XAC1221 < 0 郾 3 0 郾 28 XNJ 郾 36 香菇 3 郾 64(4 / 110) LSC 郾 3 LSC 郾 3 STJ434 0 郾 3 0 郾 88 HKN549 2 郾 9 杏鲍菇 4 郾 21(4 / 95) YCJ3098 < 0 郾 3 HKC3520 < 0 郾 3 ZJJ384 0 郾 74 0 郾 40 BHC 郾 36 其他 2 郾 5(4 / 160) ZZJ3350 < 0 郾 3 CCJ 郾 36 合计 4 郾 72(33 / 699) 9 郾 75 7 郾 69% 所有分离株至少携带 1 种肠毒素基因, 其中有 1 株平菇样品的分离株同时携带 9 种肠毒素基

5 第 36 卷第 3 期摇摇摇摇黄嘉慧等 : 我国市售食用菌中金黄色葡萄球菌污染调查耐药性及其肠毒素基因检测 29 因 (sea 鄄 seb 鄄 sec 鄄 seh 鄄 sei 鄄 sek 鄄 sem 鄄 seq 鄄 seu), 这可能与大部分肠毒素基因定位在可移动基因元件上有关本研究中传统肠毒素基因 ( sea, seb, sec, sed, see) 的检出率为 19 郾 79% (38 / 192), 以 sec 基因为主, 未检出 sed 基因新型肠毒素 (seg, sei, sem, sen, seo, seu) 的检出率为 53 郾 13% (102 / 192), 其中,sei 基因为金葡菌分离株的主要携带基因 ( 见图 1) Tab. 3 摇表 3 摇全国食用菌金黄色葡萄球菌分离株药敏实验结果 Antimicrobial susceptibility tests of Staphylococcus aureus isolates obtained from retail edible mushrooms in China 抗生素种类抗生素菌株数量 (n = 39) a((a / n) / % ) b((b / n) / % ) c((c / n) / % ) 阿莫西林 7(17 郾 95) - 32(82 郾 05) 氨苄西林 36(92 郾 31) - 3(7 郾 69) 茁鄄内酰胺类头孢吡肟 5(12 郾 82) 1(2 郾 56) 33(84 郾 62) 头孢西丁 7(17 郾 95) - 32(82 郾 05) 青霉素 G 36(92 郾 31) - 3(7 郾 69) 头孢他啶 7(17 郾 95) 4(10 郾 26) 28(71 郾 79) 阿米卡星 6(15 郾 38) 12(30 郾 77) 21(53 郾 85) 氨基糖苷类庆大霉素 4(10 郾 26) 0(0) 35(89 郾 74) 卡那霉素 18(46 郾 15) 7(17 郾 95) 14(35 郾 90) 链霉素 10(25 郾 64) 20(51 郾 28) 9(23 郾 08) 氯霉素类氯霉素 3(7 郾 69) 15(38 郾 46) 21(53 郾 85) 林可酰胺类克林霉素 12(30 郾 77) 9(23 郾 08) 17(43 郾 59) 大环内脂类氟喹诺酮类红霉素 22(56 郾 41) 3(7 郾 69) 14(35 郾 90) 泰利霉素 14(35 郾 90) 3(7 郾 69) 22(56 郾 41) 环丙沙星 4(10 郾 26) 5(12 郾 82) 30(76 郾 92) 诺氟沙星 5(12 郾 82) 1(2 郾 56) 33(84 郾 62) 四环素类四环素 20(51 郾 28) 2(5 郾 13) 17(43 郾 59) 恶唑烷酮类利奈唑胺 0(0) - 39(100) 安沙霉素类利福平 0(0) 1(2 郾 56) 38(97 郾 44) 磺胺类甲氧苄氨嘧啶 1(2 郾 56) 0(0) 38(97 郾 44) 喹诺酮类喹奴普汀 1(2 郾 56) 1(2 郾 56) 37(94 郾 87) 糖肽类替考拉宁 1(2 郾 56) 11(28 郾 21) 27(69 郾 23) 呋喃妥因类呋喃妥因 1(2 郾 56) 2(5 郾 13) 36(92 郾 31) 褐霉素 8(20 郾 51) - 31(79 郾 49) 1 ~ 3 16(41 郾 03) 耐药数量 4 ~ 10 16(41 郾 03) 11 ~ 15 7(17 郾 95) 16 ~ 24 0(0) 摇摇 a. 耐药菌株数,b. 中度耐药菌株数,c. 敏感菌株数,n. 菌株总数量 2 郾 4 摇讨摇论本研究在年, 对全国 39 个城市 699 份食用菌进行污染调查, 研究其污染情况和污染水平, 并检测到金葡菌阳性样品 33 份, 平均污染率达到了 4 郾 72%, 平均污染水平 9 郾 75 MPN / g 这一结果显示, 我国市售食用菌中金葡菌的污染情况不容乐观相较于食用菌样品, 肉鸡蛋和奶制品更适宜金 [13 - 葡菌的生长 14], 然而, 本研究中的食用菌同样受

