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- 涓宋 蓬
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1 第 ３５ 卷第 ７ 期 V ３５, N ７ 草 业 科 学 PRATACULTURALSCIENCE DOI: １０ １１８２９/ n １００１ ０６２９ ２０１７ ０４６３ j １６８５ １６９４ ７/２０１８ 刁桂萍,杨帅,遇文婧 棘孢木霉葡聚糖酶基因 G 草业科学, １ 的克隆及原核表达 ２０１８, ３５( ７): １６８５ １６９４ D GP, YngS, YWJ C n ngndp k xp n g n gng １ m T d m p m P S n, ２０１８, ３５( ７): １６８５ １６９４ 棘孢木霉葡聚糖酶基因 G １ 的 克隆及原核表达 植物 生产层 刁桂萍１,杨 帅１,遇文婧２ ( 东北林业大学林学院,黑龙江 哈尔滨 １５００４０;２ 黑龙江省林科院森林保护研究所,黑龙江 哈尔滨 １５００４０) １ 摘要:从棘孢木霉( T d m p m ) ACCC３０５３６ 中克隆获 得 一 个 葡 聚 糖 酶 基 因 G １,其 DNA 全 长 ９８４bp, 编码 ３２７ 个氨基酸.该葡聚糖 酶 属 于 G d １２ 家 族,推 测 为 β １, ４ 葡 聚 糖 酶,与 深 绿 木 霉 IMI２０６０４０ 的 G d １２ 家族蛋白( XP_０１３９４０３９７ １)有 ９１ 相似性,且亲缘关系较近.运用 qrtpcr 技术检测 ９ 种诱 导 条 件 下 棘 孢 木霉 G １ 基因的表达水平,结果表明, G １ 基因 能 参 与 棘 孢 木 霉 对 山 新 杨 ( Pp d d n P b p md )或杨树病原菌的识别.构建原 核 表 达 载 体 并 获 得 重 组 蛋 白 G １. 酶 活 特 性 分 析 结 果 表 明,该 酶 最 适 ph 为 ４ ５,最适温度为 ４５,且酶活性随诱导时间延长逐渐升高,在 ５ 达到稳定. 关键词:生物防治;山新杨;序列分析; qrtpcr;原核表达;酶活特性分析;生物农药 中图分类号: Q９４３ ２ 文献标志码: A 文章编号: １００１ ０６２９( ２０１８) ０７ １６８５ １０ C n ngndp k xp n g n n G １ mt d m p m g D G ng１,yngs １,Y Wn ng２ p j ( １ S F N F b n,１５００４０,h ng ng,c n; Un,H j ２ F ni n,h ng nga dm F b n,１５００４０,h ng ng,c n) P j,h j Ab :A９８４ bpg n gn ( G １)w nd m T d m p m ACCC３０５３６,nd w, nd n d qn ３２７m n d TG １ p n w b ng G d １２ m, p d d bβ １,４ n TG １ m n d qn ９１ dn n g nd _ w G d １ ２ m nx P ０ １ ３ ９ ４ ０ ３ ９ ７ １ T d I M I ２ ０ ６ ０ ４ ０ U n R T P C R p p gq n,g １ xp n nt p m w mn dnd n nd n nd nnd n, w nd d G １ mp n gn nb w nt p m ndpp pp ng p p gn A p k xp n w dnd mb nn p ng １ p n w b nd Enz nd d p mm phnd mp G １ ４ ５ m n nd４５, p G １ d n w p ng n nd nd np,nd g ５ K d :b n ;Pp d d n P b ; qn n ;qrtpcr;p k pmd w xp n;nz ;b g gn m C ng :D G ng Em : dgp２００３ １２６ m p pnd 收稿日期: 接受日期: ２０１７ ０９ １４ ２０１７ １２ ２１ 基金项目:中央高校基础科研业务费专项基金项目( ２５７２０１４BA０８);哈 尔 滨 市 科 技 局 青 年 科 技 创 新 人 才 项 目( ２０１３RFQXJ ０２);黑 龙 江 省 级 基 本科研业务费资助项目;哈尔滨市科技局青年科技创新人才项目( ２０１６RQQXJ ２３５) 通讯作者:刁桂萍( １９８１ ),女,黑龙江哈尔滨人,副教授,博士,主要从事森林保护研究.Em : dgp２００３ １２６ m z d n p: kx
2 1686 草业科学第 35 卷 植物致病真菌的细胞壁主要由几丁质 β G1,3G 葡 聚糖 αg1,3g 葡聚糖和 αg1,4g 葡聚糖组成 [1G3]. 葡聚糖 酶具有分解植物病原真菌细胞壁的能力, 因此能够起 [4G6] [7] 到抑制植物真菌的作用.Cdd 等从番茄 (Lpnnm) 的代谢产物中分离纯化到 一种葡聚糖酶, 体外抑菌试验表明, 其能抑制番茄病原 真菌茄链格孢菌 (Amn) 的菌丝生长. 而 在豌豆 (Pmm) 种子中发现分子量为 26kD 的葡聚糖酶, 能抑制菜豆炭疽菌 (CmnG dmnm) 和香蕉炭疽菌 (Gpm mg m) 菌丝的生长 [8]. 此外, 大豆疫霉菌 (PpG j) 能诱导大豆葡聚糖酶活性的增强已被证实, 而且大豆 (Gn mx) 对大豆疫霉根腐病 (P.G j) 的抗性与葡聚糖酶的活性呈正相关关系 [9]. 木霉菌 (Tdmpp.) 在防治植物真菌病害 中起到非常重要的作用 [10]. 它可通过分泌裂解液分 解宿主菌丝的细胞壁, 而这些裂解液中就包括葡聚糖 酶 [11]. 有研究表明, 哈茨木霉 (T.znm) 和绿木 霉 (T.n) 的 βg1,6g 葡聚糖酶对病原菌有较好的生 物防治能力. 哈茨木霉 CECT2413 的 βg1,6g 葡聚糖 酶基因 Bgn16.3 的过表达能使其更有效地抑制灰霉 病菌 (Bn) 核盘菌 (SnG m) 和柑桔褐腐疫霉菌 (PppG [12G13] [14] ) 菌丝的生长.Djn 等将 βg1,6g 葡聚糖 酶基因 TGbgn3 进行沉默和过量表达, 证明绿木霉的 βg1,6g 葡聚糖酶基因 TGbgn3 在其生防机制中起到关键作用. 为进一步探究棘孢木霉 ACCC30536 葡聚糖 酶的生防功能, 揭示木霉生防分子机理奠定理论基础, 也为棘孢木霉酶制剂类生物农药的开发与应用提供理 论与技术参考, 本研究克隆了棘孢木霉 ACCC30536 的葡聚糖酶基因 G1, 并分析了该基因在 9 种诱导条 件下的调控表达水平, 在此基础上, 构建原核表达载体 获得重组葡聚糖酶, 并对重组葡聚糖酶的酶活特性进 行了初步研究. 1 材料与方法 1.1 试验材料 供试菌株棘孢木霉 (T.pm)ACCC30536, 由中国农业微生物保藏管理中心 (ACCC) 提供. 1.2 葡聚糖酶基因 G1 的克隆及序列分析 利用 Tz 法提取棘孢木霉 ACCC30536 的总 RNA, 并反转录获得 DNA. 根据引物 g1:5 GATG GACGATCCGCATCCTCGTCG3 和 g2:3 GGGTGG GAGGATGTTTCTATATCG5 进行 DNA 的 PCR 扩增, 扩增产物转化到大肠杆菌 Tp10 中, 经过 PCR 检测后进行测序 [15]. 对获得的 DNA 序列进行生物 信息学分析 :NCBI Cnd Dmn (p: 进行保守区和蛋白 家族预测, 并寻找相似序列 ;MEGA5.1 软件进行多序 列比对和进化树的建立 ;ExPASPPm(p: 分析分子量 等电点和疏水性 ;SgG np4.0(p: 预测信号肽 ;PCmp9.0 进行亚细胞定位分析 ; Swmd(p: 预测蛋白的三维结构, 模式选自动建模 [16G17]. 