506 检验医学 2014 年 5 月第 29 卷第 5 期 LaboratoryMedicine,May2014,Vol29.No μmol/L, μmol/Land FTU,thediferencepercentagewas<5%.Themanu

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1 检验医学 2014 年 5 月第 29 卷第 5 期 LaboratoryMedicine,May2014,Vol29.No 文章编号 : (2014) 中图分类号 :R 文献标志码 :A DOI: /j.isn TINIA 检测 HbA 1c 的性能评价及和 IE HPLC 在 HbE 患者中的应用比较 温冬梅, 张秀明, 王伟佳, 陈亚琼, 索明环, 徐全中, 吴剑杨, 李曼, 萧金丽, 阚丽娟, 周甲思 ( 中山大学附属中山医院检验医学中心, 广东中山 ) 摘要 : 目的评价免疫抑制比浊法 (TINIA) 检测糖化血红蛋白 (HbA 1c ) 的分析性能, 与离子交换高效液相色谱法 (IE HPLC) 检测 HbA 1c 进行比对和偏倚评估, 并评估血红蛋白 (Hb) 变异体 E(HbE) 对 TINIA 和 IE HPLC 的影响 方法参考美国临床与实验室标准化协会 (CLSI) 发布的方法学评价系列文件 (EP 文件 ) 及有关文献, 对 TINIA 检测 HbA 1c 的精密度 正确度 分析测量范围 分析干扰以及生物参考区间进行评价和验证, 对 TINIA 与 IE HPLC 检测 Hb 结构正常的血液样本和含 HbE 的血液样本进行对比分析和偏倚评估, 分析患者平均血糖的相关性 结果 TINIA 检测 HbA 1c 的批内精密度 <2.08%, 总不精密度 <2.94%; 在 HbA 1c 浓度为 4.4% ~18.3% 范围内, 理论值与实测均值呈线性相关 (r=0.9994);hb 游离胆红素 (FBiL) 结合胆红素 (CBiL) 乳糜 (CH) 浓度分别为 9.9~49.6μmol/L 65.6~328.0μmol/L 65.6~328.0μmol/L 和 3000~12000FTU 时, 差异百分比均 <5%; 厂商提供的参考区间 (4.8% ~5.9%) 适用于临床实验室 对于 Hb 结构正常的血液样本,TINIA 和 IE HPLC 的 HbA 1c 检测结果差异无统计学意义 (P>0.05), 两种方法的相关性良好 (r 2 =0.9992) 对于 HbE 浓度在 5.4% ~54.7% 范围内的血液样本,TINIA 的平均偏倚为 -4.1% ~1.9%, 均 <5%, 几乎不受 HbE 的干扰, HbA 1c 检测结果与平均血糖的相关性较好 (r=0.9988); 当 HbE>6.4% 时 IE HPLC 检测 HbA 1c 的实测值与理论值平均偏倚为 5.7% ~278.7%, 差异百分比均 >5%, 测定结果与预期理论结果有明显差异 ; 两种方法检测结果差异有统计学意义 (P<0.01) 结论 TINIA 检测 HbA 1c 的分析性能符合临床测定的性能要求, 不受 HbE 的干扰 当 HbE>6.4% 时,IE HPLC 法检测 HbA 1c 会受干扰, 出现假性增高的情况 关键词 : 糖化血红蛋白 A 1c ; 免疫抑制比浊法 ; 高效液相色谱法 ; 相关性分析 ; 血红蛋白 E 病 EvaluationandcomparisonontheperformanceofdetectingHbA 1c bytiniamethodandie HPLCmethod inhbepatients WENDongmei,ZHANGXiuming,WANGWeijia,CHENYaqiong,SUOMinghuan,XUQuanzhong, WUJianyang,LIMan,XIAOJinli,KANLijuan,ZHOUJiashi. (ClinicalLaboratoryCenter,ZhongshanHospitalof Yat senuniversity,guangdongzhongshan528403,china) Abstract:Objective ToevaluatetheanalysisperformanceofglycosylatedhemoglobinA 1c (HbA 1c )detectionby