前言本标准代替 GB/T 食品中总汞及有机汞的测定 本标准与 GB/T 相比, 主要变化如下 : 取消总汞测定的第三法二硫腙比色法 建立食品中有机汞测定的液相色谱 - 原子荧光光谱法 (LC-AFS), 替代食品中有机汞测定的气相色谱法 2

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1 中华人民共和国国家标准 GB 食品安全国家标准 食品中总汞及有机汞的测定 - - 发布 - - 实施 中华人民共和国卫生部 发布

2 前言本标准代替 GB/T 食品中总汞及有机汞的测定 本标准与 GB/T 相比, 主要变化如下 : 取消总汞测定的第三法二硫腙比色法 建立食品中有机汞测定的液相色谱 - 原子荧光光谱法 (LC-AFS), 替代食品中有机汞测定的气相色谱法 2

3 食品安全国家标准 食品中总汞及有机汞的测定 第一篇 总汞的测定 1 范围 本标准规定了食品中总汞的测定方法 本标准适用于食品中总汞的测定 检出限 : 原子荧光光谱分析法为 0.15 μg/kg; 冷原子吸收法检出限 : 压力消解法为 0.4 μg/kg, 其他消解法为 10 μg/kg 第一法 原子荧光光谱分析法 2 原理 试样经酸加热消解后, 在酸性介质中, 试样中汞被硼氢化钾 (KBH 4 ) 或硼氢化钠 (NaBH 4 ) 还原成原子态汞, 由载气 ( 氩气 ) 带入原子化器中, 在汞空心阴极灯照射下, 基态汞原子被激发至高能态, 在去活化回到基态时, 发射出特征波长的荧光, 其荧光强度与汞含量成正比, 外标法定量 3 试剂和材料 除非另有说明, 本方法所用试剂均为分析纯, 水为 GB/T 6682 规定的一级水 3.1 试剂 浓硝酸 (HNO 3 ): 优级纯 过氧化氢 (H 2 O 2 ): 30% v/v, 优级纯 浓硫酸 (H 2 SO 4 ): 优级纯 氢氧化钾 (KOH): 优级纯 硼氢化钾 (KBH 4 ): 优级纯 3.2 试剂配制 硫酸 + 硝酸 + 水 (1+1+8): 量取 10 ml 硝酸和 10 ml 硫酸, 缓缓倒入 80 ml 水中, 冷却后小心混匀 3

4 3.2.2 硝酸溶液 (1+9): 量取 50 ml 硝酸, 缓缓倒入 450 ml 水中, 混匀 氢氧化钾溶液 (5g/L): 称取 5.0 g 氢氧化钾, 纯水溶解定容至 1.0 L, 混匀 硼氢化钾溶液 (5g/L): 称取 5.0 g 硼氢化钾, 溶于 5.0 g/l 的氢氧化钾溶液中, 并稀释至 1.0 L, 混匀 当日配制使用 3.3 标准品 : 氯化汞 (HgCl 2 ), 纯度 98% 3.4 标准溶液配制 汞标准储备液 (1.000 mg/ml): 精密称取 g 于硅胶干燥器中干燥过的氯化汞, 加硫酸 + 硝酸 + 水 (1+1+8) 溶解后移入 100 ml 容量瓶中, 并稀释至刻度, 混匀 或用有证的标准溶液 汞标准使用溶液 : 用移液管吸取汞标准储备液 (1.000 mg/ml)1.00 ml 于 100 ml 容量瓶中, 用硝酸溶液 (1+9) 稀释至刻度, 混匀, 此溶液浓度为 10 μg/ml 再分别吸取 10 μg/ml 汞标准溶液 1.00 ml 和 5.00 ml 于两个 100 ml 容量瓶中, 用硝酸溶液 (1+9) 稀释至刻度, 混匀, 溶液浓度分别为 100 ng/ml 和 500 ng/ml, 分别用于测定低浓度试样和高浓度试样制作标准曲线 4 仪器和设备 4.1 双道原子荧光光度计 4.2 高压消解罐 (100 ml 容量 ) 4.3 微波消解仪所用玻璃器皿均需以硝酸 (1+4) 浸泡过夜, 用水反复冲洗, 最后用去离子水冲冼干净 5 分析步骤 5.1 试样制备 高压消解法本方法适用于粮食 豆类 蔬菜 水果 瘦肉类 鱼类 蛋类及乳与乳制品类食品中总汞的测定 粮食及豆类等干样准确称取经粉碎混匀过 40 目筛的干样 0.2~1.00 g( 精确至 g), 置于聚四氟乙烯塑料内罐中, 加 5 ml 硝酸, 混匀后放置过夜, 再加 7 ml 过氧化氢, 盖上内盖放入不锈钢外套中, 旋紧密封 然后将消解器放入普通干燥箱 ( 烘箱 ) 中加热, 升温至 120 后保持恒温 4

