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1 中华人民共和国国家标准 牛乳检验方法 Analytical methods for milk GB/T 本标准适用于生鲜牛乳的检验 1 取样规则 1.1 每次取样量最少为 250ml 取样时要将牛乳混合均匀 取混合样品时, 可采取在同一个样品瓶中混匀即可 在贮乳缸取样应开动搅拌器 一般取样量为 0.2~1 牛乳样品应贮于 2~6, 以防变质 1.2 检验样品的准备样品应置于 15~20 水中, 保温 10~15min, 然后充分摇匀 冰冻乳应预先加温熔化, 升温到 20 时充分摇匀后再取样 1.3 检验程序 验收牛乳时, 应先做感官鉴定, 是否有异常气味, 如酸味 牛粪味 腥味和煮熟乳气味等 用搅拌棒搅匀牛乳时, 观察下列异常点 a. 色泽是否带红色 绿色或明显的黄色 ; b. 是否有大量杂质, 如煤屑 豆渣 牛粪 尘埃和昆虫等 ; c. 牛乳是否发粘或呈凝块 测定比重和脂肪, 按公式求出牛乳的近似成分, 或测定其干物质 测定酸度 当有疑问时, 按具体情况检查有无防腐剂 掺杂物和病牛乳等 1.4 各项简单的试验与检验, 均于验收牛乳时进行, 并作出牛乳等级的决定 如有疑问或争执时, 其正式鉴定应由工厂化验室或检验科按所采样品进行检验 2 牛乳检验方法 2.1 牛乳新鲜度试验 滴定酸度 : 吸取 10ml 牛乳, 置于 250ml 三角瓶中, 加入 20ml 水, 再加入 0.5m10.5% 的酚酞乙醇溶液, 小心摇匀, 用 0.1 N 氧化钠标准溶液滴至微红色 ( 见注 ), 在 1 min 内不消失为止 消耗 0.1N 氢氧化钠标准溶液的毫升数乘以 10, 即得酸度 ( T) 注 : 滴定酸度终点判定标准颜色的制备方法如下 取滴定酸度测定的同批和同样数量的样品如牛乳 10ml, 置于 250 ml 三角烧瓶中, 加人 20ml 馏水, 再加入 3 滴 0.005% 碱性品红溶液, 摇匀后作为该样品滴定酸度终点判定的标准颜色 其他产品酸度滴定的标准颜色的制备, 可根据其标准滴定酸度测定的取样量和加水稀释量的总容积, 参照本方法按比例增加或减少 0.005% 碱性品红滴数即可 酒精试验 : 于试管内用等量的乙醇 ( 中性 ) 与牛乳混合 ( 一般用 1~2ml 等量混合 ), 振摇后不出现絮片的牛乳符合表 1 酸度标准, 出现絮片的牛乳为酒精试验阳性乳, 表示其酸度较高 试验温度以 20 为标准, 不同温度需进行校正 根据收乳标准, 采用 和 72 的酒精

2 表 1 酒精浓度不出现絮片的酸度 T 以下 T 以下 T 以下 煮沸试验 : 取约 10ml 牛乳, 放入试管中, 置于沸水浴中 5min, 取出观察管壁有无絮片出现或发生凝固现象 如产生絮片或发生凝固, 表示牛乳已不新鲜, 酸度大于 26 T 2.2 牛乳比重测定本标准规定牛乳比重为 20 的牛乳与同体积 4 水的重量比值 仪器 乳稠计 : 牛乳比重用乳稠计测定, 乳稠计有 20 /4 和 15 /15 两种 a+2 =b (1) 式中 :a 20 /4 测得的度数 ; b 15 /15 测得的度数 玻璃圆筒 ( 或 200~250 ml 量筒 ): 圆筒高应大于乳调计的长度, 其直径大小应使乳稠计沉入后, 玻璃圆筒 ( 或量筒 ) 内壁与乳稠计的周边距离不小于 5 mm 方法将 10~25 的牛乳样品小心地注入容积为 250ml 的量筒中, 加到量筒容积的 3/4, 勿使发生泡沫 用手拿住乳稠计上部, 小心地将它沉入到相当标尺 30 处, 放手让它在乳中自由浮动, 但不能与筒壁接触 待静止 1~2 min 后, 读取乳稠计度数, 以牛乳表面层与乳稠计的接触点, 即新月形表面的顶点为准 根据牛乳温度和乳稠计度数, 查牛乳温度换算表 ( 见表 2), 将乳稠计度数换算成 20 或 15 时的度数 20 比重 ( r 4 ) 与乳稠计度数的关系如式 (2) 乳稠计度数 =( r ) 1000 (2) 计算举例中乳试样温度为 16, 用 20 /4 的乳稠计测得比重为 , 即乳稠计读数为 30.5 换算成温度 20 时乳稠计度数, 查表 2, 同 对应的乳稠计度数为 29.5, 即 20 时的牛乳比重为 如若计算全乳固体, 则可换算成 15 /15 的乳稠计度数 这可直接从 20 /4 的乳稠计读数 29.5 加 2 求得, 即 =31.5

