应用与环境生物学报 2010,16 ( 3 ): 394~398 Chin J Appl Environ Biol=ISSN X DOI: /SP.J 一株轻度嗜盐反硝化菌的分离鉴定及特性 * 郭艳丽 1, 2 张培

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1 应用与环境生物学报 200,6 ( 3 ): 394~398 Chin J Appl Environ Biol=ISSN X DOI: /SP.J 一株轻度嗜盐反硝化菌的分离鉴定及特性 * 郭艳丽, 2 张培玉 ** 于德爽曲洋郭沙沙成广勇 ( 青岛大学环境科学与工程系青岛 26607) ( 2 中海油山东化学工程有限责任公司济南 25003) 摘要从处理高盐度废水的成熟活性污泥中分离筛选得到株轻度嗜盐反硝化细菌 YL. 通过对该菌株的形态观察生理生化实验以及 6S rdna 基因序列分析, 确定该菌株为迪茨氏菌 (Dietzia sp.). 盐度影响实验表明, 该菌株能在盐度为 0~0% 的培养液中生长, 盐度为 3% 时 D 600 nm 达到最大, 为 2.002; 当初始硝态氮浓度为 20 mg/l 左右时,DO 值对该菌株的反硝化效果几乎没有影响,NO X 去除率均在 90% 以上, 表明该菌为好氧反硝化菌 ; 适于在碱性环境中生长, 最适 ph 为 7.5~8.5; 能利用乙酸钠蔗糖葡萄糖柠檬酸钠丁二酸钠为碳源进行反硝化, 以蔗糖为碳源时反硝化效果最好,NO X 去除率达到 99.8%; 在 25~30 的温度范围内反硝化效果较好,30 时菌株的 NO X 去除率超过 90%. 该菌在一定盐度下具有较好的反硝化作用, 能为高盐度废水的生物处理提供一定的参考价值. 图 7 参 5 关键词嗜盐菌 ; 好氧反硝化菌 ; 系统发育分析 ; 高盐废水 ; 生物降解 CLC X72 Isolation, Identification and Characteristics of a Slightly Halophilic Denitrifying Bacterium * GUO Yanli,2, ZHANG Peiyu **, YU Deshuang, QU Yang, GUO Shasha & CHENG Guangyong ( Department of Environmental Science and Engineering, Qingdao University, Qingdao 26607, Shandong, China) ( 2 Shandong Chemical Engineering Co., Ltd., China National Offshore Oil Corporation, Jinan 25003, Shandong, China ) Abstract A slightly halophilic denitrifying bacterium, named as YL, was screened from the activated sludge treating highsalinity wastewater. According to its morphological, physiological and biochemical characteristics, and the analysis of 6S rrna gene sequence, strain YL was identified as Dietzia sp. The study of the effect of salinity on its growth showed that the strain could survive at certain salinity and the suitable salinity ranged from 0 to 0%. The OD value reached the maximum when the salinity was 3%. The nitrogen removal rate was not affected by dissolved oxygen value and could exceed 90% when the concentration of nitrate was about 20 mg/l. The nitrogen removal rate exceeded 