5 2~3 小时, 至消解完全, 自然冷至室温 将消解液用硝酸溶液 (1+9) 定量转移并定容至 25 ml, 摇匀 同时做试剂空白实验 待测 蔬菜 瘦肉 鱼类及蛋类蔬菜 瘦肉 鱼类及蛋类水分含量高的鲜样用捣碎机打成匀浆, 称取匀浆 1.00~5.00 g, 置于聚四氟乙烯塑料内罐中, 加盖留缝放于 65 鼓风干燥烤箱或一般烤箱中烘至近干, 取出, 以下按 自 加 5 ml 硝酸 步骤操作 微波消解法称取 0.10~0.50 g 试样于消解罐中加入 1~5 ml 硝酸,1~2 ml 过氧化氢, 盖好安全阀后, 将消解罐放入微波炉消解系统中, 根据不同种类的试样设置微波炉消解系统的最佳分析条件 ( 参见表 1~2), 至消解完全, 冷却后用硝酸溶液 (1+9) 定量转移并定容至 25 ml( 低含量试样可定容至 10 ml), 混匀待测 表 1. 粮食 蔬菜 鱼肉类试样微波消解条件 步骤 功率 (%) 压力 psi 升压时间 (min) 保压时间 (min) 排风量 (%) 表 2. 油脂 糖类试样微波消解条件 步骤 功率 (%) 压力 psi 升压时间 (min) 保压时间 (min) 排风量 (%) 仪器参考条件 光电倍增管负高压 :240 V; 汞空心阴极灯电流 :30 ma; 原子化器温度 :300, 原子 5

6 化器高度 8.0 mm; 氩气流速 : 载气 500 ml/ml; 屏蔽气 1000 ml/min ( 注 : 原子荧光仪品牌较多, 仪器分析条件应设置仪器所提示的分析条件, 仪器稳定后, 测标准系列, 至标准曲线的相关系数 r>0.999 后测试样 试样前处理可适用任何型号的原子荧光仪 ) 5.3 标准曲线的制作 低浓度标准系列分别吸取 100 ng/ml 汞标准使用液 ml ml ml ml ml 于 25 ml 容量瓶中, 用硝酸溶液 (1+9) 稀释至刻度, 混匀 各自相当于汞浓度为 1.00 ng/ml 2.00 ng/ml 4.00 ng/ml 8.00 ng/ml 10.0 ng/ml 此标准系列适用于一般试样测定 高浓度标准系列分别吸取 500 ng/ml 汞标准使用液 0.25 ml 0.50 ml 1.00 ml 1.50 ml 2.00 ml 于 25 ml 容量瓶中, 用硝酸溶液 (1+9) 稀释至刻度, 混匀 各自相当于汞浓度 5.00 ng/ml ng/ml ng/ml ng/ml ng/ml 此标准系列适用于鱼及含汞量较高的试样测定 5.4 试样溶液的测定设定好仪器最佳条件, 连续用硝酸溶液 (1+9) 进样, 待读数稳定之后, 转入标准系列测量, 绘制标准曲线 转入试样测量, 先用硝酸溶液 (1+9) 进样, 使读数基本回零, 再分别测定试样空白和试样消化液, 每测不同的试样前都应清洗进样器 试样测定结果按公式 (1) 计算 6 分析结果的表述 试样中汞含量按公式 (1) 计算 : 式中 : (C C ) V (1) m X 0 X 试样中汞的含量, mg/kg( 或 mg/l); C 试样消化液中汞的浓度,ng/mL; C 0 试剂空白液中汞的浓度,ng/mL; V 试样消化液总体积,mL; m 试样质量 ( 体积 ),g(ml) 6