turbidimetricinhibitionimmunoasay(tinia),tocompareandevaluatethebiaswithionexchangehighperformance liquidchromatography(ie HPLC)fordetectingHbA 1c,andtoevaluatetheinfluenceofhemoglobin(Hb)E(HbE)on TINIAandIE HPLC.Methods Accordingtothemethodologyevaluationdocument(EPdocument)andrelevant literaturesfrom theclinicalandlaboratorystandardsinstitute(clsi),theprecision,accuracy,detectionrange, analysisinterferenceandbiologicalreferenceintervalanalysisofhba 1c detectionbytiniawereevaluatedandverified. ThecomparisonanalysisandbiasevaluationofTINIAandIE HPLCforbloodsampleswithnormalHbstructureand bloodsamplesinhbepatientswereperformed.thecorelationwithaveragebloodglucosewasanalyzed.results The within runprecisionbytinia was< 2.08%,thetotalimprecisionwas<2.94%,andthetheoreticalvaluewith detectionmeanvaluewaslinearlycorelatedintheconcentrationrangeof4.4% 18.3%(r=0.9994).WhenHb,free bilirubin(fbil),conjugatedbilirubin(cbil) andchyle(ch) concentrationswere μmol/l,65.6 基金项目 : 中山市科技计划项目 (20122A A091) 作者简介 : 温冬梅,1976 年生, 女, 副主任技师, 主要从事临床生物化学检验和实验室管理工作 通讯作者 : 张秀明, 联系电话 :

2 506 检验医学 2014 年 5 月第 29 卷第 5 期 LaboratoryMedicine,May2014,Vol29.No μmol/L, μmol/Land FTU,thediferencepercentagewas<5%.Themanufacturers providedreferenceinterval(4.8% 5.9%)beingsuitableforclinicallaboratories.Forthebloodsampleswithnormal Hbstructure,therewasnostatisticalsignificanceforHbA 1c detectionbetweenthe2methods(p>0.05),andthe resultsofhba 1c detectionbytiniaandie HPLChadgoodcorelation(r 2 =0.9992).ForthebloodsampleswithHbE concentrationintherangeof5.4% 54.7%,theaveragebiasbyTINIAwas-4.1% 1.9%,whichwas<5%.The interferencewasalmostnotafectedbyhbe,andthecorelationofhba 1c detectionresultswithaveragebloodglucose wasgood(r=0.9988).whilehbe >6.4%,theaveragebiasofthedetectionvalueandthetheoreticalvaluefor HbA 1c byie HPLCwas5.7% 278.7%,thediferencepercentagewas>5%,andtheexpectedtheoreticalresultswith