90% when the rotation speed was 50~200 rounds per minute. The alkaline environment was suitable for its growth and the optimal ph range was from 7.5 to 8.5. Strain YL could use a variety of carbon sources for denitrification, such as acetate, sucrose, glucose, sodium citrate and sodium succinate. However, sucrose was found the most suitable carbon source, and it got the nitrogen removal reaching 99.8%. The strain could perform denitrification when the temperature ranged from 25 to 30, and the nitrogen removal rate exceeded 90% at 30. Fig 7, Ref 5 Keywords halophilic bacterium; aerobic denitrifying bacterium; phylogenetic analysis; highsalinity wasterwater; biodegradation CL C X72 传统的生物脱氮途径被认为是分两个阶段完成的, 即好氧条件下的硝化阶段和厌氧条件下的反硝化阶段. 但是近年来, 国内外的不少研究已经证明, 反硝化可以发生在有氧条件下, 这使得好氧反硝化的研究日趋活跃. Robertson 从除硫 [] 和反硝化处理系统中首次分离出好氧反硝化菌, 近年来好 [2~3] 氧反硝化不断被报道. 目前国内也有一些关于好氧反硝化 [4] 细菌的报道, 王弘宇等从活性污泥中分离出假单胞菌, 张光收稿日期 : 接受日期 : * 国家自然科学基金项目 (Nos , ) 和青岛大学优秀研究生学位论文培育项目 (YSPY200904) 资助 Supported by the National Natural Science Foundation of China (Nos , ) and the Innovation Program of Graduate Education of Qingdao University, China (YSPY200904) ** 通讯作者 Corresponding author ( peiyu_zhang@63.com) [5] 亚从土壤中富集分离出一株具有好氧反硝化功能的红球菌. 在石油化工海产品加工和养殖等行业中, 外排含氮废水大多具有高盐的特点. 盐度的增加会影响微生物的活性, 使微生物细胞脱水引起细胞原生质分离, 甚至导致微生物细胞破裂而死亡, 严重影响了处理系统的脱氮效果. 目前 [6~7] 国外已有一些关于高盐环境下反硝化菌的研究报道, 国内还鲜见这方面的报道. 本试验从处理高盐度废水的污泥中分离出一株嗜盐好氧反硝化菌, 对其形态生理生化特征进行了研究, 并考察了不同的环境因素对其反硝化性能的影响. 高盐这一特殊生境中反硝化细菌的分离培养和特性研究将有助于了解高盐生物脱氮工艺的可行性, 是对高盐环境下生物脱氮新理论和新技术的有力补充, 将为国内高盐废水生物脱氮的工程实践提供理论依据.

2 3 期郭艳丽等 : 一株轻度嗜盐反硝化菌的分离鉴定及特性 395 材料与方法. 菌株来源菌株从实验室处理高盐度废水驯化成熟的活性污泥中分离得到, 能耐受一定的盐度, 并具有较好的反硝化效果..2 培养基耐盐反硝化培养基 (ρ/g L ):KNO 3 ;K 2 HPO 4 3H 2 O 7.9;KH 2 PO 4.5;CH 3 COONa 5;MgSO 4 7H 2 O 0.;NaCl 20; 微量元素 2 ml;ph 7.2~7.4. 其中 CH 3 COONa KNO 3 的量可根据实验要求进行调整, 固体培养基加 2% 琼脂. 微量元素溶液 (ρ/g L ):Na 2 EDTA 63.7;ZnSO 4 2.2; CaCl 2 5.5;MnCl 2 4H 2 O 5.06;FeSO 4 7H 2 O 5.0;Na 2 MoO 4 4H 2 O.;CuSO 4 5H 2 O.57;CoCl 2 6H 2 O.6;pH 耐盐反硝化菌的分离筛选取反应器中的新鲜污泥, 用高速组织捣碎机处理获得含有大量游离细菌的泥水混合物. 