鄂卫生计生通〔2018〕69号-附件

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赛仲
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1 DBS 42 湖北省食品安全地方标准 DBS 42/ xxxx 富硒食品中无机硒的测定 201x-xx-xx 发布 201x-xx-xx 实施湖北省卫生与计划生育委员会 79

2 前言第一法 : 由湖北省疾病预防控制中心提出 ; 标准主要起草人 : 黄文耀张颖王华明宋毅史廷明闻胜唐琳吴梦溪杨清清杨涵陈颖第二法 : 由恩施土家族苗族自治州农业科学院和国家富硒产品质量监督检验中心联合提出 ; 标准主要起草人 : 陈永波李卫东黄光昱胡百顺刘淑琴向极钎薛华廖美林秦邦陈娥李红英殷红清朱云芬熊倩周灵陈卉朱发厅马作江吴蓉 ; 本标准由湖北省卫生和计划生育委员会归口 ; 80

3 食品安全地方标准富硒食品中无机硒的测定第一法固相萃取原子荧光光谱法 1. 范围本标准规定了固相萃取 - 原子荧光光谱法测定富硒食品中无机硒 ( 四价硒六价硒 ) 的方法本标准适用于富硒食品中无机硒的测定 2. 原理样品经水浴振荡和超声提取后, 提取出无机硒和有机硒小分子在弱酸性 ph 范围内, 采用强阴离子交换 (SAX) 固相萃取柱 (SPE) 吸附硒酸根 (SeO 2-4 ) 和亚硒酸根 (SeO ), 去除有机硒小分子和样品基体的干扰盐酸溶液洗脱 SeO 4 和 SeO 2-3, 洗 2- 脱液经 6 mol/l 盐酸加热使试样中的 SeO 4 还原成 SeO 2-3, 用硼氢化钠或硼氢化钾使还原成硒化氢 (H 2Se), 由载气 ( 氩气 ) 带入原子化器中进行原子化, 在硒空心阴极灯的发射光激发下产生原子荧光, 其荧光强度在固定条件下与被测液中的硒浓度成正比, 与标准系列比较定量 3. 试剂和材料除非另有说明, 本标准中所使用试剂均为分析纯, 水为 GB/T 6682 中规定的二级水 3.1 试剂硝酸 (HNO 3): 优级纯盐酸 (HCl): 优级纯 81

4 3.1.3 高氯酸 (HClO 4): 优级纯氢氧化钠 (NaOH): 优级纯硼氢化钾 (KBH 4): 优级纯铁氰化钾 [K 3Fe(CN) 6] 3.2 试剂配制硝酸 - 高氯酸混合酸 (9+1): 将 900 ml 硝酸与 100 ml 高氯酸混匀氢氧化钠溶液 (5 g/l): 称取 5 g 氢氧化钠, 加入适量水溶解, 冷却后定容至 1000 ml, 混匀硼氢化钾碱溶液 (8 g/l): 称取 0.8 g 硼氢化钾, 溶于氢氧化钠溶液 (5 g/l) 中, 混匀现配现用铁氰化钾溶液 (100 g/l): 称取 10.0 g 铁氰化钾, 溶于 100 ml 水中, 混匀盐酸溶液 (6 mol/l): 量取 50 ml 盐酸缓慢加入 40 ml 水中, 冷却后定容至 100 ml, 混匀盐酸溶液 (3 mol/l): 量取 25 ml 盐酸缓慢加入适量水中, 冷却后定容至 100 ml, 混匀盐酸溶液 (5+95): 量取 25 ml 盐酸, 缓慢加入 475 ml 水中, 混匀 3.3 标准品硒标准溶液 :1000 mg/l, 或经国家认证并授予标准物质证书的一定浓度的硒标准溶液 3.4 标准溶液的制备硒标准中间液 (10 mg/l), 准确吸取 1.00 ml 硒标准溶液 (1000 mg/l) 于 100 ml 容量瓶中, 加盐酸溶液 (5+95) 定容至刻度, 混匀, 制得 10 mg/l 硒标准中间液硒标准使用液 (100 μg/l): 准确吸取 1.00 ml 硒标准中间液 (10 mg/l) 于 82