7 以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示, 结果保留三位有效数字 7 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 20% 第二法 冷原子吸收光谱法 8 原理 汞蒸气对波长 nm 的共振线具有强烈的吸收作用 试样经过酸消解或催化酸消解使汞转为离子状态, 在强酸性介质中以氯化亚锡还原成元素汞, 以氮气或干燥空气作为载体, 将元素汞吹入汞测定仪, 进行冷原子吸收测定, 在一定浓度范围其吸收值与汞含量成正比, 外标法定量 ( 一 ) 压力罐消解法 9 试剂和材料 除非另有说明, 所用试剂均为分析纯, 水为 GB/T 6682 规定的一级水 9.1 试剂 浓硝酸 (HNO 3 ): 优级纯 浓盐酸 (HCl): 优级纯 过氧化氢 (H 2 O 2 ):30% v/v 优级纯 无水氯化钙 (CaCl 2 ) 高锰酸钾 (KMnO 4 ) 重铬酸钾 (K 2 Cr 2 O 7 ) 氯化亚锡 (SnCl 2 2H 2 O) 9.2 试剂配制 硝酸 ( ): 取 0.5 ml 浓硝酸, 用纯水稀释至 100 ml 高锰酸钾溶液 (50 g/l): 称取 5.0 g 高锰酸钾置于 100 ml 棕色瓶中, 用纯水溶解 稀释至 100mL %(v/v) 硝酸 -0.05%(m/v) 重铬酸钾溶液 : 称取 0.05 g 重铬酸钾溶于水中, 加入 5 ml 7

8 硝酸, 用水稀释至 100 ml 氯化亚锡溶液 (100 g/l): 称取 10 g 氯化亚锡溶于 20 ml 盐酸中, 以水稀释至 100 ml, 临用时现配 9.3 标准品氯化汞 (HgCl 2 ), 纯度 98% 9.4 标准溶液配制 汞标准储备液 (1.000 mg/ml): 准确称取 g 经干燥器干燥过的氯化汞溶于硝酸 - 重铬酸钾溶液中, 移入 100 ml 容量瓶中, 以 5%(v/v) 硝酸 -0.05%(m/v) 重铬酸钾溶液稀释至刻度 混匀 或用有证的标准溶液 汞标准使用液 : 由 mg/ml 汞标准储备液经硝酸 - 重铬酸钾溶液稀释成 ng/ml 的汞标准使用液 当日配制使用 10 仪器和设备 10.1 双光束测汞仪 ( 附气体循环泵 气体干燥装置 汞蒸气发生装置及汞蒸气吸收瓶 ) 10.2 恒温干燥箱 10.3 压力消解器 压力消解罐或压力溶弹 所用玻璃器皿均需以硝酸 (1+4) 浸泡过夜, 用水反复冲洗, 最后用去离子水冲冼干净 11 分析步骤 11.1 试样制备 试样预处理在采样和制备过程中, 应注意不使试样污染 粮食 豆类去杂质后, 磨碎, 过 40 目筛, 储于塑料瓶中, 保存备用 蔬菜 水果 鱼类 肉类及蛋类等水分含量高的鲜样用食品加工机或匀浆机打成匀浆, 储于塑料瓶中, 保存备用 试样消解 ( 可根据实验室条件选用以下任何一种方法消解 ) 压力消解罐消解法称取 1.00~3.00 g 试样 ( 干样 含脂肪高的试样 <1.00g, 鲜样 <3.00g, 或按压力消解罐使用说明书称取试样于聚四氟乙烯内罐 ), 加硝酸 2~4 ml 浸泡过夜 再加过氧化氢 (30%)2~3 ml( 总量不能超过罐容积的 1/3) 盖好内盖, 旋紧不锈钢外套, 放入恒温干 8