thedetectionvaluehadsignificantdiferences,andtherewasstatisticalsignificancebetweenthe2methods(p< 0.01).Conclusions TheperformanceofHbA 1c detectionbytiniameetstheperformancerequirementsofclinical determination,andhasagoodcorelationwiththatbyie HPLCwithoutinterferencebyHbE.WhenHbE>6.4%,IE HPLCforthedetectionofHbA 1c hasinterference,andtherewilbefalseincreasing. Keywords:GlycosylatedhemoglobinA 1c ;Turbidimetricinhibitionimmunoasay;Highperformanceliquid chromatography;corelationanalysis;hemoglobinedisease 糖化血红蛋白 A 1c (glycosylatedhemoglobin A 1c,HbA 1c ) 是评价糖尿病患者长期血糖控制的金标准 2010 年美国糖尿病联合会 (AmericanDia betesasociation,ada) 已将 HbA 1c 6.5% 作为糖尿病的诊断标准之一 [1], 但我国尚未将 HbA 1c 作为糖尿病诊断标准 各地实验室 HbA 1c 检测方法种类繁多, 检测结果差异较大和对 HbA 1c 的干扰因素不了解等是目前限制我国使用这一糖尿病诊断新指标的主要原因 所以, 对 HbA 1c 检测方法分析性能和干扰因素进行评价以保证检测结果的准确性已显得至关重要 血红蛋白 (Hb) 变异体 氨甲酰化 Hb 和血液系统疾病等因素会不同程度地干扰不同检测方法 [2 5] Hb 变异体 E(HbE) 是全球第 2 位常见的 Hb 变异体 我国南方地区也是地中海贫血和 Hb 病的高发区 因此, 我们参考美国临床实验室标准化协会 (CLSI) 发布的方法学评价文件 (EP 文件 ) [6 9], 全面系统地评价免疫抑制比浊法 (turbidimetricinhibitionimmunoas say,tinia) 检测 HbA 1c 的分析性能, 并与离子交换色谱法 (ionexchangehigh performanceliquid chromatography,ie HPLC) 进行比对和偏倚评估 材料和方法一 材料 1. 对象标本来源于 2012 年 1 月至 2013 年 5 月在中山大学附属中山医院住院 门诊患者或健康体检者 正常对照组为中山大学附属中山医院康体保健中心体检的健康成人 20 名, 其中男 10 名, 年龄 18~59 岁, 女 10 名, 年龄 20~55 岁 ; 糖尿病组为在中山大学附属中山医院确诊的 2 型糖尿病患者 30 例, 除外贫血 Hb 变异体 高胆红素 高血脂和尿毒症患者, 其中男 15 例, 女 15 例, 根据世界卫生组织 (WHO)1999 年诊断标准确诊 HbE 组 15 例, 其中男 5 例, 女 10 例 2. 仪器和试剂美国 Bio Rad 公司 VARIA NTTM ITurbo 全自动 HbA 1c 分析仪和配套试剂 ; Trinityultra 2 全自动 HbA 1c 分析仪和配套试剂 ; 德国 RocheModularPPI 全自动生化分析仪和配套试剂 ; 法国 SebiaCapilarys 毛细管蛋白电泳分析仪和配套试剂 ; 日本 Sysmex 干扰试剂盒 [ 批号 : JISK0101; 干扰物浓度分别为游离胆红素 (FBiL) 3280μmol/L(192mg/L) 结合胆红素 (CBiL) 3280 μmol/l(192 mg/l) Hb 49.6 μmol/l (4960mg/dl) 乳糜 (CH)15000FTU] 3. 标本采集 (1)HbA 1c : 静脉抽血 2mL, 乙二胺四乙酸 (EDTA K 2 ) 抗凝, 用全血检测 ;(2) 空腹血糖 (fastingplasmaglucose,fpg): 空腹静脉抽血 2mL, 氟化钠抗凝, 分离血浆检测 二 方法 1. 检测方法分别采用 IE HPLC(Bio Rad VARIANTTM ITurbo 检测系统 ) 亲和析高压液相法 (Trinityultra 2 检测系统 ) 第 3 代 TINIA (RocheModularPPI 检测系统 ) 检测 HbA 1c 采用已糖激酶法 (hexokinase,hk) 检测血浆 FPG, 采用毛细管电泳法 (SebiaCapilarys 毛细管电泳分析仪 ) 进行 Hb 电泳