1.3 葡聚糖酶基因 G1 在不同培养条件下表达分析 将棘孢木霉 ACCC30536 菌丝体分别培养在 MM [0.5% 葡萄糖,15 g L -1 NH2PO4,5 g L -1 (NH4 ) 2SO4,600 mg L -1 CC2 2H2O,600 mg L -1 MgSO4 7H2O,5 mg L -1 FSO4,2 mg L -1 CC2,1.6 mg L -1 MnSO4,1.4 mg L -1 ZnSO4] C 饥饿 (MMG 葡萄糖 ),N 饥饿 (MMG (NH4) 2SO4), 羧甲基纤维素钠 (MG 葡萄糖 + 羧甲基纤 维素钠 ), 山新杨 (Ppddn P.b. pmd) 根粉 (MM+1% 山新杨根磨粉 ), 山新杨 茎粉 (MM+1% 山新杨茎磨粉 ), 山新杨叶粉 (MM+ 1% 山新杨叶磨粉 ), 病原菌细胞壁 (MM+1% 杨树烂 皮病细胞壁 ) 和病原菌发酵液 (MM+5% 杨树烂皮病 发酵液 ) [17] 共 9 种诱导培养基中, 分别在诱导 和 72 收取菌丝, 提取总 RNA, 反转录后进行 qrtgpcr, 每组重复 3 次.qRTGPCR 反应体系 :10 μl 的 2 SYBR Gn RGmPCR M mx, 0.5μL 引物,2μL 的 DNA,ddH2O 定量至总体积 20 μl.qrtgpcr 反应条件为 :95 预变性 30;95 变性 5,59 退火 15,72 延伸 10;82, 读板 1 ;45 个循环 ;55~95, 每间隔 0.5 读板 1. 并采 用 2 -ΔΔCT 方法计算基因表达量 [17].G1 基因及内参 基因 (An ἀgbn 和 βgbn) 引物如表 1 所列. 1.4 葡聚糖酶基因 G1 原核表达载体构建 根据 G1 基因序列和原核表达载体序列设计带 有酶切位点的引物,G1:5 GATCGGGATCCATG GACGATCCGCATCCTCGTCG3 ( 下划线为 BmHI 酶切位点 )G2:5 GCGATGCGGCCGCGGTGGAGG GATGTTTCTATATCG3 ( 下划线为 NI 酶切位 p:kx.z.d.n
3 第 7 期刁桂萍等 : 棘孢木霉葡聚糖酶基因 G1 的克隆及原核表达 1687 表 1 qrtgpcr 引物 Tb1 qrtgpcrpm 基因 引物 序列 (5 G3 ) 产物大小 Gn Pm Sqn(5 G3 ) Szpd/bp G1 G1 GATCTTACTGCCGACAATCT 309 G2 GAACACGCTGTTGATGAGTG αgbn αg1 CTGGTCACGGCTGGACTACAAG 245 αg2 GCATCAAGTCGTCGTCGTCGT βgbn βg1 GTTACCTGACGTGCTCCACCAT 232 βg2 CGGAACATGGCGGTGAACTGT An AG1 AAGGAGTCCGTCGTCGAGGTT 247 AG2 AGTTGAGGGCGGAGCGGATA 点 ). 以棘孢木霉 ACCC30536 的 DNA 为模板,G1 和 G2 为引物进行 PCR 扩增. 用 BmHI 和 NI 限制性内切酶对 PCR 的回收产物及 pgexg4tg2 质粒分别进行双酶切, 用 T4DNA Lg 进行连接后, 转入大肠杆菌 TOP10 感受态中, 在含终浓度为 50 mg L -1 羧苄青霉素的 LB 固体培养基中筛选, 并对 [18] 获得的转化子进行 PCR 和双酶切检测. 1.5 葡聚糖酶基因 G1 的原核表达将重组质粒转入大肠杆菌表达菌株 BL21 中. 将获得的阳性转化子接种于 3 ml 含 50 mg L -1 羧苄青霉素的 LB 液体培养基中,37 过夜培养 12. 次日用新鲜培养基稀释过夜的菌液, 待菌液 OD600 为 0.4~0.6 时, 加入终浓度为 1.0 mm L -1 IPTG, 于 mn -1 培养 6, 进行重组蛋白诱导表达, 以 IPTG 诱导的含 pgexg4tg2 空载的大肠肝菌 BL21 及未诱导的含重组质粒的大肠杆菌 BL21 作为 [15] 对照, 并通过电转化进行蛋白纯化. 1.6 重组葡聚糖酶的酶活特性分析 [19] 采用还原糖测定法, 测定不同 ph( 和 7.0) 及不同反应温度 ( 和 70 ) 对重组葡聚糖酶酶活的影响. 然后在最适温度和 ph 条件下测定不同诱导时间 ( 和 6) 对重组葡聚糖酶活性的影响. 以沸水浴中失活的粗酶液作对照, 每组重复 3 次. 2 结果 2.1 棘孢木霉葡聚糖酶基因 G1 的克隆与序列分析棘孢木霉 G1 基因的 DNA 序列全长为 984 bp, 编码 327 个氨基酸 ( 图 1).PPm 软件分析表明, 该葡聚糖酶的分子由 4956 个原子构成, 分子式为 C1592H2456N406Q494S8, 相对分子量为 , 等电点为 4.76, 含有 20 种氨基酸 ( 表 2). 通过 BP 预测该蛋白属于 GGdG12 家族 ( 图 2A). 葡聚糖酶 G1 具有多个磷酸化位点, 其中有 18 个苏氨酸磷酸化作用位点 (T:18) 13 个丝氨酸磷酸化作用位点 (S:13) 和 5 个酪氨酸磷酸化作用位点 (T:5), 说明该葡聚糖酶磷酸化以苏氨酸和丝氨酸磷酸化为主, 兼有酪氨酸磷酸化 ( 图 2B). 在葡聚糖酶 G1 第 22 和 23 个氨基酸中间有一个信号肽酶剪切位点 LGI LF 存在, 第 35 和 36 个氨基酸中间有一个信号肽酶剪切位点 TGO PP 存在 ( 图 2C). 棘孢木霉 ACCC30536 葡聚糖酶的三级结构与模板 βg1,4g 葡聚糖酶 (47m.1) 的结构有 36% 的相似性 ( 大于 30% 可以期望得到较好的预测结果 ), 由此推测, 棘孢木霉 ACCC30536 葡聚糖酶属于 βg1,4g 葡聚糖酶 ( 图 2D). 2.2 棘孢木霉葡聚糖酶 G1 多序列比对及进化树分析通过 Bp 获得 G1 相似的氨基酸序列, 从中选取相似性较高的 13 个序列进行分析 ( 图 3), 其中深绿木霉 IMI206040(XP_ , 相似度 91%) 贵州木霉 (OPB , 相似度 82%) 绿色木霉 G29G8(XP_ , 相似度 81%) 和里氏木霉 QM6(XP_ , 相似度 79%) 的 GG dg12 家族葡聚糖酶相似度最高. 将 G1 和 13 个相似序列进行进化树分析 ( 图 4), 结果表明 G1 和 13 个相似序列被分成 5 组, 其中 G1 和所有木霉属 p:kx.z.d.n
4 1688 草业科学第 35 卷 表 2 G1 基因的氨基酸组成 Tb2 AmndmpnG1 氨基酸 Amn d 比例 Ppn/ % 氨基酸 Amn d 比例 Ppn/ % 氨基酸 Amn d 比例 Ppn/ % 氨基酸 Amn d 比例 Ppn/ % 氨基酸 Amn d 比例 Ppn/ % A(A) 7.6 Gn (Q) 4.9 L (L) 6.7 S(S) 7.0 P(O) 0.0 Ag (R) 1.5 G (E) 1.8 L(K) 4.0 T(T) 12.2 S(U) 0.0 An (N) 7.6 G(G) 6.1 M(M) 1.8 Tp (W) 1.8 Ax (B) 0.0 Ap (D) 5.8 H(H) 0.6 P(F) 4.0 T(Y) 3.7 Gx (Z) 0.0 C(C) 0.6 I(I) 7.0 P(P) 8.6 V(V) 6.4 X(X) ATG ACG ATC CGC ATC CTC GTC AAC GCT GCG CTG CTG GCC ATC CCC ATC GCC GTG ACG CTG M T I R I L V N A A L L A I P I A V T L 61 GGC ATC TTG TTC GGC CTC CAA TCG CAC CGA GAT GCC ACG GGC CAG CCG CCT TTG TTT GCG G I L F G L Q S H R D A T G Q P P L F A 121 CCT CAA CCG CCG CCG ATT CCA ACT CCT GCA CCG CCG AAA CCC CCA AAG AAT GGC GTC ACC P Q P P P I P T P A P P K P P K N G V T 181 AAG ACG AGA TAT TGC CAA AAG TCG TAT GGA ATT ACA CCA GAT ACC ACT GGG CAG CAG TAT K T R Y C Q K S Y G I T P D T T G Q Q Y 241 ATA TTA AAT CCT AAT CAA TGG AAC TGG AAC GTC GGC GAT CCT GGA CGC CTG TGT ATG AAT I L N P N