3 表 2 牛乳温度 乳稠计读数 换算为 20 时牛乳乳稠计度数 乳脂肪的测定 罗兹哥特里法 仪器 : 罗兹 - 哥特里抽脂瓶 ( 见图 1)

4 中华人民共和国卫生问 发布

5 图 1 罗兹 - 哥特里抽脂瓶 1 玻塞 ( 硬质玻璃 );2 磨砂活塞 ( 硬质玻璃 ) 试剂 : 同 GB 乳粉检验方法 项 方法 : 称取牛乳 10ml( 准确至 0.2mg) 于抽脂瓶中, 以下操作同 GB 项 盖勃法 仪器 : 除另准备 11ml 牛乳吸管 ( 见图 2) 外, 其他同 CB 内容规定 图 2 11mL 牛乳吸管 试剂 : 同 GB 内容规定 方法 : 量取硫酸 10ml, 注入牛乳乳脂计内, 颈口勿沾湿硫酸, 用 11ml 吸管吸取牛乳样品至刻度, 加入同一牛乳乳脂计内, 再加入异戊醇 1 ml, 塞紧橡皮塞, 充分摇动, 使牛乳凝块溶解 将乳脂计放入 65~70 的水浴中保温 5 min, 转入或转出橡皮塞使脂肪柱适合乳脂计刻度部分, 然后置离心机中以离心因素等于 350 旋转 5 min, 再放入 65~70 的水浴中保温 5 min, 取出立即读数, 读数时要将乳脂肪柱下弯月面放在与眼同一水个面上, 以弯月面下限为准 所得数值即为脂肪的百分数 巴布考克法 仪器 : 除另准备 17.6ml 牛乳吸管 ( 见图 3) 外, 其余同 GB

6 项 图 mL 牛乳吸管 试剂 : 硫酸, 比重 1.820~1.825, 分析纯 方法 : 吸取 20 牛乳 17.6ml, 注入巴氏乳脂瓶中, 加等量硫酸, 小心倒入乳脂瓶中, 硫酸流入牛乳下面成一层, 摇动乳脂瓶使牛乳和硫酸混合, 即成棕黑色, 继续摇动 2~3 min, 将乳脂瓶放入离心机中, 以离心因素等于 350 离心 5 min, 取出后向瓶中加 60 热水至分离的脂肪层在瓶颈部刻度处, 再用同样的转速旋转 2 min, 取出置 60 水浴中保温 5 min, 取出, 立即读数 读数方法同盖勃法 所得数值即为脂肪的百分数 2.4 全乳固体测定 减量法 仪器和试剂 带盖铝皿或带盖玻璃皿 : 直径 50~70mm 海砂 方法在带盖铝皿中, 加入海砂 10~20g, 于 98~100 烘箱内供至恒重 吸取 5 ml 牛奶于此铝皿中, 置分析天平上称量 ( 准确至 0.2mg), 再置水浴上蒸干, 擦去皿壁上的水迹, 放入 98~100 的干燥箱中干燥 2 h 后, 加盖取出, 但不要盖紧, 置于干燥器中冷却后称重 ; 再放入烘箱中干燥 2 h 取出, 冷却 20~30min, 将盖盖紧, 称重 如此重复至前后两次重量差不超过 2 mg 为止 计算 W W3 全乳固体 (%)= (3) W W 1 3