6 30 食品科学技术学报摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇 2018 年 5 月摇摇表 4 摇全国食用菌源金黄色葡萄球菌肠毒素基因分布情况 Tab. 4 摇 Distributions of 18 types of SE genes of Staphylococcus aureus isolates edible mushrooms obtained from retail in China 肠毒素基因肠毒素基因概率 / % 合计金针菇平菇香菇杏鲍菇其他 (n = 39) (n = 23) (n = 4) (n = 4) (n = 4) (n = 4) sea 5(21 郾 74) 1(25) 1(25) 7(17 郾 95) seb 7(30 郾 43) 2(50) 1(25) 1(25) 11(28 郾 21) 传统肠毒素基因 sec 7(30 郾 43) 3(75) 2(50) 2(50) 14(35 郾 90) sed see 5(21 郾 74) 1(25) 6(15 郾 38) seg 10(43 郾 48) 2(50) 3(75) 3(75) 2(50) 20(51 郾 28) sei 23(100) 4(100) 4(100) 4(100) 4(100) 39(100) 新型肠毒素基因 sem 16(69 郾 57) 3(75) 4(100) 2(50) 3(75) 28(71 郾 79) sen 5(21 郾 74) 2(50) 1(25) 2(50) 10(25 郾 64) seo 2(50) 2(5 郾 13) seu 1(4 郾 35) 1(25) 1(25) 3(7 郾 69) seh 4(17 郾 39) 1(25) 5(12 郾 82) sej 4(17 郾 39) 1(25) 1(25) 6(15 郾 38) sek 4(17 郾 39) 2(50) 1(25) 1(25) 1(25) 9(23 郾 08) 类肠毒素基因 sel 1(4 郾 35) 1(25) 2(50) 1(25) 1(25) 6(15 郾 38) seq 8(34 郾 78) 2(50) 2(50) 2(50) 2(50) 16(41 郾 03) sep 6(26 郾 09) 1(25) 1(25) 8(20 郾 51) ser 1(4 郾 35) 1(25) 2(5 郾 13) Fig. 1 摇图 1 摇全国食用菌金黄色葡萄球菌 sei 基因分布情况 Distributions of sei gene in edible mushrooms Staphylococcus aureus isolates in China

7 第 36 卷第 3 期摇摇摇摇黄嘉慧等 : 我国市售食用菌中金黄色葡萄球菌污染调查耐药性及其肠毒素基因检测 31 到金葡菌的污染, 这很有可能是食用菌与其他类型产品发生了交叉污染 ; 因此, 需特别重视食用菌的培植环境运输及销售中的交叉污染情况一般来说, 动物源金葡菌的耐药性较为严重, 这与动物在养殖过程中长期使用亚治疗量的抗菌药物有关亚治疗量的抗菌药物会诱导动物肠道内正常菌群和寄居的病原菌产生耐药性, 导致动物源性食品中病原菌耐药株的产生且迅速蔓延引起环境或食品的污染 ; 然而, 本研究从食用菌中分离的金葡菌耐药性率也很高, 其中, 茁鄄内酰胺类大环内酯类以及四环素类等药物耐药情况甚至达到 50% 以上, 该结 [15] [16] 果与汪永禄等和周臣清研究结果一致 [17] Vitale 等对金葡菌分离株进行了耐药性研究, 结果发现其分离株同样对茁鄄内酰胺类 (35 郾 7% ) 四环素类 (20 郾 2% ) 两类药物发生耐药, 但其耐药率稍低于本研究结果, 这表明, 食用菌源金葡菌的耐药性同样严重本研究还分离到了 7 株 MRSA, 显示在分离菌中的阳性率为 17 郾 9%, 这一水平明显高于其他食品源 MRSA 中的阳性比例 [18-19] MRSA 传染性强致病性高且耐药现象严重, 不仅可产生多种分泌性毒素, 还可以通过质粒转座子等将耐药性基因转移到其他菌株中 [20], 能使原本对药物敏感的菌株成为高度耐药菌 ; 因此, 对于本研究中分离到 17 郾 9% 的 MRSA 菌株应特别引起关注 [21] [17] 与 Fursova 等以及 Vitale 等报道的不同, 本研究的分离株主要携带 sei sem 肠毒素基因 18 种肠毒素基因检测结果显示,seg sei sem sen seo seu 等新型肠毒素的携带率 (53 郾 13%,102 / 192) 要明显高于 sea ~ see 五种传统的肠毒素 (19 郾 79%, 38 / 192) 基因此外, 本研究中的金葡菌传统肠毒 [22] [23] 素的携带率远低于刘伟等和刘杰等报道的日常食品中的传统肠毒素携带率 ( 逸 70% ) 本研究中分离株的肠毒素携带情况有别于国内外的报道, 这可能与采集样品的种类数量及类型有关 3 摇结摇论我国市售食用菌中存在金黄色葡萄球菌的污染风险, 且相关分离株在耐药性肠毒素基因携带方面的情况较为严重, 在食品安全中存在一定的威胁因此, 建议相关食品企业严格把控从食品原料到成品的各个生产环节, 安排专门的化验员对成品进行检验, 以保证产品的质量, 将可能引起的食物中毒风险降到最低同时, 相关生产及其他有关部门应加强对食源性致病菌耐药性的检测, 及时掌握病原菌的耐药状况, 减低耐药危害的发生, 指导临床合理选择有针对性的抗菌药物参考文献 : [1] 摇 KADARIYA J, SMITH T C, THAPALIYA D. Staphylo 鄄 coccus aureus and staphylococcal food 鄄 borne disease: an ongoing challenge in public health[ J]. Biomed Research International, 2014(2014): [2] 摇徐振波, 刘晓晨, 李琳, 等. 