4 ( ) 05 35() [] HCG A ( 50 μl) B ( 50 μl) 37 5 min ( β-hcg β-hcg 50 μl) 450 nm 5 (chorionic gonadotropin beta polypertide 5 ).4 RT-PCR 检测 mrna 表达变化 R
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1 ( ) Journal of Nantong University (Medical Sciences) 05 35() 3 * OVCAR-3 高赛楠 **, 张玉泉 ***, 苏敏, 黄华 (,, 600) [ ] 目的 : β 5 (chorionic gonadotropin beta polpeptide 5, ) OVCAR-3 方法 :, OVCAR-3, OVCAR-3, BeWo RT-PCR 5 ( OVCAR-3,,,,BeWo ), 6, 5 5, Ki67 结果 :() BeWo 00%(6/6), OVCAR %(5/6), 33.3%(/6) () BeWo, 结论 : OVCAR-3, [ ] ;β 5 ; [ ] R737.3 [ ] A [ ] (05) Effect of on human epithelial ovarian cancer cell line OVCAR-3 in the tumor formation rates and growth speed in vivo * GAO Sainan **, ZHANG Yuquan ***, SU Min, HUANG Hua ( Department of Obstetrics and Gynecology, Department of Pathology, the Affiliated Hospital of Nantong University, Nantong 600) [Abstract] Objective: To explore the effect of chorionic gonadotropin beta polpeptide 5() on human epithelial ovarian cancer cell line OVCAR-3 in the tumor formation rates and growth speed in vivo. Methods: The overexpressed vector, targeted sirna vector were constructed and transfected into OVCAR - 3 ( empty vector as control). The human choriocarcinoma BeWo cell line with high expressed was used as a positive control. After sorting by flow cytometry, and selected by Blasticidin, the stable vector expression cell lines were obtained. These cells (five groups: untreated OVCAR-3 cells, targeted sirna transfected OVCAR-3 cells, target-off sirna transfected OVCAR-3 cells, overexpressed OVCAR-3 cells and BeWo cells) were injected subcutaneously into the nude mice (6 mice/group). Then the tumor formation rates and growth speed were examined. The expression of Ki67 was detected by the immunohistochemistry. Results: The tumor formation rates of nude mouse xenografts were 00%(6/6) for overexpressed OVCAR-3 and BeWo cells; 83.3%(5/6) for untreated or target-off sirna transfected OVCAR-3 cells group; and 33.3%(/6) for knockdown OVCAR-3 cells. And the speeds of tumor growth were also different, BeWo and overexpressed OVCAR-3 cells were the growth fastest, but the knockdown OVCAR -3 cells were the slowest. Conclusions: may increase the tumor formation rates and growth speed, which may support a new way for ovarian cancer therapy. [Key words] ovarian cancer; chorionic gonadotropin beta polpeptide 5; in vivo DOI:0.644/j.cnki.cn3-807/r (human chorionic gonadotropin HCG) HCG [] HCG * [ ] (30806) ** [ ],,, 987 0,,, : *** [ ], : , jsnt_zhangyuquan@63.com
2 4 ( ) 05 35() [] HCG A ( 50 μl) B ( 50 μl) 37 5 min ( β-hcg β-hcg 50 μl) 450 nm 5 (chorionic gonadotropin beta polypertide 5 ).4 RT-PCR 检测 mrna 表达变化 RNAiso OVCAR-3 Plus PrimeScript TM RT Reagent Kit RNA cdna β-hcg 5 -GCTACTGCCCCACCATGACC ATGGACTCGAAGCGCACATC -3. 材料 OVCAR-3 BeWo β-actin 5 -TGACGTG- SPF 4~6 GACATCCGCAAAG-3 5 -CTGGAAGGTG- BALB/c GACAGCGAGG-3 cdna SPF PCR PCR Invitrogen RP- RT-PCR PCR 94 MI640 Gibco RNA RNAiso Plus PrimeScript TM RT Reagent Kit TaKaRa PCR ( ) (enzyme linked immunosorbent assay, ELISA) %.5 裸鼠皮下移植瘤模型的建立 Ki67 OVCAR-3 OVCAR-3 BeWo 30 5 (. 慢病毒载体转染细胞与细胞分组 OVCAR-3 d BeWo ) 6 0.5% 5 00 μl( ) 4 6 polybrene( 8 μg/ml) 6 6 ml/ MOI 3 ( ) 6 h 6.6 免疫组化 37 polybrene 3 5 min 5%CO 4 h 0 min 95% 0 min 80% 0 min 0 μg/ml Blasticidin 0 min 3%H O 0 min d PBS 5 min 3 RNA 60 5 min PBS 5 min 5 OVCAR-3 ( ) 3.5% 4 PBS 5 min 3 h BeWo PBS 5 min 3 DAB.3 ELISA 检测各组细胞上清液中 β-hcg 水平 50 μl (.7 统计学方法 SPSS 8.0 ) 50 μl( ) 37 t P< min 0 s 3~5 OD 3 5 min s s 7 45 s min PCR