Q W N W N V G D P G R L C M N 301 GTC ACC ACG TTT AAC AAC GGC ACA TAT GCC ACA AGC ACT ACC GCT CCT CAG TTT ATG GTT V T T F N N G T Y A T S T T A P Q F M V 361 TCA TGG CAA TAT CCC CGT GGC CCA GAG GAC AAC CCT GTA CAC GCT TTC CCC AAC ATC CAG S W Q Y P R G P E D N P V H A F P N I Q 421 ATT GAT ACC GAC GTC ATT CCC GCC ACT GTG AAC AGC ATT TCC AAA GTC GAC ATC GAC ATC I D T D V I P A T V N S I S K V D I D I 481 GAA TGG TCC TAC GGC GTC GGC AAT GAG ACC ACA ACG TCT TCT ACC CTC GCG GAT CTT ACT E W S Y G V G N E T T T S S T L A D L T 541 GCC GAC AAT CTC AAC ACC AAC GTT GCT GTC GAT ATG TTT ATT GAC AGC GAT AAG ACG GCC A D N L N T N V A V D M F I D S D K T A 601 GCT CAG AAC CCT GCC AAG GCC AAG TTC GAA CTC ATG GTT TGG TTT GCG GCC TAT GGT AGT A Q N P A K A K F E L M V W F A A Y G S 661 TCC ACT CAG CCC ATC GGT TTT AGC AAC GGT GCT GTG TCC ACC CAA ACG CTT AAT GGC AAC S T Q P I G F S N G A V S T Q T L N G N 721 ACA TTC AAT CTT TAT GCT GGC ATT AAC ACA GCG ACC AAG CAA AAC GTC ATG ACC TGG TAC T F N L Y A G I N T A T K Q N V M T W Y 781 ACC GAC ACG CCT ATA CAA AAG TTC AAT GGA GAC ATA TCT CCA CTC ATC AAC AGC GTG TTC T D T P I Q K F N G D I S P L I N S V F 841 AAG CTC ACC ACT GTT ACC GAT ATT CCC AAG TCT AGC GAC TAC TTG GGA TAC CTG GCT CTG K L T T V T D I P K S S D Y L G Y L A L 901 GGC TCC GAG GCC TTT TCC GTT GAC AAG ACC GTC ACG CTT TAC GTA CCC CAA CTC TCG ATA G S E A F S V D K T V T L Y V P Q L S I 961 GAT ATA GAA ACA TCC TCC ACCTAG D I E T S S T 图 1 G1 基因的 DNA 序列及推导的氨基酸序列 Fg.1 DNAqnG1gnndpddmndqnG1pn 粗体表示 DNA 序列 ; 斜体表示 DNA 编码的氨基酸序列. BdxndDNAqn;xndmndqnnddbDNA. p:kx.z.d.n
5 第７期 刁桂萍 等:棘孢木霉葡聚糖酶基因 G １ 的克隆及原核表达 １６８９ 图 ２ 葡聚糖酶 G １ 的保守区 磷酸化位点 信号肽及三级结构预测图 F ２ Im n d n,p n, p p d,nd p d dg １ q n g g g p gn A: G １ 的保守区; B: G １ 的磷酸化位点; C: G １ 的信号肽; D: G １ 的三级结构. A: n d g n G １;B:p p n G １;C: pp d G １;D: G １ gn 的 G d １２ 家族葡聚糖酶分成一组( G p１),其 ５ I)培养条件下, G １ 基 因 均 呈 上 调 表 达,分 别 在 １２ G d １２ 家族葡聚糖酶同源性最高,亲缘关系最 ６ ８ ５ ４ ) ) ) ) 的 １２ １３( ２３ １３ ９３( ２３ ４５ ２５( ２５ １０ ５６( ２３ 中 G １ 和 深 绿 木 霉 IMI２０６０４０( XP_０１３９４０３９７ １)的 近,而其他属的 G d １２ 家族葡聚糖酶被分为 ４ 组( G p２ G p３ G p４ 和 G p５). ２ ３ 棘孢木霉葡聚糖酶基因 G １ 在 ９ 种诱导条件下 的表达分析 运用 qrtpcr 技术检测 ９ 种 诱 导 条 件 下 棘 孢 木 霉 G １ 基 因 的 调 控 表 达 水 平 (图 ５). 在 MM (图 ５A) N 饥饿(图５C) １ 山新杨根粉(图５E) １ 山新 杨茎粉(图 ５F) １ 山新杨叶粉(图 ５G) １ 杨树烂皮 病菌细胞壁 (图 ５H)和 ５ 杨 树 烂 皮 病 菌 发 酵 液 (图 ２４ ２４ １２ １２ ２４ 和 ４８ 达 到 峰 值,分 别 为 未 诱 导 时 １ ６ １ ) )和８ )倍.但 是,在 C 饥 饿 ８ ５７( ２３ ６ ０６( ２２ ５７( ２３ (图 ５B)和 羧 甲 基 纤 维 素 钠(图 ５D)培 养 条 件 下, G １ 基 因 呈 下 调 表 达,分 别 在 ２４ 和 １２ 下 调 至 最 低 点, ８ )和 ２１ 分 别 低 于 未 诱 导 时 的 ６ ９６( ２２ １１( ２４ ４ )倍. 说 明 G １ 基 因 在 棘 孢 木 霉 响 应 环 境 压 力 中 起 到 重 要 作 用,并 且 能 够 参 与 棘 孢 木 霉 对 杨 树 ( Pp )或 杨树病原菌的识别. ２ ４ 棘孢木霉葡聚糖酶 G １ 的 SDS PAGE 分析 SDS PAGE检 测 结 果 (图６)显 示,重 组 转 化 子 经 kx z d n p:
6 １６９０ 草 业 科 第 ３５ 卷 学 图 ３ 葡聚糖酶 G １ 及其相似序列的多序列比对 F ３ M q n G １nd m q n g p gnmn 表示同源 dn XP_０１３９４０３９７ １:深绿木霉 T dimi２０６０４０;opb３７６４３ １:贵州木霉 T zn ;XP_０１３９５４３３５ １:绿 色 木 霉 ; g T n G２９ ８;XP_００６９６４５９６ １:里 氏 木 霉 T QM６;XP_００６９６４５９６ １:里 氏 木 霉 T QM６;EQL０１６１８ １:冬 虫 夏 草 Op d p nn CO１８;KIM９９４９５ １:大 孢 树 粉 孢 菌 Od dnd n m Zn;KJK６４２９１ １:寄 生 曲 霉 Ap g p SU １;XP_ ００７８１７１８８ １:罗伯茨绿僵菌 M z m b ARSEF２３;XP_０１４５４３００６ １:罗伯茨绿僵 菌 M z mb nnm ARSEF;XP_０１４５７２９７２ １: 大孢绿僵菌 M z m mj ARSEF２９７;KDB１１７７８ １:稻曲病菌 U g n d n ;KXG４５７９０ １:灰黄霉 P n mg m. IPTG 诱 导 后,泳 道 １ ５ 清 晰 可 见 蛋 白 条 带,大 小 与 ６１ ４４kD的预测蛋白一致,而对照泳道６ 在相应位置 没有条带出现,证 明 G １ 基 因 成 功 整 合 到 大 肠 杆 菌 BL２１ 中;而且诱导 ６ 的重组蛋白明显多于诱导 ２ 和 ４ 的重组蛋白,说 明 IPTG 诱 导 时 间 越 长,转 化 子 分 泌的蛋白越多.对变 性 复 性 后 的 蛋 白 进 行 电 纯 化 后, 获得纯化后的目的蛋白 G １. ２ ５ 重组葡聚糖酶 G １ 酶活特性 首先测定 不 同 浓 度 葡 萄 糖 的 吸 光 度 绘 制 标 准 曲 线,获 得 线 性 回 归 方 程 ０ ０００ ８x ０ ００３ ９, R２ kx z d n p:
7 第 7 期刁桂萍等 : 棘孢木霉葡聚糖酶基因 G1 的克隆及原核表达 1691 图 4 葡聚糖酶 G1 及其相似序列的进化树 Fg.4 PgnG1ndmqn 所有分支显示了可靠的置信度 ( 超过 50% 的引导值 ); 线段上的数字表示碱基替换率. Abnwgnnpp(>50% bp);nmbnngmnndbpmn. 图 5 9 种诱导条件下 G1 基因差异表达 Fg.5 ExpngnG1ndnndnndnndn p:kx.z.d.n
8 1692 草业科学第 35 卷 图 6 重组蛋白的 SDSGPAGE 检测 Fg.6 SDSGPAGEdnmbnnpn M:Pnmk;1G5:IPTG 分别诱导 和 6, 重组转化子 BL21GG1 蛋白 SDSGPAGE 电泳图 ;6:IPTG 诱导 6, 对照转化子 BL21G BL21GpGEXSDSGPAGE 电泳图 ;7: 纯化后的重组蛋白 G1SDSGPAGE 电泳图. M:Pn Mk;1G5:SDSGPAGEnnmnBL21GG1ndd2,3,4,5,nd6,p;6:SDSGPAGEn nnmnbl21gpgexndd6;7:sdsgpagenpdmbnng1. 图 7 重组葡聚糖酶 G1 酶活特性 Fg.7 EnzmppmbnnG 根据回归方程, 分析在不同 ph 不同反应温条件下,G1 活性呈先增加后降低的趋势, 当 ph 为度和不同反应时间下 G1 的酶活特性. 在不同 ph 4.5 时,G1 活性最大, 为 1.81U ml -1 ( 图 7A); 在 p:kx.z.d.n
9 第 7 期 刁桂萍 等 : 棘孢木霉葡聚糖酶基因 G1 的克隆及原核表达 1693 不同反应温度条件下,G1 活性也呈先增加后降低 枯病菌 (Rzn) 的抑制效果较原始木霉 的趋势, 当温度达到 45 时,G1 活性最大, 为 1.86 菌株明显提高, 抑制率提高了 27% [21]. 因此, 本研 U ml -1 ( 图 7B); 在不同反应时间条件下,G1 活 究中的 G1 蛋白可能具有与 βg1,4g 葡聚糖酶一样的 性呈递增的趋势, 在 5 达到峰值, 为 1.80U ml -1, 生防特性. 之后趋于平缓 ( 图 7C). 这些结果表明, 重组葡聚糖酶 在正常环境下葡聚糖酶在生物体中的含量较少, 最适 ph 为 4.5, 偏酸性, 最适温度为 45, 且随着时 活性很低. 当生物体受到外界刺激时, 葡聚糖酶可以 间的增加, 重组酶活性逐渐增加, 并于 5 后趋于平 [9] 被刺激物所诱导和积累. 研究表明, 霍尔斯单轴霉 稳. (Pmpd) 侵染后的向日葵 (Hn 3 讨论与结论 [23] nn), 其葡聚糖酶基因表达量明显升高. 在本研究中, 当棘孢木霉 ACCC30536 与山新杨及杨树病 木霉菌种类繁多, 其分泌的代谢产物也相当丰 原菌互作后,G1 基因的表达也明显上升, 表明 G1 富, 其中抗真菌次生代谢物和细胞壁水解酶协同作 蛋白参与了生防菌棘孢木霉与杨树及杨树病原菌的识 [20] 用可导致植物病原真菌死亡. 细胞壁水解酶中的 别, 从而使杨树 (Pp) 可能通过调节自身防御基 葡聚糖能够水解植物病原真菌细胞壁最外层覆盖的 因表达和生理变化来适应环境或抵御病原真菌. 在此 葡聚糖层, 使细胞壁骨架和细胞受损, 而且抑菌试验 基础上构建了 G1 基因的原核表达载体并获得重组 也表明葡聚糖酶对多种真菌菌丝的生长有抑制作 葡聚糖酶 G1. 酶活特性分析表明, 该重组 G1 [21] 用. 本研究从棘孢木霉 ACCCC30536 菌株基因 活性的最适 ph 为 4.5, 偏酸性, 最适温度为 45 C, 与 组中克隆到一个葡聚糖酶基因 G1,DNA 序列全 玉蜀黍赤霉菌 (Gbbz) 的 βg1,4g 葡聚糖酶重 长 984bp, 由 327 个氨基酸组成, 通过生物信息学分 [23] 组蛋白酶酶活特性报道结果一致. 此外, 重组酶酶 析推测此酶属于 βg1,4g 葡聚糖酶. 一些研究表明, β G 活受时间影响较大, 随着时间的增加, 酶活也逐渐增 1,4G 葡聚糖酶在纤维素的水解过程中起着非常关键 加, 并于 5 后趋于平稳. 以上这些研究结果将为进 的作用, 它能够作用于纤维素链内的 βg1,4 糖苷键, 一步探究葡聚糖酶的生防功能提供理论基础, 也为进 将长链纤维素分子水解成更小分子量的葡萄糖聚合 一步开发和应用葡聚糖酶类生物农药奠定良好的物质 [20,22] 物. 插入 βg1,4g 葡聚糖酶的绿色木霉对小麦纹 基础. 参考文献 Rn: [1] LP,Fng M G,LW F,HCX.CnnndznbnnnnzmBGdβGgG nndxnxpdne.fems MbgL,2006,261(2):224G230. [2] KnM,BmC W.GwTdmdndwppnmb.JnAg FdCm,2001,49:883G887. [3] BbmnnV,VD,CJ,SkN.PnβG1,3Ggn:TbgnnndngnxpG ngnppgnng.bngl,2012,34:1983g1990. [4] LgéJP.Tw:Abdmng.MMbg,2007,66(2):279G290. [5] Lmón M C,Cn M R,MjR,BnízLT.IndnngndnpTdmzG nm CECT2413bddnbndngdmn.Appd MbgBng,2004,64:675G685. [6] RbJF.EkndSH.Smndnmnmndxnnndxnnd mnppd.bgncm,1982,11:115g132. [7] CddJA,RJS,P M E.Impnggwpm.InnnSgJn,1997,99: 78G84. [8] GmV M,OA EA,XGFJ.AnndbG1,3Ggndmdwp(VgnnG g L.Wp)nbgwngndnpd.JnSnFdnd Ag, 1996,72(1):86G90. [9] 左豫虎, 康振生, 杨传平, 芮海英, 娄树宝, 刘惕若.βG1,3G 葡聚糖酶和几丁质酶活性与大豆对疫霉根腐病抗性的关系. 植物病理 p:kx.z.d.n
10 1694 草业科学第 35 卷 学报,2009,39(6):600G607. ZY H,KngZS,YngCP,RH Y,LSB,LTR.RnbwnβG1,3GgnndnndG nppnbn.appgsn,2009,39(6):600g607.(ncn) [10] SnzL,Mn M,RdndGNdJ,MnE.ExpnnαG1,3Ggndng mpnntg dmpm.febsjn,2005,272:493g499. [11] NngD,NnnH.MppTdmpdn.CndnJnMbg,1996,42: 141G146. [12] GnB,DnzG,HmnGE.Innmmnm,g,ndngxpnwGdgdG ngnzmntdmdnp1.appdndennmnmbg,2001,67(12):5643g5647. [13] Mn M,SnzL,R M,LbA,MnE.Cnngndznbgn16 3,dngβG1,6GgnxG pddngtdmznm mpm.jnappd Mbg,2007,103(4):1291G1300. [14] Djn S,Pz MJ,KnC M.Tbgn3, β G1,6GgnmbnngTdmn,ndn mpmndnpmmm.appdennmnmbg,2006,72(12):7661g7670. [15] HngY,MjG,WngZY,Y WJ,FnHJ,ZngRS,Z,LZ H.FnnnⅡ dpbngn HFB2G6mbngnTdmpm ACCC30536.MbgR,2015,171:8G20. [16] DK,WngZY,ZngRS,WngN,FnHJ,DGP,LZH.CnngndnnppG gnap55mtdmpm ACCC30536.MbgR,2014,169:915G923. [17] FnHJ,LZH,ZngRS,WngN,DK,MjG,DGP,WngZY.FnnnbnGknpG gnmbnngtdmznm.jnmbg,2004,52(2):129g138. [18] SnH T,YngH Q,Yng,LJ,LZY,DM X,CnYX,JngXD.CnnpkxpnG mnmgppppdndmmngnxpdpd.jnsnmdun,2012,32: 185G188. [19] 王苑螈. 