金黄色葡萄球菌肠毒素在食源性微生物中的研究进展 [ J]. 现代食品科技, 2013(9): XU Z B, LIU X C, LI L, et al. Development of Staphy 鄄 lococcal aureus enterotoxin in food 鄄 borne bacteria [ J]. Modern Food Technology, 2013(9): [3] 摇 HENNEKINNE J A, BUYSER M L D, DRAGACCI S. Staphylococcus aureus and its food poisoning toxins: char 鄄 acterization and outbreak investigation[ J]. Fems Micro 鄄 biology Reviews, 2012,36(4): [4] 摇 KUZMA K, MALINOWSKI E, LASSA H, et al. Enter 鄄 toxin and tonic shock syndrome toxin 鄄 1 production by Staphylococcus aureus isolated from bovine mastitis [ J]. Medycyna Weterynaryjna, 2005, 61(3): [5] 摇向晶晶. 食用菌种植中污染菌青霉的拮抗菌筛选与应用研究 [D]. 成都 : 四川大学, [6] 摇中华人民共和国卫生部, 中国国家标准化管理委员会. GB 4789 郾 : 食品微生物学检验总则 [ S]. 北京 : 中国标准出版社, [7] 摇 VARSHNEY A K, MEDIAVILLA J R, ROBIOU N, et al. Diverse enterotoxin gene profiles among clonal complexes of Staphylococcus aureus isolates from the Bronx, New York[ J]. Applied & Environmental Microbiology, 2009, 75(21):6839. [8] 摇 LEEKITCHAROENPHON P, SONDA T, KUMBURU H H, et al. Hospital epidemiology of methicillin 鄄 resistant Staphy 鄄 lococcus aureus in a tertiary care hospital in Moshi, Tanzania, as determined by whole genome sequencing [ J]. BioMed Research International,2018(2):1-12. [9] 摇王敏, 范婧, 李先平. PCR 扩增法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的 meca 基因 [ J]. 广东医学, 2008,29 (4): WANG M, FAN J, LI X P. PCR amplification method

8 32 食品科学技术学报摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇 2018 年 5 月 for detection of meca gene of methicillin 鄄 resistant Staphy 鄄 lococcus aureus [ J ]. Guangdong medicine, 2008, 29 (4): [10] 摇 SMITH J R, BARBER K E, HALLESY J, et al. Tela 鄄 vancin demonstrates activity against methicillin 鄄 resistant Staphylococcus aureus isolates with reduced susceptibility to vancomycin, daptomycin, and linezolid in broth microdilution MIC and one 鄄 compartment pharmacokinet 鄄 ic / pharmacodynamic models [ J ]. Antimicrob Agents Chemother, 2015,59(9): [11] 摇陈栎江, 周铁丽, 吴庆, 等. 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌对万古霉素替考拉宁利奈唑胺的 MIC 值的 5 年监测 [J]. 