细菌泥水混合液自然沉降 h 后, 取上清液以 0 梯度进行稀释, 分别取 0. ml0 4 ~0 9 稀释度的混合菌稀释液涂布到耐盐反硝化菌固体培养基上, 倒置于 30 的恒温培养箱中培养至长出单菌落养至长出单菌落, 划线纯化后优选反硝化性能较好的一株进行实验研究..4 形态和生理生化试验菌株的形态和生理生化试验根据常见细菌系统鉴定手册 [8] 和伯杰细菌鉴定手册 [9] 进行..5 6S r RNA 基因序列分析 ) 先用溶菌酶处理后, 再用离心柱型 DNA 提取试剂盒提取 DNA. 用于 6S rdna 基因扩增的 PCR 反应引物为一对通用引物. 正向引物 27F:5'AGAGTTTGATCCTGGCTCAG3'; 反向引物 492R:5'GGTTACCTTGTTACGACTT3'. 引物由上海生工生物工程有限公司合成. PCR 反应体系 (50 μl):0 buffer( 含 Mg 2+ )5 μl,dntp 4 μl, 正向和反向引物各 μl, 模板 μl,tap 聚合酶缓冲液 μl, 重蒸水 37 μl. PCR 程序如下 : 94 预变性 5 min; s,55 30 s,72 2 min, 循环 30 次 ; min;4 4 放置. 测序由上海生工生物工程有限公司完成. 2) 系统发育分析 : 将测序结果用 BLAST 软件与 GenBank 中已登录的 6S rr NA 基因序列进行同源性比较, 通过 CLUSTAL X 和 BIOEDIT 等软件进行多重序列比对分析, 并以 Neighborjoining 法构建系统发育树..6 菌株好氧反硝化性能测试以硝酸钾为唯一氮源, 以乙酸钠为碳源, 取处于对数生长期的菌液按 2% 的接种量接种于装有 50 ml 培养液的 500 ml 三角瓶中 ( 瓶塞为硅胶塞, 菌体好氧培养 ), 置于恒温气浴振荡器中 30 恒温培养 ( 转速 20 r/min), 定时取培养液测定菌体生长量, 离心菌体后取上清液测定 NO 3 和 NO 2 的变化..7 分析方法 NO 2 :N( 萘基 ) 乙二胺光度法 ;NO 3 : 麝香草酚分光光度法 ;NH 4+ : 钠氏试剂分光光度法 ; 菌体生长量 : 吸光度法, 用 7200 型尤尼柯 (UNIC) 可见分光光度计于 600 nm 处测量吸光度值 ;ph 值 : 采用 600 型 ph 计测定 ;DO: 溶解氧仪 Senso Direct OX24. 2 结果与讨论 2. 菌株的形态特征和生理生化特性菌株 YL 为革兰氏阳性菌. 将已接种的培养基平板置于 30 的恒温培养箱中, 培养 3 d 后菌落大小为 (0.4~0.5) μm (0.7~.2) μm, 无鞭毛, 无芽孢. 菌体为圆形, 橘红色, 大小约为 ~.2 mm, 边缘整齐, 表面光滑, 有光泽, 隆起. 菌株 YL 的生理生化特性鉴定结果为 : 接触酶 H 2 O 2 酶反应呈阳性, 严格好氧, 硝酸盐还原亚硝酸盐还原吲哚乙酸氧化油脂水解为阳性 ; 甲基红明胶液化 VP 纤维素柠檬酸盐淀粉水解产氨实验果胶水解为阴性 ; 石蕊牛乳实验为还原石蕊退色 ; 利用蔗糖葡萄糖产酸 ; 不能利用麦芽糖乳糖甘露醇半乳糖产酸 S rrna 基因序列分析获得分离菌株 Y L 部分长度的 6S rr NA 基因序列 ( 44 bp), 在 GenBank 序列登录号为 FJ50238,YL 与多株 Dietzia sp.6s rrna 基因的相似性达 98% 以上, 结合菌株的形态学和生理学特性, 可基本确定分离菌株 YL 为 Dietzia sp. 通过 GenBank 检索得到与 YL 亲缘性相近的其他菌株, 利用 BIOEDIT 和 PHYLIP 等软件, 以 Neighborjoining 法绘制系统发育树 ( 图 ). 目前关于迪茨氏菌国内外有一些降解有机烷烃和石油污染物的报道 [0~], 周丽华从太湖沉积物中分离出该种菌 [2], 但尚没有其降解硝酸盐和亚硝酸盐的报道. 2.3 菌株 YL 的好氧反硝化特性菌株 YL 在恒温气浴振荡器中 30 振荡培养, 定时取样测定菌体生长量 NO 3 和 NO 2 的变化, 考察菌株在好氧条件下的反硝化效果. 