9 燥箱,120~140 保持 3~4 h, 在箱内自然冷却至室温, 用滴管将消化液洗入或过滤入 ( 视消化后试样的盐份而定 )10.0 ml 容量瓶中, 用水少量多次洗涤罐, 洗液合并于容量瓶中并定容至刻度, 混匀备用 ; 同时做试剂空白 11.2 仪器参考条件 : 打开测汞仪, 预热 1~2 h, 并将仪器性能调至最佳状态 11.3 标准曲线的制作吸取上面配制的 2.0 ng/ml 4.0 ng/ml 6.0 ng/ml 8.0 ng/ml 10.0 ng/ml 汞标准使用液各 5.0 ml( 相当于 10.0 ng 20.0 ng 30.0 ng 40.0 ng 50.0 ng), 置于测汞仪的汞蒸气发生器的还原瓶中, 分别加入 1.0 ml 还原剂氯化亚锡 (100 g/l), 迅速盖紧瓶塞, 随后有气泡产生, 从仪器读数显示的最高点测得其吸收值, 然后, 打开吸收瓶上的三通阀将产生的汞蒸气吸收于高锰酸钾溶液 (50 g/l) 中, 待测汞仪上的读数达到零点时进行下一次测定 并求得吸光值与汞质量关系的一元线性回归方程 11.4 试样溶液的测定分别吸取样液和试剂空白液各 5.0 ml 置于测汞仪的汞蒸气发生器的还原瓶中, 以下按照 11.3 自 分别加入 1.0 ml 还原剂氯化亚锡 起进行操作 将所测得其吸收值, 代入标准系列的一元线性回归方程中求得样液中汞含量 12 分析结果的表述 试样中汞含量按公式 (2) 计算 : (A -A ) V X m V (2) 2 式中 : X 试样中汞含量,mg/kg(mg/L); A1 测定试样消化液中汞质量,ng; A2 试剂空白液中汞质量,ng; V1 试样消化液总体积,mL; V2 测定用试样消化液体积,mL; m 试样质量 ( 或体积 ),g( 或 ml) 以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示, 结果保留二位有效数字 13 精密度 9

10 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 20% ( 二 ) 其他消化法 14 试剂和材料除非另有说明, 所用试剂均为分析纯, 水为 GB/T 6682 规定的一级水 14.1 试剂 浓硝酸 (HNO 3 ): 优级纯 浓硫酸 (H 2 SO 4 ): 优级纯 高锰酸钾 (KMnO 4 ) 氯化亚锡 (SnCl 2 2H 2 O) 五氧化二钒 (V 2 O 5 ) 无水氯化钙 (CaCl 2 ) 盐酸羟胺 (NH 2 OH HCl) 14.2 试剂配制 氯化亚锡溶液 (300g/L): 称取 30g 氯化亚锡, 加 2 ml 硫酸使溶解后加水稀释至 100 ml, 放置冰箱保存 混合酸 (1+1+8): 量取 10 ml 硝酸和 10 ml 硫酸, 慢慢倒入 80 ml 水中 高锰酸钾溶液 (50 g/l): 配好后煮沸 10 min, 静置过夜, 过滤, 贮于棕色瓶中 盐酸羟胺溶液 (200 g/l): 称取 10 g 盐酸羟胺溶于 50 ml 水中, 当日配制使用 14.3 标准品 : 氯化汞 (HgCl 2 ), 纯度 98% 14.4 标准溶液配制 汞标准贮备溶液 (1.000 mg/ml): 准确称取 g 于硅胶干燥器干燥过的氯化汞, 加混合酸 (1+1+8) 溶解后移入 100 ml 容量瓶中, 并稀释至刻度, 混匀 或用有证的标准溶液 汞标准使用液 : 吸取 1.0 ml 汞标准贮备溶液 (1.000 mg/ml), 置于 100 ml 容量瓶中, 加混合酸 (1+1+8) 稀释至刻度, 此溶液汞浓度为 10.0 μg/ml 再吸取此液 1.0 ml 置 100 ml 容量瓶中, 加混合酸 (1+1+8) 稀释至刻度, 此溶液汞浓度为 0.10 μg/ml 临用时现配 15 仪器和设备 10