3 检验医学 2014 年 5 月第 29 卷第 5 期 LaboratoryMedicine,May2014,Vol29.No 精密度实验 参考 EP15 A2 文件 [5], 选取 IE HPLC 检测 15 份 HbE 浓度在 5.4% ~54.7% 5 份不同浓度的标本, 其中 2 份为 Bio RadHbA 1c 质控液,3 份为低 中 高不同浓度的新鲜全血 所有实验样本每天批内重复测定 3 次, 连续 5d 范围内的血液样品的 HbA 1c 浓度, 计算估计平均血糖值 (estimatedaverageglucose,eag) [11], 判断两种方法对 HbE 组的检测结果是否有差异及与 3. 正确度实验 参考 EP15 A2 文件 [6], 对卫 平均血糖水平的相关性 生部临床检验中心同期发放的 5 份室间质量评价 9. 不同浓度 HbE 样品的制备 以 Hb 结构正 调查品进行检测, 每一分析物分布在 5 个不同的分析批次测定, 每一样品重复测定 2 次 常的全血样品 (HbA 浓度为 96.8%,HbA 2 浓度为 3.2%) 为 1 号样品, 以 HbE 含量为 54.7% 的 4. 分析测量范围 (AMR) 实验 参考 EP6 A 全血样品为 5 号样品,1 号和 5 号样品分别按 文件 [7], 收集 HbA 1c 为 18.3% 的高值全血样本和 4.4% 的低值全血样本, 按 1L 0.8L+0.2H 0.6L +0.4H 0.4L+0.6H 0.2L+0.8H 1H 等不同稀释浓度形成系列浓度全血, 对系列全血在检测系统上检测, 重复 4 次, 在 1 个分析批次内完成 和 1 3 的比例混合, 分别作为 2~4 号样品 采用毛细管电泳法检测 5 个样品的 HbE 浓度 用不受 HbE 干扰的分析性能得到验证的 TrinityPrimus 检测系统检测 HbA 1c 浓度 [12], 通过 HbA 1c 浓度和总的出峰面积计算得出各混合样品 5. 分析干扰实验 参考 EP7 A2 文件 [8], 选 的 HbA 1c 理论浓度, 再分别用 TINIA 和 IE HPLC 择浓度为 10.4% 和 6.2% 的 2 个全血样品作为基础样本, 以添加不同浓度 FBiL CBiL Hb 和 CH 等干扰物之后的 HbA 1c 测定均值超过同一浓度下的空白对照管的 ±5% 为产生干扰作用 检测含不同浓度 HbE 的样品, 每组检测 2 次 三 统计学方法所有资料应用 Excel 和 SPSS13.0 软件进行统计分析 各组间均数比较采用 t 检验 P< 6. 生物参考区间验证 参考 C28 A2 文 0.05 为差异有统计学意义 件 [9], 对 20 个参考个体进行 HbA 1c 检测 检测结果用 1/3 规则进行离群值检验 结 果 7. 正常对照组和糖尿病组两种检测系统的比 一 精密度实验 对分析和偏倚评估 参照 EP9 A2 [10] 文件, 以性 TINIA 测定不同浓度新鲜全血和质控品 能分析指标通过验证的 IE HPLC 为比较方法, TINIA 作为实验方法, 检测 HbA 1c 含量在 4.1% ~ 13.9% Hb 结构正常的 40 份正常对照组和糖尿病组血液样品, 每天检测 8 份, 连续测定 5d 8.HbE 组两种方法的比对分析和偏倚评估 HbA 1c 的不精密度性能结果见表 1 与厂商声明值 (HbA 1c 浓度为 4.1% 9.2% 和 10.5% 时厂商声明的批内 CV 分别为 2.2% 2.3% 和 1.8%, 总 CV 分别为 4.4% 3.2% 和 3.0%) 比较, 各分析水平的实际 CV 均低于厂商声明的 CV, 厂家声明的精 及与平均血糖的相关性分析 分别用 TINIA 和 密度性能得到验证 表 1 TINIA 法检测 HbA 1c 的精密度性能结果 项目 新鲜全血样本 LEVEL 1 LEVEL 2 LEVEL 3 LEVEL L 质控品 LEVEL H 批内不精密度均值 (%) 标准差 (%) CV(%) 总不精密度均值 (%) 标准差 (%) CV(%)