浙江检验医学, 2009(1): CHEN L J, ZHOU T L, WU Q, et al. 5 years monitoring of the MIC value of methicillin 鄄 resistant Staphylococcus aureus in vancomycin, teicoplanin, and linneazolamide [J]. Zhejiang Laboratory Medicine, 2009(1): [12] 摇 PEYRUSSON F, TULKENS P M, VAN F B. Cellular pharmacokinetics and intracellular activity of gepotidacin against Staphylococcus aureus with different resistance phe 鄄 notypes in models of cultured phagocytic cells[j]. Antimi 鄄 crobial Agents & Chemotherapy, 2018, 62 (4): [13] 摇索玉娟. 食品中金黄色葡萄球菌的分布及其肠毒素基因的研究 [D]. 保定 : 河北农业大学, [14] 摇黄冰, 邓志爱, 谭铭雄, 等. 食品中金黄色葡萄球菌污染状况产肠毒素特性及耐药性研究 [ J]. 中国卫生检验杂志, 2009(6): HUANG B, DENG Z A, TAN M X, et al. Contamination status, staphylococcal enterotoxin 鄄 producing property and drug resistance of Staphylococcus aureus isolated from food products [ J ]. Chinese Journal of Health Inspection, 2009(6): [15] 摇汪永禄, 张萍, 陶勇, 等. 不同来源金黄色葡萄球菌肠毒素及耐药性检测分析 [ J]. 实用预防医学, 2014,21(4): WANG Y L, ZHANG P, TAO Y, et al. Analysis on enterotoxin and antibiotic resistance in Staphylococcus aureus isolated from different sources [ J ]. Practical Preventive Medicine, 2014,21(4): [16] 摇周臣清. 生猪肉中金黄色葡萄球菌的检测及耐药机制研究 [D]. 广州 : 华南理工大学, [17] 摇 VITALE M, GAGLIO S, GALLUZZO P, et al. Antibiotic resistance profiling, analysis of virulence aspects and molecular genotyping of Staphylococcus aureus isolated in Sicily, Italy [ J]. Foodborne Pathog Dis, 2018,15(3): [18] 摇 GE B, MUKHERJEE S, HSU C H, et al. MRSA and multidrug 鄄 resistant Staphylococcus aureus in U. S. retail meats, [ J]. Food Microbiology, 2017,62: [19] 摇 PAPADOPOULOS P, PAPADOPOULOS T, ANGELI 鄄 DIS A S, et al. Prevalence of Staphylococcus aureus and of methicillin 鄄 resistant S. aureus ( MRSA ) along the production chain of dairy products in north 鄄 western Greece[ J]. Food Microbiology, 2018,69:43. [20] 摇王艳, 周丽萍, 巢国祥, 等. 金黄色葡萄球菌 MRSA 分型及分子溯源研究 [J]. 中国卫生检验杂志, 2014 (20): WANG Y, ZHOU L P, CHAO G X, et al. Study on MRSA typing and molecular traceability of Staphylococ 鄄 cus aureus [ J]. Chinese Journal of Health Inspection, 2014(20): [21] 摇 FURSOVA K K, SHCHANNIKOVA M P, LOSKUTOVA I V, et al. Exotoxin diversity of Staphylococcus aureus isolated from milk of cows with subclinical mastitis in central Russia [ J ]. Journal of Dairy Science, 2018 (101):1-7. [22] 摇刘伟, 王菊光, 孙晓华, 等. 日常食品及食物中毒样本中金黄色葡萄球菌肠毒素的分型检测分析 [J]. 