毕赤酵母异源表达玉蜀黍赤霉菌 βg1,4g 葡聚糖酶及其酶学特性的研究. 上海 : 上海海洋大学硕士学位论文,2015. WngYY.CznndnnnβG1,4GgnmGbbxpdnPp.MG T.Sng:SngSUn,2015.(nCn) [20] mnngonnna,smnnp.enndpdntdmndgnndnw ppnnpdngngwdndnmb.appdndennnmbg,2002,68(8):3956g [21] BbmnnV,VD,CJ,SkN.PnβG13Ggn:TbgnnndngnxpG ngnppgnng.bngl,2012,34:1983g1990. [22] 李纪顺, 陈凯, 李红梅, 扈进冬, 魏红艳, 杨合同. 通过染色体整合 βg1,4g 葡聚糖酶基因 G4 提高绿色木霉对小麦纹枯病的防治效果. 植物病理学报,2013,39(6):393G400. LJS,CnK,LH M,HJD,WH Y,Yng H T.EnndbGnTdmdgnw bg(rzn)gmmngnmgmβg1,4ggngng4.apg pgsn,2013,43(4):393g400.(ncn) [23] EgC,AzM D,CndM E.βG1,3GGnndnpgnGdpnndnn wcpmnnm ndwmbm.bgpnm,1996,38(3):437g443. ( 责任编辑王芳 ) p:kx.z.d.n
材料! 方法! # 基因的扩增及其序列分析
生物技术通报 黄艳燕 黄靖华 卢福芝 孙靓 彭立新 周兴 黄日波 利用 的方法从鼠李糖乳杆菌基因组 中扩增到 乳酸脱氢酶基因 并连接到载体 上 构建表达质粒 将重组质粒 转化大肠杆菌 重组菌株经 诱导表达 电泳分 析表明 在大肠杆菌中实现了表达 表达产物的分子量约为 同时采用紫外分光光度法测定 乳酸脱氢酶的酶活 测得重组菌株的 乳酸脱氢酶活力为 最适反应温度为 最适 乳酸脱氢酶 克隆 表达 鼠李糖乳杆菌
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结 果 与 讨 论
倪 卓 杜 学 晓 王 帅 邢 锋 以 脲 醛 树 脂 为 囊 壁 双 酚 型 环 氧 树 脂 为 囊 芯 采 用 原 位 聚 合 法 合 成 环 氧 树 脂 微 胶 囊 根 据 化 学 反 应 动 力 学 得 到 脲 醛 树 脂 预 聚 体 及 微 胶 囊 囊 壁 合 成 反 应 过 程 中 的 速 率 方 程 测 定 不 同 温 度 下 甲 醛 浓 度 随 时 间 变 化 的 曲 线 确 定 不
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( ) ( )... 李 雪 岩, 龙 耀 (. 广 西 民 族 大 学 商 学 院, 广 西 南 宁 ;. 中 山 大 学 教 育 学 院, 广 东 广 州 ) : 高 等 教 育 是 专 业 教 育 高 考 是 为 高 等 教 育 服 务 的, 是 为 高 等 专 业 教 育 选 拔 有 专 业 培 养 潜 质 的 人 才 现 行 高 考 制 度 忽 略 专 业 潜 质 的 因 素, 过 份 强
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四 中 央 新 闻 单 位 整 改 名 单 新 闻 单 位 中 国 纪 检 监 察 报 中 国 纪 检 监 察 报 福 建 记 者 站 中 国 纪 检 监 察 报 贵 州 记 者 站 中 国 纪 检 监 察 报 四 川 记 者 站 中 国 纪 检 监 察 报 云 南 记 者 站 检 察 日 报 检 察 日 报 安 徽 记 者 站 检 察 日 报 北 京 记 者 站 检 察 日 报 福 建 记 者 站
福建农林大学硕士学位论文番茄抗叶霉菌相关基因的鉴定及 TRV 16K 基因的功能分析姓名 : 郑璐平申请学位级别 : 硕士专业 : 分子病毒学指导教师 : 吴祖建 ; 蔡新忠 20070401 番茄抗叶霉菌相关基因的鉴定及 TRV 16K 基因的功能分析 作者 : 郑璐平
材 料 方 法 统 计 学 分 析 体 外 作 用 对 细 胞 增 殖 的 影 响
生 物 技 术 通 报 罗 春 燕 官 涛 王 红 宁 杨 艳 姜 蓉 胡 晓 舒 华 自 森 王 建 伟 旨 在 探 讨 人 参 总 皂 苷 对 细 胞 表 达 的 影 响 法 显 示 对 细 胞 增 殖 抑 制 程 度 呈 剂 量 与 时 间 依 赖 性 增 加 且 呈 正 相 关 关 系 流 式 细 胞 术 表 明 能 阻 止 细 胞 从 期 向 期 移 行 激 光 共 聚 焦 显 微 镜 观
评 委 : 徐 岩 宇 - 个 人 技 术 标 资 信 标 初 步 审 查 明 细 表 序 号 投 标 单 位 投 标 函 未 按 招 标 文 件 规 定 填 写 漏 填 或 内 容 填 写 错 误 的 ; 不 同 投 标 人 的 投 标 文 件 由 同 一 台 电 脑 或 同 一 家 投 标 单
评 委 : 徐 岩 宇 - 个 人 清 标 评 审 明 细 表 评 审 因 素 序 号 投 标 单 位 清 标 评 审 1 深 圳 市 创 捷 科 技 有 限 合 格 2 四 川 川 大 智 胜 软 件 股 份 有 限 合 格 3 北 京 航 天 长 峰 科 技 工 业 集 团 有 限 公 司 合 格 4 深 圳 中 兴 力 维 技 术 有 限 合 格 5 深 圳 键 桥 通 讯 技 术 股 份 有
2006年顺德区高中阶段学校招生录取分数线
2014 年 顺 德 区 高 中 阶 段 学 校 考 试 提 前 批 第 一 批 第 二 批 学 校 录 取 根 据 佛 山 市 办 提 供 的 考 生 数 据, 现 将 我 区 2014 年 高 中 阶 段 学 校 考 试 提 前 批 第 一 批 第 二 批 学 校 的 录 取 公 布 如 下 : 一 顺 德 一 中 录 取 分 第 1 志 愿, 总 分 585, 综 合 表 现 评 价 A, 考
算 公 式 为 :G = (t 2 t 1 ) log 2 (log W 2 log W 1 ) 式 中 t 1 和 t 2 为 所 取 对 数 期 两 点 时 间,W 1 和 W 2 为 相 应 时 间 测 得 的 细 胞 含 量 或 OD 值 测 定 微 生 物 的 数 量 有 多 种 不 同
测 定 细 菌 生 长 曲 线 生 92 沈 睿 2912372 同 组 成 员 : 徐 鲁 斌 赵 磊 韦 人 杨 丹 灵 实 验 日 期 :211-5-15 一. 实 验 目 的 1. 了 解 细 菌 生 长 曲 线 特 征, 测 定 细 菌 繁 殖 的 代 时 2. 学 习 液 体 培 养 基 的 配 制 及 注 意 事 项 3. 学 习 液 体 种 子 和 固 体 种 子 的 不 同 接 种
一 公 共 卫 生 硕 士 专 业 学 位 论 文 的 概 述 学 位 论 文 是 对 研 究 生 进 行 科 学 研 究 或 承 担 专 门 技 术 工 作 的 全 面 训 练, 是 培 养 研 究 生 创 新 能 力, 综 合 运 用 所 学 知 识 发 现 问 题, 分 析 问 题 和 解 决
上 海 市 公 共 卫 生 硕 士 专 业 学 位 论 文 基 本 要 求 和 评 价 指 标 体 系 ( 试 行 ) 上 海 市 学 位 委 员 会 办 公 室 二 O 一 二 年 三 月 一 公 共 卫 生 硕 士 专 业 学 位 论 文 的 概 述 学 位 论 文 是 对 研 究 生 进 行 科 学 研 究 或 承 担 专 门 技 术 工 作 的 全 面 训 练, 是 培 养 研 究 生 创
三武一宗灭佛研究
四 川 大 学 博 士 学 位 论 文 三 武 一 宗 灭 佛 研 究 姓 名 : 张 箭 申 请 学 位 级 别 : 博 士 专 业 : 中 国 古 代 史 指 导 教 师 : 杨 耀 坤 20020101 三
(2015-2016-2)-0004186-04205-1 140242 信 号 与 系 统 Ⅰ 学 科 基 础 必 修 课 37 37 1 教 203 17 周 2016 年 06 月 13 日 (08:00-09:35) (2015-2016-2)-0004186-04205-1 141011