7 式中 :W 1 含有海砂的皿加样品重,g; W 2 含有海砂的皿加样品干燥后重,g; W 3 含有海砂的皿重,g 计算法利用式 (4), 可由上述所测得的比重和脂肪含量来计算全乳固体的含量 T=0.25 L+1.2 F+0.14 (4) 式中 :T 全乳固体,%; F 脂肪,%; L 乳稠计 ( 15 /15 ) 度数 非脂乳固体 (%)= T-F (5) 式中符号同式 (4) 2.5 掺水或脱脂的检验与计算对原乳有怀疑时, 应采用 畜舍 乳样进行分析 在无法取得 畜舍 乳样时, 亦可从乳样所测出的成分计算与规定标准相差之百分率 但在判断掺水时, 应以其他方法, 如乳清折射率测定或冰点测定来鉴定 E E 加水百分率 = (6) E F F 加入脱脂乳百分数 ( 或取出脂肪百分率 )= (7) F 加水和加脱脂乳的百分数 : F A=100- ( 1 100) (8) F E 加水百分数 B=100- ( 1 100) (9) E 加脱脂乳百分数 =A-B (10) 式中 :E 畜舍 乳样中或标准规定的非脂乳固体百分数 ; E 1 被检验乳样中的非脂乳固体百分数 ; F 畜舍 乳样中或标准规定的脂肪百分数 ; F 1 被检验乳样中的脂肪百分数 2.6 异常乳的检出 氯糖数的测定 乳糖的测定 : 参照 GB 款 氯化物的测定 : 用吸管吸取 20ml 牛乳, 注入 200ml 容量瓶中, 加入 10ml 20% 的硫酸铝溶液及 8 ml2 N 氢氧化钠溶液, 混合均匀, 加水至刻度, 混匀后过滤 取 100ml 滤液, 注入 250ml 三角瓶中, 加入 1 ml 10% 的铬酸钾溶液, 用 N 的硝酸银溶液 ( 每升水溶入 4.788g 硝酸银, 需标定 ) 滴定到红砖色 (1 ml N 的硝酸银相当于 1 mg 氯 ) 注 : 滴定前, 须用石蕊试纸测定溶液酸碱性 如果呈酸性, 则须事先用氢氧化钠溶液中和至中性 V 10 氯 % = (11) 式中 :V 滴定时用去硝酸银的毫升数 ; 正常牛乳的比重 ; V 10 每 100ml 牛乳中含氯量,mg

8 氯糖量 = X 100 L (12) 式中 :X 氯的百分含量,%; L 乳糖的百分含量,% 健康牛乳中的氯糖数不超过 4, 患乳房炎的乳中氯糖数则增高 对病牛乳的检查, 在牛乳发生疑问时, 进行个别牛只的牛乳检查有相当意义 血与脓的检出用小刀尖取少量的二氨基联苯, 将其溶解在盛有 2 ml96% 的乙醇试管内, 加人 2 ml 3% 的过氧化氢溶液, 摇匀后再加入 3~4 滴冰乙酸 在上述配制的试剂中, 加入 4~5ml 牛乳, 如有血与脓存在时, 在 20~30s 后, 液体呈深蓝色 2.7 机械杂质的检出对牛乳中杂质存在的程度有怀疑者, 可取 500ml 或 250ml 牛乳进行杂质度的测定, 测定方法可参阅 GB 条中杂质度的测定, 测定结果要换算成 1 L 牛乳中所含杂质的毫克数 2.8 碱性物质的检出 玫瑰红酸定性法 试剂 : 玫瑰红酸 (0.05% 乙醇溶液 ) 方法 : 于盛有 5 ml 牛乳的试管中加入 5 ml 玫瑰红酸液, 用手指堵住管口, 摇匀, 乳中如无碱性物质则是黄色, 有碱时则呈玫瑰红色, 其加入量与颜色的深浅成正比 ( 在检验时应做对照试验 ) 牛乳灰分碱度测定法在坩埚或瓷皿中, 注入 25 ml 牛乳, 置于浴上蒸干, 然后在电炉上灼烧成灰 灰分用 50ml 热水分数次浸渍, 并用玻璃棒捣碎灰块, 过滤, 滤纸及灰分残块用热水冲洗 滤液中加入数滴酚酞指示剂, 用 0.1N 盐酸标准溶液进行滴定 1 ml 0.1N 盐酸标准溶液相当于 g 碳酸钠 牛乳中碳酸钠正常含量为 0.025% 碳酸钠 V 加入量 (%)= ( ) (13) 式中 :V 消耗 0.1N 盐酸标准溶液的毫升数 2.9 乳房炎的检出 试剂配制方法称取 60g 碳酸钠 (Na 2 CO 3 10H 2 O, 化学纯 ) 溶于 100ml 蒸馏水中, 称取 40g 无水氯化钙溶于 300ml 蒸馏水中 二者须均匀搅拌 加温 过滤, 然后将二种滤液倾注一起, 予以混合 搅拌 加温和过滤, 于第二次滤液中加入等量的 15 % 的氢氧化钠溶液, 继续搅拌 加温 过滤即为试液 加入溴甲酚紫于试液内, 有助于结果的观察 试剂宜放在棕色玻璃瓶中保存 检验方法吸取乳样 3 ml 于白色平皿中, 加 0.5ml 试液, 立即回转混合, 约 10s 后观察结果 ( 见表 3) 表 3 现象结果无沉淀及絮片 -( 阴性 )