5 100 ml 容量瓶中, 加盐酸溶液 (5+95) 定容至刻度, 混匀, 制得 100 μg/l 硒标准使用液硒标准系列溶液 : 分别准确吸取 0.00 ml,0.050 ml,0.10 ml,0.20 ml,0.30 ml,0.50 ml 和 1.0 ml 标准使用液 (100 μg/l) 于 10 ml 容量瓶中, 加入铁氰化钾 (100 g/l)1.0 ml, 用盐酸溶液 (5+95) 定容至刻度, 混匀, 配制成质量浓度分别为 0 μg/l 0.50 μg/l 1.00 μg/l 2.00 μg/l 3.00 μg/l 5.00 μg/l 和 10.0 μg/l 的标准系列溶液注 : 可根据仪器的灵敏度及样品中硒的实际含量确定标准系列溶液中硒元素的质量浓度 4. 仪器和设备注 : 玻璃器皿需以硝酸溶液 (1+4) 浸泡过夜, 用自来水反复冲洗, 最后用实验用水冲洗干净 4.1 原子荧光光度计, 带硒元素空心阴极灯 4.2 电热板 4.3 天平 : 感量为 1 mg 4.4 粉碎机 4.5 烘箱 4.6 超声波清洗器 4.7 低温高速离心机 : 配有 50 ml 与 10mL 离心管适配器, 温度小于 4, 最大转速大于 8000 r/min 4.8 水浴恒温振荡器 4.9 SAX 强阴离子交换柱 :1000 mg/6 ml 或以上 5. 分析步骤 83

6 5.1 试样制备注 : 在采样和制备过程中, 应避免试样污染粮食豆类等样品去杂物后粉粹均匀, 装入洁净塑料瓶内, 密封保存备用蔬菜水果鱼类肉类及蛋类等新鲜样品, 洗净晾干, 取可食部分匀浆, 装入洁净塑料瓶内中, 密封, 于 4 冰箱冷藏备用饮料酒醋酱油食用植物油液态乳等液体样品, 将样品摇匀, 备用 5.2 试样提取固体样品准确称取试样 0.2 g~1.0 g( 精确至 g), 置于 50 ml 塑料离心管中, 准确加入 20 ml 纯水, 涡旋混匀, 超声 10 min 后, 于 80~90 水浴振荡提取 1 h, 其间每隔 20 min 取出上下颠倒, 使样品充分混匀水浴结束后, 再使用超声提取 20 min, 确保样品中无机硒被充分提取提取完毕, 冷却至室温, 以 8000 r/min 离心 15 min 取上层清液, 用氢氧化钠溶液 (5 g/l) 调节 ph 至 4~7 后, 经 0.45μm 针头式有机滤膜过滤, 准确吸取 10 ml 滤液, 待用同时做空白试验对魔芋黑木耳等易溶胀的样品可减少称样量, 增大提取液体积液体样品 ( 水饮料酒醋酱油液体乳等 ) 准确移取试样 ml( 精确到 0.01mL) 于 100 ml 小烧杯中, 加热浓缩至 5 ml 以下, 转移至 10 ml 离心管中, 纯水定容至 10 ml, 涡旋混匀, 超声 10 min 后, 于 80~90 水浴振荡提取 1 h, 其间每隔 20 min 取出上下颠倒, 使样品充分混匀, 水浴结束后, 再使用超声提取 20 min 提取完毕, 冷却至室温, 以 8000 r/min 离心 15 min 取上层清液, 用氢氧化钠溶液 (5 g/l) 调节 ph 至 4~7 后, 经 0.45μm 针头式有机滤膜过滤, 准确吸取 5 ml 滤液, 待用同时做空白试验植物油 84

7 准确称取试样 10.0 g( 精确到 0.001g) 于 50 ml 离心管中, 准确加入 10 ml 纯水, 涡旋混匀, 超声 10 min 后, 于 80~90 水浴振荡提取 1 h, 其间每隔 20 min 取出上下颠倒, 水浴结束后, 再使用超声提取 20 min 提取完毕, 冷却至室温, 以 8000 r/min 离心 15 min 取下层水溶液, 用氢氧化钠溶液 (5 g/l) 调节 ph 至 4~7 后, 经 0.45μm 针头式有机滤膜过滤, 准确吸取 5 ml 滤液, 待用同时做空白试验 5.3 试样净化将上述提取液移入经 10 ml 盐酸 (3 mol/l),20 ml 纯水处理过的 SAX 柱上, 待液体以 <3 ml/min 的速度流出后, 用 10 ml 盐酸 (3 mol/l) 洗脱液以 1 ml/min 洗脱吸附在柱上的无机硒, 收集洗脱液, 待用 5.4 试样消解 5.3 所得洗脱液按照 GB 第一法处理即 : 洗脱液置于锥形瓶中, 加 10.0 ml 硝酸 - 高氯酸混合酸 (9+1) 及几粒玻璃珠, 盖上表面皿冷消化过夜次日于电热板上加热, 并及时补加硝酸当溶液变为清亮无色并伴有白烟时, 再继续加热至剩余体积 2 ml 左右, 切不可蒸干冷却, 再加 5.0 ml 盐酸溶液 (6 mol/l), 继续加热至溶液变为清亮无色并伴有白烟出现, 将六价硒还原成四价硒冷却, 转移至 10 ml 容量瓶中, 加入 2.5 ml 铁氰化钾溶液 (100 g/l), 用水定容, 混匀待测 5.5 测定仪器参考条件根据各自仪器性能调至最佳状态参考条件为 : 负高压 300 V; 灯电流 80 ma; 炉高 8 mm; 载气流速 400 ml/min; 屏蔽气流速 1000 ml/min; 测量方式标准曲线法 ; 读数方式峰面积标准曲线的制作以盐酸溶液 (5+95) 为载流, 硼氢化钾碱溶液 (8 g/l) 为还原剂, 连续用标准系 85