3 ,. OVCAR-3 5. 荧光测定慢病毒载体转染细胞效果 OVCAR-3 ( ). RT-PCR 测定各组细胞中 mrna 的表达 RT-PCR mrna ( ) 3 mrna mrna GAPDH OVCAR-3 mrna.7 免疫组化测定各组中肿瘤细胞增殖指标 Ki67.3 ELISA 测定各组细胞分泌上清液中 的表的表达情况 BeWo 达 ELISA Ki67 Ki67 ( 6 ) ( 3) 3.4 裸鼠皮下移植瘤模型的建立 6 HCG [3-0] ( 4) HCG.5 裸鼠皮下移植瘤的成瘤率比较 BeWo 00%(6/6) OVCAR-3 HCG [3-0] 83.3%(5/6) HCG HCG 33.3%(/6) HCG.6 裸鼠皮下移植瘤的生长速度比较 BeWo HCG ( 5) HCG 3 β-hcg / Unit ml OVCAR-3 BeWo OVCAR-3 * P<0.05 ELISA /cm OVCAR-3 BeWo / α β α α β-hcg 6 β β β3 β5 β7 β8 [-3] 99.7% β5 β3 β8 β5 [3-4] HCG
4 6 ( ) 05 35() HCG H.Melmed [5] adult rat spinal cord [J]. Neurosci Lett, 003, 336(3): HCG [7] Pabon JE, Bird JS, Li X, et al. Human skin contains luteinizing hormone chorionic gonadotropin receptors [J]. Clin Endocrinol Metab, 996, 8(7): [8] Tao YX, Lei ZM, Rao CV. The presence of luteinizing hormone/human chorionic gonadotropin receptors in lactating HCG HCG rat mammary glands[j]. Life Sci, 997, 60(5): [5] [9] Toth P, Li X, Rao CV, et al. Expression of functional human [6] HCG chorionic gonadotropin/human luteinizing hormone re- ceptor gene in human uterine arteries[j]. J Clin Endocrinol Metab,994,79(): [0] Ohba T, Ujioka T, Ishikawa K, et al. Ovarian hyperstimulation syndrome-model rats; the manifestation and clinical implication[j]. Mol Cell Endocrinol, 003, 0(/):47-5. [] [] Michel RM, Aguilar JL, Arrieta O. Human chorionic gonadotropin as an angiogenic factor in breast cancer during HCG HCG pregnancy[j]. Med Hypotheses, 007, 68(5): [] Hamada AL, Nakabayashi K, Sato A, et al. Transfection [ ] of antisense chorionic gonadotropin beta gene into choriocarcinoma cells suppresses the cell proliferation and induces apoptosis[j]. J Clin Endocrinol Metab, 005, 90(8): []. hcg [J]. : , 00, 9(4): [3] Bo M, Boime I. Identification of the transcriptionally active [] Su M, Wei W, Xu X, et al. Role of hcg in vasculogenic mimicry in OVCAR-3 ovarian cancer cell line[j]. Int J Gynecol genes of the chorionic gonadotropin beta gene cluster in vivo[j]. J Biol Chem, 99, 67(5): Cancer, 0, (8): [4] Talmadge K, Boorstein WR, Vamvakopoulus NC, et al. [3] Toth P, Li X, Rao CV, et al. Expression of functional human chorionic gonadotropin/human luteinizing hormone receptor gene in human uterine arteries[j]. J Clin Endocrinol Only three of the seven human chorionic gonadotropin beta subunit genes can be expressed in the placenta[j]. Nucleic Acids Res, 984, (): Metab, 994, 79(): [5] Mukaida H, Toi M, Hirai T, et al. Clinical significance of [4] Berndt S, Perrier d'hauterive S, Blacher S, et al. Angiogenic activity of human chorionic gonadotropin through LH the expression of epidermal growth factor and its receptor in esophageal cancer[j].cancer, 99, 68():4-48. receptor activation on endothelial and epithelial cells of the endometrium[j]. FASEB J, 006, 0(4): [6] Granier G, Marty-Double C. [Gastrointestinal adenocarcinomas with a choriocarcinomatous component: cases [5] Thompson DA, Othman MI, Lei ZM, et al. Localization of receptors for luteinizing hormone chorionic gonadotropin in neural retina[j]. Life Sci, 998, 63(): and a review of 0 cases in the literature][j]. Gastroenterol Clin Biol, 007, 3(0): [ ] [6] Rao SC, Li X, Rao ChV, et al. Human chorionic go- [] nadotropin/luteinizing hormone receptor expression in the
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