4 508 检验医学 2014 年 5 月第 29 卷第 5 期 LaboratoryMedicine,May2014,Vol29.No5. 二 正确度实验对 5 份定值室间质量评价调查品进行检测, 结果见表 2 5 个不同浓度的样品偏倚的验证区间均包含了靶值, 正确度性能得到验证 三 AMR 通过对系列浓度全血样品的 HbA 1c 浓度和总的出峰面积计算得出 HbA 1c 理论浓度, 对预期值和实测值进行回归分析, 回归方程为 Y=1.04X ,b 接近于 1,a 接近于 0,r= 在 实验所涉及的浓度范围内 (4.4% ~18.3%) 呈线性 四 分析干扰实验 FBil<328.0μmol/L CBil<328.0μmol/L Hb<49.6g/L CH<12000FTU 对 TINIA 检测 HbA 1c 基本无干扰 ( 差异百分比 <5% 为无干扰 ), 但高浓度 CH(15000FTU) 所产生的干扰超过临床可接受的允许误差, 但基本上符合临床的检测要求 见表 3 表 2 TINIA 检测 HbA 1c 正确度验证结果 批号 能力验证计划结果 靶值 (%) 标准差 (%) 例数标准误 回收实验结果 均值 (%) 标准差 (%) 偏倚 (%) 验证区间 (%) 表 3 TINIA 检测 HbA 1c 2 个不同浓度样品干扰实验结果 HbA 1c FBil(μmol/L) CBil(μmol/L) 低浓度 高浓度 HbA 1c Hb(g/L) CH(FTU) 低浓度 高浓度 注 : 为超过空白对照管的 ±5% 范围, 存在偏差 四 生物参考区间验证不同年龄的 10 名男性健康参考个体 HbA 1c 浓度为 5.1% ~5.7%, 不同年龄的 10 名女性健康参考个体 HbA 1c 浓度为 4.8% ~5.7%,20 名健康参考个体总的 HbA 1c 浓度为 4.8% ~5.7%, 均落在厂商提供的参考区间内, 厂商提供的参考区间 (4.8% ~5.9%) 得到验证, 可以直接使用 五 正常对照组和糖尿病组 TINIA 和 IE HPLCHbA 1c 检测结果的比较与偏倚评估对正常对照组和糖尿病组 80 个实验数据作散点图和偏倚图, 见图 1~4 其中 r , 实验样本浓度范围合适 参照 NGSP 认证对 Ⅱ 级定 值检测实验室比对系统与参比系统检测值百分偏差的绝对值 <8% 的可接受标准,HbA 1c 医学决定 ^ 水平为 6.5% 时其允许偏倚为 (0.26), 预期偏倚 B c 的 95% 可信区间 (CI) 为 [-0.157,-0.098],< 允许偏倚 0.26;HbA 1c 的医学决定水平为 9.0% 时 ^ 其允许偏倚为 0.36, 预期偏倚 B c 的 95% CI 为 [-0.151,-0.097],< 允许偏倚 (0.36), 两者具有良好的相关性 方法的测定结果差异无统计学意义 (P<0.05) 六 HbE 组 TINIA 和 IE HPLC 检测 HbA 1c 的比较及与平均血糖的相关性分析

5 检验医学 2014 年 5 月第 29 卷第 5 期 LaboratoryMedicine,May2014,Vol29.No 由 TINIA 测定 HbA 1c 结果计算得出的 eag 结果和 FPG 结果的差值为 -5~6mg/dL 对 eag 结果和 FPG 结果进行回归分析, 方程为 Y=1.013 X-0.972,r=0.999,P=0.320, 差异无统计学意义 (P>0.05), 且 HbA 1c 和 FPG 呈高度相关 (r=0.9988), 见图 5 TINIA 检测 HbA 1c 不受 HbE 的干扰 由 IE HPLC 法测定 HbA 1c 结果计算得出的 eag 结果和 FPG 结果的差值为 6~128mg/dL 对 eag 结果和 FPG 结果进行回归分析, 方程为 Y=1.0514X+31.13,r=0.906,P=0.0013, 差异有统计学意义 (P<0.01), 见图 6 IE HPLC 检测 HbA 1c 受 HbE 干扰, 结果偏高 见表 4 HbE 组 TINIA 和 IE HPLC 检测 HbA 1c 结果的差异有统计学意义 (P<0.01) 见图 7 七 不同浓度的 HbE 对两种方法测定 HbA 1c 的影响用毛细管电泳法检测 5 个样品的 HbE 浓度分别为 0.0% 6.4% 13.4% 21.7% 和 