关 于 2015-2016 学 年 第 二 学 期 期 末 周 内 考 试 时 间 地 点 安 排 选 课 课 号 班 级 名 称 课 程 名 称 课 程 性 质 合 考 人 数 实 际 人 数 考 试 教 室 考 试 段 考 试 时 间 (2015-2016-2)-0006178-04247-1 130101 测 试 技 术 基 础 学 科 基 础 必 修 课 35 35 1 教 401 17 周
公 开 刊 物 须 有 国 内 统 一 刊 (CN), 发 表 文 章 的 刊 物 需 要 在 国 家 新 闻 出 版 广 电 总 局 (www.gapp.gov.cn 办 事 服 务 便 民 查 询 新 闻 出 版 机 构 查 询 ) 上 能 够 查 到 刊 凡 在 有 中 国 标 准 书 公 开
杭 教 人 2014 7 杭 州 市 教 育 局 关 于 中 小 学 教 师 系 列 ( 含 实 验 教 育 管 理 ) 晋 升 高 级 专 业 技 术 资 格 有 关 论 文 要 求 的 通 知 各 区 县 ( 市 ) 教 育 局 ( 社 发 局 ), 直 属 学 校 ( 单 位 ), 委 托 单 位 : 为 进 一 步 规 范 杭 州 市 中 小 学 教 师 系 列 ( 含 实 验 教 育 管
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药学 实践 杂志 药理 年第 卷第 期 生 物 技 术 药 品 近年 来 的 发 展 杨玉 龙 任海 祥 南 京军 区 南京 总 医 院 南京 本 文 概 述 了 近 年 来 国 内 外 生 物 技 术 药 品 与 生 化 药 品 的 研 究 与 发 展 论 述 了生 物 技 术与 生 物 药 品 摘要 间 的 关 系 介 绍 了 近 代 生物 技 术 在某 些 生 物 药 品 生 产 中 的应 用
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呼 伦 贝 尔 学 院 十 三 五 发 展 规 划 二 〇 一 六 年 三 月 目 录 呼 伦 贝 尔 学 院 十 三 五 发 展 规 划 呼 伦 贝 尔 学 院 十 三 五 专 项 发 展 规 划 呼 伦 贝 尔 学 院 各 学 院 十 三 五 发 展 规 划 - 2 - 呼 伦 贝 尔 学 院 十 三 五 发 展 规 划 序 言 - 1 - 一 指 导 思 想 和 发 展 思 路 二 建 设
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- 1 - - 2 - - 3 - - 4 - - 5 - 做 四 个 全 面 的 宣 传 者 实 践 者 - 6 - - 7 - - 8 - - 9 - - 10 - - 11 - - 12 - - 13 - - 14 - - 15 - - 16 - - 17 - - 18 - - 19 - - 20 - 创 新 调 处 新 机 制 构 筑 稳 定 防 火 墙 - 21 - - 22 - - 23
0 年 上 半 年 评 价 与 考 核 细 则 序 号 部 门 要 素 值 考 核 内 容 考 核 方 式 考 核 标 准 考 核 ( 扣 原 因 ) 考 评 得 3 安 全 生 产 目 30 无 同 等 责 任 以 上 道 路 交 通 亡 人 事 故 无 轻 伤 责 任 事 故 无 重 大 质 量
0 年 上 半 年 评 价 与 考 核 细 则 序 号 部 门 要 素 值 考 核 内 容 考 核 方 式 考 核 标 准 无 同 等 责 任 以 上 道 路 交 通 亡 人 事 故 3 无 轻 伤 责 任 事 故 目 标 30 及 事 无 重 大 质 量 工 作 过 失 故 管 无 其 他 一 般 责 任 事 故 理 在 公 司 文 明 环 境 创 建 中, 无 工 作 过 失 及 被 追 究 的
编号：
编 号 : 企 业 内 高 技 能 人 才 培 养 评 价 实 施 方 案 ( 仅 适 用 于 企 业 特 有 行 业 特 有 工 种 ) 实 施 单 位 ( 公 章 ) 申 报 日 期 年 _ 月 日 1 企 业 内 高 技 能 人 才 培 养 评 价 项 目 实 施 方 案 申 报 表 项 目 名 称 等 级 项 目 性 质 课 时 申 报 单 位 联 系 人 通 讯 地 址 电 话 手 机 电
人 工 抗 原 的 鉴 定
生 物 技 术 通 报 张 海 棠 王 自 良 刘 耀 东 传 统 的 理 化 分 析 方 法 在 食 品 污 染 检 测 方 面 发 挥 了 重 要 的 作 用 但 均 存 在 一 定 的 缺 陷 急 需 建 立 快 速 高 效 的 检 测 方 法 食 品 污 染 免 疫 检 测 是 一 种 新 型 的 分 析 方 法 与 理 化 分 析 方 法 相 比 具 有 省 时 省 力 费 用 低 廉 便
二 工 资 制 度 与 教 师 道 德 风 险 行 为
义 务 教 育 学 校 绩 效 工 资 改 革 的 经 济 学 分 析 李 萍 盘 宇 章 吕 荣 西 南 财 经 大 学 成 都 本 文 利 用 委 托 代 理 理 论 对 义 务 教 育 学 校 绩 效 工 资 改 革 中 教 师 行 为 和 地 方 政 府 行 为 分 别 进 行 了 分 析 研 究 发 现 绩 效 工 资 的 最 优 设 计 是 工 资 函 数 中 包 含 一 个 固 定 支
科 学 出 版 社 科 学 出 版 社 前 言 本 书 是 针 对 普 通 高 等 院 校 经 济 类 和 工 商 管 理 类 本 科 专 业 财 务 管 理 学 的 教 学 需 求, 结 合 教 育 部 经 济 管 理 类 本 科 财 务 管 理 学 课 程 教 学 大 纲 编 写 而 成 的 本 书 执 笔 者 都 是 长 期 工 作 在 财 务 管 理 教 学 一 线 的 专 业 教 师,
浙 江 大 学 化 学 工 程 与 生 物 工 程 学 系 硕 士 学 位 论 文 混 合 模 式 吸 附 层 析 分 离 猪 血 免 疫 球 蛋 白 研 究 姓 名 : 庄 甜 甜 申 请 学 位 级 别 : 硕 士 专 业 : 化 学 工 程 指 导 教 师 : 林 东 强 20100101 混
福 建 农 业 学 报 材 料 与 方 法 药 敏 纸 片 及 药 品 培 养 基 菌 种 来 源 仪 器 检 测 抗 菌 活 性 的 测 定 数 据 处 理 结 果 与 分 析 种 抗 菌 药 物 对 临 床 分 离 鸡 大 肠 杆 菌 的 结 果
福 建 农 业 学 报 律 海 峡 刘 建 华 潘 玉 善 胡 功 政 苑 丽 许 瑞 福 建 农 业 学 报 材 料 与 方 法 药 敏 纸 片 及 药 品 培 养 基 菌 种 来 源 仪 器 检 测 抗 菌 活 性 的 测 定 数 据 处 理 结 果 与 分 析 种 抗 菌 药 物 对 临 床 分 离 鸡 大 肠 杆 菌 的 结 果 律 海 峡 等 外 排 泵 抑 制 剂 对 鸡 源 大 肠 杆
附件2：
电 气 工 程 及 其 自 动 化 专 业 本 科 生 培 养 方 案 一 培 养 目 标 本 专 业 培 养 具 备 电 气 工 程 领 域 相 关 的 基 础 理 论 专 业 技 术 和 实 践 能 力, 具 有 宽 广 的 自 然 科 学 基 础 和 良 好 的 人 文 素 养, 富 于 创 新 精 神, 能 在 电 机 与 电 器 电 力 系 统 工 业 自 动 化 以 及 电 气 装 备
中 国 社 会 科 学 年 第 期!!!! ( ( ) % ) ) ) % % % %
转 变 外 贸 发 展 方 式 的 经 验 与 理 论 分 析 中 国 应 对 国 际 金 融 危 机 冲 击 的 一 种 总 结 裴 长 洪 彭 磊 郑 文 在 应 对 国 际 金 融 危 机 冲 击 中 中 国 各 级 政 府 和 外 贸 企 业 不 仅 创 造 了 新 的 实 践 而 且 实 现 了 从 转 变 外 贸 增 长 方 式! 到 转 变 外 贸 发 展 方 式! 的 认 识 飞 跃
附件1：