由图 2 可以看出, 菌株 YL 的对数生长期发生在培养开始后的 2~33 h, 在前 33 h 将 NO 3 浓度从 5.3 mg/l 降到 0.4 mg/l,no 2 的积累量也在这个时刻达到最大 (25.4 mg/l), 可以看出菌株的反硝化过程主要发生在对数生长期. 从图 2 不难发现, 在最初的生长阶段,NO 2 的积累很少. 随着反应的进行和菌体生长速度的加快, 进入对数生长期后,NO 2 积累量明显增加. NO 2 在对数生长期的大量积累可以看成是菌株的反硝化是先将 NO 3 还原为 NO 2 再继续还原为氮气的过程, 对数生长期内 NO 3 的快速还原造成了 NO 2 的大量积累,NO 2 的积累又能诱导亚硝酸还原酶的产生, 从而将 NO 2 还原盐度对 YL 生长的影响鉴于该菌是从处理高盐度废水的活性污泥中分离的, 具有一定的耐盐性, 本实验特别考查了盐度对该菌株反硝化性能的影响, 设 0~2% 共 3 个不同的盐度. 从图 3 可以看出, 随着盐度的增加, 菌体的生长呈现先增加后减少的趋势. 盐度为 0 时, 菌株生长 36 h 时的 D 600 nm 为.78, 盐度为 3% 时的 D 600 nm 达到最大, 为 2.002, 盐度为 8% 时 D 600 nm 降到了.367, 盐度继续增加, 菌体的生长吸光度迅速降低, 在高于 % 的盐度中几乎不生长, 可知该菌在 0~0% 的盐度环境下均可生长, 最适生长盐度为 0~7% [3]. 菌株 YL 在盐度为 0~0% 的培养液中均能生长, 说明

3 396 应用与环境生物学报 Chin J Appl Environ Biol 6 卷图基于 6S rrna 基因序列同源性构建的菌株 YL 和亲缘性相近的其他细菌的系统发育树 Fig. Unrooted phylogenetic trees based on the partial 6S rrna sequences of strain YL and related bacteria 图 2 YL 的反硝化特性 Fig. 2 Denitrification characteristics of YL YL 能耐受一定的盐度, 这是长期污泥驯化的必然结果. 长期的驯化过程使得该菌株具有极为特殊的生理机构和代谢机制 [4] :) 在其细胞内具有相当高的离子浓度, 基本上与细胞外的离子浓度相等, 可以抵御胞外高盐浓度对菌体细胞的脱水作用 ;2) 菌体具有对环境中离子的选择作用, 具有浓缩 K + 和排斥 Na + 的能力, 在 Na + 占优势的高盐环境中, 也不会有过多的 Na + 进入细胞, 因此耐盐菌能在高盐环境中保持细胞结构和显示生理活性, 并能很好地生存 DO 对 YL 好氧反硝化效果的影响本实验通过设计不同的转速调节 DO 浓度, 测定培养基的 DO 值找出转速与 DO 值的对应关系. 本实验确定转速的 4 个水平分别为 r/min, 对应的 DO 值分别为 4.3~ ~ ~ ~6.7 mg/l. 由图 4 可以看出, 在不同的溶解氧条件下, 当培养液的图 3 盐度对 YL 生长的影响 Fig. 3 Effects of salinity on YL growth 初始硝态氮浓度在 20 mg/l 左右时, 该菌株的 NO X 去除率均达到了 90% 以上. 可见, 在该硝态氮浓度下 DO 值对菌株的反硝化效果没有显著的影响, 这与马放的研究结果 [5] 是一致的. 传统反硝化理论认为, 生物反硝化只在严格厌氧的条件下才能进行, 氧气的存在阻止了电子传递给 NO 2 和 NO 3, 从而抑制反硝化的进行, 但是 DO 值的改变对菌株 YL 的反硝化基本没有抑制作用, 可见氧的存在不会抑制硝酸还原酶的活性. 菌株 YL 的反硝化酶和有氧呼吸系统可以同时存在, 氧不是抑制反硝化酶活性和反硝化酶生成的直接因素 ph 对 YL 好氧反硝化效果的影响调整培养液的初始 ph 后灭菌, 以 2% 的接种量等量接种种子培养液,pH 在培养过程中不再调整. 由图 5 可以看出, 菌株 YL 在 ph 为时基本没有反硝化作用,pH 为 6.5 时培养液中不仅有 42. mg/

3 期郭艳丽等 : 一株轻度嗜盐反硝化菌的分离鉴定及特性 397 图 4 DO 对 YL 好氧反硝化的影响 Fig. 4 Effect of DO on denitrification of YL L 的硝态氮剩余, 还有 20.8 mg/l 亚硝态氮的积累,pH 为 7.5 8.5 时菌株的反硝化效果最好,NO X 去除率达到了 90% 左右,pH 为 9.