9 稍有沉淀发生 ±( 可疑 ) 肯定有沉淀 ( 片条 ) +( 阳性 ) 发生粘稠性团块并继之分为薄片 ++( 强阳性 ) 有持续性的粘稠性团块 ( 凝胶 ) +++( 强阳性 ) 2.10 蔗糖的检出方法 方法 试剂 乙酸铅 - 氨水溶液 : 将 250g 乙酸铅溶于 600ml 水中, 再加入 250ml 15 % 的氨水 ( 比重为 0.944) 二苯胺试剂 :10ml 10% 的二苯胺 - 乙醇溶液 25ml 冰乙酸和 65ml 浓盐酸混合即成 费林试液 : 甲液和乙液的配制同 GB 款 检验方法取 30 ml 牛乳, 在水浴上加热到 80~90, 加入 30ml 乙酸铅 - 氨水溶液, 用力摇动 0.5min, 过滤 取无色透明滤液 3 ml, 加入等容积的二苯胺试剂, 摇匀, 并在沸水浴上保持 10min, 如有蔗糖存在时,1~2 min 内就有淡蓝色出现,5 min 后变为深蓝色 当在水浴内保持时间超过 10min 时, 痕迹量的乳糖存在也可能出现淡蓝色 为了对照, 可取 4 ml 滤液, 加入等容积的费林试液 ( 甲液 乙液各 2 ml) 置于沸水浴内加热, 如果二苯胺的反应明显, 而没有还原费林试液时, 则证明有蔗糖存在 此法可测出 0.1~1.0% 的蔗糖 方法二取 30ml 牛乳, 加入 2 ml 浓盐酸混合, 过滤 取滤液 15ml, 加入 1 g 间苯二酚, 置于沸水浴中 5 min, 有蔗糖存在时, 即有红色出现 2.11 淀粉的检出取 5 ml 牛乳注入试管中, 稍稍煮沸, 待冷却后, 加入数滴碘液 ( 碘的酒精溶液或 0.1N 的碘液 ), 有淀粉存在时, 则有蓝色或青蓝色沉淀物出现 2.12 熟乳的检出牛乳中有一种酶, 能分解过氧化氢而与色素起作用, 加热后酶即被破坏 试剂 % 的过氧化氢溶液 % 的对苯二胺 方法取 5 ml 牛乳, 放入试管中, 加 0.2ml 1% 的过氧化氢, 摇匀, 再加入 0.2ml 2% 的对苯二胺, 摇匀 生乳或加热至 78 以下者呈青蓝色, 加热至 79~80 者, 0.5 min 后呈淡灰青色, 加热至 80 以上者无颜色出现 2.13 生鲜牛乳中抗生素残留检验牧场内经常应用抗生素治疗乳牛的各种疾病, 特别是乳牛的乳房炎, 有时用抗生素直接注射乳房部位进行治疗, 因此凡经抗生素治疗过的乳牛, 其乳中在一定时期内仍残存着抗生素 对抗生素有过敏体质的人服用后就会发生过敏反应, 也会使某些菌株对抗生素产生抗药性 因此, 检查乳中有无抗生素残留已成为一项急需开展的常规检验工作 TTC( 氯化三苯四氮唑 ) 试验是用来测定乳中有无抗生素残留的较简易方法, 现介绍于下