11 15.1 消化装置 15.2 测汞仪 附气体干燥和抽气装置 15.3 汞蒸气发生器 ( 图 1) 所用玻璃器皿均需以硝酸 (1+4) 浸泡过夜, 用水反复冲洗, 最后用去离子水冲冼干净 图 ml 汞蒸气发生器 16 分析步骤 16.1 试样制备 回流消化法 ( 可根据实验室条件选用以下任何一种方法消解 ) 粮食或水分少的食品称取 10.00g 试样, 置于消化装置锥形瓶中, 加玻璃珠数粒, 加 45 ml 硝酸 10 ml 硫酸, 转动锥形瓶防止局部炭化 装上冷凝管后, 小火加热, 待开始发泡即停止加热, 发泡停止后, 加热回流 2 h 如加热过程中溶液变棕色, 再加 5 ml 硝酸, 继续回流 2 h, 放冷后从冷凝管上端小心加 20 ml 水, 继续加热回流 10 min 放冷, 用适量水冲洗冷凝管, 洗液并入消化液中, 将消化液经玻璃棉过滤于 100 ml 容量瓶内, 用少量水洗锥形瓶 滤器, 洗液并入容量瓶内, 加水至刻度, 混匀 同时做试剂空白 植物油及动物油脂称取 5.0 g 试样, 置于消化装置锥形瓶中, 加玻璃珠数粒, 加入 7 ml 硫酸, 小心混匀至溶液颜色变为棕色, 然后加 40 ml 硝酸, 装上冷凝管后, 以下按 自 小火加热 步骤操作 薯类 豆制品称取 g 捣碎混匀的试样 ( 薯类须预先洗净晾干 ), 置于消化装置锥形瓶中, 加玻璃 11

12 珠数粒及 30 ml 硝酸 5 ml 硫酸, 转动锥形瓶防止局部炭化 装上冷凝管后, 以下按 自 小火加热 步骤操作 肉 蛋类称取 g 捣碎混匀的试样, 置于消化装置锥形瓶中, 加玻璃珠数粒及 30 ml 硝酸 5 ml 硫酸 转动锥形瓶防止局部炭化 装上冷凝管后, 以下按 自 小火加热 步骤操作 牛乳及乳制品称取 g 牛乳或酸牛乳, 或相当于 g 牛乳的乳制品 (2.4 g 全脂乳粉 8 g 甜炼乳,5 g 淡炼乳 ), 置于消化装置锥形瓶中, 加玻璃珠数粒及 30 ml 硝酸, 牛乳或酸牛乳加 10mL 硫酸, 乳制品加 5 ml 硫酸, 转动锥形瓶防止局部炭化 装上冷凝管后, 以下按 自 小火加热 步骤操作 五氧化二钒消化法本法适用于水产品 蔬菜 水果 取可食部分, 洗净, 晾干, 切碎, 混匀 取 2.50 g 水产品或 g 蔬菜 水果, 置于 50~100 ml 锥形瓶中, 加 50mg 五氧化二钒粉末, 再加 8 ml 硝酸, 振摇, 放置 4 h, 加 5 ml 硫酸, 混匀, 然后移至 140 砂浴上加热, 开始作用较猛烈, 以后渐渐缓慢, 待瓶口基本上无棕色气体逸出时, 用少量水冲洗瓶口, 再加热 5 min, 放冷, 加 5 ml 高锰酸钾溶液 (50 g/l), 放置 4 h( 或过夜 ), 滴加盐酸羟胺溶液 (200 g/l) 使紫色褪去, 振摇, 放置数分钟, 移入容量瓶中, 并稀释至刻度 蔬菜 水果定容体积为 25 ml, 水产品定容体积为 100 ml 按同一方法进行试剂空白试验 16.2 测定 用回流消化法制备的试样消化液 吸取 10.0 ml 试样消化液, 置于汞蒸气发生器内, 连接抽气装置, 沿壁迅速加入 3 ml 氯化亚锡溶液 (300 g/l), 立即通过流速为 1.0 L/min 的氮气或经活性炭处理的空气, 使汞蒸气经过氯化钙干燥管进入测汞仪中, 读取测汞仪上最大读数, 同时做试剂空白试验 标准曲线制作吸取 ml 浓度为 0.1μg/mL 的汞标准使用液 ( 相当 μg 汞 ) 置于试管中, 各加 10 ml 混合酸 (1+1+8) 以下按 自 置于汞蒸气发生器内 步骤操作 用五氧化二钒消化法制备的试样消化液 12