中国预防医学杂志, 2013(8): LIU W, WANG J G, SUN X H, et al. Analysis of enterotoxin of staphylococcal isolated from food and food poisoning samples [ J ]. China Journal of Preventive Medicine, 2013(8): [23] 摇刘杰, 陈磊, 黄淑华, 等. 22 株不同来源金黄色葡萄球菌肠毒素及耐药性检测分析 [J]. 公共卫生与预防医学, 2017,28(1): LIU J, CHEN L, HUANG S H, et al. Analysis on the detection of staphylococcal enterotoxin and drug resist 鄄 ance in 22 different strains [J]. Public Health and Pre 鄄 ventive Medicine, 2017,28(1): ( 下转第 55 页 )

9 第 36 卷第 3 期摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇岳锦萍等 : 利用理化参数鉴别掺假蜂蜜 55 materials, the physical and chemical parameters, such as water content, protein content, molecular weight range, and monosaccharide content ratio, were used to analyze the similarities. In order to im 鄄 prove the resolution of fructose and glucose, an aminopropyl column was applied in this study. The results showed that ph value, polyphenol content, and flavones content were not different. The water contents of 17 kinds of honey were 15 郾 13% - 19 郾 88% while the water contents of 10 kinds of syrup were 22 郾 13% - 28 郾 50%. The ratios of fructose and glucose of different honey samples and syrup samples were 0 郾 95-1 郾 50 and 0 郾 13-2 郾 80. The protein contents of honey samples were 1 郾 12-5 郾 09 滋 g / g and the molecular weight range was 45 郾郾 0 kda. However, the syrup did not have protein. The combina 鄄 tion of protein content determination and protein molecular weight assays enhance the persuasiveness of identifying true and false honey through proteins. The moisture content, relative content of fructose / glu 鄄 cose, protein content and molecular weight of protein can be used as indicators of adulteration, and pro 鄄 vide the theoretical basis for the identification of honey adulteration. Keywords: honey; syrup; physical and chemical indexes; adulteration; authenticity identification ( 责任编辑 : 张逸群 ) 詬詬詬詬詬詬詬詬詬詬詬詬詬詬詬詬詬詬詬詬詬詬詬詬詬詬詬詬詬詬詬詬詬詬詬詬詬詬詬詬詬詬詬詬詬詬詬 ( 上接第 32 页 ) Prevalence, Antibiotic Resistance, and Enterotoxin Gene Detection of Staphylococcus aureus Isolated from Retail Edible Mushrooms in China HUANG Jiahui 1, 摇 WU Shi 1, 摇 ZHANG Feng 1,2, 摇 ZHANG Jumei 1, 摇 WU Qingping 1,* (1. Guangdong Institute of Microbiology / State Key Laboratory of Applied Microbiology Southern China/ Guangdong Provincial