10 设备和材料 水浴箱 : 一个 温箱 : 一个 锅 : 一个 温度计 : 一支 蜡笔 : 一支 试管架 : 一个 灭菌 10ml 吸管 : 每一份检样需二支 灭菌 lml 吸管 : 每份检样需二支 灭菌 mm 试管 : 每份检样需二支 培养基和试剂 菌种 : 嗜热乳酸链球菌 脱脂乳 : 经 min 灭菌 % 氯化三苯四氮唑水溶液 : 装褐色瓶内于 7 冰箱保存, 临用时 1 5 稀释 检验程序鲜乳中抗生素残留检验程序如下 图 操作步骤 菌液制备 : 将菌种移种脱脂乳经 36±1 15h 培养后, 以灭菌脱脂乳 1:1 稀释待用 取检样 9 ml, 置 mm 试管,80 水浴加热 5 min, 冷却 37 以

11 下, 加菌液 1 ml,36±1 水浴培养 2 h, 加 TTC 0.3ml,36±1 水浴培养 30min, 观察, 如为阳性, 再水浴培养 30 min 做第二次观察 每份检样做二份, 另外再做阴性 阳性对照各一份, 阳性对照管用无抗生素的乳 8 ml 加抗生素及菌液和 TTC 阴性对照管用无抗生素乳 9 ml 加菌液和 TTC 判断方法准确培养 30 min, 观察结果, 如为阳性, 再继续培养 30min 做第二次观察 在观察时要迅速, 避免光照过久干扰, 乳中有抗生素存在, 则在向检样中加入菌液培养时细菌不增殖, 此时由于加入的指示剂 TTC 不还原, 所以不显色 与此相反, 如果没有抗生素存在, 则加入菌液即进行增殖,TTC 被还原而显红色, 也就是说检样呈乳的原色时为阳性, 成红色为阴性 表 4 显色状态标准判断显色状态判断未显色者阳性微红色者可疑桃红色 红色阴性表 5 检测各种抗生素的灵敏度抗生素名称最低检出量青霉毒 单位链霉素 0.5 单位庆大霉素 0.4 单位卡那霉素 5 单位 2.14 细菌总数及大肠菌群检验按 GB 消毒牛乳 附录 B( 补充件 ) 执行 2.15 六六六 滴滴涕检验按 GB 中 2.11 条进行 2.16 汞的检验按 GB 中 2.10 条进行 附录 A 牛乳新鲜度的检验方法 ( 参考件 ) A.1 利色唑林 ( 刃天青 ) 试验 A.1.1 仪器 A ml 带塞刻度试管 A 水浴锅 A ml 吸管 A.1.2 试剂 A 刃天青基础液 : 取 100mg 刃天青 ( 分析纯 ) 于烧杯中, 加少量煮沸过的水溶解, 入 200ml 容量瓶中, 最后加水至刻度, 贮藏在冰箱中, 此液含刃天青 0.05%

12 A 刃天青工作液 : 用煮沸过的 经玻璃器皿蒸馏的水以 1 10 的比例将基础液稀释即可, 工作液贮于棕色瓶中, 避光保存 A.1.3 方法向刻度试管中加入牛乳 10 ml, 加刃天青工作液 1 ml, 混匀, 用灭菌橡胶塞塞好, 但不要塞严, 在 38~40 的水浴中放置 5 min 当试管加热到 57 时, 用胶塞把管口塞住, 慢慢转动试管 ( 不振荡 ), 使受热均匀, 用温度计测被检样液温度 ( 可将温度计放在对照组试管中测得 ), 样液温度在 57 下维持 60 min 根据 20min 和 60min 的观察结果按表 A1 分级 表 A1 级别 乳的质量 乳的颜色 经过 20min 经过 60min 1 良好 青蓝色 青蓝色 2 合格 青蓝色 蓝紫色 3 差 青蓝色或蓝紫色 粉红色 4 劣 白色 经 20min 观察后的记录结果, 除去白色乳试管, 其他试管进行转动, 继续放 入水浴中保温 60min, 记录结果, 试验时试管应当避光 试验用试管需在 160 温度下保温 60min, 干热灭菌后, 用无菌胶塞盖紧 所用胶塞应在杀菌釜中灭菌 ( 压力为 1 kg/cm 2, 保温 10 min) 或煮沸 30min A.2 美蓝 ( 亚甲蓝 ) 试验 A.2.1 仪器 A ml 试管 A 水浴锅 A.2.2 试剂 亚甲蓝溶液 :5 ml 饱和亚甲蓝的乙醇溶液加 195ml 水, 混匀 A.2.3 方法 取 20ml 牛乳放于试管小, 在水浴上加热至 38~40, 加入 1 ml 亚甲蓝溶液, 混匀后将试容置于 38~40 恒温箱小, 经过 20min 2h 和 5.5h, 观察三次褪色 情况, 根据褪色时间将牛乳分为四个等级 ( 见表 A2) 表 A2 级别 乳的质量 褪色时间 相当每毫升牛乳中的细菌总数 1 良好 >5.5h < 合格 2h~5.5h ~ 差 20min~2h ~ 劣 <20min > A.3 牛乳之界限酸度的测定 在试管内加入 5 ml 水 0.25ml 酚酞指示剂 (0.5% 乙醇溶液 ), 再加 5 ml 碱 液 碱液的浓度按所要测定的酸度来决定 测定 18 T 时, 用 5 ml 0.018N 氢氧化钠溶液 测定 20 T 时, 用 5 ml N 氢氧化钠溶液