54.7% TINIA 的检测值与理论浓度平均差值的 95%CI 为 -0.20~0.10, 低于理论浓度 ±0.75%HbA 1c 的控制标准, 且 r 值为 0.978; 平均偏倚为 -4.1% ~ 1.9%, 均 <5% 可见含不同浓度 HbE 的样品 TINIA 检测结果与预期值无差异, 几乎不受 HbE 的干扰 当 HbE>6.4% 时,IE HPLC 检测含不同浓度 HbE 的样品的平均偏倚为 5.7% ~278.7%, 均 > 5%, 测定结果均高于预期理论结果, 对 HbA 1c 检测存在一定的影响 ; 当血液样品中 HbE 浓度高达 54.7% 时, 其 HbA 1c 测定结果远远高于预期理论结果, 平均偏倚高达 278.7%, 测定结果与预期理论结果有明显差异 见表 5 Hb 结构正常的全血样品的 IE HPLC 检测 HbA 1c 的图谱见图 8;HbE 浓度为 54.7% 时 IE HPLC 检测 HbA 1c 的图谱见图 9 图 2 单实验方法测定值对比较方法均值散点图图 3 均值差值与两种方法均值的偏倚图图 4 单个结果差值与两种方法均值的偏倚图图 5 TINIA 测定 HbE 组 HbA 1c 结果和 FPG 结果的相关性分析 图 6 IE HPLC 测定 HbE 组 HbA 1c 结果 图 1 实验方法对比较方法均值散点图 和 FPG 结果的相关性分析

6 510 检验医学 2014 年 5 月第 29 卷第 5 期 LaboratoryMedicine,May2014,Vol29.No5. 表 4 HbE 组 TINIA 和 IE HPLCHbA 1c 检测结果的比较及与平均血糖的相关性分析 患者性别年龄 FPG HbA 1c (%) TINIA eag eag FPG HbA 1c (%) IE HPLC eag eag FPG 1 M F M F F F F F M M F F F M F 表 5 不同浓度的 HbE 对两种方法测定 HbA 1c 的影响 (%) 例数 HbE 浓度 HbA 1c 理论浓度 IE HPLC TINIA IE HPLC 偏差 IE HPLC 偏倚 TINIA 偏差 TINIA 偏倚 图 9 HbE 浓度为 54.7% 时 IE HPLC 检测 HbA 1c 的图谱 图 7 HbE 组 IE HPLC 和 TINIA 检测 HbA 1c 的相关性分析图 8 Hb 结构正常的体检者全血样品的 IE HPLC 检测 HbA 1c 的图谱 讨论近年来,HbA 1c 在糖尿病的筛查 诊断和治疗中发挥着极为重要的作用, 其检测方法有离子交换法 亲和层析法和免疫分析法等多种方法, 每种方法各有优势 不同的检测方法受不同影响因素的干扰, 从而影响糖尿病的诊断 Hb 变异体会不同程度地干扰不同检测方法 HbE 是全球第 2 位常见的 Hb 变异体, 主要存在于东南亚人群中, 由 β 珠蛋白基因第 26 位的谷氨酸被赖氨酸取代

7 检验医学 2014 年 5 月第 29 卷第 5 期 LaboratoryMedicine,May2014,Vol29.No 所产生, 是一种 β 地中海贫血样的 Hb 病 但因谷氨酸和赖氨酸理化性质相似, 对 Hb 分子的稳定性和功能影响不大, 文献报道 HbE 杂合子无临床症状 [12] 本研究主要参考 CLSIEP 系列文件对 TINIA 检测 HbA 1c 的分析性能进行评价, 并评估 HbE 对 TINIA 和 IE HPLC 检测 HbA 1c 的干扰程度 旨在了解免疫分析方法检测 HbA 1c 的分析性能及为 HbE 人群选用合适的 HbA 1c 检测方法, 保证 HbA 1c 检测的准确性 TINIA 检测不同浓度 HbA 1c 的批内 CV 分别为 2.08% 1.97% 1.28% 1.82% 和 1.57%, 总 CV 分别为 2.94% 2.78% 1.80% 2.56% 和 2.21%, 均 < 厂商声明的 CV, 厂家声明的精密度性能得到验证 对 5 份定值室间质量评价调查品进行检测, 偏倚的验证区间均包含了靶值, 正确度性能得到验证 对系列浓度样本进行检测, 并对预期值和实测值回归分析, 回归方程为 Y= X ,r=0.9994,AMR 为 4.4% ~ 18.3%, 具有良好的线性 干扰实验结果显示 TINIA 具有良好的抗溶血 脂血 黄疸和 CH 的能力 厂商提供的参考区间 (4.8% ~5.9%) 得到验证, 