13 吸取 10.0 ml 试样消化液, 以下按 的方法操作 标准曲线制作分别吸取 和 5.0 ml 汞标准使用液 ( 相当 μg 汞 ), 置于 6 个 50 ml 容量瓶中, 各加 1 ml 硫酸 (1+1) 1 ml 高锰酸钾溶液 (50 g/l), 加 20 ml 水, 混匀, 滴加盐酸羟胺溶液 (200 g/l) 使紫色褪去, 加水至刻度混匀, 分别吸取 10.0 ml( 相当于 μg 汞 ), 以下按 自 置于汞蒸气发生器内 步骤操作 17. 结果计算 试样中汞含量按公式 (3) 计算 : (A -A ) 1000 X 1 2 m (V /V ) (3) 2 1 式中 : X 试样中汞的含量,mg/kg; A 1 测定用试样消化液中汞的质量,μg; A 2 试剂空白液中汞的质量,μg; m 试样质量,g; V 1 试样消化液总体积,mL; V 2 测定用试样消化液体积,mL 以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示, 结果保留二位有效数字 18 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 15% 第二篇 甲基汞的测定 液相色谱 - 原子荧光光谱联用方法 19 范围 本标准规定了水产品中甲基汞含量测定的液相色谱 - 原子荧光光谱联用方法 (LC-AFS) 本标准适用于水产品中甲基汞含量的测定 13