附 件 5 增 列 硕 士 专 业 学 位 授 权 点 申 请 表 硕 士 专 业 学 位 类 别 ( 工 程 领 域 ): 工 程 硕 士 ( 控 制 工 程 领 域 ) 申 报 单 位 名 称 : 上 海 工 程 技 术 大 学 一 申 请 增 列 硕 士 专 业 学 位 授 权 点 论 证 报 告 申 请 增 列 硕 士 专 业 学 位 授 权 点 论 证 报 告 一 专 业 人 才 需 求
第 卷 第 期 年 月 水 生 生 物 学 报 肠 丫 搔蒸霎 原 位杂 交 和 原 位 技 术在 鱼 类基 因 定位 中 的 应 用 黄 袁仕 取 梅 朱作言 中 国科 学 院 水 生 生 物 研 究 所 淡 水 生 态 与 生 物 技 术 国 家 重 点 实验 室 武 汉 陕 西 师 范 大学 生 命 科 学 院 西 安 # 万 尸 了夭 如 趾 郑 人 扭寿 卿 关 键词 艺 只 妙 毛山知
实 验 方 法 射 线 衍 射 鉴 别 差 示 扫 描 量 热 分 析 红 外 吸 收 光 谱 鉴 定 色 谱 条 件 测 定 法 结 果 与 讨 论 射 线 衍 射 鉴 别
课程类 别
美 声 演 唱 方 向 培 养 方 案 一 培 养 目 标 本 方 向 要 求 学 生 德 智 体 美 全 面 发 展, 培 养 能 在 文 艺 团 体 从 事 声 乐 演 唱 及 能 在 艺 术 院 校 从 事 本 方 向 教 学 的 高 级 门 人 才 二 培 养 规 格 本 方 向 学 生 应 系 统 掌 握 声 乐 演 唱 方 面 的 理 论 和 技 能, 具 备 较 高 的 声 乐 演 唱
2011年第三季度全国星级饭店统计公报
2012 年 第 一 季 度 全 国 星 级 饭 店 统 计 公 报 2012 年 第 一 季 度, 星 级 饭 店 统 计 管 理 系 统 中 13591 家 星 级 饭 店, 有 12823 家 经 营 情 况 数 据 通 过 省 级 旅 游 行 政 管 理 部 门 的 审 核, 完 成 率 为 94.35% 一 总 体 情 况 在 12823 家 星 级 饭 店 中, 除 停 业 的 687
抗 日 战 争 研 究 年 第 期
田 子 渝 武 汉 抗 战 时 期 是 国 共 第 二 次 合 作 的 最 好 时 期 在 国 共 合 作 的 基 础 上 出 现 了 抗 日 救 亡 共 御 外 侮 的 局 面 这 个 大 好 局 面 的 出 现 与 中 共 长 江 局 的 丰 功 伟 绩 是 分 不 开 的 但 长 期 以 来 由 于 有 一 个 王 明 的 右 倾 错 误 直 接 影 响 了 对 它 的 全 面 科 学 准 确
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( 一 ) 深 刻 认 识 学 习 教 育 的 重 大 意 义 : - 3 - ( 二 ) 明 确 学 习 教 育 的 任 务 目 标 ( 三 ) 把 握 特 点 方 法 - 4 - ( 四 ) 坚 持 六 项 原 则 在 - 5 - ( 五 ) 着 力 解 决 问 题 - 6 - - 7 - - 8 - ( 一 ) 学 党 章 党 规, 进 一 步 明 确 党 员 标 准 树 立 行 为 规 范
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审 核 人 员 资 格 管 理 规 范 版 次 :F/0 附 表 1: QMS/EMS/OHSMS 管 理 体 系 审 核 员 通 用 要 求 申 请 条 件 初 次 综 合 素 质 考 核 越 级 晋 升 条 件 实 习 审 核 员 审 核 员 主 任 审 核 员 1. 高 等 教 育 : 大 学 本 科 以 上 学 历, 或 大 专 学 历 及 相 2. 工 作 1 : ; 3. 专 业 工 作
抗 战 时 期 国 民 政 府 的 银 行 监 理 体 制 探 析 % # % % % ) % % # # + #, ) +, % % % % % % % %
抗 战 时 期 国 民 政 府 的 银 行 监 理 体 制 探 析 王 红 曼 抗 战 时 期 国 民 政 府 为 适 应 战 时 经 济 金 融 的 需 要 实 行 由 财 政 部 四 联 总 处 中 央 银 行 等 多 家 机 构 先 后 共 同 参 与 的 多 元 化 银 行 监 理 体 制 对 战 时 状 态 下 的 银 行 发 展 与 经 营 安 全 进 行 了 大 规 模 的 设 计 与
数 学 标 准 不 练 习 1.1 理 解 问 题 并 坚 持 解 决 这 些 问 题 1.2 以 抽 象 和 定 量 方 式 推 理 1.3 建 构 可 行 参 数 和 评 判 他 人 的 推 理 1.4 使 用 数 学 方 法 建 模 1.5 策 略 性 地 使 用 合 适 的 工 具 1.6
课 程 表 格 科 学 框 架 不 练 习 1.1 提 问 1.2 开 发 和 使 用 模 型 1.3 规 划 和 开 展 调 查 1.4 分 析 和 解 释 数 据 1.5 使 用 数 学 运 算 信 息 和 计 算 机 技 术 以 及 计 算 思 维 1.6 构 造 解 释 和 设 计 解 决 方 案 1.7 通 过 证 据 进 行 论 证 1.8 获 取 评 估 和 交 流 信 息 跨 领 域
一、中央新闻单位驻地方机构批复保留名单 （一）保留的报纸驻地方机构名单
一 中 央 新 闻 单 位 保 留 名 单 ( 一 ) 保 留 的 报 纸 名 单 新 闻 单 位 人 民 日 报 人 民 日 报 社 安 徽 分 社 人 民 日 报 社 北 京 分 社 人 民 日 报 社 福 建 分 社 人 民 日 报 社 甘 肃 分 社 人 民 日 报 社 广 东 分 社 人 民 日 报 社 广 西 分 社 人 民 日 报 社 贵 州 分 社 人 民 日 报 社 海 南 分 社
李 一 博 孙 立 瑛 靳 世 久 邢 菲 菲 杜 刚 基 于 大 型 常 压 立 式 金 属 储 罐 底 板 在 线 声 发 射 检 测 及 定 位 的 原 理 针 对 声 发 射 检 测 过 程 中 因 声 源 性 质 不 明 确 导 致 的 罐 底 完 整 性 评 价 结 果 不 准 确 的 问 题 采 用 小 波 分 析 方 法 对 罐 底 声 发 射 信 号 进 行 了 分 解 通 过 提
文 化 记 忆 传 统 创 新 与 节 日 遗 产 保 护 根 据 德 国 学 者 阿 斯 曼 的 文 化 记 忆 理 论 仪 式 与 文 本 是 承 载 文 化 记 忆 的 两 大 媒 体 在 各 种 仪 式 行 为 中 节 日 以 其 高 度 的 公 共 性 有 组 织 性 和 历 史 性 而 特 别 适 用 于 文 化 记 忆 的 储 存 和 交 流 节 日 的 文 化 功 能 不 仅 在 于
一 从 分 封 制 到 郡 县 制 一 从 打 虎 亭 汉 墓 说 起
县 乡 两 级 的 政 治 体 制 改 革 如 何 建 立 民 主 的 合 作 新 体 制 县 乡 人 大 运 行 机 制 研 究 课 题 组 引 言 一 从 分 封 制 到 郡 县 制 一 从 打 虎 亭 汉 墓 说 起 二 密 县 在 周 初 是 两 个 小 国 密 国 和 郐 国 三 密 县 的 第 一 任 县 令 卓 茂 四 明 清 时 代 的 密 县 二 从 集 中 的 动 员 体
正 规 培 训 达 规 定 标 准 学 时 数, 并 取 得 结 业 证 书 二 级 可 编 程 师 ( 具 备 以 下 条 件 之 一 者 ) (1) 连 续 从 事 本 职 业 工 作 13 年 以 上 (2) 取 得 本 职 业 三 级 职 业 资 格 证 书 后, 连 续 从 事 本 职 业
1. 职 业 概 况 1.1 职 业 名 称 可 编 程 师 1.2 职 业 定 义 可 编 程 师 国 家 职 业 标 准 从 事 可 编 程 序 控 制 器 (PLC) 选 型 编 程, 并 对 应 用 进 行 集 成 和 运 行 管 理 的 人 员 1.3 职 业 等 级 本 职 业 共 设 四 个 等 级, 分 别 为 : 四 级 可 编 程 师 ( 国 家 职 业 资 格 四 级 ) 三
1600 1000 40 50 2030 2000 采 取 行 动 的 机 会 90% 开 拓 成 功 的 道 路 2