适用于本实验室 正常对照组和糖尿病组 TINIA 和 IE HPLC 检测 HbA 1c 的结果具有良好的相关性 (r= ), 两种方法具有可比性 但 HbE 组 TINIA 和 IE HPLC 检测 HbA 1c 的结果差异有统计学意义 (P<0.01) 另外, 本研究结果显示, TINIA 测定 HbE 组 HbA 1c 的结果与 FPG 结果呈高度相关 (r=0.9988) 不同浓度的 HbE 对两种方法测定 HbA 1c 的影响结果显示, 采用 TINIA 检测含不同浓度 HbE 的样品, 其 HbA 1c 实测值与预期理论浓度的平均偏倚为 -4.1% ~1.9%, 均 <5%,TINIA 几乎不受 HbE 的干扰 ; 而 IE HPLC 检测 HbA 1c 随着 HbE 浓度的增高, 实测值与预期理论浓度的平均偏倚逐渐增大, 当样品中 HbE 浓度高达 54.7% 时, 其 HbA 1c 实测结果远远高于预期理论值, 平均偏倚高达 278.7% 由此可见,IE HPLC 检测 HbE 患者的 HbA 1c 浓度时会受 HbE 干 [13] 扰, 出现 HbA 1c 假性增高的情况, 与 Litle 等的研究结果一致 IE HPLC 检测所有 HbE 的色谱图均包含 变异体窗口 中的 1 个色谱峰, 该色谱峰显示为 1 个分裂的 A0 峰, 图谱显示出峰时间 (RT) 稍微有点滞后, 导致真正的 A0 错认为 Vari antwindow, 图中的 A0 应该为 E 由于这个问题, 同时 E 的量低于 A0 的, 导致 A 1c 假性增高 但 TINIA 的检测结果未受到 HbE 的干扰 可能是由于免疫学方法抗体特异性的结合 Hbβ 链 N 末端 HbA 1c 糖化部分, 而 HbE 的氨基酸替代远离这部分, 因此检测结果不受干扰 由此可见, 在有 HbE 干扰的情况下,TINIA 的抗干扰能力优于 IE HPLC 本研究结果显示,TINIA 具有良好的分析性能和抗干扰能力, 检测结果不受 HbE 的干扰, 适用于临床 IE HPLC 由于操作简便 快速 精密度好, 检测结果能溯源到 DCCT 而成为检测 HbA 1c 的金标准方法, 其分析图谱可以识别 Hb 变异体的存在, 但检测结果宜受 HbE 的干扰而呈假性增高 因此, 为保证 HbA 1c 检测结果的准确性, 实验室工作人员均应具备分析 HbA 1c 检测图谱的能力, 识别是否存在 Hb 变异体 若出现异常峰或发现检测结果与血糖浓度不相关时, 且进一步确定存在 HbE, 则可选用其他合适的检测方法, 确保 HbA 1c 检测质量能够完全满足临床需求 ; 或选用其他替代指标, 如糖化血清蛋白 糖化白蛋白或连续监测血糖, 客观 准确地对患者的血糖控制情况进行监测 参考文献 [1] AmericanDiabetesAsociation.Standardsofmedical careindiabetes 2010[J].DiabetesCare,2010,33 (Suppl1):S11 S61. [2] 康建华, 杨立顺, 袁海生. 变异血红蛋白和氨基甲酰血红蛋白对糖化血红蛋白测定干扰的评价 [J]. 检验医学,2012,27(6): [3] 闫颖, 张传宝, 张江涛, 等. 三种相同原理的糖化血红蛋白分析仪检测结果的初步比对 [J]. 检验医学,2012,27(7): [4] 陈健.TOSOHHLC 723G8 全自动糖化血红蛋白分析仪性能评价 [J]. 检验医学,2013,28(10): [5] 中华医学会检验分会, 卫生部临床检验中心, 中华检验医学杂志编辑委员会. 糖尿病诊断治疗中实验室检测项目的应用建议 [J]. 中华检验医学杂志,2010,33(1):8 15. [6] ClinicalLaboratoryStandardInstitute.User demonstration of performance for precision and