原因在于 ph 直接影响到反应体系的氧化还原电位, 过低的 ph 使得体系的 H + 浓度增大, 氧化还原电位增高, 而反硝化必须在体系为还原态的情况下进行, 较低的 ph 会使微生物酶的活性降低, 影响生化反应的进行, 所以刚开始培养时菌株的生长量很小.

4 3 期郭艳丽等 : 一株轻度嗜盐反硝化菌的分离鉴定及特性 397 图 4 DO 对 YL 好氧反硝化的影响 Fig. 4 Effect of DO on denitrification of YL L 的硝态氮剩余, 还有 20.8 mg/l 亚硝态氮的积累,pH 为时菌株的反硝化效果最好,NO X 去除率达到了 90% 左右,pH 为 9.5 时菌株能将 98% 的硝态氮反硝化但培养液中有大量的亚硝态氮积累. ph 为 6.5 时, 根据对反应过程的定时检测可得, 在培养的前 20 h 菌株的生长量很小, 反硝化作用很微弱,20 h 后菌株开始快速的增殖, 反硝化速度加快. 原因在于 ph 直接影响到反应体系的氧化还原电位, 过低的 ph 使得体系的 H + 浓度增大, 氧化还原电位增高, 而反硝化必须在体系为还原态的情况下进行, 较低的 ph 会使微生物酶的活性降低, 影响生化反应的进行, 所以刚开始培养时菌株的生长量很小. 由于反硝化过程是一个产碱的过程, 前 20 h 菌株的微量反硝化产生的 OH 能缓慢改变培养基的 ph, 使培养液的 ph 慢慢升高, 当培养液的 ph 变为适合反硝化细菌生长的微碱环境时, 菌株 YL 开始快速的生长, 反硝化速率明显加快不同碳源对 YL 好氧反硝化的影响在生物反硝化系统中, 反硝化菌利用碳源作为电子供体,NO 2 和 NO 3 作为电子受体, 将 NO 2 和 NO 3 还原, 同时达到去除有机物的图 5 ph 值对 YL 脱氮效果的影响 Fig. 5 Effect of ph on denitrification of YL 效果, 可见碳源是反硝化过程不可少的因素. 在生物脱氮中使用较多的碳源是甲醇, 但甲醇有毒, 一般不用于处理饮用水 ; 糖类物质如葡萄糖蔗糖是质优价廉的化工原料, 作为反硝化的碳源处理效果也比较理想, 本实验采用的 7 种碳源中有 3 种糖类, 分别为葡萄糖蔗糖乳糖. 由图 6 可以看出, 乙酸钠蔗糖为菌株 YL 进行反硝化作用较好的碳源, 以蔗糖为碳源时反硝化效果最好,NO X 去除率达到了 99.8%; 菌株能利用葡萄糖柠檬酸钠丁二酸钠为碳源进行反硝化, 但是菌株的 NO X 去除率不高, 培养液中有大量的 NO 3 剩余 ; 不能以碳酸钠乳糖碳源进行反硝化. 该菌能在以乙酸钠蔗糖葡萄糖柠檬酸钠丁二酸钠碳源的培养液中生长, 但是不同底物的生长情况和反硝化能力不同, 蔗糖和乙酸钠时该菌进行反硝化较好的碳源. 造成这种现象的原因可能有两种 :) 葡萄糖柠檬酸钠丁二酸钠这 3 种碳源不像甲醇乙醇等低级醇类易于生物降解, YL 对 3 种碳源生物降解性较小, 不能满足 YL 对反硝化能量的需求. 虽然蔗糖和乳糖均为双糖且分子式相同, 但是二者的分子结构不同, 所以 YL 利用这两种碳源时的反硝化效图 6 不同碳源对 YL 反硝化的影响 Fig. 6 Effect of different carbon sources on denitrification of YL 图 7 不同温度对 YL 反硝化的影响 Fig. 7 Effect of different temperatures on denitrification of YL

5 398 应用与环境生物学报 Chin J Appl Environ Biol 6 卷果差异很大 ;2) 不仅碳源种类对反硝化有影响, 合适的 C/N 也是反硝化一个重要的影响因素. 以甲醇为碳源时适宜的 C/N 为 2.8~3.2, 以葡萄糖为碳源时的 C/N 较高, 为 6.0~7.0, 可见不同碳源的适宜碳氮比有很大差异. YL 以葡萄糖柠檬酸钠丁二酸钠为碳源时有一定的反硝化效果, 但是 NO X 去除率不高, 可能是添加的碳源量不合适, 没有达到菌体生长所需的最适 C/N 比不同温度对 YL 好氧反硝化的影响从图 7 可以看出, 菌株 YL 在 20~35 的温度范围内生长, 最适生长温度为 25~30. 温度为 20 时, 菌株 YL 有一定量的生长,NO X 去除率仅为 45.3%, 培养液中有大量的硝酸盐和亚硝酸盐剩余. 温度上升到 25 时, 硝酸盐的去除效果得到明显改善, NO X 去除率达到了 82.%. 温度为 30 时, 菌株 YL 的脱氮效果最好, 培养液中几乎没有硝酸盐的剩余, 亚硝态氮的积累量液很少,NO X 去除率达到了 9%. 