14 检出限 : 甲基汞 0.1 g/l 定量限 : 甲基汞 0.3 g/l 20 原理 动物性水产品中有机汞经 5 mol/l HCl 超声提取后, 使用 C 18 反相色谱柱分离, 色谱流出液进入在线紫外消解系统, 在紫外光照射下与强氧化剂过硫酸钾 (K 2 S 2 O 8 ) 反应, 有机汞转变为无机汞 酸性环境下, 无机汞与硼氢化钾 (KBH 4 ) 在线反应生成汞蒸气, 由原子荧光光谱仪测定 由保留时间定性, 外标法峰面积定量 21 试剂和材料 除另有说明, 本方法所用试剂均为分析纯, 水为 GB/T 6682 规定的一级水 21.1 试剂 乙腈 (CH 3 CN): 色谱纯 L- 半胱氨酸 (L-HSCH 2 CH(NH 2 )COOH): 生化试剂 氢氧化钠 (NaOH): 优级纯 氢氧化钾 (KOH): 优级纯 硼氢化钾 (KBH 4 ) 过硫酸钾 (K 2 S 2 O 8 ) 乙酸铵 (CH 3 COONH 4 ) 浓盐酸 (HCl): 优级纯 浓氨水 (NH 3 H 2 O): 优级纯 试剂制备 流动相 (5.0% (v/v) 乙腈 mol/l 乙酸铵 -0.1% (m/v) 半胱胺酸 ): 称取 0.5 g L- 半胱胺酸,1.9 g 乙酸铵, 置于 500 ml 容量瓶, 纯水溶解, 加入 25 ml 乙腈, 纯水定容至 500 ml 经 0.45 μm 有机系滤膜过滤后, 于超声水浴中超声脱气 30 min, 备用 当日配制使用 盐酸溶液 (5 mol/l): 量取 208 ml 浓盐酸, 溶于水并稀释至 0.5 L 氨水溶液 (50%(v/v)): 量取 50 ml 浓氨水, 溶于水并稀释至 100 ml 盐酸溶液 (10%(v/v)): 量取 100 ml 浓盐酸, 溶于水并稀释至 1.0 L 氢氧化钾溶液 (2 g/l): 称取 2.0 g 氢氧化钾, 溶于水并稀释至 1.0 L 氢氧化钠溶液 (6 mol/l): 称取 24 g NaOH, 溶于水并稀释至 100mL 14

15 硼氢化钾溶液 (2 g/l): 称取 2.0 g 硼氢化钾, 用 2 g/l 氢氧化钾溶液溶解并稀释至 1.0 L 当日配制使用 过硫酸钾溶液 (2 g/l): 称取 1.0 g 过硫酸钾, 用 2 g/l 氢氧化钾溶液溶解并稀释至 0.5 L 当日配制使用 L- 半胱氨酸溶液 (10 g/l): 称取 0.1 g L- 半胱氨酸, 溶于 10 ml 水中 当日配制使用 21.3 标准品 氯化汞 (HgCl 2 ), 纯度 98% 氯化甲基汞 (HgCH 3 Cl), 纯度 98% 氯化乙基汞 (HgCH 2 CH 3 Cl), 纯度 98% 21.4 标准溶液配制 氯化汞标准储备液 (200 μg/ml, 以 Hg 计 ): 准确称取 g 氯化汞, 用 5%(v/v) 硝酸 -0.05%(m/v) 重铬酸钾溶液溶解, 并稀释定容至 100 ml 于 4 冰箱中避光保存 或用有证的标准溶液 甲基汞标准储备液 (200 μg/ml, 以 Hg 计 ): 准确称取 g 氯化甲基汞, 加少量甲醇溶解,50%(v/v) 甲醇稀释和定容至 100 ml 于 4 冰箱中避光保存 或用有证的标准溶液 乙基汞标准储备液 (200 μg/ml, 以 Hg 计 ): 准确称取 g 氯化乙基汞, 加少量甲醇溶解,50%(v/v) 甲醇稀释和定容至 100 ml 于 4 冰箱中避光保存 或用有证的标准溶液 混合标准使用液 (1.00 μg/ml, 以 Hg 计 ): 准确移取上述甲基汞 乙基汞 氯化汞标准储备液各 0.50 ml, 置于 100 ml 容量瓶中, 以流动相稀释至刻度, 摇匀 此混合标准使用液中, 三种汞形态化合物的浓度均为 1.00 μg /ml 当天配制使用 22 仪器和设备 22.1 液相色谱 - 原子荧光光谱联用仪 (LC-AFS): 由液相色谱仪 ( 包括液相色谱泵和手 动进样阀 ) 与原子荧光光谱仪组成 22.2 组织匀浆器 22.3 高速粉碎机 22.4 冷冻干燥机 15