8 列的零管进样, 待读数稳定之后, 将硒标准系列溶液按质量浓度由低到高的顺序分别导入仪器, 测定其荧光强度, 以质量浓度为横坐标, 荧光强度为纵坐标, 制作标准曲线试样测定在与测定标准系列溶液相同的实验条件下, 将空白溶液和试样溶液分别导入仪器, 测其荧光值强度, 与标准系列比较定量 6. 分析结果的表述按式 (1) 计算试样中无机硒的含量 : X ( C- C0) V 2 = m (1) 式中 : X 试样中无机硒的含量, 单位为毫克每千克或毫克每升 (mg/kg 或 mg/l); C 试样溶液中无机硒的质量浓度, 单位为微克每升 (μg/l); C 0 空白溶液中无机硒的质量浓度, 单位为微克每升 (μg/l); m V 试样称样量或移取体积, 单位为克或毫升 (g 或 ml); 试样消化液总体积, 单位为毫升 (ml); 2 试样稀释倍数 ; 1000 换算系数当无机硒含量 1.00 mg/kg( 或 mg/l) 时, 计算结果保留三位有效数字, 当无机硒含量 <1.00 mg/kg( 或 mg/l) 时, 计算结果保留两位有效数字 86

9 7. 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 20% 8. 其他本方法检出限 : 当称样量为 1 g( 或 1 ml), 定容体积为 10 ml 时, 方法检出限为 mg/kg( 或 mg/l), 方法定量限为 0.009mg/kg( 或 mg/l) GB 中总硒含量的单位是 mg/kg 或 mg/l,dbs 42/ 中总硒有机硒含量单位为 μg/100 g 或 μg/100 ml, 二者的换算关系为 1 μg/100 g(ml) =0.01 mg/kg(l) 因强阴离子交换 (SAX) 固相萃取柱为非选择性吸附阴离子, 故使用时, 对硒含量较高的样品注意减少上样量, 扩大柱容量, 防止样品过载第二法原子荧光形态分析法 1 范围本标准规定了用原子荧光形态分析仪测定富硒食品中无机硒 [ 四价硒 Se(IV) 六价硒 Se(VI)] 的方法本标准适用于富硒食品中无机硒的测定 2 原理试样中的无机硒及有机硒小分经磷酸二氢钾 - 硫酸铜溶液浸提后, 用 0.45μm 滤膜过滤, 制成样品溶液, 溶液进样后经高效液相色谱柱分离, 在固定的色谱条件下, Se(IV) 和 Se(VI) 与有机硒小分子完全分开, 无机硒不受其它成分的干扰 ; 单一含硒组分随流动相导入形态分析预处理装置, 在酸性环境中氧化剂 ( 碘化钾 ) 还原剂 ( 硼氢化钾 ) 的作用下转化成硒化氢 (H 2Se), 由载气 ( 氩气 ) 带入原子化器中进行 87

10 原子化, 在硒空心阴极灯的发射光激发下产生原子荧光, 其荧光强度在固定条件下与被测溶液中的硒浓度成正比, 与标准样品比较, 以保留时间定性, 外标法定量 3 试剂和材料除非另有说明, 本方法所用试剂均为分析纯, 水为去离子水或相当纯度的水, 符合 GB/T 6682 的规定 3.1 试剂磷酸二氢钾磷酸氢二铵硫酸铜四丁基溴化铵碘化钾氢氧化钾硼氢化钾甲酸盐酸 : 优级纯甲醇 : 色谱纯 3.2 试剂配制浸提液 0.1 mol/l 磷酸二氢钾溶液 mmol/l 的硫酸铜溶液 : 准确称取 g 磷酸二氢钾, 用少量水溶解后, 再加入 65 mg 五水硫酸铜 (CuSO 4.5H 2O), 溶解后定容至 1000 ml( 如发现有硫酸铜结晶析出, 需摇动使其溶解后使用 ) 流动相 2% 甲醇 +25 mmol/l 磷酸氢二铵 +0.5 mmol/l 四丁基溴化铵溶液 (ph=6.0): 称取 88