8 512 检验医学 2014 年 5 月第 29 卷第 5 期 LaboratoryMedicine,May2014,Vol29.No5. accuracy[s].ep15 A2,CLSI,2004. [7] ClinicalLaboratoryStandardInstitute.User demonstration of performance for precision and accuracy[s].ep6 A,CLSI,2004. [8] ClinicalLaboratoryStandardInstitute.Interference testinginclinicalchemistry[s].ep7 A2,CLSI, [9] ClinicalLaboratoryStandardInstitute.Howtodefine and determine reference intervals in the clinical laboratory[s].c28 A2,CLSI,2000. [10] ClinicalLaboratoryStandardInstitute.Method comparisonandbiasestimationusingpatientsamples [S].EP9 A2,CLSI,2002. [11] NathanDM,KuenenJ,BorgR,etal.Translatingthe A1Casayintoestimatedaverageglucosevalues[J]. DiabetesCare,2008,31(18): [12] VichinskyE.HemoglobineSyndromes[J]. HematologyAm SocHematolEducProgram,2007, 1: [13] LitleRR,RohlfingCL,HansonS,etal.Efectsof hemoglobin(hb)eandhbdtraitsonmeasurements ofglycatedhb(hba 1c )by23methods[j].clin Chem,2008,54(8): ( 收稿日期 : ) ( 本文编辑 : 范基农 ) 檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿 CasWeykamp 博士访问上海市临床检验中心 2014 年 4 月 14 日下午, 荷兰贝娅特丽克丝皇后医院临床生化负责人 北欧室间质评计划负责人 国际临床化学联盟糖化血红蛋白 (IFCCHbA 1c ) 标准化计划负责人 CasWeykamp 博士来上海市临床检验中心 ( 以下简称中心 ) 访问, 中心副主任居漪全程陪同 Cas 博士自 2013 年起担任中心临床生化专业学术导师以来, 在参考方法建立及应用 室间质评活动以及科研等方面都提供了指导和帮助 此次访问期间,Cas 博士介绍了国际上对结果互认的重视, 如美国临床化学协会 (AACC) 近期为协调全球范围内的结果互认活动制订了 检验结果互认 计划 对于众多暂时不能实现标准化的检测项目, 期望寻找能够走向一致性的途径 同时, 通过规范化的组织和信息共享, 也可以避免资源浪费, 集中力量研究尚未实现标准化的分析物 Cas 博士还介绍了他所负责的碳水化合物缺乏性转铁蛋白 (CDT) 项目 该项目属于 AACC 检验结果互认 计划中的一部分, 在欧洲广泛用于判断是否长时间大量饮酒, 但在国内临床实验室目前尚未开展这个项目, 他的介绍对中心在今后的项目拓展方面很有启发 糖化血红蛋白 (HbA 1c ) 标准化和相关研究是本次交流的主要内容 变异血红蛋白对 HbA 1c 检测的干扰也是业界非常重视的问题, 双方讨论了变异体在中国的流行分布情况 样本来源 变异位点检测 对不同 HbA 1c 检测方法的干扰等内容 Cas 博士介绍了他所在的实验室对新上市的 HbA 1c 毛细管电泳分析仪进行的评估, 评估方案设计规范, 结果有说服力, 为我们提供了很好的借鉴作用 此外, 双方还探讨了由国际糖尿病协会 (IDF) 副主席 中国糖化血红蛋白教育计划 发起人纪立农教授和 IFCCHbA 1c 标准化工作组主席 GaryJohn 教授组织的中国 HbA 1c 标准化实验室认证计划, 本中心的作用以及具体的工作细节如样本制备等问题 近两年, 本中心在政府财政专项的大力支持下, 购置了液相质谱仪和气相质谱仪等高端检测仪器, 为中心在参考方法的建立及运行提供了最关键的设备保障 Cas 博士此次还参观了生化和免疫专业建立的标准化实验室, 向正在实验的人员详细了解了检测情况, 他希望今后在人员培训和项目开发上, 与中心能够进一步加强合作 双方对中心未来的发展 标准化工作在中国的推进都充满了信心 ( 本刊记者 : 范基农 )

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