Key Laboratory of Microbial Culture Collection and Application/ Guangdong Open Laboratory of Applied Microbiology, Guangzhou , China; 2. School of Bioscience and Bioengineering, South China University of Technology, Guangzhou , China) Abstract: This study investigated the contamination level of Staphylococcus aureus of retail edible mush 鄄 rooms in China. 699 retail edible mushroom samples were collected from 39 cities in China during 2011 to 2016, 33 samples (4 郾 72% ) were positive for Staphylococcus aureus and the geometric mean was 9 郾 75 MPN / g. A total of 39 isolates were analyzed. For antibiotics susceptibility tests, all isolated strains were resistant to 22 kinds of different antibiotics, such as ampicillin, and only sensitive to linezolid and rifam 鄄 picin. Seven isolates were resistant to cefoxitin and carried meca gene, confirmed as methicililin 鄄 resistant Staphylococcus aureus ( MRSA). Polymerase chain reaction( PCR) analysis of 18 SE genes showed that 4-6 kinds of enterotoxin genes carried by 60% isolated strains, and sei gene was the most frequently de 鄄 tected, followed by sem,seg,seq,sec,seb,sen. This study reflects the potential risk of Staphylococcus au 鄄 reus contamination of retail edible mushrooms in China and these isolate strains had virulence potential and drug tolerance, which should be drawn public attention. Keywords: Staphylococcus aureus; edible mushrooms; pollution level; enterotoxin gene; drug tolerance ( 责任编辑 : 叶红波 )

目录一 2014 年全院 5533 株细菌分布及前 10 位主要细菌耐药性结果二按照标本类型 ( 或感染部位 ) 进行的病原菌构成及药敏分析 1 呼吸道标本病原菌构成及药敏分析 2 尿液标本病原菌构成及药敏分析 3 血流骨髓标本病原菌构成及药敏分析 4 皮肤软组织标本病原菌构成及药敏分析 5

目录一 2014 年全院 5533 株细菌分布及前 10 位主要细菌耐药性结果二按照标本类型 ( 或感染部位 ) 进行的病原菌构成及药敏分析 1 呼吸道标本病原菌构成及药敏分析 2 尿液标本病原菌构成及药敏分析 3 血流骨髓标本病原菌构成及药敏分析 4 皮肤软组织标本病原菌构成及药敏分析 5 2014 年安医大一附院病原菌分布及药物敏感性分析编者 : 沈继录编审 : 王中新徐元宏 1 目录一 2014 年全院 5533 株细菌分布及前 10 位主要细菌耐药性结果二按照标本类型 ( 或感染部位 ) 进行的病原菌构成及药敏分析 1 呼吸道标本病原菌构成及药敏分析 2 尿液标本病原菌构成及药敏分析 3 血流骨髓标本病原菌构成及药敏分析 4 皮肤软组织标本病原菌构成及药敏分析 5 伤口引流液标本病原菌构成及药敏分析

第 36 卷第 3 期 2018 年 5 月 食品科学技术学报 Journal of Food Science and Technology Vol. 36 No. 3 May 狮栓 栓 专题研究专栏 栓狮狮狮狮狮狮狮狮狮狮狮狮狮狮狮狮狮 栓 编者按 : 食品安全问题是关系到人类健康

第 36 卷第 3 期 2018 年 5 月食品科学技术学报 Journal of Food Science and Technology Vol. 36 No. 3 May 狮栓栓专题研究专栏栓狮狮狮狮狮狮狮狮狮狮狮狮狮狮狮狮狮栓编者按 : 食品安全问题是关系到人类健康