11 3.302 g 磷酸氢二铵 g 四丁基溴化铵, 溶于水中, 加入 20 ml 甲醇, 用水定容至 1000 ml, 用甲酸调节 ph=6.0,0.45 μm 滤膜 ( 水相 ) 过滤, 超声脱气 2 min-3 min 流动相如过夜后使用需重新调节 ph 值氧化剂 1% 碘化钾 +0.5% 氢氧化钾溶液 : 称取 10 g 碘化钾,5 g 氢氧化钾, 用水溶解并定容至 1000 ml 还原剂 2% 硼氢化钾 +0.5% 氢氧化钾溶液 : 称取 20 g 硼氢化钾,5 g 氢氧化钾, 用水溶解并定容至 1000 ml 载流 7% 盐酸溶液 : 量取 70 ml 盐酸, 用水定容至 1000 ml 以上溶液 3.2.3~3.2.5 需在使用前配制 3.3 标准品 Se(IV) 标准溶液 : 亚硒酸根标准溶液 (GBW 10032), 浓度为 μg/ml( 以硒计 ) Se(VI) 标准溶液 : 硒酸根标准溶液 (GBW 10033): 浓度为 41.5 μg/ml( 以硒计 ) 3.4 标准溶液配制混合标准使用液 : 将 Se(IV) 标准溶液 (3.3.1) 2.0 ml 和 Se(VI) 标准溶液 (3.3.2) 2.0 ml 一同转入 10 ml 容量瓶中, 用水定容至 10 ml, 配制成标准使用溶液, 此溶液浓度 Se(IV) 为 8.58μg/mL,Se(VI) 为 8.30 μg/ml 混合标准工作液 : 吸取混合标准使用液 (3.4.1) 1.2 ml 于 10 ml 容量瓶中, 用浸提液 (3.2.1) 定容至刻度, 配制成混合标准工作液, 此溶液浓度 Se(IV) 为 89

12 1.030μg/mL,Se(VI) 为 μg/ml 4 仪器和设备实验中所用玻璃仪器均需以硝酸 (1+4) 浸泡过夜, 用自来水反复冲洗, 最后用去离子水冲冼干净 4.1 原子荧光形态分析仪 : 含形态分析预处理装置 ( 带 C 18 色谱柱或相当者 ) 和原子荧光光谱仪 ( 带硒空芯阴极灯 ) 形态分析预处理装置的进样系统也可采用高效液相色谱仪代替, 连接成高效液相色谱 - 原子荧光光谱联用仪 4.2 分析天平 : 感量 0. 1 mg 0.01g 4.3 超级恒温混匀仪 4.4 离心机 4.5 针筒式过滤器, 含 0.45 μm 滤膜 5 分析步骤 5.1 试样制备固体样品 ( 保健食品粮食肉类等 ) 准确称取富硒保健食品硒食品添加剂富硒叶菜类样品 0.3 g~0.5 g( 精确到 g) 或粮食类肉类禽蛋类样品 1 g~2 g( 精确到 0.01 g) 于 10 ml 离心管中, 加入浸提液 (3.2.1), 充分湿润后定容至 10 ml, 在超级恒温混匀仪上 r/min 条件下振荡浸提 30 min,3000 r/min 离心 10 min, 用 0.45 μm 滤膜过滤, 收集滤液待测浸提液体积按 10 ml 计算液体样品 ( 水酒饮料酱油醋等 ) 准确吸取试样 30 ml( 精确到 0.01 ml) 于 100 ml 小烧杯中, 加热浓缩至 1 ml 以下, 转入 10 ml 离心管中, 用浸提液 (3.2.1) 定容至 5 ml, 在超级恒温混匀仪上 r/min 条件下振荡浸提 30 min,3000 r/min 离心 10 min, 用 0.45 μm 90