温度上升到 35 时, 菌株 YL 的生长和脱氮效果受到明显的抑制, 培养液中硝酸盐的剩余量达到 63.5 mg/l,no X 去除率仅为 4.7%. 温度为 40 时, 菌株 YL 基本不生长, 脱氮效果很差. 可见温度过高或过低会严重影响菌株的生长, 进而影响菌株的脱氮效果. 3 结论从驯化成熟的耐盐活性污泥中筛选得到株轻度嗜盐好氧反硝化细菌 YL, 经形态观察生理生化实验以及 6S rdna 基因序列分析及同源性比对, 菌株 YL 与 Dietzia sp. 的同源性为 98%, 可以初步判定为 Dietzia sp. 目前关于迪茨氏菌国内外仅有一些降解有机烷烃污染物和石油污染物的报道, 但尚未见其降解硝酸盐和亚硝酸盐的报道. 对于该菌属反硝化能力的研究是对细菌分类学很好的补充, 具有较强的理论意义, 关于该菌在降解石油污染物和各种有机烷烃污染物等方面还需进一步研究. 菌株 YL 能在盐度为 0~0% 的培养液中生长, 并有一定的去除率, 可见该菌株能耐受一定的盐度并有很好的反硝化效果, 属于轻度嗜盐菌, 适用于高盐度废水的脱氮处理. 当培养液的初始硝态氮浓度在 20 mg/l 左右时,YL 的脱氮效果几乎不受 DO 值的影响, 可见该菌株在好氧条件下反硝化性能良好, 是一株好氧反硝化菌. YL 在偏碱的条件下有较好的反硝化效果, 最适宜的 ph 值为 7.5~8.5. YL 可利用蔗糖乙酸钠柠檬酸钠葡萄糖和丁二酸钠为碳源进行反硝化, 其中最适碳源为蔗糖. YL 在温度为 25~30 的范围内具有较好的反硝化效果, 温度过高或过低都不利于菌株的反硝化作用. References Rober tson LA, Va n neil EWJ, Tor remans R A M, Kuenen JG. Simultaneous nitrification and denitrification in aerobic chemostat cultures of Thiosphaera pantotroph. Appl Environ Mcrobiol, 988, 54 (): 282~288 2 Takaya N, Antonina MBC, Sakaguchi Y, Kato I, Zhou ZM, Shoun H. Aerobic denitrifying bacteria that produce low levels of nitrous oxide. Appl Environ Microbiol, 2003, 69 (6): 352~ Scholten E, Lukow T, Auling G, Kroppenstedt RM, Rainey FA, Diekmann H, Lukow T. Thaurea mechernichensis sp. nov., anaerobic denitrifier from aleachate treatment plant. Int J Sys Bacteriol, 999, 49: 045~05 4 Wang HY ( 王弘宇 ), Ma F ( 马放 ), Su JF ( 苏俊峰 ), Zuo W ( 左薇 ), Zhang XX ( 张献旭 ), Zhang J ( 张佳 ). Identification and characterization of a bacterial strain C3 capable of aerobic denitrification. Environ Sci ( 环境科学 ), 2007, 28 (7): 548~552 5 Zhang GY ( 张光亚 ), Chen PQ ( 陈培钦 ). Isolation, identification and characteristics of aerobic denitrifying bacteria. J Microbiol ( 微生物学杂志 ), 2005, 25 (6): 23~26 6 Caton TM, Witte LR, Ngyuen HD, Buchheim JA, Buchheim MA, Schneegurt MA. Halotolerant aerobic heterotrophic bacteria from the Great Salt plains of Oklahoma. Microbial Ecol, 2004, 48: 449~ Shapovalova AA, Khijniak TV, Tourova TP, Muyzer G, Sorokin DY. Heterotrophic denitrification at extremely high salt and ph by haloalkaliphilic Gammaproteobacteria