13 于此准备好的碱液中, 加入 5 ml 牛乳, 摇动混合, 如果牛乳酸度超过限度时, 溶液即行褪色, 当牛乳酸度低于限度时溶液仍呈红色 A.4 牛乳酸度的茜素试验向试管内加 3~5ml 牛乳, 再加入等容积的茜素试剂 ( 茜素溶于 68 的酒精中成为 0.2~0.4% 溶液 ) 加以摇动, 观察混合物颜色的变化与形成絮片的特征, 牛乳内呈乳酸发酵时则颜色变化如下 ( 见表 A3)

14 表 A3 酸度,T 牛乳与茜素混合物的颜色絮片特征 17.5 淡紫红色无絮片 20.0 淡红色无絮片或很细的絮片 22.5 棕红色很细或细的絮片 25.0 红棕色细的或通常的絮片 30.0 黄棕色大的或很大的絮片 35.0 棕黄色或黄色很大的絮片牛乳内有凝乳发酵时, 牛乳保持红色并形成絮片 A.5 牛乳脂肪快速测定 ( 伊尼霍夫氏碱法 ) A.5.1 仪器 A 盖勃牛乳乳脂计 A 恒温水浴锅 A.5.2 试剂 A 碱试剂 : 于第一个烧怀中将 30 g 氢氧化钠用 300ml 水溶解 ; 于第二个烧杯内将 40 g 无水碳酸钠溶于 300 ml 水中 ; 于第三个烧杯内用水将 759 氯化钠加热到 65~70 使其溶解 ; 然后将三种溶液混合到一起, 注入容积为 1000ml 的容量瓶中, 用水加至刻度, 用脱棉滤入试剂瓶中, 塞紧备用 A 异戊醇 - 乙醇混合液 : 将 6.5 份体积的异戊醇与 10.5 份体积的 96 乙醇加以混合 A.5.3 方法用吸管吸取 10ml 碱试剂, 注入乳脂计内, 再用另一牛乳吸管吸取摇匀的牛乳样品 10ml, 注入碱试剂中, 然后再加入异戊醇 - 乙醇混合液 1ml, 用橡皮塞将乳脂计塞紧, 将内容物小心混合 ( 振荡 ), 直至出现泡沫使牛乳凝块溶解为止 将牛乳乳脂计放入 70~73 水浴锅内保持 10min, 约 5 min 振荡一次, 水温勿降至 70 以下 然后将乳脂计倒置, 使橡皮塞向下, 再置 70~73 水浴内保持 10 15min( 时间长短取决于泡沫消失速度 ), 至脂肪柱不含泡沫时取出, 读数, 读数方法同本标准 项规定, 所读数字即为脂肪百分率 附加说明 : 本标准由中华人民共和国轻工业部提出, 由黑龙江省乳品工业研究所归口 本标准由黑龙江省乳品工业研究所负责起草 本标准主要起草人张保锋 李玉贤 郁蕴华 自本标准实施之日起, 原轻工业部部标准 QB 牛乳检验方法 作废

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