13 滤膜过滤, 收集滤液待测浸提液体积按 5 ml 计算植物油准确称取试样 6 g( 精确到 0.01 g) 于 10 ml 离心管中, 用浸提液 (3.2.1) 定容至 10 ml, 在超级恒温混匀仪上 r/min 条件下振荡浸提 30 min,3000 r/min 离心 10 min, 取下层水溶液, 用 0.45 μm 滤膜过滤后, 收集滤液待测浸提液体积按 4 ml 计算验以上各类样品溶液如不能在 24 h 内测定, 应于 4 冰箱内保存同时做空白试 5.2 仪器参考条件见表 1 表 1 仪器参考条件流程参数名称参数条件色谱柱 C18 色谱柱 (150 mm 4.6 mm i.d., 5μm ) HPLC 分离 HG 发生 AFS 测定流动相流速 1.0 ml /min 柱温 30 进样体积 100 μl 氧化剂 0.5% KOH +1.0% KI 还原剂 0.5% KOH +2% KBH4 载流 7% HCl 紫外灯开 / 关开 UV 元素灯 Se 负高压 300 V 灯电流 ( 总电流 / 辅电 80/30 ma 流 ) 载气 400 ml/min 屏蔽气 600 ml/min 2% 甲醇 +25 mmol/l+ 磷酸氢二铵 +0.5 mmol/l 四丁基溴化铵溶液,pH= 标准曲线的制作分别吸取 Se(IV) Se(VI) 标准混合液 (3.4.2) 0 ml 0.15mL 0.30 ml 0.60 ml 0.90 ml 1.20 ml 1.50 ml 于 10 ml 刻度试管中, 用 0.1 mol/l 磷酸二氢钾溶液 (3.2.1) 定容至 3 ml, 配制成 Se(IV) 浓度为 0 μg/ml μg/ml μg/ml μg/ml 91

14 0.308 μg/ml μg/ml μg/ml;se(vi) 浓度为 0 μg/ml μg/ml μg/ml 0.200μg/mL μg/ml μg/ml μg/ml 的标准系列, 进样量 100 μl, 以标准工作液的浓度为横坐标, 以峰面积响应值为纵坐标, 绘制标准曲线 5.4 试样溶液的测定将试样溶液 100 μl 注入原子荧光形态分析仪进行检测, 采集试样中 Se(IV) 和 Se(VI) 的图谱, 根据标准曲线得到待测液中 Se(IV) 和 Se(VI) 的浓度, 平行测定次数不少于两次 Se(IV) 和 Se(VI) 的标准色谱图见附录 A 6 分析结果的表述样品中 Se(IV) Se(VI) 和无机硒总量的计算见公式 (1) (2) (3): X Se(IV)= (C 1 -C 0) V 1000 m 1000 (1) X Se(VI)= (C 1 -C 0) V 1000 m 1000 (2) 式中 : X T = X Se(IV)+ X Se(VI) (3) XSe(IV) 试样中 Se(IV) 的含量, 单位为毫克每千克 (mg/kg) 或毫克每升 (mg/l); XSe(vI) 试样中 Se(VI) 的含量, 单位为毫克每千克 (mg/kg) 或毫克每升 (mg/l); XT 试样中 Se(IV) 或 Se(VI) 的总量, 单位为毫克每千克 (mg/kg) 或毫克每升 (mg/l); m 试样质量或体积, 单位为克 (g) 或毫升 (ml) C1 从曲线中计算出的试液中 Se(IV) 或 Se(VI) 的浓度, 单位为微克每毫升 (μg/ml); C0 从曲线中计算出的试剂空白液中 Se(IV) 或 Se(VI) 的浓度, 单位为微克每毫升 (μg/ml); V 浸提液体积, 单位为毫升 (ml); 92

15 计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示, 计算结果保留到小数点后二位 7 精密度在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两个测定值算术平均值的 10 % 8 检测限本标准方法仪器检测限 Se(IV) 为 1.2 μg/kg, Se(VI) 为 3.5 μg/kg 本标准固体样品方法检出限为 Se(IV) 为 12 µg/kg,se(vi) 为 35 µg/kg 本标准液体样品方法检出限为 Se(IV) 为 0.2 µg/l,se(vi) 为 0.6 µg/l 本标准液体植物油方法检出限为 Se(IV) 为 0.8 µg/l,se(vi) 为 2.3 µg/l 9 其它 GB 中总硒含量的单位是 mg/kg 或 mg/l,dbs42/ 中总硒有机硒含量单位为 μg/100 g 或 μg/100 ml, 二者的换算关系是 1 mg/kg(l)=100 μg/100 g(ml) 附录 A 无机硒标准样品色谱图 93

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中华人民共和国国家标准 GB 5009.13 2017 食品安全国家标准食品中铜的测定 2017-04-06 发布 2017-10-06 实施中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会国家食品药品监督管理总局发布前言本标准代替 GB/T5009.13 2003 食品中铜的测定 GB5413.21 2010 食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中钙铁锌钠钾镁铜和锰的测定 GB/T23375