16 22.5 离心机, 最大转速 rpm 22.6 超声清洗器 所用玻璃器皿均需以硝酸 (1+4) 浸泡过夜, 用水反复冲洗, 最后用去离子水冲洗干净 23 分析步骤 23.1 试样制备干样经高速粉碎机粉碎 ; 湿样经匀浆器匀浆 ; 含水量大的试样需用冷冻干燥机干燥 称取干重样品 0.2~0.5 g( 精确到 g), 或湿重样品 0.5 g~2.0 g( 精确到 g), 置于 15 ml 离心管中, 加入 10 ml 的 5 mol/l HCl 提取试剂, 密闭放置过夜 于室温下超声水浴提取 60 min, 期间振摇数次 于 4 下以 8000 rpm 转速离心 15 min 移取 2 ml 上清液至 15mL 离心管中, 缓慢逐滴加入 1.5 ml 的 6 mol/l NaOH, 加入 0.2 ml 的 10 g/l 半胱氨酸溶液, 定容至 5.0 ml, 于 4 下以 8000 rpm 转速离心 15 min, 取上清液过 0.45 µm 有机系滤膜, 滤液进液相色谱 - 原子荧光光谱联用仪进行分析 同时做空白对照 ( 注意 : 滴加 6 mol/l NaOH 时应缓慢逐滴加入, 以免酸碱中和放热来不及扩散, 使温度很快升高, 导致汞化合物挥发, 造成测定值偏低 ) 23.2 仪器参考条件 ( 不同仪器具体条件可能有所不同 ) 液相色谱参考条件色谱柱 *:Agela Technologies Venusil MP C 18 分析柱 (150mm 4.6 mm, 5 µm); Agela Technologies Venusil MP C 18 预柱 (10 mm 4.6 mm, 5 µm) ( 注 *: 给出这一信息是为了方便本标准的使用者, 并不表示对该产品的认可, 如果其他等效产品具有相同的效果, 则可使用这些等效的产品 ) 流动相组成 :5.0%(v/v) 乙腈 -0.05mol/L 乙酸铵 -0.1%(m/v) L- 半胱胺酸 流速 :0.8 ml/min 进样体积:100 µl 原子荧光光谱仪参考条件负高压 :300 V 汞灯电流:30 ma 原子化方式: 冷原子 载液 :10%(v/v)HCl 溶液, 流速 4.0 ml/min 还原剂:2 g/l 硼氢化钾溶液, 流速 4.0 ml/min 氧化剂:2 g/l 过硫酸钾溶液, 流速 1.6 ml/min 载气流速 :500 ml/min 辅助气流速:600 ml/min 23.3 标准曲线制作取 5 支 10 ml 容量瓶, 分别准确加入 μg/ml 混合标准使用液 ml ml 0.10 ml 0.20 ml 和 0.50 ml, 用流动相稀释至刻度 此标准系列溶液的浓度分别为 1.00µg/L 16

17 5.00µg/L 10.00µg/L 20.00µg/L 和 µg/l 进样前经 0.45 m 有机系滤膜过滤 吸取标准系列溶液 100 μl 进样, 以标准系列溶液中目标化合物的浓度为横坐标, 以色谱峰面积为纵坐标, 绘制标准曲线 试样溶液的测定 : 将试样溶液 100 μl 注入液相色谱 - 原子荧光光谱联用仪中, 得到色谱图, 以保留时间定性 以外标法峰面积定量 平行测定次数不少于两次 24 分析结果的表述 试样中甲基汞含量按公式 (6) 计算 : 式中 : 2.5( C C0) V 1000 X...(6) m X 试样中甲基汞的含量,mg/kg; C 0 经标准曲线得到的空白溶液中甲基汞的浓度,µg/L; C 经标准曲线得到的测定液中甲基汞的浓度,µg/L; V 加入提取试剂的体积,mL; m 试样称样量,g 以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示, 结果保留三位有效数字 25 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 20% 17

18 附录 资料性附录 标准溶液色谱图 (MC: 无机汞 ;MMC: 甲基汞 ;EMC: 乙基汞 ) GB 标准参考物质 ( 金枪鱼 ) 色谱图 18

19 实际样品 ( 鲤鱼鱼肉 ) 色谱图 19

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