from hypersaline soda lakes. Extremophiles, 2008, 2: 69~625 8 Dong XZ ( 东秀珠 ), Cai MY ( 蔡妙英 ). Identification of Common Bacterial Systems Manual. Beijing, China: Science Press ( 北京 : 科学出版社 ), ~59 9 Buchanan R E, Gibbons NE. Bergey's Manual of Systemaic Bacteriology. Beijing, China: Science Press ( 北京 : 科学出版社 ), Weid IV, Marques JM, Cunha CD, Lippi RK, Rosado AS, Lins U, Seldin L. Identification and biodegradation potential of a novel strain of Dietzia cinnamea isolated from a petroleumcontaminated tropical soil. Syst & Appl Microbiol, 2007, 30: 33~339 Liu Z ( 刘真 ), Shao ZZ ( 邵宗泽 ). The diversity of alkane degrading bacteria in the enrichments with deep sea sediment of the South China Sea. Acta Microbiol Sin ( 微生物学报 ), 2007, 47 (5): 869~873 2 Zhou LH ( 周丽华 ), Chen SC ( 陈士超 ), Deng ZR ( 邓志瑞 ), Chrn Q ( 陈沁 ), Zheng LP ( 郑乐平 ), Liu ZX ( 刘志学 ). Culturable bacteria in the sediment of Lake Taihu(Ⅰ): Primary analysis of bacterial diversity. J Lake Sci ( 湖泊科学 ), 2009, 2 (): 27~35 3 Wang ZX ( 王振雄 ), Xu Y ( 徐毅 ), Zhou PJ ( 周培瑾 ). Taxonomy of a new species of haloalkalophilic archaeon. Acta Microbiol Sin ( 微生物学报 ), 2000, 40 (2): 5~ KariminiaaeHamedaani HR, Kanda K, Kato F. Denitrification activity of the bacterium Pseudomonas sp. ASM23 isolated from the Ariake Sea tideland. J Biosci & Bioengin, 2004, 97 (): 39~44 5 Ma F ( 马放 ), Zhou DD ( 周丹丹 ), Wang HY ( 王宏宇 ), Dong SS ( 董双石 ). Character istics of psammophytes of an aerobic denitrifier. J Harbin Inst Technol ( 哈尔滨工业大学学报 ), 2006, 38 (4): 575~577

680 微生物学通报 2008, Vol.35, No.5,, [1 4],,,,, Paracoccus Pseudomonas [2,3] Bacillus [5] Rhodococcus [5],, [6],, [7], 4, 40 h, A1, 99.05% 16S rdna A1 ph A

680 微生物学通报 2008, Vol.35, No.5,, [1 4],,,,, Paracoccus Pseudomonas [2,3] Bacillus [5] Rhodococcus [5],, [6],, [7], 4, 40 h, A1, 99.05% 16S rdna A1 ph A 微生物学通报 MAY 20, 2008, 35(5): 679~684 Microbiology tongbao@im.ac.cn 2008 by Institute of Microbiology, CAS 研究报告生物滤塔体系好氧反硝化菌的分离鉴定与特性研究 * 范利荣黄少斌杨军张永清 ( 510006) 摘要 : 从实验室生物滤塔填料的生物膜上, 经选择性培养基筛选, 分离出 4 株好氧反硝化菌