简 略 版 本 :2015 3 10 2016 2021 全 球 卫 生 部 门 病 毒 性 肝 炎 战 略 2016 2021 2015 3 12 2012 2010 2014 2015 2016 2021 140 55% 35% 5 15% 5 20% 2.4 1.3 1.5 1 1600 1000 40 50 2030 2000 采 取 行 动 的 机 会 90% 开 拓 成 功 的 道 路
校 级 2 3 年 1 分 /10 万 双 语 示 范 课 程 国 家 级 6 3 年 1 分 /10 万 精 品 教 材 国 家 主 编 2, 副 获 奖 当 年 ( 教 育 部 ) 主 编 1 省 部 级 5 在 研 究 期 间 1 分 /10 万 元 其 它 教 研 课 题 校 级 2 在 研
医 学 院 教 职 工 岗 位 业 绩 考 核 计 分 标 准 2015.01.23 修 订 版 一 教 学 考 核 标 准 计 分 办 法 1 教 学 课 时 教 学 工 作 量 以 标 准 课 时 为 单 位 计 量, 按 32 标 准 课 时 计 1 分 理 论 课 : 讲 课 分 值 =E 总 学 时 /32 式 中,m 为 听 课 学 生 数 ( 不 含 进 修 生 跟 班 重 修 生 );E
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第 第 卷 海 欺 环 洋 科 境 学 月 年 铜 锌 镐 汞 锰 铬 对 斑 节 对 虾仔虾 急性 致毒 的研 究 高淑 英 邹栋梁 厦 门 大学 海洋 系 厦 门 摘 仔虾 的 急 性 致 毒 效 应 土 本文在恒温 要 结果 表 明 值 分别 为 充 气条 件下 研 究 了 值分 别为 十 对斑节对虾 对 斑 节对 虾 仔 虾 值分 别 为 值 分别 为 六 种重 金 属 的 毒性 顺 序 为
第 期 李 伟 等 用 方 法 对 中 国 历 史 气 温 数 据 插 值 可 行 性 讨 论
李 伟 李 庆 祥 江 志 红 使 用 插 值 方 法 对 已 经 过 质 量 控 制 和 均 一 化 的 年 月 年 月 中 国 全 部 基 本 基 准 站 气 温 资 料 逐 月 进 行 空 间 插 值 通 过 站 点 的 实 际 序 列 与 插 值 后 格 点 序 列 进 行 比 较 针 对 相 关 系 数 和 线 性 趋 势 等 多 个 量 来 检 验 方 法 对 气 候 资 料 插 值 的
刘 宏 明 连 传 宝 综 述 肠 道 细 胞 色 素 和 糖 蛋 白 对 口 服 药 物 生 物 利 用 度 的 影 响 包 括 的 作 用 及 与 的 联 合 作 用 收 集 阅 读 并 分 析 近 十 年 来 关 于 肠 道 细 胞 和 影 响 口 服 药 物 生 物 利 用 度 的 文 献 和 在 胃 肠 道 均 具 有 高 表 达 且 两 者 的 底 物 具 有 显 著 的 重 叠 性 所
2015-2016 学 年 第 二 学 期 集 中 考 试 安 排 (18 周 ) 考 试 日 期 :6 月 27 日 星 期 一 8:10-9:50 第 二 公 共 教 学 楼 A 区 A303 10811046 高 等 数 学 ( 理 二 2) 复 材 1501-2 材 料 科 学 与 工 程
考 试 时 间 2015-2016 学 年 第 二 学 期 集 中 考 试 安 排 (18 周 ) 考 试 日 期 :6 月 27 日 星 期 一 考 场 所 在 教 学 楼 ( 教 学 区 ) 考 试 教 室 课 程 号 课 程 名 考 生 所 在 专 业 ( 班 级 ) 考 生 所 属 学 院 8:10-9:50 第 二 公 共 教 学 楼 A 区 A101 10811026 高 等 数 学 (
内 容 二 : 建 立 并 完 善 了 三 点 的 网 络 教 学 管 理 体 系 内 容 三 : 注 重 培 养 学 生 的 听 说 能 力 14
上 海 大 学 学 报 ( 高 教 科 学 管 理 版 ) 2008 年 增 刊 深 化 基 于 网 络 和 计 算 机 的 大 学 英 语 教 学 改 革 [ 摘 要 ] [ 关 键 词 ] 一 前 言 二 教 学 改 革 实 践 的 具 体 内 容 内 容 一 : 实 践 并 完 善 了 三 主 的 教 学 理 念 肖 福 寿 : 上 海 大 学 外 国 语 学 院 教 授 大 学 英 语 部
王 桂 华 黄 韦 艮 王 辉 基 于 第 二 版 本 潜 热 感 热 和 海 表 温 度 个 参 量 的 年 逐 月 平 均 资 料 利 用 经 验 正 交 方 法 分 解 分 析 了 这 个 参 量 在 南 海 的 时 空 分 布 结 果 表 明 在 夏 季 模 态 潜 热 表 现 为 南 高 北 低 感 热 表 现 为 中 间 低 两 边 高 两 者 主 要 都 是 海 洋 向 大 气 输 送
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国 家 职 业 标 准 1 可 编 程 序 控 制 系 统 设 计 师 国 家 职 业 标 准 1. 职 业 概 况 1.1 职 业 名 称 可 编 程 序 控 制 系 统 设 计 师 1.2 职 业 定 义 从 事 可 编 程 序 控 制 器 (PLC) 选 型 编 程, 并 对 应 用 系 统 进 行 设 计 集 成 和 运 行 管 理 的 人 员 1.3 职 业 等 级 本 职 业 共 设 四
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科 研 进 展 1 科 研 进 展 2 科 研 进 展 图 一, 埃 博 拉 病 毒 采 集 分 布 传 播 路 线 和 进 化 动 力 学 a, 埃 博 拉 病 毒 样 本 采 集 与 测 序 区 域 ;b, 埃 博 拉 病 毒 在 塞 拉 利 昂 的 潜 在 传 播 路 径 ;c,2014 年 埃 博 拉 病 毒 的 进 化 速 率 ;d, 埃 博 拉 病 毒 有 效 种 群 增 长 趋 势 3
第1篇 道路桥梁工程技术核心专业课程标准及学习绩效考评体系
陕 西 铁 路 工 程 职 业 技 术 学 院 课 程 标 准 ( 适 用 建 筑 工 程 技 术 专 业 ) 课 程 名 称 : 单 位 工 程 施 工 组 织 设 计 执 笔 人 : 王 恒 博 审 定 人 : 编 制 时 间 : 年 月 日 陕 西 铁 路 工 程 职 业 技 术 学 院 制 表 二 〇 一 一 年 九 月 课 程 标 准 一 课 程 基 本 信 息 课 程 编 码 略 开 设
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中 国 软 科 学 年 第 期!!!
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第 卷 第 辑 高 明 华 蔡 卫 星 曾 诚 股 权 结 构 与 信 息 披 露 质 量 来 自 证 券 分 析 师 盈 余 预 测 特 征 的 证 据!!
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11.23-11.29 北 京 房 地 产 市 场 周 报 编 号 1 一 土 地 供 应 分 析 宗 地 名 称 北 京 市 顺 义 区 仁 和 镇 05-02-15-1 地 块 R2 二 类 居 住 用 地 05-02-17 地 块 A33 基 础 教 育 用 地 限 价 商 品 住 房 项 目 宗 地 位 置 用 地 性 质 建 设 用 地 面 积 (m 2 ) 规 划 建 筑 面 积 (m
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抗 日 战 争 研 究 % 年 第 期! # # % %
以 翁 文 灏 为 核 心 的 考 察 李 学 通 本 文 以 先 后 任 国 民 政 府 国 防 设 计 委 员 会 秘 书 长 和 军 委 会 资 源 委 员 会 秘 书 长 的 翁 文 灏 为 中 心 考 察 年 国 防 设 计 委 员 会 成 立 至 年 初 战 时 经 济 体 制 建 立 期 间 国 民 政 府 以 工 矿 业 为 重 点 的 抗 战 经 济 准 备 工 作 作 者 认 为